丹參酸甲酯磺酸鈉的制備方法和應(yīng)用
【專利說明】
[0001] 本申請為申請?zhí)朇N201410093547. 0,申請日為2014年3月14日，申請名稱為："丹 參酸甲酯磺酸鈉的制備方法和應(yīng)用"的專利申請的分案申請。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及丹參酸甲酯磺酸鈉的制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0003] 丹參，又名血參、赤根、紅根、血生根，為唇形科植物（Salviamiltiorrhza)的根 莖，其入藥始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。中醫(yī)認為，其味苦微寒，具有活血痛經(jīng)、祛瘀止痛、清心除 煩、涼血消癰的功效，適用于治療月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、經(jīng)閉、崩漏、帶下、冠心病、動脈粥樣硬化、 高血脂、心絞痛、跌打淤血、失眠、神經(jīng)衰弱、乙肝等疾病，為婦科、內(nèi)科及外傷科證屬血瘀兼 熱者常用。
[0004] 現(xiàn)代藥學研究表明，丹參中化學成分復雜，主要為水溶性丹參酚酸類和脂溶性二 萜醌類丹參酮類化合物。其中，丹參酮類化合物主要包括丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮 IIB、異丹參酮I、異丹參酮IIA、隱丹參酮、異隱丹參酮、甲基丹參酮、羥基丹參酮等。
[0005] 丹參酮IIA是重要的丹參有效成分。丹參酮IIA磺酸鈉（SodiumTanshinoneIIA Sulfonate，STS)，則是丹參酮IIA經(jīng)磺化后得到的水溶性磺酸鹽。由于磺酸基的引入，在治 療冠心病、心絞痛、心肌梗塞等疾病方面，丹參酮IIA磺酸鈉相比丹參酮IIA具有更多的優(yōu) 越性，從而成為主要的心血管類丹參提取物中藥。
[0006] 丹參酮IIA是制備丹參酮IIA磺酸鈉的原料，從丹參藥材飲片提取，故難免混有少 量、或極低含量其他結(jié)構(gòu)較為相似的組分，如丹參酮IIB、丹參酮I、隱丹參酮、紫丹參甲素 等。若要制備高純度丹參酮IIA磺酸鈉，則獲得這些極低含量相關(guān)組分標準品、以及這些標 準品在丹參酮IIA磺酸鈉原料相關(guān)成分含量控制中的應(yīng)用，具有重要意義。
[0007] 但是，由于該類化合物結(jié)構(gòu)復雜，化學全合成難度大，要獲得高純度對照品成為挑 戰(zhàn)。有研究報道從丹參酮IIA磺酸鈉原料藥中提取相關(guān)物質(zhì)，由于其含量極低，HPLC純度 通常不到百分之一，采用高效液相法分離提取，工作量大、難度高。因此，丹參提取物中極低 含量組分的高純度標準品規(guī)?；苽?，及其在丹參酮IIA磺酸鈉原料藥相關(guān)物質(zhì)含量監(jiān)控 中的應(yīng)用成為本領(lǐng)域長期以來難以解決的技術(shù)難題。
[0008] 丹參酸甲酯也是丹參脂溶性二萜醌類化合物有效成分之一，并且尚未有技術(shù)大量 制備丹參酸甲酯磺酸鈉的報道。現(xiàn)有技術(shù)中專利CN200610039234. 2"一組從丹參中提取的 二萜醌類化合物的磺化物在醫(yī)藥中的應(yīng)用"表明丹參酸甲酯磺酸鈉可以應(yīng)用于治療冠心病 (包括心絞痛，心肌梗死，心律失常，心肌血供應(yīng)不足）和抗菌消炎等。因此，定量控制丹參 酸甲酯磺酸鈉，對丹參酮IIA磺酸鈉原料的質(zhì)量保證具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于為了克服現(xiàn)有技術(shù)中丹參酸甲酯磺酸鈉提純困 難、效率低、提取量低的缺陷，提供了丹參酸甲酯磺酸鈉的制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明的制備 方法的制備能力強、制備量大、周期短、純度高、效率高，并且減少了有機溶劑的使用，工藝 操作連續(xù)性強易于進行質(zhì)量控制和生產(chǎn)。
[0010] 本發(fā)明通過以下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題。
[0011] 本發(fā)明的丹參酸甲酯磺酸鈉的結(jié)構(gòu)如下式所示：
[0012]
[0013] 本發(fā)明提供了丹參酸甲酯磺酸鈉的制備方法，其包括下述步驟：采用高效液相反 相色譜法分離丹參酮類磺化液，即可；
[0014] 其中，高效液相反相色譜法的條件如下：
[0015] 流動相A為0. 1 %三乙胺-水、流動相B為0. 1 %三乙胺-甲醇；或，流動相A為 0. 1 %二乙胺-水、流動相B為0. 1 %二乙胺-甲醇；或，流動相A為0. 1 %氨水、流動相B為 甲醇；百分比為組分占流動相的體積百分比；檢測波長為271nm，保留時間為35~50min。
[0016] 其中，所述的高效液相反相色譜法較佳地包括富集純化、中間純化和精制純化，其 中，所述的富集純化的條件優(yōu)選如下：
[0017] 流動相A為0. 1 %三乙胺-水、流動相B為0. 1 %三乙胺-甲醇；或，流動相A為 0. 1 %二乙胺-水、流動相B為0. 1 %二乙胺-甲醇；或，流動相A為0. 1 %氨水、流動相B為 甲醇；流速為80~120mL/min(較佳地為100mL/min)，檢測波長為271nm;
[0018] 將丹參酮類磺化液與流動相A按體積比為1:4的混合物上樣25min，80%流動相 A+20 %流動相B(體積分數(shù)）平衡lmin，以流動相A和流動相B按照下述體積比進行線性梯 度洗脫40min:80%A+20%B- 40%A+60%B，再以100%流動相B再生lOmin，收集保留 時間為42~50min的洗脫液得到富集純化樣品溶液；
[0019] 采用美國Varian公司的Pr印StarSD-I制備系統(tǒng)和L&L4002色譜柱（內(nèi)徑50mm)， 裝Varian公司的PLRP-S反相C18聚合物填料160.Og(粒徑10ym，孔徑IOnm)，動態(tài)軸向 壓縮系統(tǒng)裝填至壓力650psi，靜態(tài)鎖緊至柱床高度25cm。
[0020] 其中，所述的中間純化的條件優(yōu)選如下：
[0021] 流動相A為0. 1 %三乙胺-水、流動相B為0. 1 %三乙胺-甲醇；或，流動相A為 0. 1 %二乙胺-水、流動相B為0. 1 %二乙胺-甲醇；或，流動相A為0. 1 %氨水、流動相B為 甲醇；流速為80~120mL/min(較佳地為100mL/min)，檢測波長為271nm;
[0022] 將上述富集純化樣品溶液與水按體積比為1:1的混合物上樣lOmin，80%流動相 A+20%流動相B(體積分數(shù)）平衡lOmin，以流動相A和流動相B按照下述體積比進行線性 梯度洗脫40min:80%A+20%B- 40%A+60%B，再以100%流動相B再生lOmin，收集保 留時間為36~44min的洗脫液得到中間純化樣品溶液；
[0023] 采用美國Varian公司的Pr印StarSD-I制備系統(tǒng)和L&L4002色譜柱（內(nèi)徑50mm)， 裝Varian公司的PLRP-S反相C18聚合物填料160.Og(粒徑10ym，孔徑IOnm)，動態(tài)軸向 壓縮系統(tǒng)裝填至壓力650psi，靜態(tài)鎖緊至柱床高度25cm。
[0024] 其中，所述的精制純化的條件優(yōu)選如下：
[0025] 流動相A為0. 1 %三乙胺-水、流動相B為0. 1 %三乙胺-甲醇；或，流動相A為 0. 1 %二乙胺-水、流動相B為0. 1 %二乙胺-甲醇；或，流動相A為0. 1 %氨水、流動相B為 甲醇；流速為20~30mL/min(較佳地為25mL/min)，檢測波長為271nm;
[0026] 將上述中間純化樣品溶液與水按體積比為1:1的混合物上樣lOmin，80%流動相 A+20%流動相B(體積分數(shù)）平衡lOmin，以流動相A和流動相B按照下述體積比進行線性 梯度洗脫30min:80%A+20%B- 50%A+50%B，再以100%流動相B再生lOmin，收集保 留時間為45~50min的洗脫液得到精制純化樣品溶液；
[0027] 采用美國Varian公司的Pr印StarSD-I制備系統(tǒng)和L&L4001色譜柱（內(nèi)徑25mm)， 裝瑞典Kromasil公司的反相C18硅膠填料100.Og(粒徑10ym，孔徑IOnm)，動態(tài)軸向壓縮 系統(tǒng)裝填至壓力650psi，靜態(tài)鎖緊至柱床高度25cm。
[0028] 其中，所述的丹參酮類磺化液可為本領(lǐng)域常規(guī)的丹參進行磺化反應(yīng)的反應(yīng)液，較 佳地通過下述步驟制得：
[0029] (1)將丹參提取物溶解于冰醋酸-乙酸酐的混合溶液中，再加入濃硫酸-冰醋酸的 混合溶液，進行反應(yīng)得到反應(yīng)液；
[0030] (2)將石油醚、二氯甲烷和水的混合溶液加入步驟（1)的反應(yīng)液，再加入氯化鈉溶 液，抽濾，得到濾餅；
[0031] (3)用石油醚-二氯甲烷的混合溶液浸泡步驟（2)的濾餅，抽濾干燥得粗品；
[0032] (4)用甲醇溶解步驟（3)的粗品，活性炭過濾，濾液濃縮，冷卻結(jié)晶過濾，濾液即為 丹參酮類磺化液。
[0033] 其中，所述的冰醋酸-乙酸酐的混合溶液與所述的丹參提取物的體積質(zhì)量比較佳 地為7~9ml/g。
[0034] 其中，所述的冰醋酸-乙酸酐的混合溶液較佳地為冰醋酸與乙酸酐體積比為1 : (2~3)的混合溶液。
[0035] 其中，所述的濃硫酸-冰醋酸的混合溶液較佳地為濃硫酸與冰醋酸體積比為1:1 的混合溶液，所述的濃硫酸的質(zhì)量分數(shù)較佳地為98 %。
[0036] 其中，所述的石油醚、二氯甲烷和水的混合溶液較佳地為石油醚、二氯甲烷和水的 體積比為1:2: (2~2. 5)的混合溶液。
[0037] 其中，所述的石油醚-二氯甲烷的混合溶液較佳地為石油醚與二氯甲烷體積比為 1:3的混合溶液。
[0038] 其中，所述的丹參提取物可為本領(lǐng)域常規(guī)方法得到的丹參提取物，較佳地通過下 述步驟制得：將丹參用乙醇提取，過濾，濾液濃縮，干燥，即得。
[0039] 本發(fā)明中，色譜柱的柱溫較佳地為10~30°C。
[0040] 本發(fā)明的制備方法中，所述的精致純化結(jié)束后還可包括凍干過程。所述的凍干過 程優(yōu)選包括如下步驟：將所述的精制純化樣品溶液濃縮，冷凍干燥，即得純凈的丹參酸甲酯 磺酸鈉。所述的減壓濃縮的壓力較佳地為-0. 〇8MPa~-0.1 MPa，所述的減壓濃縮的溫度較 佳地為30~40°C，所述的真空冷凍干燥較佳地采用上海東富龍科技股份有限公司的LYO-I真空冷凍干燥機進行。
[0041] 本發(fā)明中0. 1 %三乙胺-水是指三乙胺的體積分數(shù)為0. 1 %的三乙胺水溶液， 0. 1%三乙胺-甲醇是指三乙胺的體積分數(shù)為0. 1%的三乙胺甲醇溶液，0. 1%二乙胺-水是 指二乙胺的體積分數(shù)為0.1%的二乙胺水溶液，0.1%二乙胺-甲醇是指指二乙胺的體積分 數(shù)為0. 1 %的二乙胺甲醇溶液，0. 1 %氨水是指氨的體積分數(shù)為0. 1 %的氨水溶液。
[0042] 本發(fā)明還提供了上述丹參酸甲酯磺酸鈉作為標準品在檢測藥品中丹參酸甲酯磺 酸鈉含量的應(yīng)用。
[0043] 其中，所述的藥品較佳地為丹參酮IIA磺酸鈉原料藥。
[0044] 其中，所述的應(yīng)用較佳地包括下述步驟：將丹參酮IIA磺酸鈉原料藥溶液和丹參 酸甲酯磺酸鈉標準品溶液分別進行高效液相色譜檢測，根據(jù)丹參酸甲酯磺酸鈉標準品色譜 圖的保留時間確定丹參酮IIA磺酸鈉原料藥色譜圖中相關(guān)物質(zhì)的峰，并根據(jù)峰面積計算丹 參酮IIA磺酸鈉原料藥中丹參酸甲酯磺酸鈉的含量。
[0045] 其中，所述的高效液相色譜的條件優(yōu)選