本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種治療非小細(xì)胞肺癌的組合物和人參皂苷f4在制備治療非小細(xì)胞肺癌的組合物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：進(jìn)入21世紀(jì)，惡性腫瘤死亡率呈逐年上升的趨勢，仍然是影響人類生命健康的重要疾病，死亡率居全部死因的第2位，僅次于心血管疾病。按病種分類，2004年全部死因中，肺癌居第8位，并預(yù)計在2030年將上升至第6位，位居各種癌癥之首。同時，肺癌的發(fā)病率在我國也一直處于癌譜首位。2000-2005年間我國肺癌的新發(fā)病例增加了12萬，并且每年以26.3％的速度增長，預(yù)計到2025年我國肺癌人數(shù)將達(dá)到100萬，成為世界第一肺癌大國。肺癌是最常見的肺原發(fā)性惡性腫瘤，絕大多數(shù)肺癌起源于支氣管黏膜上皮，故亦稱支氣管肺癌。從臨床治療角度，可將其分為小細(xì)胞肺癌(sclc)和非小細(xì)胞肺癌(nsclc)，其中nsclc占肺癌總數(shù)的80％-85％，非小細(xì)胞型肺癌包括鱗狀細(xì)胞癌(鱗癌)、腺癌、大細(xì)胞癌，與小細(xì)胞癌相比其癌細(xì)胞生長分裂較慢，擴(kuò)散轉(zhuǎn)移相對較晚。非小細(xì)胞肺癌約占肺癌總數(shù)的80％，約75％的患者發(fā)現(xiàn)時已處于中晚期，5年生存率很低，其中高齡患者占多數(shù)，約50％的肺癌患者年齡大于65歲。肺癌在全部腫瘤死亡中仍占16.2％。目前國內(nèi)外對于非小細(xì)胞肺癌的治療方法主要有：手術(shù)、化療、放療、靶向藥物、生物治療、中醫(yī)藥治療等。但上述方法均存在缺陷：(1)非小細(xì)胞肺癌患者早期缺乏典型的臨床表現(xiàn)，不能及時診斷，約70％的患者在確診時已經(jīng)處于晚期，無法進(jìn)行手術(shù)。即使患者達(dá)到手術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，術(shù)后復(fù)發(fā)的機(jī)率仍較大；(2)化療方案均憑經(jīng)驗給藥，這種同質(zhì)化的治療往往具有很大的盲目性，且化療藥物毒副作用明顯，對自身免疫系統(tǒng)損傷極大，且容易產(chǎn)生耐藥性，多次使用后無效；(3)放療的副作用大，容易造成肺損傷和放射性肺炎；(4)目前非小細(xì)胞肺癌的靶向藥物主要是小分子egfr酪氨酸激酶抑制劑：吉非替尼、厄洛替尼及抗腫瘤血管生成藥物貝伐單抗、恩度。這些靶向藥物雖在一定程度上可以緩解腫瘤進(jìn)展或改善生存質(zhì)量，但在治療的同時同樣存在嚴(yán)重的副作用，很多病人無法忍受副作用帶來的痛苦而終止用藥。人參，又稱“百草之王”，古代醫(yī)藥學(xué)書籍《神農(nóng)本草經(jīng)》對人參的功效有重要記載：“人參味甘，微寒，主補(bǔ)五臟、安精神、定魂魄、止驚悸、除邪氣、明目，開心益智、久服輕身延年”。人參皂苷作為人參的主要活性物質(zhì)，已受到廣泛關(guān)注。近年來，對于以人參皂苷rg3為首的稀有人參皂苷在抗腫瘤領(lǐng)域的研究也在世界各國深入展開，并得到了國際共識，大量的臨床及非臨床試驗證明稀有人參皂苷具有抗腫瘤作用，其作用機(jī)理主要表現(xiàn)在如下方面：a.抑制腫瘤細(xì)胞增殖作用；b.促進(jìn)細(xì)胞凋亡作用；c.抑制腫瘤組織新生血管生成，防止腫瘤轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散；d.促進(jìn)免疫器官功能、增強(qiáng)自身免疫力。而人參皂苷的服用安全性也得到了廣泛的認(rèn)可。專利cn101732332b公開了以20(s)-rg3作為藥物在治療非小細(xì)胞肺癌的中的應(yīng)用。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：本發(fā)明的目的在于提供一種治療非小細(xì)胞肺癌的組合物，人參皂苷f4在制備治療非小細(xì)胞肺癌的藥物中的應(yīng)用。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：一種治療非小細(xì)胞肺癌的組合物，其含有人參皂苷f4。進(jìn)一步的，上述的治療非小細(xì)胞肺癌的組合物中，所述組合物還包括靈芝提取物、黃芪提取物、西洋參提取物、三七提取物、當(dāng)歸提取物、山藥提取物、淫羊藿提取物中的一種或幾種。進(jìn)一步的，上述的治療非小細(xì)胞肺癌的組合物中，所述組合物為片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、散劑、乳劑、注射劑、溶液劑、噴霧劑、氣霧劑、凝膠劑、霜劑或貼膏劑。進(jìn)一步的，上述的治療非小細(xì)胞肺癌的組合物中，所述組合物以人參皂苷f4為主要活性成分加上藥學(xué)上可接受的載體，所述載體包括填充劑、崩解劑、粘合劑、潤滑劑、甜味劑中的一種或幾種。進(jìn)一步的，上述的治療非小細(xì)胞肺癌的組合物中，由如下重量份比的原料組成：人參皂苷f41份；靈芝提取物1份；黃芪提取物2份；枸杞提取物5份；淀粉10份。進(jìn)一步的，上述的治療非小細(xì)胞肺癌的組合物中，由如下重量份比的原料組成：人參皂苷f41份；微晶纖維素10份；聚維酮k303份；交聯(lián)羧甲基纖維素鈉4份；硬脂酸鎂1份。進(jìn)一步的，上述的治療非小細(xì)胞肺癌的組合物中，由如下重量份比的原料組成：人參皂苷f41份；靈芝提取物1份；乳糖10份；預(yù)膠化淀粉5份；硬脂酸鎂1份。本發(fā)明的另一技術(shù)方案為：人參皂苷f4在制備治療非小細(xì)胞肺癌的組合物中的應(yīng)用。進(jìn)一步的，上述的應(yīng)用中，所述組合物由人參皂苷f4和藥學(xué)上可接受的載體組成，所述載體包括填充劑、崩解劑、粘合劑、潤滑劑、甜味劑中的一種或幾種。進(jìn)一步的，上述的應(yīng)用中，所述組合物為片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、散劑、乳劑、注射劑、溶液劑、噴霧劑、氣霧劑、凝膠劑、霜劑或貼膏劑。本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明提供一種人參皂苷f4在制備治療非小細(xì)胞肺癌的組合物中的應(yīng)用和治療非小細(xì)胞肺癌的組合物，人參皂苷f4為一類稀有人參皂苷，在天然人參中的含量極低，本發(fā)明申請人發(fā)現(xiàn)人參皂苷f4具有治療非小細(xì)胞肺癌的作用，通過細(xì)胞及動物實驗、臨床試驗證實，人參皂苷f4可抑制非小細(xì)胞肺癌的生長。且效果較人參皂苷rg3更佳?？勺鳛榉切〖?xì)胞肺癌治療的一種潛在藥物，且該藥物高效、無毒?？砷L期服用。具體實施方式為詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容、所實現(xiàn)目的及效果，以下結(jié)合實施方式予以說明。本發(fā)明最關(guān)鍵的構(gòu)思在于：人參皂苷f4為一類稀有人參皂苷，在天然人參中的含量極低，本發(fā)明人通過實驗發(fā)現(xiàn)人參皂苷f4具有治療非小細(xì)胞肺癌的作用，且效果較人參皂苷rg3更佳。可作為非小細(xì)胞肺癌治療的一種潛在藥物，且該藥物高效、無毒。實施例1一種含人參皂苷f4中藥組方顆粒劑的制備方法，原料如下：人參皂苷f4100g；靈芝提取物100g；黃芪提取物200g；枸杞提取物500g；淀粉1000g；將人參皂苷f4、靈芝提取物、黃芪提取物、枸杞提取物及淀粉混合均勻，于濕法制粒機(jī)中制粒后烘干、裝袋；最終，制備成顆粒劑190袋；每袋10g，一日三次、每次1袋。實施例2一種含人參皂苷f4的膠囊劑的制備方法，原料如下：人參皂苷f4100g；微晶纖維素1000g；聚維酮k30300g；交聯(lián)羧甲基纖維素鈉400g；硬脂酸鎂100g；將上述原輔料混合均勻后，經(jīng)膠囊制備工藝制備成硬膠囊4750粒、每粒400mg。實施例3一種含人參皂苷f4的片劑的制備方法，原料如下：人參皂苷f4100g；靈芝提取物100g；乳糖1000g；預(yù)膠化淀粉400g；硬脂酸鎂100g；將上述原輔料混合均勻經(jīng)制粒、烘干、整粒、壓片，制備成片劑4250片，每片400mg。實施例4肺癌細(xì)胞抑制實驗試驗材料：人參皂苷f4、人參皂苷20(s)-rg3，分別用細(xì)胞培養(yǎng)基(含0.5％dmso便于人參皂苷的溶解)配制濃度為500μg/ml(高劑量)、62.5μg/ml(低劑量)溶液備用。按常規(guī)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)方法將肺癌細(xì)胞nci-h460進(jìn)行復(fù)蘇、培養(yǎng)后加入96孔板進(jìn)行腫瘤細(xì)胞抑制實驗。具體步驟如下：(1)人肺癌細(xì)胞株nci-h460，用rpmi1640細(xì)胞培養(yǎng)液，這四種細(xì)胞均為貼壁細(xì)胞。將凍存的細(xì)胞液以1500r離心5min，棄上清，加入新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液，吹勻，將其加入到培養(yǎng)皿中，放進(jìn)含5％co2、37℃的生化培養(yǎng)箱中，待細(xì)胞貼壁生長24h或者48h，細(xì)胞數(shù)目達(dá)到80％左右時，加入pbs洗滌2-3遍，再加入3ml胰蛋白酶，37℃消化2min，待細(xì)胞變圓之后，加入等體積細(xì)胞培液終止消化，并將細(xì)胞從培養(yǎng)皿底部吹下來。收集細(xì)胞液，離心，棄上清，加入一定的培養(yǎng)液，吹勻，將細(xì)胞液分別加進(jìn)兩個25cm培養(yǎng)皿中，繼續(xù)培養(yǎng)。(2)待腫瘤細(xì)胞生長至皿底面積80％左右時，加入pbs洗滌2-3遍，再加入3ml胰蛋白酶，37℃消化2min，待細(xì)胞變圓之后，加入等體積細(xì)胞培養(yǎng)液終止消化，并將細(xì)胞從培養(yǎng)皿底部吹下來。收集細(xì)胞液，離心，棄上清，加入一定的培養(yǎng)液，吹勻，取大約50μl加到細(xì)胞計數(shù)板上，在倒置顯微鏡上計數(shù)。細(xì)胞密度＝(四大格細(xì)胞數(shù)之和)×104/ml。調(diào)整細(xì)胞密度至(7-10)×104/ml，將細(xì)胞接種于96孔板中，每孔加入0.1ml，然后放入培養(yǎng)箱中24h。(3)24h后，吸去每個孔中的培養(yǎng)液，加入各濃度含有稀有人參皂苷的培養(yǎng)液，每個濃度設(shè)置5個復(fù)孔，接著放進(jìn)培養(yǎng)箱中孵育48h；之后，吸去孔中的舊培養(yǎng)液，每孔依次加入100μl培養(yǎng)液和50μlmtt溶液，搖勻，放進(jìn)培養(yǎng)箱中孵育4h，然后吸出其混合液，加入150μldmso來溶解紫色晶體甲瓚，震蕩10min，放進(jìn)酶標(biāo)儀中，檢測波長570nm，測定每孔的吸光度值a。抑制率＝(空白組a-實驗組a)×100％/空白組。表1為人參皂苷f4對肺癌細(xì)胞nci-h460的抑制試驗結(jié)果。表1試驗結(jié)果表明，人參皂苷rg3及人參皂苷f4對于nci-h460大細(xì)胞肺癌細(xì)胞、ltep-78肺鱗癌細(xì)胞、a549肺腺癌細(xì)胞均有抑制作用，且人參皂苷f4的抑制率較人參皂苷rg3高。實施例5人參皂苷f4治療非小細(xì)胞肺癌的動物實驗1、動物和材料t739小鼠58只，近交系，雌雄各半，體重20-22g。大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株nci-h460。人參皂苷rg3、人參皂苷f4。2、實驗分組t739小鼠隨機(jī)分為6組，接種24小時候分組如下：(1)模型組：灌胃生理鹽水0.4ml/只/d；(2)陽性對照組：灌胃環(huán)磷酰胺0.4ml/只/d，藥物濃度5g/ml；rg3低劑量組：灌胃rg3溶液0.4ml/只/d，藥物濃度37.5g/ml；rg3高劑量組：灌胃rg3溶液0.4ml/只/d，藥物濃度375g/ml；f4低劑量組：灌胃rg3溶液0.4ml/只/d，藥物濃度37.5g/ml；f4高劑量組：灌胃rg3溶液0.4ml/只/d，藥物濃度375g/ml。3、模型建立取經(jīng)鑒定的新鮮nci-h460瘤塊，無菌條件下剪碎研磨后，再經(jīng)200目濾網(wǎng)過濾后制成腫瘤單細(xì)胞懸液，用生理鹽水將懸液稀釋至6×106/ml癌細(xì)胞懸液，取0.1ml原液，常規(guī)方法接種于各組小鼠右側(cè)腋下皮下。4、抑瘤率測定將小鼠于第14天斷頸處死，剝離瘤組織，取瘤體，稱取瘤體重量，計算抑瘤率：抑瘤率＝(模型組平均腫瘤重量-治療組平均腫瘤重量)/模型組平均腫瘤重量×100％。5、統(tǒng)計分析數(shù)字結(jié)果用表示，各組數(shù)據(jù)均采用spss10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，兩組間進(jìn)行t檢驗。6、結(jié)果表2為人參皂苷f4對大細(xì)胞肺癌的抑制率(n＝10)。表2組別動物數(shù)瘤重(g)抑制率(％)模型對照組82.39±0.28陽性對照組100.48±0.1979.9**rg3低劑量組101.44±0.2239.7**rg3高劑量組100.95±0.2560.3**f4低劑量組101.06±0.2055.6**f4高劑量組100.69±0.1871.1**注：與模型對照組比較，*p＜0.01，**p＜0.001。結(jié)果顯示：與沒有用藥的模型對照組比較，人參皂苷rg3與人參皂苷f4對于小鼠大細(xì)胞肺癌均具有顯著的抑瘤作用，人參皂苷f4對癌細(xì)胞生長的抑制作用較人參皂苷rg3更佳。綜上所述，人參皂苷f4為一類稀有人參皂苷，在天然人參中的含量極低，但人參皂苷f4具有治療非小細(xì)胞肺癌的作用，通過細(xì)胞及動物實驗、臨床試驗證實，人參皂苷f4可抑制非小細(xì)胞肺癌的生長。且效果較人參皂苷rg3更佳。可作為非小細(xì)胞肺癌治療的一種潛在藥物，且該藥物高效、無毒?？砷L期服用。以上所述僅為本發(fā)明的實施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書內(nèi)容所作的等同變換，或直接或間接運用在相關(guān)的
技術(shù)領(lǐng)域：
，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁12