相關(guān)申請的交叉引用

本申請主張獲得2014年12月5日提交的編號為62/088,327的美國臨時(shí)申請和2015年1月23日提交的序列號為62/106,885的申請之權(quán)益，上述兩項(xiàng)申請的全部內(nèi)容通過引用并入本文。

發(fā)明信息

免疫治療對于癌癥患者而言已經(jīng)成為越來越具吸引力的治療策略，許多晚期臨床試驗(yàn)證明其在黑素瘤和去勢抵抗性前列腺癌中的整體存活期(os)優(yōu)勢。最近，非小細(xì)胞肺癌(nsclc)已經(jīng)成為下一代基于免疫的治療策略的重點(diǎn)。免疫治療(特別是使用阻斷抑制性免疫檢查點(diǎn)分子并因此增強(qiáng)對腫瘤的免疫反應(yīng)的單克隆抗體)已經(jīng)在晚期實(shí)體瘤中顯示出良好的臨床前景。

免疫檢查點(diǎn)是指從固有線路接入免疫系統(tǒng)的大量抑制路徑，它對維持自身耐受性和為了減少周圍組織損傷而調(diào)節(jié)外周組織中生理免疫反應(yīng)的持續(xù)時(shí)間和幅度至關(guān)重要。目前已清楚的是，腫瘤將某些免疫檢查點(diǎn)路徑作為免疫抵抗性的主要機(jī)制，特別是針對腫瘤抗原特異性的t細(xì)胞。

程序性死亡受體-1(pd-1)與其配體pd-l1和pd-l2的相互作用是許多腫瘤用于逃避免疫監(jiān)視的重要策略之一。當(dāng)pd-ls與pd-1結(jié)合時(shí)，t細(xì)胞受體(tcr)信號傳導(dǎo)受阻，導(dǎo)致增殖遭到抑制，細(xì)胞因子生成減少、無反應(yīng)和/或凋亡。因此，腫瘤細(xì)胞pd-ls的表達(dá)作為一種保護(hù)機(jī)制，導(dǎo)致腫瘤微環(huán)境中腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞的抑制。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

用布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑處理的抗原遞呈細(xì)胞在本文中顯示出更具炎癥性，顯示出免疫抑制分子pdl1的較低表達(dá)，并且能夠恢復(fù)耐受性t細(xì)胞的反應(yīng)性。因此，本文公開的是在受試者的癌癥免疫治療期間促進(jìn)t細(xì)胞活化的方法，涉及向接受癌癥免疫治療的受試者施用包含布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑的組合物。在部分實(shí)施例中，布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑是布羅莫結(jié)構(gòu)域和末端(“bet”)抑制劑。例如，bet抑制劑為(s)-叔丁基2-(4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮雜-6-基)醋酸鹽(“jq1”)。

另外本文還公開了一種用于治療受試者癌癥的方法，包括向受試者共同施用布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑和免疫刺激劑。例如，免疫刺激劑可以是抗pd-1抗體、抗pd-l1抗體、抗ctla-4抗體或其組合。該方法還包括向受試者施用免疫原性劑。

另外還公開了抗原特異性的t細(xì)胞進(jìn)行繼承性細(xì)胞轉(zhuǎn)移(act)的體外激活和擴(kuò)張方法。該方法包括于存在布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑的情況下將抗原遞呈細(xì)胞群體(apc)暴露于t淋巴細(xì)胞群體。例如，t淋巴細(xì)胞可從由自體腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞(til)、使用高親和力t細(xì)胞受體(tcr)轉(zhuǎn)導(dǎo)的t細(xì)胞及使用嵌合抗原受體(car)轉(zhuǎn)導(dǎo)的t細(xì)胞組成的一組細(xì)胞中選定。另外作為示例，可使用的apc包括自體樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞或其組合。在某些情況下，apc是人造抗原遞呈細(xì)胞(aapc)。

下文附圖和描述中詳盡地說明了本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例的細(xì)節(jié)。本發(fā)明的其他特征、目的和優(yōu)勢將通過說明與附圖以及權(quán)利要求予以闡明。

圖示說明

圖1按jq1濃度(納米)函數(shù)顯示pem細(xì)胞活力(％)。

圖2通過含有和不含lps的jq1(100、200或400納米)處理后的腹腔巨噬細(xì)胞(pem)顯示il-10產(chǎn)生(皮克/毫升)。

圖3通過含有和不含lps的jq1(400或800納米)處理后的pem顯示il-6產(chǎn)生(皮克/毫升)。

圖4顯示用jq1、lps或jq1和lps處理后，pem中的il-6和il10mrna表達(dá)(校正折疊表達(dá))。

圖5顯示使用抗pd-l1(左)或抗-pd-l2(右)抗體時(shí)，以同種型、無物質(zhì)、jq1、lps或jq1和lps處理的pem流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果。

圖6顯示用無物質(zhì)、jq1、lps或jq1和lps處理的pem中的pd-l1和pd-l2mrna表達(dá)。

圖7顯示在處理后1、2和6小時(shí)，用無物質(zhì)、jq1、lps或jq1和lps處理的pem中的pd-l1mrna表達(dá)。

圖8顯示用jq1、lps或jq1和lps處理24小時(shí)，然后用含有或不含ova肽的初始cd4t細(xì)胞再培養(yǎng)48小時(shí)后的pem的il-2產(chǎn)生(皮克/毫升)。

圖9顯示用jq1、lps或jq1和lps處理24小時(shí)，然后用含有或不含ova肽的初始cd4t細(xì)胞再培養(yǎng)48小時(shí)后的pem的inf-γ產(chǎn)生(皮克/毫升)。

圖10顯示用jq1、lps或jq1和lps處理24小時(shí)，然后用含有或不含ova肽的耐受cd4t細(xì)胞再培養(yǎng)48小時(shí)后的pem的inf-γ產(chǎn)生(皮克/毫升)。

詳細(xì)描述

在部分實(shí)施例中，所公開的方法包括使用布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑在體內(nèi)治療受試者，抑制癌性腫瘤的生長?？梢詥为?dú)使用布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑來抑制癌性腫瘤的生長?；蛘?，布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑可以與其它免疫原性試劑、標(biāo)準(zhǔn)癌癥治療劑或免疫刺激劑組合使用。

還有幾種其他治療方案涉及抗原特異性t細(xì)胞的體外激活和擴(kuò)增，并將這些細(xì)胞過繼性轉(zhuǎn)移到受體中以促進(jìn)抗原特異性t細(xì)胞對抗腫瘤(greenberg,r.&riddell,s.(1999)science285:546-51)。這些方法也可用于激活t細(xì)胞對cmv等感染因子的反應(yīng)。存在布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑的情況下，體外激活可以預(yù)期增加過繼性轉(zhuǎn)移的t細(xì)胞的頻率和活性。

“受試者”一詞指作為施用或治療目標(biāo)的任何個(gè)體。受試者可以是脊椎動(dòng)物，例如哺乳動(dòng)物。因此，受試者可以是人或獸患者?！盎颊摺币辉~指臨床醫(yī)生(例如醫(yī)師)治療下的受試者。

“治療”一詞是指旨在治愈、改善、穩(wěn)定或預(yù)防疾病、病理狀況或病癥的患者醫(yī)療管理。該詞包括主動(dòng)治療，即專門針對改善疾病、病理狀況或病癥的治療，還包括病因治療，即針對去除相關(guān)疾病的病因、病理狀況或病癥的治療。此外，該詞包括姑息治療，即旨在緩解癥狀而非治愈疾病、病理狀況或病癥的治療；預(yù)防性治療，即旨在最大限度減少或部分或完全抑制相關(guān)疾病、病理狀況或病癥發(fā)展的治療；以及支持治療，即用于補(bǔ)充針對改善相關(guān)疾病，病理狀態(tài)或病癥的另一種特定療法的治療。

“抑制”一詞是指活性、反應(yīng)、病癥、疾病或其他生物學(xué)參數(shù)的降低。其中包括但不限于活性、反應(yīng)、病癥或疾病的完全消除。其中還包括(例如)與本地或?qū)φ账较啾龋钚?、反?yīng)、病癥或疾病減少10％。因此，減幅可以是10、20、30、40、50、60、70、80、90、100％或與天然或?qū)φ账较啾热魏畏鹊臏p少。

可以通過公開方法抑制其生長的癌癥包括通常對免疫治療有反應(yīng)的癌癥。所治療的癌癥的非限制性實(shí)例包括黑素瘤(例如轉(zhuǎn)移性惡性黑素瘤)、腎癌(例如透明細(xì)胞癌)、前列腺癌(例如激素抵抗性前列腺癌)、乳腺癌、結(jié)腸癌和肺癌(例如非小細(xì)胞肺癌)?？梢允褂霉_方法治療的其它癌癥實(shí)例包括骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭頸部癌癥、皮膚或眼內(nèi)惡性黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區(qū)癌、胃癌、睪丸癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內(nèi)膜癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、食道癌、小腸癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)的癌癥、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、慢性或急性白血病(包括急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病)、兒童實(shí)體瘤、淋巴細(xì)胞淋巴瘤、膀胱癌、腎癌或輸尿管癌、腎盂癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(cns)腫瘤、原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤、腫瘤血管生成、脊軸腫瘤、腦干膠質(zhì)瘤、垂體腺瘤、卡波西肉瘤、表皮樣癌、鱗狀細(xì)胞癌、t細(xì)胞淋巴瘤、環(huán)境誘發(fā)的癌癥(包括由石棉引起的癌癥)，以及所述癌癥的組合。公開方法也可用于治療轉(zhuǎn)移性癌癥，特別是表達(dá)pd-l1的轉(zhuǎn)移性癌癥。

在部分實(shí)施例中，布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑可以與免疫原性劑組合，比如癌細(xì)胞、純化的腫瘤抗原(包括重組蛋白、肽和碳水化合物分子)或通過編碼免疫刺激細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞?？墒褂玫哪[瘤疫苗非限制性實(shí)例包括黑素瘤抗原肽，例如gp100、mage抗原、trp-2、mart1和/或酪氨酸酶的肽，或轉(zhuǎn)染以表達(dá)細(xì)胞因子gm-csf的腫瘤細(xì)胞。

公開的布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑可以與疫苗接種方案組合。已經(jīng)設(shè)計(jì)了許多針對腫瘤疫苗的實(shí)驗(yàn)策略(參見rosenberg,s.,2000,developmentofcancervaccines,ascoeducationalbookspring:60-62；logothetis,c.,2000,ascoeducationalbookspring:300-302；khayat,d.2000,ascoeducationalbookspring:414-428；foon,k.2000,ascoeducationalbookspring:730-738；亦可參見restifo,n.andsznol,m.,cancervaccines,ch.61,pp.3023-3043indevita,v.etal.(eds.),1997,cancer:principlesandpracticeofoncology.fifthedition)。在其中一種策略中，疫苗使用自體或同種異體腫瘤細(xì)胞進(jìn)行制備。當(dāng)腫瘤細(xì)胞被轉(zhuǎn)導(dǎo)以表達(dá)gm-csf時(shí)，這些細(xì)胞疫苗被證明最為有效。gm-csf已被證明是用于腫瘤疫苗接種的強(qiáng)效抗原遞呈激活劑(dranoffetal(1993)proc.natl.acad.sci.u.s.a.90:3539-43)。

公開的布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑可以與在腫瘤中表達(dá)的重組蛋白質(zhì)和/或肽結(jié)合使用，以對這些蛋白質(zhì)產(chǎn)生免疫反應(yīng)。這些蛋白質(zhì)通常被免疫系統(tǒng)視為自身抗原，因此對其形成耐受。腫瘤抗原還包括蛋白質(zhì)端粒酶，為合成染色體端粒所需物質(zhì)，并且其在超過85％的人類癌癥中和有限數(shù)量的體細(xì)胞組織中表達(dá)。腫瘤抗原也可能是癌細(xì)胞中表達(dá)的“新抗原”，因?yàn)轶w細(xì)胞突變會(huì)改變蛋白質(zhì)序列，或在b細(xì)胞腫瘤的兩個(gè)不相關(guān)序列或獨(dú)特型之間產(chǎn)生融合蛋白。

其他腫瘤疫苗包括來自涉及人類癌癥的病毒(人乳頭瘤病毒(hpv)、肝炎病毒(hbv和hcv)和卡波西氏皰疹肉瘤病毒(khsv))的蛋白質(zhì)?？膳cpd-1阻滯聯(lián)合使用的另一種形式的腫瘤特異性抗原是從腫瘤組織本身分離的純化熱休克蛋白(hsp)。這些熱休克蛋白含有來自腫瘤細(xì)胞的蛋白質(zhì)片段，且這些熱休克蛋白可高效遞送到抗原遞呈細(xì)胞引發(fā)腫瘤免疫。

樹突狀細(xì)胞(dc)是可用于引發(fā)抗原特異性反應(yīng)的高效抗原遞呈細(xì)胞。樹突狀細(xì)胞可以體外制備并用各種蛋白質(zhì)和多肽抗原以及腫瘤細(xì)胞提取物加載。樹突狀細(xì)胞也可以通過遺傳方式轉(zhuǎn)導(dǎo)以表達(dá)這些腫瘤抗原。就免疫而言，樹突狀細(xì)胞也可直接與腫瘤細(xì)胞融合。作為免疫接種的方法，樹突狀細(xì)胞免疫可與布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑有效結(jié)合以激活更高效的抗腫瘤反應(yīng)。

公開的布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑也可與標(biāo)準(zhǔn)癌癥治療結(jié)合，例如化療方案。在這些情況下，可以減少所用化學(xué)試劑的劑量。此類結(jié)合的一個(gè)實(shí)例是將布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑與氨烯咪胺組合用于治療黑素瘤。此類組合的另一個(gè)實(shí)例是將布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑與白細(xì)胞介素-2(il-2)組合用于治療黑素瘤?？赡苤率古c布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑協(xié)同作用的其他聯(lián)合療法是放射性療法、手術(shù)和內(nèi)分泌治療。每個(gè)方案都在宿主中產(chǎn)生腫瘤抗原的來源。血管發(fā)生抑制劑也可與布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑結(jié)合。血管發(fā)生的抑制導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡，其可以提供腫瘤抗原進(jìn)入宿主抗原遞呈途徑。

布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑是本領(lǐng)域已知試劑。布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑是可以部分或全部阻止或抑制至少一個(gè)布羅莫結(jié)構(gòu)域與蛋白質(zhì)的乙酰賴氨酸殘基(例如組蛋白的乙酰賴氨酸殘基)結(jié)合的任何分子或化合物。布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑可能是上述抑制布羅莫結(jié)構(gòu)域的任何分子或化合物，包括核酸(例如dna和rna核酸適體)、反義寡核苷酸、小干擾rna和短發(fā)夾rna、短肽、抗體或抗體片段和小分子物質(zhì)(例如小分子化合物)。應(yīng)當(dāng)理解，布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑可以僅抑制一個(gè)含布羅莫結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)，或者它可以抑制多種或所有含布羅莫結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)。

布羅莫結(jié)構(gòu)域的實(shí)例描述于jp2009028043、jp2009183291、wo2011054843、wo2011054848、wo2009/084693a1、wo2009084693、wo2011054844、wo2011054846、us2012028912,filippakopoulosetal.bioorgmedchem.20(6):1878-1886,2012；chungetal.jmedchem.54(11):3827-38,2011；和chungetal.jbiomolscreen.16(10):1170-85,2011，通過引用將其并入本文。

在部分實(shí)施例中，布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑是bet抑制劑。bet抑制劑是可以防止或抑制至少一個(gè)bet族群的布羅莫結(jié)構(gòu)域與蛋白質(zhì)的乙酰賴氨酸殘基結(jié)合的任何分子或化合物。bet抑制劑可能是上述抑制bet的任何分子或化合物，包括核酸(例如dna和rna核酸適體)、反義寡核苷酸、小干擾rna和短發(fā)夾rna、短肽、抗體或抗體片段和小分子物質(zhì)(例如小分子化合物)。

bet的實(shí)例描述于wo2011/143651、wo2009/084693、wo2011/143669、wo2011/143660、wo2011/054851和jp2008156311中，通過引用將其并入本文。應(yīng)當(dāng)理解，bet抑制劑可以僅抑制一個(gè)bet族群或它可以抑制多個(gè)或所有的bet族群。本領(lǐng)域已知的bet抑制劑的實(shí)例包括但不限于rvx-208(resverlogix)、pfi-1(結(jié)構(gòu)基因組學(xué)聯(lián)盟)、otx015(田邊三菱制藥株式會(huì)社)、bzt-glaxosmithkline)。

在某些方面，bet抑制劑是式i的化合物：

其中

x為n或cr5；

r5為h、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基；各項(xiàng)被任選取代；

rb為h、烷基、羥烷基、氨基烷基、烷氧基烷基、鹵代烷基、羥基、烷氧基或-coo-r3，各項(xiàng)被任選取代；

環(huán)a為芳基或雜芳基；

每個(gè)ra都是獨(dú)立的烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，各項(xiàng)被任選取代；或任意兩個(gè)ra與每個(gè)連接的原子一起可形成稠合芳基或雜芳基基團(tuán)；

r為烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基；各項(xiàng)被任選取代；

r1為-(ch2)n-l，其中n為0-3、l為h、-coo-r3、-co-r3、-co-n(r3r4)、-s(o)2-r3、-s(o)2-n(r3r4)、n(r3r4)、n(r4)c(o)r3、任選經(jīng)取代芳基或任選經(jīng)取代雜芳基；

r2為h、d(氘)、鹵素或任選經(jīng)取代烷基；

r3分別獨(dú)立地選自由下列基團(tuán)組成的一組基團(tuán)：

(i)h、芳基、經(jīng)取代芳基、雜芳基或經(jīng)取代雜芳基；

(ii)雜環(huán)烷基或經(jīng)取代雜環(huán)烷基；

(iii)-c1-c8烷基、-c2-c8烯基或-c2-c8炔基，分別含有從o、s或n中選取的0、1、2或3雜原子；-c3-c12環(huán)烷基、經(jīng)取代-c3-c12環(huán)烷基、-c3-c12環(huán)烯基或經(jīng)取代-c3-c12環(huán)烯基，各項(xiàng)可被任選取代；及

(iv)nh2，n＝cr4r6；

每個(gè)r4分別為h、烷基、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，各項(xiàng)被任選取代；

或者r3和r4與其附著的氮原子結(jié)合形成4-10元環(huán)；

r6為烷基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，各項(xiàng)被任選取代；或者r4和r6與其附著的碳原子結(jié)合形成4-10元環(huán)；

m為0、1、2或3；

前提是：

(a)若環(huán)a為噻吩基，x為n，r為苯基或經(jīng)取代苯基，r2為h，rb為甲基，r1為-(ch2)n-l，其中，n為1，l為-co-n(r3r4)，則r3和r4不會(huì)與其附著的氮原子結(jié)合形成嗎啉環(huán)；

(b)若環(huán)a為噻吩基，x為n，r為經(jīng)取代苯基，r2為h，rb為甲基，r1為-(ch2)n-l，其中，n為1，l為-co-n(r3r4)，且r3和r4其中一個(gè)為h，則另一個(gè)r3和r不是甲基、羥乙基、烷氧基、苯基、經(jīng)取代苯基、吡啶基或經(jīng)取代吡啶基；及

(c)若環(huán)a為噻吩基，x為n，r為經(jīng)取代苯基，r2為h，rb為甲基，r1為-(ch2)n-l，其中，n為1，l為-coo-r3，則r3不是甲基或乙基；或其鹽、溶劑化物或水合物。

在部分實(shí)施例中，r為芳基或雜芳基，各項(xiàng)被任選取代。

在部分實(shí)施例中，l為h、-coo-r3、-co-n(r3r4)、-s(o)2-r3、-s(o)2-n(r3r4)、n(r3r4)、n(r4)c(o)r3或任選經(jīng)取代芳基。在部分實(shí)施例中，r3分別獨(dú)立地選自由下列基團(tuán)組成的一組基團(tuán)：h、-c1-c8烷基，含有從o、s或n中選取的0、1、2或3雜原子；或nh2、n＝cr4r6。

在部分實(shí)施例中，r1為-(ch2)n-l，其中，n為1，l為-co-n(r3r4)，r3和r4其中一個(gè)為h，另一個(gè)為(ch2)p-y，其中p為1-3范圍內(nèi)的數(shù)值(例如，p為2)，y為含氮環(huán)(可能為芳環(huán)或非芳環(huán))。

在部分實(shí)施例中，r2為h、d、鹵素或甲基。

在部分實(shí)施例中，rb為烷基、羥烷基、鹵代烷基或烷氧基；各項(xiàng)被任選取代。

在部分實(shí)施例中，rb為甲基、乙基、羥甲基、甲氧基甲基、三氟甲基、cooh、coome、cooet或cooch2oc(o)ch3。

在部分實(shí)施例中，環(huán)a為5或6元芳基或雜芳基。在部分實(shí)施例中，環(huán)a為硫代呋喃基、苯基、萘基、聯(lián)苯、四氫萘基、二氫茚基、吡啶基、呋喃基、吲哚基、嘧啶基、吡地嗪基、吡嗪基、咪唑基、氧氮茂基、噻吩基、噻唑基、三唑基、異惡唑基、喹啉基、吡咯基、吡唑基或5、6、7、8-四氫異喹啉。

在部分實(shí)施例中，環(huán)a為苯基或噻吩基。

在部分實(shí)施例中，m為1或2，且至少有一個(gè)ra為甲基。

在部分實(shí)施例中，每個(gè)ra分別為h、任選經(jīng)取代烷基，或任意兩個(gè)ra與其各自附著的原子結(jié)合，可形成芳基。

在某些方面，bet抑制劑是式ii的化合物：

其中

x為n或cr5；

r5為h、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，各項(xiàng)被任選取代；

rb為h、烷基、羥烷基、氨基烷基、烷氧基烷基、鹵代烷基、羥基、烷氧基或-coo-r3，各項(xiàng)被任選取代；

每個(gè)ra分別為烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，各項(xiàng)被任選取代；或任意兩個(gè)ra與其各自附著的原子結(jié)合，可形成稠合芳基或雜芳基基團(tuán)；

r為烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，各項(xiàng)被任選取代；

r'1為h、-coo-r3、-co-r3，任選經(jīng)取代芳基或任選經(jīng)取代雜芳基；

r3分別獨(dú)立地選自由下列基團(tuán)組成的一組基團(tuán)：

(i)h、芳基、經(jīng)取代芳基、雜芳基、經(jīng)取代雜芳基；

(ii)雜環(huán)烷基或經(jīng)取代雜環(huán)烷基；

(iii)-c1-c8烷基、-c2-c8烯基或-c2-c8炔基，分別含有從o、s或n中選取的0、1、2或3雜原子；-c3-c12環(huán)烷基、經(jīng)取代-c3-c12環(huán)烷基、-c3-c12環(huán)烯基或經(jīng)取代-c3-c12環(huán)烯基，各項(xiàng)可被任選取代；

m為0、1、2或3；

前提是，若r'1為-coo-r3，x為n，r為經(jīng)取代苯基，rb為甲基，則

r3不是甲基或乙基；

或其鹽、溶劑化物或水合物。

在部分實(shí)施例中，r為芳基或雜芳基，各項(xiàng)被任選取代。在部分實(shí)施例中，r為苯基或吡啶基，各項(xiàng)被任選取代。在部分實(shí)施例中，r為p-cl-苯基、o-cl-苯基、m-cl-苯基、p-f-苯基、o-f-苯基、m-f-苯基或吡啶基。

在部分實(shí)施例中，r'1為-coo-r3，任選經(jīng)取代芳基或任選經(jīng)取代雜芳基；r3為-c1-c8烷基，包含了從o、s或n中選取的0、1、2或3雜原子，可被任選取代。在部分實(shí)施例中，r'1為-coo-r3，r3為甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基或叔丁基；或r'1為h或任選經(jīng)取代苯基。

在部分實(shí)施例中，rb為甲基、乙基、羥甲基、甲氧基甲基、三氟甲基、cooh、coome、cooet、cooch2oc(o)ch3。

在部分實(shí)施例中，rb為甲基、乙基、羥甲基、甲氧基甲基、三氟甲基、cooh、coome、cooet或cooch2oc(o)ch3。在部分實(shí)施例下，每個(gè)ra分別為任選經(jīng)取代烷基，或任意兩個(gè)ra與其各自附著的原子結(jié)合，可形成稠合芳基。

在部分實(shí)施例中，每個(gè)ra為甲基。

在某些方面，bet抑制劑是式iii的化合物：

其中

x為n或cr5；

r5為h、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，各項(xiàng)被任選取代；

rb為h、烷基、羥烷基、氨基烷基、烷氧基烷基、鹵代烷基、羥基、烷氧基或-coo-r3，各項(xiàng)被任選取代；

環(huán)a為芳基或雜芳基；

每個(gè)ra分別為烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，各項(xiàng)被任選取代；或任意兩個(gè)ra與其各自附著的原子結(jié)合，可形成稠合芳基或雜芳基基團(tuán)；

r為烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，各項(xiàng)被任選取代；

r3分別獨(dú)立地選自由下列基團(tuán)組成的一組基團(tuán)：

(i)h、芳基、經(jīng)取代芳基、雜芳基或經(jīng)取代雜芳基；

(ii)雜環(huán)烷基或經(jīng)取代雜環(huán)烷基；

(iii)-c1-c8烷基、-c2-c8烯基或-c2-c8炔基，分別含有從o、s或n中選取的0、1、2或3雜原子；-c3-c12環(huán)烷基、經(jīng)取代-c3-c12環(huán)烷基、-c3-c12環(huán)烯基或經(jīng)取代-c3-c12環(huán)烯基，各項(xiàng)可被任選取代；及

(iv)nh2，n＝cr4r6；

每個(gè)r4分別為h、烷基、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，各項(xiàng)被任選取代；

或者r3和r4與其附著的氮原子結(jié)合形成4-10元環(huán)；

r6為烷基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，各項(xiàng)被任選取代；或者r4和r6與其附著的碳原子結(jié)合形成4-10元環(huán)；

m為0、1、2或3；

前提是：

(a)若環(huán)a為噻吩基，x為n，r為苯基或經(jīng)取代苯基，rb為甲基，則r3和r4不與其附著的氮原子結(jié)合形成嗎啉環(huán)；及

(b)若環(huán)a為噻吩基，x為n，r為經(jīng)取代苯基，r2為h，rb為甲基，且r3和r4其中一個(gè)為h，則另一個(gè)不是甲基、羥乙基、烷氧基、苯基、經(jīng)取代苯基、吡啶基或經(jīng)取代吡啶基；及

或其鹽、溶劑化物或水合物。

在部分實(shí)施例中，r為芳基或雜芳基，各項(xiàng)被任選取代。在部分實(shí)施例中，r為苯基或吡啶基，各項(xiàng)被任選取代。

在部分實(shí)施例中，r是p-cl-苯基、o-cl-苯基、m-cl-苯基、p-f-苯基、o-f-苯基、m-f-苯基或吡啶基。在部分實(shí)施例中，r3為h、nh2或n＝cr4r6。

在部分實(shí)施例中，每個(gè)r4分別為h、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基；各項(xiàng)被任選取代。

在部分實(shí)施例中，為烷基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，各項(xiàng)被任選取代。

在某些方面，bet抑制劑是式iv的化合物：

其中

x為n或cr5；

r5為h、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，各項(xiàng)被任選取代；

rb為h、烷基、羥烷基、氨基烷基、烷氧基烷基、鹵代烷基、羥基、烷氧基或-coo-r3，各項(xiàng)被任選取代；

環(huán)a為芳基或雜芳基；

每個(gè)ra分別為烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，各項(xiàng)被任選取代；或任意兩個(gè)ra與其各自附著的原子結(jié)合，可形成稠合芳基或雜芳基基團(tuán)；

r1為-(ch2)n-l，其中n為0-3、l為h、-coo-r3、-co-r3、-co-n(r3r4)、-s(o)2-r3、-s(o)2-n(r3r4)、n(r3r4)、n(r4)c(o)r3、任選經(jīng)取代芳基或任選經(jīng)取代雜芳基；

r2為h、d、鹵素或任選經(jīng)取代烷基；

r3分別獨(dú)立地選自由下列基團(tuán)組成的一組基團(tuán)：

(i)h、芳基、經(jīng)取代芳基、雜芳基或經(jīng)取代雜芳基；

(ii)雜環(huán)烷基或經(jīng)取代雜環(huán)烷基；

(iii)-c1-c8烷基、-c2-c8烯基或-c2-c8炔基，分別含有從o、s或n中選取的0、1、2或3雜原子；-c3-c12環(huán)烷基、經(jīng)取代-c3-c12環(huán)烷基、-c3-c12環(huán)烯基或經(jīng)取代-c3-c12環(huán)烯基，各項(xiàng)可被任選取代；及

(iv)nh2，n＝cr4r6；

每個(gè)r4分別為h、烷基、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，各項(xiàng)被任選取代；

或者r3和r4與其附著的氮原子結(jié)合形成4-10元環(huán)；

r6為烷基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，各項(xiàng)被任選取代；或者r4和r6與其附著的碳原子結(jié)合形成4-10元環(huán)；

m為0、1、2或3；

前提是：

(a)若環(huán)a為噻吩基，x為n，r2為h，rb為甲基，r1為-(ch2)n-l，其中，n為0，l為-co-n(rar4)，則r3和r4不會(huì)與其附著的氮原子結(jié)合形成嗎啉環(huán)；

(a)若環(huán)a為噻吩基，x為n，r2為h，rb為甲基，r1為-(ch2)n-l，其中，n為0，l為-co-n(r3r4)，且r3和r4其中一個(gè)為h，則另一個(gè)不是甲基、羥乙基、烷氧基、苯基、經(jīng)取代苯基、吡啶基或經(jīng)取代吡啶基；及

(c)若環(huán)a為噻吩基，x為n，r2為h，rb為甲基，r1為-(ch2)n-l，其中，n為0，l為-coo-r3，則r3不是甲基或乙基；或

其鹽、溶劑化物或水合物。

在部分實(shí)施例中，r1為-(ch2)n-l，其中n為0-3，l為-coo-r3，任選經(jīng)取代芳基或任選經(jīng)取代雜芳基；r3為-c1-c8烷基，包含了從o、s或n中選取的0、1、2或3雜原子，可被任選取代。在部分實(shí)施例中，n為1或2，l為烷基或-coo-r3，r3為甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基或叔丁基；或n為1或2，l為h或任選經(jīng)取代苯基。

在部分實(shí)施例中，r2為h或甲基。

在部分實(shí)施例中，rb為甲基、乙基、羥甲基、甲氧基甲基、三氟甲基、cooh、coome、cooet、cooch2oc(o)ch3。

在部分實(shí)施例中，環(huán)a為苯基、萘基、聯(lián)苯、四氫萘基、二氫茚基、吡啶基、呋喃基、吲哚基、嘧啶基、吡地嗪基、吡嗪基、咪唑基、氧氮茂基、噻吩基、噻唑基、三唑基、異惡唑基、喹啉基、吡咯基、吡唑基或5、6、7、8-四氫異喹啉。

在部分實(shí)施例下，每個(gè)ra分別為任選經(jīng)取代烷基，或任意兩個(gè)ra與其各自附著的原子結(jié)合，可形成芳基。

本發(fā)明的方法也與式v-xxii的化合物以及下述的任何化合物相關(guān)。

另一方面，該化合物由下列公式表示：

或其鹽、溶劑化物或水合物。

在部分實(shí)施例中，該化合物為(+)-jql：

或其鹽、溶劑化物或水合物。

另一方面，該化合物由下列公式表示：

或其鹽、溶劑化物或水合物。

另一方面，該化合物由下列公式表示：

或其鹽、溶劑化物或水合物。

另一方面，該化合物由下列任一公式表示：

或其鹽、溶劑化物或水合物。

另一方面，該化合物由下列任一公式表示：

或其鹽、溶劑化物或水合物。

另一方面，該化合物由下列任一公式表示：

或其鹽、溶劑化物或水合物。

在部分實(shí)施例中，本發(fā)明的化合物由下列任一結(jié)構(gòu)表示：

或其鹽、溶劑化物或水合物。

在一則實(shí)施例中，該化合物由下列結(jié)構(gòu)表示：

或其鹽、溶劑化物或水合物。在另一則實(shí)施例中，該化合物由下列結(jié)構(gòu)表示：

或其鹽、溶劑化物或水合物。

在另一則實(shí)施例中，該化合物由下列結(jié)構(gòu)表示：

或其鹽、溶劑化物或水合物。

在部分實(shí)施例中，本發(fā)明的化合物可具有與下述任何化合物相反的手性。

在部分實(shí)施例中，該化合物由式(v)，(vi)或(vii)表示：

r中，rl、r2和rb與式(i)中的意義相同；y為o、n、s或cr5，其中r5與式(i)中的意義相同；n為0或1；式(vii)中的虛線圓指芳環(huán)或非芳環(huán)；或其鹽、溶劑化物或水合物。

在式i-iv及vi(或下列任何公式)的部分實(shí)施例中，r6表示下表所述醛的非羰基部分(如式r6cho的醛，r6為其非羰基部分)。在部分實(shí)施例中，r4與r6一同表示下述酮的非羰基部分(如式r6c(o)r4的酮，r4與r6為其非羰基部分)。

表格a

在一則實(shí)施例中，該化合物由下列公式表示：(viii)或其鹽、溶劑化物或水合物。

在部分實(shí)施例中，該化合物為(外消旋)jql；在部分實(shí)施例中，該化合物為(+)-jql。在部分實(shí)施例中，該化合物為選自由下列物質(zhì)組成的一組基團(tuán)的化合物：

或其鹽、溶劑化物或水合物。

化合物的其他例子包括下列任何公式所對應(yīng)的化合物：

或其鹽、溶劑化物或水合物。

在公式ix-xxιι中，r和r'可以是，例如h、芳基、經(jīng)取代芳基、雜芳基、雜環(huán)烷基、-c1-c8烷基、-c2-c8烯基、-c2-c8炔基、-c3-c12環(huán)烷基、經(jīng)取代-c3-c12環(huán)烷基、-c3-c12環(huán)烯基或經(jīng)取代-c3-c12環(huán)烯基，以上各項(xiàng)可被任選取代。在公式xiv中，x可以是本文中所述芳基基團(tuán)的任何取代基。

在某些方面，bet抑制劑是下列公式的化合物：

其中

r1是碳數(shù)為1-4的烷基，

r2為氫原子；鹵素原子或被鹵素原子或醇羥基任選取代的碳數(shù)為1-4的烷基，

r3為鹵素原子；被鹵素原子任選取代的苯基、碳數(shù)為1-4的烷基、碳數(shù)為1-4的烷氧基或氰基；—nrs—(ch2)m—r6，其中r5為氫原子或碳數(shù)為1-4的烷基，m為0-4的整數(shù)，r6為被鹵素原子任選取代的苯基或吡啶基；或—nr7—co—(ch2)n—r8，其中r7為氫原子或碳數(shù)為1-4的烷基，n為0-2的整數(shù)，r8為被鹵素原子任選取代的苯基或吡啶基，且

r4為—(ch2)a—co—nh—r9，其中a為1-4的整數(shù)，r9為碳數(shù)為1-4的烷基；碳數(shù)為1-4的羥烷基；碳數(shù)為1-4的烷氧基；被碳數(shù)為1-4的烷基、碳數(shù)為1-4的烷氧基、氨基或醇羥基任選取代的苯基或吡啶基或—(ch2)b—coor10，其中b為1-4的整數(shù)，r10為碳數(shù)為1-4的烷基，

或其藥用鹽或其水合物或溶劑化物。

在部分示例中，r1為甲基。

在部分示例中，r2為鹵素原子(如氯)、甲基或羥甲基。

在部分示例中，r3為鹵素原子、甲氧基苯基、苯腈、—nr5′—(ch2)m′—r6′，其中r5′為氫原子或甲基，m′為0或1，r6′為苯基、吡啶基或被氟原子取代的苯基及—nr7′—co—(ch2)n′—r8′，其中r7′為氫原子，n′為2，r8′為苯基以及更多更可取的例子，包括氯原子、苯腈、苯胺基和苯乙基羰基氨基。最可取的例子包括氯原子和3-苯腈。

在部分示例中，r4為—(ch2)8′—co—nh—r9′，其中a′為1，r9為甲基、羥乙基、甲氧基、氨基苯基、羥苯基、吡啶基或甲氧基吡啶及，—(ch2)b′—coor10，其中b′為1，r10′為甲基或乙基，如羥基苯基氨基羰基甲基和甲氧羰基。其他例子包括4-羥基苯基氨基羰基甲基和甲氧羰基。此外，與r4鍵結(jié)的碳原子是不對稱碳原子。其空間構(gòu)型可以是s構(gòu)型、r構(gòu)型和混合構(gòu)型中任意一種，s構(gòu)型較為合適。

在某些方面，bet抑制劑包括(s)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑[4,3-a][1,4]二氮雜-6-基]-n-(4-羥苯基)乙酰胺和其二水合物。

在某些方面，bet抑制劑為甲基(s)-{4-(3′-氰基聯(lián)苯-4-基)-2,3,9-三甲基-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑[4,3-a][1,4]二氮雜-6-基}醋酸鹽。

在某些方面，bet抑制劑為甲基(s)-{2,3,9-三甲基l-4-(4-苯基氨基苯基-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑[4,3-a][1,4]二氮雜-6-基}醋酸鹽。

在某些方面，bet抑制劑為甲基(s)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙酰氨基)苯基]-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑[4,3-a][1,4]二氮雜-6-yl}醋酸鹽。

在某些方面，bet抑制劑為(s)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6h-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑[4,3-a][1,4]二氮雜-6-基]-n-(4-羥苯基)乙酰胺或其二水合物。

在某些方面，bet抑制劑是下列公式的化合物：

在某些方面，bet抑制劑是下列公式的化合物：

在某些方面，bet抑制劑是下列公式的化合物：

在某些方面，bet抑制劑是下列公式的化合物：

在某些方面，bet抑制劑是下列公式的化合物：

在部分實(shí)施例中，bet抑制劑是鍵結(jié)至bet族成員(如brd1、brd2、brd3、brd4、brd7、brdt；參見wo2011143669)首個(gè)布羅莫結(jié)構(gòu)域的結(jié)合口袋的小型分子化合物。在部分重要的實(shí)施例中，bet抑制劑是jq1，具有以下公式：

公開的布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑可以與癌癥免疫療法結(jié)合使用。有兩種不同的免疫療法：被動(dòng)的免疫療法利用免疫系統(tǒng)的部件指揮對抗癌細(xì)胞的靶向細(xì)胞毒素活動(dòng)，而無需啟動(dòng)患者體內(nèi)的免疫反應(yīng)，而主動(dòng)的免疫療法則會(huì)觸發(fā)內(nèi)生的免疫反應(yīng)。被動(dòng)策略包括使用b細(xì)胞產(chǎn)生應(yīng)對特定抗原的單克隆抗體(mabs)。二十世紀(jì)70年代雜交瘤技術(shù)的開發(fā)及識(shí)別腫瘤特異性抗原促使專門針對腫瘤細(xì)胞，以使免疫系統(tǒng)對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行毀滅的mabs得以研發(fā)成功。迄今為止，mabs一直是免疫療法領(lǐng)域取得的最大成就，是2012年三種最暢銷的抗癌藥物之一。其中一種藥物是利妥昔單抗(美羅華、基因泰克)，這種藥物與在b細(xì)胞惡性腫瘤(如非何杰金氏淋巴瘤(nhl))表面表達(dá)高度活躍的cd20蛋白鍵結(jié)。利妥昔單抗獲美國食品和藥物管理局批準(zhǔn)，與化療結(jié)合用于治療非何杰金氏淋巴瘤和慢性淋巴細(xì)胞白血病(cll)。另一種重要的單克隆抗體是曲妥單抗(赫塞??；基因泰克)，該種抗體通過指向人類表皮生長因子受體2(her2)的表達(dá)而徹底改革了her2陽性乳腺癌的治療方法。

為積極促進(jìn)抗腫瘤免疫反應(yīng)，癌癥治療性疫苗已研發(fā)成功。與用于預(yù)防傳染疾病的預(yù)防疫苗不同的是，治療性疫苗旨在通過刺激針對特定腫瘤相關(guān)抗原的免疫反應(yīng)治療已確定的癌癥。2010年，sipuleucel-t(普羅文奇；dendreoncorporation)獲美國食品和藥物管理局批準(zhǔn)，根據(jù)impact(免疫療法前列腺癌治療)的試驗(yàn)結(jié)果用于治療轉(zhuǎn)移性去勢抵抗性前列腺癌，該藥物使整體存活率提高4.1個(gè)月，且與安慰劑效應(yīng)相比將死亡風(fēng)險(xiǎn)降低22％。積極免疫療法的優(yōu)勢在于它們可同時(shí)調(diào)動(dòng)先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)，從而提供長期可持續(xù)的抗癌活性。盡管mabs通常被視作被動(dòng)免疫療法，但越來越多的證據(jù)表明，它們還可通過“類疫苗”效應(yīng)誘導(dǎo)適應(yīng)性免疫反應(yīng)。

兩種已知的抑制性檢查點(diǎn)途徑包括通過細(xì)胞毒t淋巴細(xì)胞抗原-4(ctla-4)和程序性死亡受體1(pd-1)發(fā)出信號。這些蛋白屬于協(xié)同信號分子cd28-b7族群，該族群在t細(xì)胞功能的所有階段均扮演重要角色。pd-1受體(也稱為cd279)在激活的t細(xì)胞表面表達(dá)。其配體pd-l1(b7-h1；cd274)和pd-l2(b7-dc；cd273)在抗原呈遞細(xì)胞(如樹突細(xì)胞或巨噬細(xì)胞)表面表達(dá)。pd-l1是主要配體，但pd-l2的表達(dá)模式更加有限。當(dāng)配體鍵結(jié)至pd-1時(shí)，會(huì)向t細(xì)胞傳輸抑制信號，從而減少細(xì)胞因子產(chǎn)生并抑制t細(xì)胞擴(kuò)散。表1載列臨床試驗(yàn)中的免疫檢查點(diǎn)靶向抗體清單。

編號為8,008,449的美國專利中描述了程序性死亡1(pd-1)的人單克隆抗體和單獨(dú)使用抗pd-1抗體或與其它免疫治療劑組合治療癌癥的方法，通過引用將其納入本文。編號為8,552,154的美國專利中描述了抗pd-l1抗體及其用途，通過引用這些抗體將其納入本文。編號為8,617,546的美國專利中描述了包含抗pd-1抗體或抗pd-l1抗體的抗癌劑，通過引用這些抗體將其納入本文。

本文還公開了一種組合物，例如含有與藥學(xué)上可接受的載體一起配制的布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑的藥物組合物。藥物組合物可以聯(lián)合治療，即與其它試劑組合施用。例如，組合療法包括與至少一種其它抗炎或免疫抑制劑組合的布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑抗體。

本文所用的“藥學(xué)上可接受的載體”包括生理上相容的任何及所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗菌和抗真菌劑、等滲和吸收延遲劑等。最佳情況下，載體適合于靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、腸胃外、脊髓或表皮給藥(例如通過注射或輸注)。根據(jù)給藥途徑，可以在材料中涂覆活性化合物(即抗體、免疫偶聯(lián)物或雙特異性分子)，以保護(hù)化合物免受可能使其失活的酸和其它天然條件的作用。

公開的藥物組合物包括一種或多種藥學(xué)上可接受的鹽。“藥學(xué)上可接受的鹽”指保留母體化合物的所需生物活性并且不會(huì)產(chǎn)生任何不期望的毒理作用的鹽。

所公開的藥物組合物包括藥學(xué)上可接受的抗氧化劑。藥學(xué)上可接受的抗氧化劑的示例包括：(1)水溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸、酸鹽半胱氨酸、硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉等；(2)油溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基羥基茴香醚(bha)、二丁基羥基甲苯(bht)、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α-生育酚等；和(3)金屬螯合劑，例如檸檬酸、乙二胺四乙酸(edta)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。

可用于藥物組合物的合適水性和非水性載體示例包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合適的混合物、植物油(如橄欖油)和可注射的有機(jī)酯(如油酸乙酯)。例如，通過使用卵磷脂等包衣材料、在分散體的情況下維持所需的粒徑以及使用表面活性劑，可以保持適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性。

這些組合物還包含佐劑，如防腐劑、潤濕劑、乳化劑和分散劑。可以通過滅菌程序(同上)和通過包含各種抗細(xì)菌和抗真菌劑(例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等)以避免微生物的存在。還可以在組合物中納入等滲劑(例如糖、氯化鈉等)。此外，可注射藥物形式的延長吸收可以通過納入延遲吸收的試劑(例如單硬脂酸鋁和明膠)來實(shí)現(xiàn)。

藥學(xué)上可接受的載體包括無菌水溶液或分散體和用于臨時(shí)制備無菌可注射溶液或分散體的無菌粉末。將這種介質(zhì)和試劑用于藥物活性物質(zhì)是本領(lǐng)域已知做法。除了任何常規(guī)介質(zhì)或試劑與活性化合物不相容之外，預(yù)期將在本發(fā)明的藥物組合物中使用以上物質(zhì)。亦可在組合物中納入補(bǔ)充活性化合物。

治療組合物通常在制造和儲(chǔ)存的情況下必須無菌且穩(wěn)定。該組合物可以配制成適合高藥物濃度的溶液、微乳液、脂質(zhì)體或其他有序結(jié)構(gòu)。載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)，及其合適的混合物。例如，通過使用卵磷脂等包衣、在分散體的情況下維持所需的粒徑以及使用表面活性劑，可以保持適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性。在許多情況下，首選在組合物中納入等滲劑(例如糖)、多元醇(例如甘露糖醇、山梨糖醇或氯化鈉)?？勺⑸浣M合物的延長吸收可以通過在組合物中納入延遲吸收的試劑(例如單硬脂酸鹽和明膠)來實(shí)現(xiàn)。

無菌可注射溶液可以通過在適當(dāng)?shù)娜軇┲屑尤胨枇康幕钚曰衔锱c上述所列成分的一種或其組合，根據(jù)需要并進(jìn)行殺菌微濾來制備。通常，通過將活性化合物摻入含有堿性分散介質(zhì)的無菌載體和上述所列的其他必要成分來制備分散體。就制備無菌可注射溶液的無菌粉末而言，首選制備方法是真空干燥和冷凍干燥(凍干)，以產(chǎn)生活性成分的粉末加上任何預(yù)先無菌過濾的溶液中的額外所需成分。

可以與載體材料組合以產(chǎn)生單一劑型的活性成分含量將根據(jù)所治療的受試者和具體的給藥方式而變化?？梢耘c載體材料組合以產(chǎn)生單一劑型的活性成分含量通常是產(chǎn)生治療效果的組合物含量。一般而言，在百分之百范圍內(nèi)，該含量介于約0.01％至約99％的活性成分，較優(yōu)范圍介于約0.1％至約70％的活性成分，最優(yōu)范圍介于約1％至約30％的活性成分與藥學(xué)上可接受的載體組合。

調(diào)整劑量方案以提供最佳預(yù)期的反應(yīng)(例如治療反應(yīng))。例如，可以施用單次推注，可以隨時(shí)間分開施用多個(gè)劑量，或者依據(jù)治療情況的緊急程度指示按比例減少或增加劑量。以劑量單位形式配制非消化道組合物尤其有利于給藥和劑量均勻。本文所用的劑量單位形式是指適合于待治療受試者的單位劑量的物理離散單位；每個(gè)單位含有經(jīng)計(jì)算的預(yù)定量活性化合物，以產(chǎn)生與所需藥物載體相關(guān)聯(lián)的預(yù)期治療效果。本發(fā)明的劑量單位形式的規(guī)格遵循并直接依賴于(a)活性化合物的獨(dú)特特征和將要實(shí)現(xiàn)的特定治療效果，和(b)復(fù)合此類化合物以治療個(gè)體敏感性的領(lǐng)域中固有的限制。

就布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑的給藥而言，每千克宿主體重的給藥劑量范圍從0.0001至100毫克不等，0.01至5毫克之間較為常見。例如，劑量可能為0.3毫克/千克體重、1毫克/千克體重、3毫克/千克體重、5毫克/千克體重或10毫克/千克體重，或者在1-10毫克/千克的范圍之內(nèi)。一項(xiàng)示范性治療方案所需的給藥頻率為每周一次、每兩周一次、每三周一次、每四周一次、每月一次、每三個(gè)月一次或每三至六個(gè)月一次。通過靜脈注射給藥的布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑首選劑量包括1毫克/千克體重或3毫克/千克體重，同時(shí)按照以下給藥方案之一使用布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑：(i)每四周給藥六劑，隨后每三個(gè)月給藥六劑；(ii)每三周；(iii)每三周給藥1毫克/千克體重后，一次性給藥3毫克/千克體重。

可改變藥物組合中活性成分的實(shí)際劑量水平，從而獲取一定量的活性成分，能在對患者無毒性的情況下，有效達(dá)到針對某一特定患者、組合和給藥方式的理想治療療效。選定的劑量水平將取決于各種藥物動(dòng)力學(xué)因素，包括所采用的現(xiàn)行發(fā)明特定組合的活性或其酯、鹽或酰胺化物、給藥途徑、給藥時(shí)間、所采用特定化合物的排泄率、治療的持續(xù)時(shí)間、與所采用的特定組合結(jié)合使用的其他藥物、化合物及/或物質(zhì)、接受治療患者的年齡、性別、體重、疾病、一般健康狀況和先前的病史，以及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中眾所周知的類似因素。

“治療有效劑量”的最好結(jié)果是病癥的嚴(yán)重程度降低，疾病無癥狀期的頻率和持續(xù)時(shí)間增加，或者預(yù)防感染疾病引起的損傷或障礙。例如，就腫瘤的治療而言，“治療有效劑量”最好能抑制至少約20％的細(xì)胞生長或腫瘤生長，更好的情況是抑制至少約40％，甚至能抑制至少約60％，而相對于未經(jīng)治療的受試者，仍能達(dá)到抑制至少約80％的較好情況?；衔镆种颇[瘤生長的能力可在能預(yù)測對人類腫瘤療效的動(dòng)物模型系統(tǒng)中進(jìn)行評估?；蛘?，組合的這一特性可通過測定化合物的抑制能力進(jìn)行評估，該抑制作用通過技術(shù)熟練的專家了解的化驗(yàn)在體外進(jìn)行。具療效化合物的治療有效劑量可縮減腫瘤大小或以其他方式改善受試者的癥狀。該領(lǐng)域中的一項(xiàng)普通技能是可基于受試者的大小、受試者癥狀的嚴(yán)重程度及選定的特定組合或給藥途徑等種種因素，確定該等劑量。

本文公開的組合可通過一種或多種給藥途徑，使用一種或多種該領(lǐng)域已知的各種方法進(jìn)行給藥。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，給藥的途徑及/或方式將視乎預(yù)期效果而異。對本發(fā)明抗體的首選給藥方式包括靜脈注射、肌肉注射、皮內(nèi)注射、腹腔注射、皮下注射、骨髓注射或其他非消化道給藥方式，例如注射或輸液。本文中使用的短語“非消化道給藥”指消化道給藥和局部給藥以外的給藥方式，通常采用注射方式，包括但不限于靜脈、肌肉、動(dòng)脈、鞘內(nèi)、囊內(nèi)、眶內(nèi)、心內(nèi)、皮內(nèi)、腹腔、經(jīng)氣管、皮下注射、表皮注射、關(guān)節(jié)內(nèi)注射、囊膜下、蛛網(wǎng)膜下、脊柱內(nèi)、硬膜外和胸骨內(nèi)注射及輸液。此外，該組合還可通過非消化道以外途徑給藥，如局部、表皮或粘膜途徑給藥，例如鼻腔內(nèi)、口服、陰道內(nèi)、直腸、舌下或局部給藥。

活性化合物可使用能防止化合物迅速釋放的載體制備，如控釋制劑，包括植入體、透皮貼劑及微膠囊輸送系統(tǒng)?？墒褂蒙锟山到?、生物相容的聚合物，如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯及聚乳酸。制備該制劑的許多方法均受專利保護(hù)，或普遍為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所知。

t細(xì)胞激活可經(jīng)自體樹突狀細(xì)胞或人工抗原遞呈細(xì)胞(aapcs)，或者通過轉(zhuǎn)基因輸送t細(xì)胞受體(tcrs)進(jìn)行t細(xì)胞工程在體外或體內(nèi)誘導(dǎo)。體外激活的自體t細(xì)胞可繼承性地轉(zhuǎn)移到患者體內(nèi)，從而專門殺死癌癥細(xì)胞。因此，還公開了抗原特異性t細(xì)胞進(jìn)行繼承性細(xì)胞轉(zhuǎn)移(act)的體外激活和擴(kuò)張方法。該方法包括在適合激活和擴(kuò)張抗原特異性t細(xì)胞的條件下存在布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑時(shí)，將抗原遞呈細(xì)胞(apc)群體暴露于大量t淋巴細(xì)胞群體。例如，t淋巴細(xì)胞可從由自體腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞(til)、使用高親和力t細(xì)胞受體(tcr)轉(zhuǎn)導(dǎo)的t細(xì)胞及使用嵌合抗原受體(car)轉(zhuǎn)導(dǎo)的t細(xì)胞組成的一組細(xì)胞中選定。

此外，注射抗原遞呈細(xì)胞可在無需自體細(xì)胞培養(yǎng)的情況下促成體內(nèi)免疫療法。因此，還公開了提高抗原遞呈細(xì)胞體外機(jī)能以進(jìn)行體內(nèi)免疫療法的方法。此方法包括使大量抗原遞呈細(xì)胞與布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑接觸。

可在公開療法中使用的抗原遞呈細(xì)胞包括自體樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞或兩者的結(jié)合體。

本發(fā)明的若干實(shí)施方式已作說明。盡管如此，需要理解的是，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的情況下作出了多項(xiàng)修改。因此，其他實(shí)施方式也屬以下權(quán)利要求的范圍。

示例

示例1：jq1，一種選擇性的布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑，減少了耐受性分子pdl1在抗原遞呈細(xì)胞(apcs)中的表達(dá)以及修復(fù)了無應(yīng)變性的cd4+t細(xì)胞的反應(yīng)性。

布羅莫結(jié)構(gòu)域和額外的末端結(jié)構(gòu)域(bet)為可識(shí)別乙酰化賴氨酸殘基的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域，如組蛋白的n-端尾部上的乙酰化賴氨酸殘基。這種識(shí)別通常是蛋白質(zhì)-組蛋白聯(lián)合、染色體重塑和基因轉(zhuǎn)錄的先決條件。對bet蛋白質(zhì)在通過組蛋白的轉(zhuǎn)譯標(biāo)記調(diào)控炎性細(xì)胞因子基因的反應(yīng)中的作用缺乏認(rèn)識(shí)。

鑒于抗原遞呈細(xì)胞的炎癥狀態(tài)對于確定相對于t細(xì)胞耐受性的t細(xì)胞激活至關(guān)重要，以及抗原遞呈細(xì)胞中特定基因的表觀遺傳修改在這一過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，從而確定在抗原遞呈細(xì)胞中抑制bet的功能性結(jié)果。

材料和方法

為確定jq1在pem中的最佳作用濃度，對培養(yǎng)板上的pem(96孔培養(yǎng)板)使用濃度增加的jq1進(jìn)行24小時(shí)的處理，隨后確定細(xì)胞的存活力。確定可接受的閥值為100至800納摩爾濃度。

分別在存在和不存在lps(巨噬細(xì)胞興奮劑)的情況下，對巨噬細(xì)胞(pem)使用不同的jq1濃度進(jìn)行處理。24小時(shí)過后，收集上清液，通過elisa測定為il-10及il-6的產(chǎn)物。呈劑量依賴性的il-10及il-6的產(chǎn)物均有所減少，使用lps或jq1處理的il-10及il-6的mrna表達(dá)以及兩者的結(jié)合均由實(shí)時(shí)的pcr決定。

分別在存在和不存在lps的情況下，對pem使用不同的jq1濃度進(jìn)行處理。對在存在和不存在lps的情況下接受不同濃度的jq1處理的pem采用流式細(xì)胞術(shù)，并使用抗pd-l1和抗pd-l2以及同種型作為對照標(biāo)準(zhǔn)。使用jq1和lps對pem的綜合處理結(jié)果表明，pd-l1和pd-l2的表達(dá)相對于單獨(dú)使用lps有所減少。經(jīng)過lps或jq1處理及兩者結(jié)合處理的pd-l1和pd-l2的mrna表達(dá)同樣由實(shí)時(shí)的pcr決定。使用lps+jq1對pem的綜合處理降低了pdl1mrna的表達(dá)。

分別在存在和不存在lps的情況下，對pem使用不同的jq1濃度進(jìn)行處理。24小時(shí)過后，使用溫?zé)岬膔pmi清洗pem兩次。將初始cd4t細(xì)胞或耐受型t細(xì)胞添加到培養(yǎng)板上含有或不含ova肽的巨噬細(xì)胞上，共同培養(yǎng)48小時(shí)。通過elisa測定il-2和ifn-γ產(chǎn)物。在不含ova肽的情況下，均無il-2或ifn-γ產(chǎn)物。cd4t細(xì)胞產(chǎn)生的il-2和ifn-γ劑量依賴性產(chǎn)物均有增加。對pem的綜合處理(jq1+lps)引起了耐受型t細(xì)胞ifn-γ產(chǎn)物的增加。

因此，不僅初始cd4t細(xì)胞中的抗原遞呈能力有所增長，更重要的是，經(jīng)jq1處理后的耐受型t細(xì)胞功能得到修復(fù)。因此，使用bdr特定抑制劑jq1處理的抗原遞呈細(xì)胞更具炎癥性，并顯示出免疫抑制分子pd-l1的表達(dá)降低。jq1之類的bet抑制劑從而能夠修復(fù)耐受型t細(xì)胞的反應(yīng)性，具備有前景的治療應(yīng)用，并拓寬了臨床范圍。

結(jié)果

首先，評估了jq1(一種選擇性小分子bet布羅莫結(jié)構(gòu)域抑制劑)對抗原遞呈細(xì)胞的機(jī)能及其對抗原特異性cd4+t細(xì)胞反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用。對腹腔巨噬細(xì)胞(pem)或骨髓源樹突狀細(xì)胞(dc)進(jìn)行提高jq1濃度的體外處理后，抗炎性細(xì)胞因子il-10和il-6在lps刺激下減少了表達(dá)及蛋白質(zhì)產(chǎn)生(圖2至圖4)。在所用的濃度下，jq1并未影響被處理抗原遞呈細(xì)胞的活力(圖1)。其次，經(jīng)分析主要組織相容性復(fù)合體(mhc)家族分子和共刺激分子的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)致耐受性分子pdl1在經(jīng)jq1處理的抗原遞呈細(xì)胞中的表達(dá)與未經(jīng)處理的抗原遞呈細(xì)胞相比有所減少(圖5至圖7)。第三，評估了經(jīng)jq1處理的抗原遞呈細(xì)胞將同族抗原遞呈給初始或耐受型抗原特異性cd4+t細(xì)胞的能力。使用jq1處理pem或dc均提高了其抗原遞呈能力，由此導(dǎo)致初始cd4+t細(xì)胞的有效促發(fā)，il-2(圖8)和ifn-γ(圖9)在同族抗原作用下產(chǎn)量增加可證實(shí)這一點(diǎn)。更重要的是，經(jīng)jq1處理的抗原遞呈細(xì)胞能夠恢復(fù)從帶淋巴瘤宿主身上分離的耐受性cd4+t細(xì)胞的反應(yīng)性(圖10)。

綜上所述，用布羅莫結(jié)構(gòu)域特定抑制劑jq1處理的抗原遞呈細(xì)胞更具炎癥性，顯示出免疫抑制分子pdl1的較低表達(dá)，更重要的是，其能夠恢復(fù)耐受性t細(xì)胞的反應(yīng)性。上述結(jié)果揭示了bet抑制劑具有先前不為人知的免疫作用，并拓寬了其臨床范圍，即有望作為癌癥免疫治療的補(bǔ)充劑。

除非另有指明，本文中使用的所有科學(xué)和技術(shù)術(shù)語，與本發(fā)明所涉領(lǐng)域的專業(yè)人士通常理解的涵義相同。本文中引用的著作及就此引用的材料均列為參考文獻(xiàn)。

相關(guān)領(lǐng)域的專業(yè)人員將確認(rèn)或能夠保證，僅將本文所述發(fā)明中具體實(shí)施例的許多等價(jià)物用于常規(guī)實(shí)驗(yàn)。此類等價(jià)物應(yīng)包括下列權(quán)利要求。