本發(fā)明涉及長梗冬青苷新用途。
背景技術(shù)：
病毒感染性疾病已經(jīng)成為威脅人類生命健康的重大疾病之一。其中，由乙型肝炎病毒(hbv)引起的慢性乙型肝炎是一種危害極大的流行性疾病。2015年3月世界衛(wèi)生組織(who)公布的數(shù)據(jù)顯示全球慢性hbv感染者約2.4億，每年約78萬人死于乙型肝炎并發(fā)癥。目前，臨床上用于抗乙肝病毒的藥物主要有干擾素和核苷類似物如拉米呋啶、恩替卡韋和阿德福韋。它們雖然能夠有效控制病情，但是售價昂貴，且長期服用存在副作用大、易耐藥和停藥后易反跳的缺點。
目前，國內(nèi)外眾多研究者在篩選抗hbv新藥的過程中，把注意力轉(zhuǎn)向來源豐富，毒副作用小的天然化合物。長梗冬青苷(分子式為c36h58o10)廣泛存在于冬青科冬青屬植物中，其在救必應(冬青科冬青屬植物鐵冬青ilexrotundathunb.的干燥樹皮)中含量較高。長梗冬青苷屬于五環(huán)三萜類化合物，具有五環(huán)三萜母核。五環(huán)三萜類化合物的結(jié)構(gòu)通式為：
式中，r為cooh、coo―β―d―葡萄糖基或其他藥學上可接受的基團。
當式中r為coo―β―d―葡萄糖基時，化合物名為長梗冬青(pedunculoside)，如上結(jié)構(gòu)式。
關(guān)于長梗冬青苷的報道主要有抗炎、降血脂相關(guān)專利文獻。但尚未見關(guān)于長梗冬青苷抗乙肝病毒作用的報道。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明首次公開長梗冬青苷在制備抗乙肝病毒藥物中的新用途。包括長梗冬青苷在制備抑制乙肝病毒表面抗原分泌或乙肝病毒e抗原分泌藥物中的應用。
所述的抗乙肝病毒藥物可制成片劑、顆粒劑、膠囊劑或滴丸劑。
經(jīng)體外hepg22.2.15細胞藥理實驗，結(jié)果證實，長梗冬青苷具有良好的抗hbv作用，且具有有效濃度較低以及細胞毒性較小的特點；長梗冬青苷對hbsag和hbeag均有抑制作用，在100μg/ml時對hbsag和hbeag的抑制率分別為34.8％和35.2％，對hbv的抑制作用均強于陽性對照拉米呋啶，以及齊墩果酸與救必應藥材提取物。因此，長梗冬青苷可作為活性成分制備用于抗乙肝病毒的藥物。
具體實施方式
為了更好地理解本發(fā)明的實質(zhì)，下面用實施例的形式提供長梗冬青苷抗乙肝病毒的藥理實驗結(jié)果，說明其在制藥領域的新用途。同時必須說明這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的保護范圍。
實施例1救必應藥材提取物的制備
取救必應藥材適量，粉碎，過1號篩，藥材加8倍量70％(體積分數(shù))乙醇，加熱回流提取2次，每次1h，過濾，合并提取液，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在80℃下減壓濃縮至稠膏狀。將濃縮液轉(zhuǎn)移置減壓干燥箱中，在80℃下繼續(xù)進行干燥、粉碎，即得救必應藥材提取物。
實施例2
1.實驗材料
1.1受試藥物：長梗冬青苷(從救必應中提取得到，純度＞98％)。
1.2對照藥物：拉米呋啶，齊墩果酸，救必應藥材提取物(見實施例1)
1.3體外細胞模型：轉(zhuǎn)染乙肝病毒的2.2.15細胞株(hepg2.2.15細胞)。將hepg2.2.15細胞接種于dmem培養(yǎng)液(含10％胎牛血清，380μg/mlg418，0.03％谷氨酰胺，青霉素和鏈霉素各100μg/ml)，置5％co2，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
上述藥物均經(jīng)二甲基亞砜(dmso)充分溶解后-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
2.試劑及主要儀器
二甲基亞楓(dmso，ar)，mtt(噻唑藍，ar)，乙肝病毒表面抗原檢測試劑盒和乙肝病毒e抗原檢測試劑盒購自上海實業(yè)科華生物技術(shù)有限公司。
3.實驗方法
選用對數(shù)生長期的hepg2.2.15細胞，經(jīng)胰蛋白酶消化液消化后，稀釋濃度至105cells/ml，接種于96孔板，每孔200μl，培養(yǎng)24h后，換成二甲基亞砜助溶的含長梗冬青苷藥物的dmem培養(yǎng)液，該藥物設5個藥液濃度，同時設不含藥液培養(yǎng)的細胞對照組和藥物對照組(包括拉米呋啶，齊墩果酸，救必應藥材提取物)，每種藥物設4個平行孔。每3天更換樣品液一次，連續(xù)培養(yǎng)9天，分別取上清液，使用乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒和乙型肝炎病毒e抗原診斷試劑盒按照elisa方法測定細胞上清液中hbsag及hbeag含量，同時用上述細胞株，用mtt法測定藥物的細胞毒性。
4.實驗結(jié)論
如表1所示，采用hepg2.2.15細胞模型，本發(fā)明所述的長梗冬青苷能夠抑制乙肝病毒表面抗原和乙肝病毒e抗原的分泌，具有良好的抗hbv作用，且有效濃度低，細胞毒性較小。此外，長梗冬青苷在100μg/ml時對hbsag和hbeag的抑制率分別為34.8％和35.2％，對hbv的抑制作用均強于陽性對照拉米呋啶，以及齊墩果酸與救必應藥材提取物。
本發(fā)明所述的長梗冬青苷可作為活性成分制備用于抗乙肝病毒的藥物。
表1藥物對hepg2.2.15細胞的毒性情況及對hbsag和hbeag的抑制效果
注：—：“未見明顯毒性”系指用mtt法檢測細胞存活率≥75％；+：“顯示毒性”系指細胞存活率﹤75％。