本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域,涉及一種包載丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒的制備方法及用途。
背景技術(shù):
丹參酮iia(tanshinoneiia)為二萜醌類(lèi)化合物,是臨床常用活血化瘀中藥丹參的主要有效成分之一,屬于脂溶性的藥物,易溶于有機(jī)溶劑,是一種天然的抗氧化藥物。丹參酮iia具有廣泛的藥理作用,丹參酮iia可以通過(guò)保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、降低體內(nèi)過(guò)氧化脂質(zhì)、免疫調(diào)節(jié)等多種方式,起到改善動(dòng)脈粥樣硬化的作用。臨床研究發(fā)現(xiàn),丹參酮iia還具有抑制心肌細(xì)胞凋亡作用,在治療心血管疾病的發(fā)展中起關(guān)鍵的作用;丹參酮iia不僅在治療心血管疾病方面有廣泛的應(yīng)用,對(duì)于缺血缺氧引起的大腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷也有顯著的治療效果。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明,丹參酮iia的抗炎、抑制細(xì)胞凋亡、抗氧化及清除氧自由基的作用,可以用來(lái)治療腦缺血等疾病并且效果非常明顯。
雖然丹參酮iia在治療很多腦部疾病方面有廣泛的藥理活性,但是在藥物研發(fā)上還有許多問(wèn)題沒(méi)有得到解決,比如丹參酮iia難溶于水,制成水溶性制劑存在困難,且血液循環(huán)半衰期短、生物利用度低、跨越血腦屏障的滲透性差等,因此限制了丹參酮iia在臨床的應(yīng)用。目前,主要是通過(guò)磺酸化反應(yīng)對(duì)丹參酮iia進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾,轉(zhuǎn)化為水溶性的丹參酮iia磺酸鈉注射液,但是由于丹參酮iia磺酸鈉在血液中半衰期短,快相和慢相分別為26min及108min,因此必須用較大劑量(160mg/250ml/日)進(jìn)行靜脈滴注【邵鶴生,景錫南,殷蘭琴,顧建峰,趙敏敏。丹參酮iia磺酸鈉在大鼠體內(nèi)的分布排泄和代謝的研究,《中成藥研究》1979,2:8-12】。此外,磺酸鈉鹽為離子型化合物,較難通過(guò)以脂質(zhì)及蛋白質(zhì)成分為基礎(chǔ)的生物膜結(jié)構(gòu)系統(tǒng),使得丹參酮iia的利用率不高,大幅度降低了丹參酮iia的治療效果,而且反復(fù)給藥對(duì)正常器官組織的副作用較大。
隨著納米技術(shù)的快速發(fā)展,直徑小于100nm納米材料的在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用,尤其是在醫(yī)學(xué)成像、疾病診斷、藥物靶向遞送、癌癥精準(zhǔn)治療、基因轉(zhuǎn)染等領(lǐng)域。腦血管疾病的治療,由于血腦屏障的阻礙,大約有98%的親水性小分子和絕大多數(shù)大分子都不能通過(guò),使藥物分子難以達(dá)到病灶處,限制了對(duì)腦血管疾病的臨床療效。而納米藥物載體由于優(yōu)良的生物相容性、可修飾性等特性,成為腦靶向遞藥系統(tǒng)研究的熱點(diǎn)之一。研究發(fā)現(xiàn),采用納米載藥系統(tǒng)負(fù)載化學(xué)治療藥物、多肽、蛋白質(zhì)藥物,能實(shí)現(xiàn)緩釋、控釋和靶向給藥的目的,使得這類(lèi)藥物不會(huì)在很短的時(shí)間內(nèi)被降解和清除,從而減少注射給藥頻率,提高患者的順應(yīng)性同時(shí),經(jīng)過(guò)特異性靶向配體修飾后,可攜載藥物分子透過(guò)血腦屏障,顯著提高藥物在腦組織病變部位的有效濃度,達(dá)到精準(zhǔn)治療腦部疾病的目的。降低其它非病變部位的藥物濃度,減少對(duì)機(jī)體的毒副作用。
聚乳酸-羥基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolicacid),plga)是由乳酸(lacticacid,la)和羥基乙酸(glycolicacid,ga)按照不同比例聚合而成的一種功能性高分子有機(jī)材料,已經(jīng)通過(guò)美國(guó)的食品藥品監(jiān)督管理局(fda)認(rèn)證。目前,已被廣泛用于制備人工導(dǎo)管,藥物緩釋載體(微球、納米粒、微丸),埋植劑以及膜劑等制【acharyas,sahoosk.plgananoparticlescontainingvariousanticanceragentsandtumourdeliverybyepreffect.advdrugdelivrev.2011,63(3):170-183.;chenyc,liudz,liujj,etal.developmentofterbinafinesolidlipidnanoparticlesasatopicaldeliverysystem.intjnanomedicine.2012,7:4409-4418.】。作為納米藥物載體plga具有以下優(yōu)點(diǎn):①由乳酸(la)和羥基乙酸(或稱(chēng)乙醇酸,ga)聚合而成,合成工藝成熟;②具有可控的粒徑,納米粒分散度??;③具有良好的生物降解性和生物相容性的、無(wú)免疫原性;plga共聚物在人體內(nèi)最終的降解產(chǎn)物是二氧化碳(co2)和水(h2o),并且可以通過(guò)正常的生陳代謝排出體外,因此對(duì)人的身體沒(méi)有刺激性和毒性。④能夠?qū)崿F(xiàn)藥物的長(zhǎng)時(shí)間緩釋?zhuān)〝?shù)周或數(shù)月),降低了用藥頻率,提高患者順應(yīng)性;⑤經(jīng)修飾后的plga納米粒,適于包埋生物活性分子如蛋白、基因dna,疫苗等;⑥在plga表面修飾配基后,可實(shí)現(xiàn)藥物的靶向遞送【chohj,yoonis,yoonhy,etal.polyethyleneglycol-conjugatedhyaluronicacid-ceramideself-assemblednanoparticlesfortargeteddeliveryofdoxorubicin.biomaterials.2012,33(4):1190-1200.;collinsmnbirkinshawc.hyaluronicacidbasedscaffoldsfortissueengineering-areview.carbohydrpolym.2013,92(2):1262-1279.】。利用納米載體peg-plga-peg包載丹參酮iia,可以改善丹參酮iia的親水性、生物相容性、生物利用度低等問(wèn)題。納米粒表面的親水性與親脂性將影響吞噬細(xì)胞對(duì)其吞噬的快慢,因而要延長(zhǎng)丹參酮iia在體內(nèi)的血液循環(huán)半衰期需增加plga表面的親水性。因plga嵌段結(jié)晶性較強(qiáng),且有疏水性,所以極易被res清除,很難將藥物到達(dá)靶向部位。而peg-plga-peg三嵌段共聚物具有親水性,且生物相容性好,無(wú)毒性、抗原性和免疫原性,易溶于水和許多有機(jī)溶劑。通過(guò)與plga共聚合成peg-plga-peg,可以將peg和plga的優(yōu)點(diǎn)結(jié)合起來(lái),有效延緩res的清除,延長(zhǎng)體循環(huán)時(shí)間。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:
針對(duì)上述丹參酮iia傳統(tǒng)制劑的技術(shù)問(wèn)題,本發(fā)明的目的在于提供一種包載丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒的制備方法,該方法過(guò)程簡(jiǎn)單,重現(xiàn)性好。利用這種方法制備的丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒,大小均一、具有明顯的球狀結(jié)構(gòu)、穩(wěn)定性好,載藥量和包封率均較高,分散性好,丹參酮iia載藥納米粒在體內(nèi)的循環(huán)半衰期明顯延長(zhǎng),不易被res清除。
本發(fā)明提供一種包載丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒:是用三嵌段共聚物peg-plga-peg包載親脂性藥物丹參酮iia,經(jīng)過(guò)冷凍干燥后,得到性質(zhì)穩(wěn)定、大小均一,加水復(fù)溶后溶解性好的載藥納米粒。
所述的三嵌段共聚物peg-plga-peg納米載體材料,其分子量為10000~60000;其中,plga的含量為40%~96%,分子量為2000~30000,合成plga過(guò)程中乙交酯與丙交酯的比例為1/100~99/100;其中peg的含量為4%~60%,分子量為1000~5000。
所述的丹參酮iia的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%~98%;乳化劑的類(lèi)型為:吐溫80、聚乙烯醇(pva)、泊洛沙姆188、大豆磷脂或卵磷脂其中的一種或幾種的混合物,在內(nèi)水相和外水相中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%~10%;所述的納米粒徑的范圍為100~400nm,納米粒中丹參酮iia的載藥量10%~35%,包封率50%~90%。
一種包載丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒的制備方法,工藝如下:
(1)將丹參酮iia和peg-plga-peg溶解在混合有機(jī)溶劑中作為油相,將乳化劑溶于去離子水作為內(nèi)水相;
(2)在冰水浴攪拌的條件下,用注射器吸取步驟(1)中的內(nèi)水相緩慢滴加到有機(jī)相中,超聲形成初乳;
(3)將乳化劑溶于去離子水中作為外水相(外水相和內(nèi)水相中所用的乳化劑為同一種乳化劑),在冰水浴攪拌的條件下,用注射器吸取步驟(2)中的初乳,深入外水相的液面下,緩慢滴加超聲震蕩形成復(fù)乳;
(4)采用攪拌的方式除去復(fù)乳中的有機(jī)溶劑,將納米混懸溶液高速離心,用去離子水反復(fù)清洗超聲分散,用微孔濾膜過(guò)濾后冷凍干燥,即可獲得負(fù)載丹參iia的peg-plga-peg納米粒。
步驟(1)中加入處方劑量的丹參酮iia的量為1mg/ml~20mg/ml,所用的混合有機(jī)溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯,無(wú)水乙醇中任意兩種混合,混合的比例為1:1~1:20,加入的peg-plga-peg的量為0.5mg/ml~50mg/ml。
步驟(3)中初乳與外水相的比例為1:1~1:30,滴加的速度為10~30滴/每分鐘,攪拌的速度為100r/min~700r/min。
所述的一種包載丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒的制備方法中,超聲的功率為100w~500w,超聲的方式為超聲2s~60s間歇10s~30s,連續(xù)超聲5~40min。
所述的一種包載丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒的制備方法中,攪拌揮發(fā)有機(jī)溶劑的時(shí)間為4~6h,所用高速離心的轉(zhuǎn)速為10000r/min~16000r/min,離心時(shí)間為20min~60min。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:
1.本發(fā)明制備的包載丹參酮iia,采用的載體材料二嵌段共聚物peg-plga-peg,是一種毒性低、成本低、生物降解性較好的高分子材料,共聚物中的plga在人體內(nèi)降解時(shí),降解產(chǎn)物可參與新陳代謝,并最終形成二氧化碳(co2)和水(h2o),不會(huì)在體內(nèi)聚集。因此,生物相容性好,無(wú)免疫原性,安全性高;
2.載體材料中plga中羥基乙酸(ga)和乳酸(la)的比例為1/100~99/100,降解能力達(dá)到最佳能夠緩慢降解,控制藥物緩慢釋放,能充分發(fā)揮丹參酮iia的藥理作用;peg親水基團(tuán)能夠減少血液對(duì)納米粒的調(diào)理作用,從而延長(zhǎng)藥物的血液半衰期;且不使用輔助溶劑,可以避免對(duì)其他正常組織器官產(chǎn)生副作用,給藥方便,增加患者適應(yīng)性;
3.peg-plga-peg為兩親性聚合物,其組成的納米粒經(jīng)過(guò)冷凍干燥后可以有效的溶于水溶液,其內(nèi)部疏水性區(qū)域可以為丹參酮iia提供空間,提高丹參酮iia的溶解性,改變其在體內(nèi)的分布,提高生物利用度。
附圖說(shuō)明
圖1為實(shí)施例1制備得到的丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒掃描電鏡圖。
圖2為實(shí)施例1制備得到的丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒粒度分布圖。
圖3為丹參酮iia的高效液相色譜圖。
圖4為實(shí)施例1制備得到的丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒體外釋放曲線(xiàn)。
圖5為實(shí)施例1制備得到的丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒組和臨床丹參酮iia注射劑組的血藥濃度-時(shí)間曲線(xiàn)。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明,但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例。
實(shí)施例1包載丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒的制備
(1)將2mg丹參酮iia和30mgpeg-plga-peg超聲溶解在2ml丙酮和二氯甲烷(丙酮:二氯甲烷=1:9)的混合溶劑中作為油相,配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的泊洛沙姆f188溶液作為水相;
(2)在冰水浴攪拌的條件下,用注射器吸取步驟(1)中的內(nèi)水相30μl以10~30滴/每分鐘速度滴加到有機(jī)相中,超聲5s間歇5s,連續(xù)超聲10min形成初乳;
(3)在冰水浴攪拌的條件下,用注射器吸取步驟(2)中的初乳,采用液面下滴加的方式,以10~30滴/每分鐘速度滴加到20ml0.5%泊洛沙姆f188溶液中(初乳復(fù)乳比為1:10),超聲5s間歇5s,連續(xù)超聲20min形成復(fù)乳;
(4)室溫下攪拌5h,除去復(fù)乳中的有機(jī)溶劑,15000r/min高速離心30min,倒掉上清液,用去離子水反復(fù)清洗超聲分散即可獲得載丹參酮的納米混懸溶液,用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除去未包裹的藥物,冷凍干燥,即可獲得負(fù)載丹參酮iia的peg-plga-peg納米粒,測(cè)得納米粒的平均粒徑為158nm,包封率為90%,載藥量為35%。
實(shí)施例2包載丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒的制備
(1)將4mg丹參酮iia和30mgpeg-plga-peg超聲溶解在2ml丙酮和二氯甲烷(丙酮:二氯甲烷=1:8)的混合溶劑中作為油相,配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的吐溫-80溶液作為水相;
(2)在冰水浴攪拌的條件下,用注射器吸取步驟(1)中的內(nèi)水相30μl以10~30滴/每分鐘速度滴加到有機(jī)相中,超聲5s間歇5s,連續(xù)超聲10min形成初乳;
(3)在冰水浴攪拌的條件下,用注射器吸取步驟(2)中的初乳,采用液面下滴加的方式,以10~30滴/每分鐘速度滴加到20ml0.5%吐溫-80溶液中,超聲5s間歇5s,連續(xù)超聲20min形成復(fù)乳;
(4)室溫下攪拌5h,除去復(fù)乳中的有機(jī)溶劑,15000r/min高速離心30min,倒掉上清液,用去離子水反復(fù)清洗超聲分散即可獲得載丹參酮的納米混懸溶液,用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除去未包裹的藥物,冷凍干燥,即可獲得負(fù)載丹參酮iia的peg-plga-peg納米粒。測(cè)得平均粒徑為180nm,載藥量為27%,包封率為81%。
實(shí)施例3包載丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒的制備
(1)將8mg丹參酮iia和30mgpeg-plga-peg超聲溶解在2ml丙酮和二氯甲烷(丙酮:二氯甲烷=1:8)的混合溶劑中作為油相,配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的pva溶液作為內(nèi)水相;
(2)在冰水浴攪拌的條件下,用注射器吸取步驟(1)中30μl的內(nèi)水相以10~30滴/每分鐘速度滴加到有機(jī)相中,超聲5s間歇5s,連續(xù)超聲10min形成初乳;
(3)在冰水浴攪拌的條件下,用注射器吸取步驟(2)中的初乳,采用液面下滴加的方式,以10~30滴/每分鐘速度滴加到20ml0.5%pva溶液中(初乳復(fù)乳比為1:10),超聲5s間歇5s,連續(xù)超聲20min形成復(fù)乳;
(4)室溫下攪拌5h,除去復(fù)乳中的有機(jī)溶劑,15000r/min高速離心30min,倒掉上清液,用去離子水反復(fù)清洗超聲分散即可獲得載丹參酮的納米混懸溶液,用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除去未包裹的藥物,冷凍干燥,即可獲得負(fù)載丹參酮iia的peg-plga-peg納米粒,測(cè)得納米粒的平均粒徑為210nm,載藥量為17%,包封率為74%。
實(shí)施例4包載丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒的制備
(1)將8mg丹參酮iia和40mgpeg-plga-peg超聲溶解在2ml乙酸乙酯和二氯甲烷(乙酸乙酯:二氯甲烷=1:8)的混合溶劑中作為油相,配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的pva溶液作為水相;
(2)在冰水浴攪拌的條件下,用注射器吸取步驟(1)中的內(nèi)水相30μl以10~30滴/每分鐘速度滴加到有機(jī)相中,超聲5s間歇5s,連續(xù)超聲10min形成初乳;
(3)在冰水浴攪拌的條件下,用注射器吸取步驟(2)中的初乳,采用液面下滴加的方式,以10~30滴/每分鐘速度滴加到30ml%的pva溶液中(初乳復(fù)乳比為1:20),超聲5s間歇5s,連續(xù)超聲20min形成復(fù)乳;
(4)室溫下攪拌5h,除去復(fù)乳中的有機(jī)溶劑,15000r/min高速離心30min,倒掉上清液,用去離子水反復(fù)清洗超聲分散即可獲得載丹參酮的納米混懸溶液,用0.45um微孔濾膜過(guò)濾除去未包裹的藥物,冷凍干燥,即可獲得負(fù)載丹參酮iia的peg-plga-peg納米粒,測(cè)得納米粒的平均粒徑為240nm,載藥量為12%,包封率為61%。
實(shí)施例5包載丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒的制備
(1)將2mg丹參酮iia和20mgpeg-plga-peg超聲溶解在2ml無(wú)水乙醇和二氯甲烷(無(wú)水乙醇:二氯甲烷=1:10)的混合溶劑中作為油相,配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.0%的吐溫-80溶液作為水相;
(2)在冰水浴攪拌的條件下,用注射器吸取步驟(1)中的內(nèi)水相30μl以10~30滴/每分鐘速度滴加到有機(jī)相中,超聲5s間歇5s,連續(xù)超聲10min形成初乳;
(3)在冰水浴攪拌的條件下,用注射器吸取步驟(2)中的初乳,采用液面下滴加的方式,以10~30滴/每分鐘速度滴加到1.0%的吐溫-80溶液中(初乳復(fù)乳比為1:5),超聲5s間歇5s,連續(xù)超聲20min形成復(fù)乳;
(4)室溫下攪拌5h,除去復(fù)乳中的有機(jī)溶劑,15000r/min高速離心30min,倒掉上清液,用去離子水反復(fù)清洗超聲分散即可獲得載丹參酮的納米混懸溶液,用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除去未包裹的藥物,冷凍干燥,即可獲得負(fù)載丹參酮iia的peg-plga-peg納米粒將,測(cè)得納米粒的平均粒徑為196nm,載藥量為20%,包封率為71%。
實(shí)施例6包載丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒的制備
(1)將10mg丹參酮iia和60mgpeg-plga-peg超聲溶解在2ml丙酮和二氯甲烷(丙酮:二氯甲烷=1:5)的混合溶劑中作為油相,配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%的吐溫-80溶液作為水相;
(2)在冰水浴攪拌的條件下,用注射器吸取步驟(1)中的內(nèi)水相30μl以10~30滴/每分鐘速度滴加到有機(jī)相中,超聲5s間歇5s,連續(xù)超聲10min形成初乳;
(3)在冰水浴攪拌的條件下,用注射器吸取步驟(2)中的初乳,采用液面下滴加的方式,以10~30滴/每分鐘速度滴加到40ml1.5%的吐溫-80溶液中(初乳復(fù)乳比為1:20),超聲5s間歇5s,連續(xù)超聲20min形成復(fù)乳;
(4)室溫下攪拌5h,除去復(fù)乳中的有機(jī)溶劑,15000r/min高速離心30min,倒掉上清液,用去離子水反復(fù)清洗超聲分散即可獲得載丹參酮的納米混懸溶液,用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除去未包裹的藥物,冷凍干燥,即可獲得負(fù)載丹參酮iia的peg-plga-peg納米粒將,測(cè)得平均粒徑為260nm,載藥量為10%,包封率為53%。
實(shí)施例7丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒的載藥量及包封率的測(cè)定
采用高效液相色譜測(cè)定丹參酮iia的含量:色譜柱:watersc18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm),流動(dòng)相:甲醇:水=75:25(v/v)柱溫:25℃流速:1.0ml/min紫外檢測(cè)波長(zhǎng):268~270nm,進(jìn)樣量:20μl;
分別取濃度為1、5、10.0、25.0、50、80、100μg/ml的丹參酮iia標(biāo)準(zhǔn)品溶液,按照色譜條件進(jìn)行測(cè)試,以峰面積對(duì)丹參酮iia濃度進(jìn)行擬合,建立回歸方程。精密稱(chēng)取凍干好的2mg丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒,置于10ml容量瓶中,用甲醇稀釋后搖勻定容。0.22μm微孔濾膜過(guò)濾后,進(jìn)樣3次每次20μl。用hplc檢測(cè),測(cè)定峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)回歸方程,計(jì)算丹參酮iia的含量。根據(jù)以下公式,可以求得載藥量和包封率(丹參酮iia高效液相色譜圖如圖3所示),包封率%=(納米載體中所含的藥量/投入的總藥量)×100%,載藥量%=(納米載體中所含的藥量/投入的總藥量)×100%。
實(shí)施例8:丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒外觀形態(tài)、zate電位、粒徑大小和分布的測(cè)定。
實(shí)施例9:使用掃描電子顯微鏡觀察納米粒(實(shí)施例2制備)的外觀形態(tài),如圖1所示,采用激光粒度分析儀可測(cè)定納米粒的粒徑分布及zeta電位,如圖2所示。
實(shí)施例10丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒體外釋藥的測(cè)定。
精密稱(chēng)量丹參酮iia原料藥和冷凍干燥后的丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒各8mg,分別置于5ml0.01mol/l的ph=7.4pbs緩沖液中,再放入50ml的離心管,立即置于37±1℃恒溫水浴搖床中,100r/min勻速攪拌,并保持漏槽條件。分別于0、15min、30min、1h、2h、4h、8h、12h、24h、48h、72h規(guī)定的時(shí)間點(diǎn)取樣1ml,同時(shí)補(bǔ)充等量等溫的新鮮介質(zhì)。樣品經(jīng)15000r/min離心25min后,取出上清液用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾后,加一倍量的甲醇稀釋后進(jìn)樣20μl,記錄峰面積,代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),計(jì)算溶液中丹參酮iia的濃度液,計(jì)算規(guī)定時(shí)間內(nèi)的藥物累計(jì)釋放率。每個(gè)樣品平行操作3份,以累積釋放率的平均值對(duì)時(shí)間繪制體外累計(jì)釋放曲線(xiàn)(如圖4所示)。
實(shí)施例11:丹參酮iiapeg-plga-peg納米粒大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)考察。
使用健康雄性sd大鼠,隨機(jī)分為兩組(n=10),每組5只,空白丹參酮iia(10mg/kg)混懸在羧甲基纖維素鈉溶液中,peg-plga-peg納米粒(含有tiia10mg/kg,實(shí)施例1制備)分散于生理鹽水中,分別通過(guò)尾靜脈注射,分別于給藥后(0,5,15,30和45分鐘;1,2,4,6,8,12、24和36小時(shí)),通過(guò)尾靜脈收集血樣(0.5ml),4000r/min離心l0min,取上清(血清)200μl,加入500μl甲醇,渦旋3min,7000r/min離心l0min,取上清液過(guò)0.22μm微孔濾膜,使用高效液相法測(cè)定濾液中丹參酮iia的濃度,計(jì)算血液中丹參酮iia的濃度,繪制peg-plga-peg納米粒組和臨床丹參酮iia注射劑組血藥濃度一時(shí)間曲線(xiàn)(如圖5所示)。