本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及基于茶葉成分抑制炎癥的方法。
背景技術(shù)：
：巴豆油所致耳腫脹模型是一種常用的炎癥模型，多用于抗炎藥物的研究，其中主要致炎成分是佛波酯(tpa)。tpa可致病理和生物化學(xué)變化，包括血管通透性的改變，炎癥細胞的聚集，巨噬細胞的激活，炎癥介質(zhì)的釋放增加，以及促進炎癥細胞dna、rna的合成。在現(xiàn)有技術(shù)中，陸彩鵬等(華西藥學(xué)雜志，2014,29(5)：609-610)研究表明，亞油酸及其甲酯能有效抑制巴豆油所致小鼠耳腫脹，具有一定抗炎作用；陳一村等(汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2010,23(1):7-9)研究表明，海灘牽牛有效部位具有較強的抗炎活性，對巴豆油所致小鼠耳腫脹有明顯減輕作用。目前，對巴豆油所致小鼠耳腫脹抑制效果的研究中，還未有關(guān)于茶氨酸抑制效果的研究，而茶氨酸在茶葉中含量是其干重的1%-2%，游離氨基酸的40%-70%，并且具有一些特殊的生理功能，如鎮(zhèn)靜和舒緩神經(jīng)、增強學(xué)習(xí)和記憶、降血壓、抗腫瘤、抗疲勞、提高人體免疫力等功能，使其成為茶葉功能成分研究與利用的又一大熱點。技術(shù)實現(xiàn)要素：為解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題與不足，本發(fā)明提供了一種利用茶葉中茶氨酸(thn)對tpa誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹炎癥的抑制方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所才有的技術(shù)方案如下：基于茶葉成分抑制炎癥的方法，所述方法如下：向帶有炎癥的哺乳動物受試者給予有效量的茶氨酸，并涂抹于患處。特別地，所述茶氨酸為單體，可于市面直接購買，或從茶葉中提取分離。特別地，所述受試者為4-6周齡雌性icr小鼠。特別地，茶氨酸，作為治療或抑制炎癥的藥劑。特別地，茶氨酸，在治療或抑制因tpa誘導(dǎo)的哺乳動物耳腫脹炎癥方面的應(yīng)用。本發(fā)明要解決的第二個問題是：茶氨酸抑制因tpa誘導(dǎo)的哺乳動物耳腫脹炎癥的機理。通過westernblot法檢測小鼠耳片中cox2蛋白表達量的變化，以及免疫熒光法檢測炎癥因子il-1β和tnf-α，結(jié)果表明，茶氨酸t(yī)hn是通過調(diào)控cox2蛋白表達，抑制炎癥因子il-1β和tnf-α的表達而抑制tpa誘導(dǎo)的耳腫脹炎癥。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，提供了一種新的抑制炎癥的方法和研究理論，通過對動物進行試驗，顯示本方法具有顯著的抗炎效果；此外，利用從茶葉中提取茶氨酸進行研究與開發(fā)，對于茶葉功能更進一步深入研究具有重要意義和價值。附圖說明圖1為小鼠耳片處理前后，耳片腫脹程度隨時間的變化趨勢。圖2為小鼠耳片處理前后，兩耳片的厚度和重量差值。圖3為小鼠耳片處理前后耳片外觀圖。圖4為小鼠耳片病理結(jié)構(gòu)的he染色圖。圖5為小鼠耳片中cox2蛋白表達量。圖6為小鼠耳片il-1β(上)和tnf-α(下)炎癥因子表達水平。具體實施例以下實施例為本發(fā)明的一些舉例，不應(yīng)視為是對本發(fā)明的限定。將4周齡的雌性icr小鼠在動物房飼養(yǎng)穩(wěn)定2周后，60只小鼠隨機分成6組，每組10只，分別為：空白組（丙酮水溶液），tpa模型組（tpa+丙酮水溶液），陽性對照組（tpa+地塞米松+丙酮水溶液），低/中/高劑量實驗組（tpa+茶氨酸+丙酮水溶液）。小鼠右耳朵內(nèi)外兩側(cè)分別涂上20μl50%丙酮溶液或不同濃度茶氨酸+50%丙酮溶液20μl，20min后再涂上20μltpa丙酮溶液（2.5μg/20μl），6h后將小鼠處死，拍攝兩耳紅腫程度，游標(biāo)卡尺測量兩耳厚度，兩耳打孔，孔徑為6mm，取耳片組織并稱重。每組隨機選4只小鼠右耳片組織浸泡于福爾馬林溶液中固定，按常規(guī)石蠟包埋、切片、he染色后于顯微鏡上觀察拍片。每組剩下6只小鼠右耳片組織儲存在-80℃作elisa或westernblot分析。實施例1基于茶葉成分抑制炎癥的方法，步驟如下：向icr小鼠右耳朵內(nèi)外兩側(cè)涂上2.5μgtpa+茶氨酸+20μl50%丙酮水溶液。特別地，所述茶氨酸為單體，可于市面直接購買。實施例2不同濃度茶氨酸對炎癥抑制作用影響實施例2實施方法如實施例1，不同之處在于，實施例2中所涂抹的茶氨酸濃度不一樣，具體分組如下表:組別組1組2組3組4茶氨酸濃度0μm0.1μm1.0μm5.0μm對比例1組5：小鼠右耳片只涂抹20μl50%丙酮水溶液，作為空白對照。對比例2組6：小鼠耳片上涂抹2.5μgtpa+0.05mg地塞米松(dexa)+20μl50%丙酮水溶液，作為陽性對照。對6組實驗數(shù)據(jù)分析如下：1.icr小鼠耳片處理前后，耳腫脹程度隨時間的變化趨勢icr小鼠右耳片處理前后，小鼠兩耳片厚度差（腫脹程度）由圖1可知，結(jié)果表明，涂tpa后，小鼠耳片持續(xù)腫脹，在6-8h腫脹程度達最大值，隨后腫脹程度有所下降，48h時耳片腫脹癥狀基本消失。涂抹tpa+陽性消炎藥地塞米松（dexa）后，小鼠耳片腫脹程度受到抑制，4h后腫脹程度開始下降，6h后恢復(fù)正常；涂抹thn+tpa也不同程度的抑制了小鼠耳腫脹程度，高濃度thn比低濃度thn效果更顯著，說明茶氨酸具有較好的抑制tpa引起的耳腫脹炎癥作用。2.icr小鼠耳片涂抹tpa和thn6h后兩耳片的厚度和重量差值icr小鼠右耳片處理前后，小鼠耳片腫脹程度和兩耳片厚度差由圖2a和圖3可知，中高劑量thn組（組3和組4）極顯著地抑制了小鼠耳片腫脹程度，但低濃度（組1和組2）thn組抑制耳片腫脹程度未達顯著差異水平，與此同時，icr小鼠兩耳片的重量差值與對照相比有所下降，但未達顯著差異水平（圖2b）。3.icr小鼠耳片病理結(jié)構(gòu)的he染色圖分析he染色法觀察tpa和thn處理對icr小鼠耳片病理結(jié)構(gòu)的影響，結(jié)果如圖4所示，tpa可導(dǎo)致小鼠耳片表皮層增厚、炎癥細胞浸潤，dexa和thn干預(yù)后可顯著減小小鼠耳片厚度，thn組呈劑量依賴性地減輕炎癥細胞浸潤程度，表明thn具有較好的抑制tpa誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹炎癥作用。4.茶氨酸抑制因tpa誘導(dǎo)的哺乳動物耳腫脹炎癥的機理分析westernblot法檢測小鼠耳片中cox2蛋白表達量的變化，結(jié)果如圖5所示，tpa可顯著增加cox2蛋白的表達量，thn呈劑量依賴性地降低cox2蛋白的表達量，在5.0μm濃度處理極顯著地降低了cox2表達量。免疫熒光法檢測耳片中il-1β和tnf-α炎癥因子的表達，圖6結(jié)果表明，5.0μm茶氨酸t(yī)hn干預(yù)可顯著地抑制il-1β和tnf-α表達量。這些結(jié)果表明茶氨酸t(yī)hn是通過調(diào)控cox2蛋白表達，抑制炎癥因子il-1β和tnf-α的表達而抑制tpa誘導(dǎo)的耳腫脹炎癥。實驗表明，本發(fā)明所提供的抑制炎癥方法具有顯著的抗炎效果。當(dāng)前第1頁12