本發(fā)明涉及藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一些新型抗雄激素受體化合物，含所述化合物的藥物劑型及其使用方法，特別是隱丹參酮類化合物及其用途。

背景技術(shù)：

雄激素受體(Androgen receptor，AR)屬于核受體超家族中的類固醇受體，是一類在生物體內(nèi)廣泛分布的，配基激活的核轉(zhuǎn)錄因子超家族成員。雄激素和雄性激素受體在前列腺的生長(zhǎng)發(fā)育、功能維持以及前列腺癌的發(fā)生發(fā)展及惡化轉(zhuǎn)移過程中均發(fā)揮著極為重要的作用。在老年男性中許多疾病與雄激素及雄激素受體相關(guān)。男性隨著年齡增大，體內(nèi)雄激素水平會(huì)下降，伴隨著體內(nèi)肌肉減少，性功能下降及出現(xiàn)“男性更年期”等現(xiàn)象。相反，體內(nèi)雄激素水平過高同樣會(huì)帶來(lái)其他一些疾病，如前列腺增生和前列腺癌就是雄激素依賴性疾病，還有其他一些疾病和雄激素水平有關(guān)，身體皮膚毛中含有雄激素受體，有些人這些受體對(duì)雄激素較為敏感，造成脫發(fā)，青年人皮膚中雄激素受體較為敏感，造成粉不刺的生長(zhǎng)等。

前列腺癌(Prostate Cancer,PCa)是一種常見的男性惡性腫瘤，近幾年來(lái)已快速上升為一種全球性腫瘤疾病，在許多歐美國(guó)家，前列腺癌發(fā)病率占男性惡性腫瘤第一位，死亡率占第二位。2016年在美國(guó)約有220，800例男性罹患前列腺癌，其中約20，710例患者死亡。在所有男性腫瘤中分別排第一位和第二位。近年來(lái)隨著前列腺癌早期診斷水平的提高，前列腺癌在我國(guó)發(fā)病率逐年上升，其將成為影響我國(guó)男性健康的常見惡性腫瘤。

前列腺癌早期是雄激素依賴性，雄激素去勢(shì)治療(ADT)是治療前列腺癌的首選治療方法，其中包括手術(shù)去勢(shì)法和化學(xué)去勢(shì)法。但幾乎所有患者在經(jīng)歷12～18個(gè)月后出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，腫瘤轉(zhuǎn)移，發(fā)展為難以醫(yī)治且極易導(dǎo)致患者死亡的去雄激素抵抗型前列腺癌(CRPC)。去勢(shì)抵抗型前列腺癌的發(fā)生發(fā)展?fàn)可娴揭幌盗袕?fù)雜信號(hào)分子的相互作用，其中雄激素受體的基因突變及過度表達(dá)為去勢(shì)抵抗型前列腺癌主要發(fā)展機(jī)制。

一些抗雄性激素受體藥物，如氟他胺(flutamide,HF)和比卡魯胺(bicalutamide)已廣泛用于臨床治療前列腺癌。但該藥有很多副作用。氟他胺和比卡魯胺為非甾體類抗雄性激素受體藥物，雖然已廣泛用于治療前列腺癌，一些抗雄性激素受體藥物可以作為雄激素受體激動(dòng)劑可能會(huì)導(dǎo)致“抗雄激素撤除綜合征”。對(duì)“氟他胺撤除綜合征”目前一般認(rèn)為雄激素受體基因發(fā)生突變，氟他胺的代謝產(chǎn)物激活雄激素受體的目標(biāo)基因，如前列腺特異抗原(PSA)，導(dǎo)致PSA上升，停止后PSA下降。事實(shí)上，另一個(gè)雄激素受體輔助激活子ARA70的過表達(dá)能使AR被雄性激素受體拮抗劑激活,從而造成以雄性激素受體拮抗劑法治療的前列腺癌的復(fù)發(fā),甚至發(fā)展為非雄激素依賴性前列腺癌。

恩雜魯胺(enzalutamide，)為第二代非甾體類雄性激素受體抑制劑，可以阻斷腫瘤細(xì)胞雄性激素受體信號(hào)通路傳導(dǎo)，是美國(guó)藥物開發(fā)商Medivation公司開發(fā)的新一代口服抗雄激素藥物，主要用于治療晚期前列腺癌(CRPC)患者，2012年獲得美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市。目前報(bào)道恩雜魯胺同樣有抗藥性，不能長(zhǎng)期使用。開發(fā)更有效的抗雄激素新藥，用于治療晚期前列腺癌具有重要價(jià)值。

從天然產(chǎn)物中篩選先導(dǎo)化合物，再進(jìn)行結(jié)構(gòu)修改和改造，是新藥開發(fā)的有效途經(jīng)。丹參為唇科植物丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge)的根及根莖，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，，在臨床上具有具有活血祛瘀、通經(jīng)止痛、清心除煩、養(yǎng)心安神等功效，目前主要用于治療心血管、高血壓、腦缺血等疾病，其主要化學(xué)活性成分為鄰醌結(jié)構(gòu)丹參酮類化合物。我們已發(fā)現(xiàn)丹參酮類化合物具有良好的抗雄性激素受體活性，(徐德鋒，張傳祥，紀(jì)葉俊，丹參酮類化合物及其應(yīng)用，中國(guó)專利：CN102127037A)，本發(fā)明是在此基礎(chǔ)上以隱丹參酮為母體結(jié)構(gòu)進(jìn)行化合物修飾合成一系列隱丹參酮類化合物，可作為抗雄性激素受體藥物用于治療前列腺癌、前列腺增生、粉刺、脫發(fā)、青春痘、多毛癥等與雄激素有關(guān)的疾病。本發(fā)明還涉及隱丹參酮類化合物作為藥物應(yīng)用，將隱丹參酮類化合物作為雄性激素受體拮抗劑的有效成分，單獨(dú)應(yīng)用或者合用或與可接受的賦形劑等結(jié)合，按照常規(guī)的方法制成口服劑或非口服型用于治療與雄性激素相關(guān)疾病。

本發(fā)明指用于治療人類和動(dòng)物疾病或生理紊亂，特別是用于治療人類疾病或生理紊亂類的藥物或藥物組成，這些藥物或藥物組成含用下述化合物通式的化合物或組成的鹽，或適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)上可接受的載體或稀釋液，這些人類疾病或生理紊亂包括前列腺癌和其他與雄激素受體相關(guān)的人類疾病和不適合癥狀，如前列腺增生、粉刺、脫發(fā)、多毛癥、男性不育，男性性功能不良、前列腺癌、肝癌、睪丸、乳腺癌等，這些藥物或藥物組成還可有其他用途，如男性避孕等與雄激素有關(guān)的疾病。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，尋找一類活性高的一類抗雄性激素受體化合物，提供一種丹參酮類化合物，可作為抗雄性激素受體藥物用于治療與雄激素相關(guān)的疾病，可用于治療前列腺癌、如前列腺增生、粉刺、脫發(fā)、多毛癥、肌肉衰竭，性腺功能衰弱、膽固醇過高、男性不育，男性性功能不良、貧血、肥胖等疾病。

本發(fā)明主要目的是提供該類化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和醫(yī)學(xué)用途。

隱丹參酮類化合物,涉及具有以下結(jié)構(gòu)通式的化合物Ⅲ，

R為含有F，Cl，Br，CH₃，OCH₃，NO₂，OH等取代基的苯基。

隱丹參酮類化合物的用途，用于制備抗雄性激素受體藥物，用于治療與雄激素相關(guān)的疾病，可用于治療前列腺癌、如前列腺增生、粉刺、脫發(fā)、多毛癥、肌肉衰竭，性腺功能衰弱、膽固醇過高、男性不育，男性性功能不良、貧血、肥胖等疾病。

本發(fā)明所涉及的化合物按以下路線合成方法

R為含有F，Cl，Br，CH₃，OCH₃，NO₂，OH等取代基的苯。

本發(fā)明的制備方法具體如下步驟：

隱丹參酮、取代苯基醛、乙酸和乙酸銨混合后加熱攪拌至110度，反應(yīng)完畢后冷卻，加入去離子水稀釋，調(diào)節(jié)PH＝7，過濾、洗滌和干燥，用硅膠柱分離得新隱丹參酮類化合物。

本發(fā)明隱丹參酮類化合物的制備方法，按照下述步驟進(jìn)行：

在反應(yīng)瓶中加入隱丹參酮(1)、取代苯甲醛、冰乙酸、乙酸銨，在80-120醛反應(yīng)2-10小時(shí)，反應(yīng)完畢后，混合液冷卻至室溫后，加入蒸餾水,濃氨水調(diào)節(jié)PH＝7左右,過濾,水洗、干燥，用硅膠柱層析得化合物II，其中反應(yīng)物隱丹參酮(1)、取代苯甲醛、冰乙酸、乙酸銨等摩爾比為1：1-2：5-25：3-5，反應(yīng)溫度80-120醛，反應(yīng)2-12小時(shí)。

其中所述的取代苯甲醛的結(jié)構(gòu)式為其中R為含有F，Cl，Br，CH₃，OCH₃，NO₂，OH等取代基的苯甲醛。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：

AR有多種亞型,完全型(fAR)和剪接變異型雄激素受體(ARVs)，其中剪接變異型雄激素受體(ARVs)是晚期前列腺癌特有的，我們發(fā)明的隱丹參酮類化合物對(duì)完全型(fAR)和剪接變異型雄激素受體(ARVs)均有效抑制，可用于晚期前列腺癌的治療。與現(xiàn)有臨床藥物比卡魯胺相比，只能抑制完全型(fAR)，不能抑制剪接變異型雄激素受體(ARVs)，導(dǎo)致比卡魯胺對(duì)晚期前列腺癌無(wú)效，本發(fā)明克服上現(xiàn)有抗雄激素藥物的不足，可用于治療晚期前列腺癌。

附圖說(shuō)明

圖1為化合物對(duì)LNCaP細(xì)胞的相對(duì)抑制生長(zhǎng)能力，

圖2為化合物對(duì)CWR22RV1細(xì)胞的相對(duì)抑制生長(zhǎng)能力。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明涉及丹參酮類化合物的藥物，包含的化合物其結(jié)構(gòu)式如下：

實(shí)例一 2-(2-氟苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-01)

在反應(yīng)瓶中加入隱丹參酮(149mg,0.5mmol)、2-氟苯甲醛(65mg,0.50mmol)、3ml冰乙酸、乙酸銨(0.77g,10mmol),在100-105℃反應(yīng)3-5小時(shí)，反應(yīng)完畢后,混合液冷卻至室溫后，加入10ml蒸餾水，濃氨水調(diào)節(jié)PH＝7左右，過濾,水洗、干燥，用硅膠柱層析制備得到亮黃色粉末，為目標(biāo)產(chǎn)品，收率61.6％，熔點(diǎn)：179.3～181.9℃。¹H-NMR(300M,CDCl₃),δ＝10.78(s,1H),8.58(t,J＝6.7Hz,1H),7.92(d,J＝8.7Hz,1H),7.52(d,J＝8.7Hz,1H),7.34(dd,J＝15.1,7.5Hz,2H),7.23–7.15(m,1H),4.94(t,J＝8.8Hz,1H),4.53–4.22(m,1H),4.19(d,J＝6.8Hz,1H),3.40(s,2H),2.06(s,2H),1.82(s,2H),1.63(d,J＝6.5Hz,3H),1.40(d,J＝2.9Hz,6H)；¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝9.61,19.70,31.77,34.43,37.02,38.21,115.82,116.00,117.60,123.78,125.19,129.71,140.58,143.72,158.92,160.88。

實(shí)例二 2-(3-氟苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-02)

在反應(yīng)瓶中加入隱丹參酮(149mg,0.5mmol)、3-氟苯甲醛(130mg,1.0mmol)、15ml冰乙酸、乙酸銨(2.0g,26mmol),在100-105℃反應(yīng)3-5小時(shí)，反應(yīng)完畢后,混合液冷卻至室溫后，加入30ml蒸餾水，濃氨水調(diào)節(jié)PH＝7左右，過濾,水洗、干燥，用硅膠柱層析制備得到亮黃色粉末，為目標(biāo)產(chǎn)品，收率55.8％，熔點(diǎn)：105.2～109.3℃。¹H-NMR(300M,CDCl₃),δ＝9.99(s,1H),7.92(d,J＝8.6Hz,1H),7.82(d,J＝7.5Hz,1H),7.53(d,J＝8.7Hz,1H),7.44(dd,J＝12.8,6.3Hz,1H),7.09(s,1H),4.87(s,1H),4.36(s,1H),4.09(s,1H),3.49(s,2H),2.08(d,J＝5.1Hz,2H),1.83(s,2H),1.56(d,J＝6.3Hz,3H),1.41(d,J＝4.2Hz,6H)。¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝19.79,30.61,34.50,36.99,38.43,79.25,113.01,113.20,116.03,116.21,117.56,120.34,121.44,123.79,130.62,132.36,143.80,152.90,162.18,164.14。

實(shí)例三 2-(4-氟苯基)咪唑[4,5-f][10,11]--1,6,6-三甲基1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-03)

反應(yīng)同實(shí)例一，用4-氟苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率50.7％，熔點(diǎn)：143.8～147.2℃。¹H-NMR(300M,CDCl₃),δ＝9.96(s,1H),8.09–7.98(m,2H),7.92(d,J＝8.5Hz,1H),7.51(d,J＝8.7Hz,1H),7.17(t,J＝8.6Hz,2H),4.88(t,J＝8.8Hz,1H),4.53–4.31(m,1H),4.05(s,1H),3.49(s,2H),2.15–1.99(m,2H),1.88–1.74(m,2H),1.54(s,3H),1.40(d,J＝3.6Hz,6H)。¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝19.74,2.93,30.38,31.80,34.48,37.01,38.42,79.23,115.99,116.17,120.36,123.65,124.23,126.48,128.00,140.66,143.88,152.77,162.47,164.46。

實(shí)例四 2-(2-氯苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-04)

反應(yīng)同實(shí)例一，用2-氯苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率61.6％，熔點(diǎn)：156.8～159.2℃。¹H-NMR(300M,CDCl₃),δ＝11.24(s,1H),8.59(d,J＝7.2Hz,1H),7.93(d,J＝8.7Hz,1H),7.53(d,J＝8.8Hz,1H),7.50–7.40(m,2H),7.36(d,J＝7.6Hz,1H),4.95(t,J＝8.8Hz,1H),4.41(dd,J＝8.6,6.1Hz,1H),4.19(s,1H),3.41(s,2H),2.09(s,2H),1.82(s,2H),1.61(s,3H),1.40(s,6H)；¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝19.76,29.74,30.28,31.79,34.45,37.11,38.31,117.63,120.45,123.78,127.68,128.37,130.15,130.68,131.78,143.57。

實(shí)例五 2-(3-氯苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-05)

反應(yīng)同實(shí)例一，用3-氯苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率53％，熔點(diǎn)：132.8～138.6℃。¹H-NMR(300M,CDCl₃),δ＝9.96(s,1H),8.05(s,1H),7.92(d,J＝8.6Hz,2H),7.53(d,J＝8.7Hz,1H),7.38(d,J＝7.5Hz,2H),4.89(t,J＝8.8Hz,1H),4.39(dd,J＝8.6,5.8Hz,1H),4.08(s,1H),3.55(s,2H),2.09(s,2H),1.81(d,J＝11.7Hz,2H),1.55(d,J＝5.7Hz,3H),1.41(d,J＝3.9Hz,6H)。¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝9.74,19.74,29.72,30.67,31.92,34.49,38.34,124.01,124.43,126.02,129.18,130.22,135.01。

實(shí)例六 2-(4-氯苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-06)

反應(yīng)同實(shí)例一，用4-氯苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率收率57.8％，熔點(diǎn)：144.5～145.7℃。¹H-NMR(300M,CDCl₃),δ＝10.05(s,1H),7.95(dd,J＝18.9,8.1Hz,3H),7.52(d,J＝8.7Hz,1H),7.44(d,J＝7.9Hz,2H),4.87(s,1H),4.41(s,1H),4.09(s,1H),3.50(s,2H),2.07(s,2H),1.82(s,2H),1.56(s,3H),1.40(s,6H)。¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝19.71,27.01,30.57,31.79,34.49,36.97,38.38,79.25,117.53,120.41,123.84,127.33,129.21。

實(shí)例七 2-(2-溴苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-07)

反應(yīng)同實(shí)例一，用2-溴苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率60.7％，熔點(diǎn)：164.1～165.9℃。¹H-NMR(300M,CDCl₃),δ＝11.22(s,1H),8.51(d,J＝9.0Hz,1H),7.93(d,J＝8.7Hz,1H),7.69(d,J＝7.2Hz,1H),7.51(dd,J＝18.0,8.1Hz,2H),7.28(d,J＝7.5Hz,1H),4.94(t,J＝8.8Hz,1H),4.41(dd,J＝8.6,6.0Hz,1H),4.16(s,1H),3.44(s,2H),2.06(d,J＝5.9Hz,2H),1.89–1.70(m,2H),1.61(d,J＝6.5Hz,3H),1.40(d,J＝3.0Hz,6H)。¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝19.74,19.80,26.92,30.41,31.76,31.80,34.45,37.11,38.20,79.30,99.98,117.65,119.62,120.45,123.78,128.15,130.38,132.52,134.00。

實(shí)例八 2-(3-溴苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-08)

反應(yīng)同實(shí)例一，用3-溴苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率58.4％，熔點(diǎn)：127.6～130.5℃。¹H-NMR(300M，CDCl₃),δ＝9.95(s,1H),8.15(s,1H),7.87(s,2H),7.46(d,J＝8.7Hz,2H),7.27(s,1H),4.80(s,1H),4.33(s,1H),4.04(s,1H),3.40(s,2H),2.02(d,J＝4.0Hz,2H),1.74(d,J＝11.7Hz,2H),1.49(d,J＝6.5Hz,3H),1.34(d,J＝4.2Hz,6H)。¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝19.72,2.94,30.61,31.82,34.51,36.95,38.45,79.29,114.34,117.67,120.37,123.07,123.91,124.65,128.94,130.36,132.21,143.95,153.20。

實(shí)例九 2-(4-溴苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-08)

反應(yīng)同實(shí)例一，用4-溴苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率62.9％，熔點(diǎn)：143.9～149.2℃。¹H-NMR(300M,CDCl₃),δ＝7.91(d,J＝8.5Hz,3H),7.55(t,J＝9.5Hz,3H),4.85(t,J＝8.4Hz,1H),4.38(dd,J＝8.5,5.8Hz,1H),4.03(s,1H),3.54(s,2H),2.08(d,J＝4.8Hz,2H),1.81(d,J＝11.7Hz,2H),1.54(d,J＝6.5Hz,3H),1.41(d,J＝5.0Hz,6H)。¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝19.57,20.01,26.89,30.43,31.71,31.87,34.59,36.70,38.32,79.31,117.94,120.56,128.31,132.09。

實(shí)例十 2-(2-甲基苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-10)

反應(yīng)同實(shí)例一，用2-甲基苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率67.2％，熔點(diǎn)：109.7～118.6℃。¹H-NMR(300M,CDCl₃),δ＝9.93(s,1H),7.94(d,J＝8.6Hz,1H),7.79(d,J＝6.9Hz,1H),7.53(d,J＝8.7Hz,1H),7.34(s,3H),4.92(t,J＝8.7Hz,1H),4.59–4.28(m,1H),4.12(s,1H),3.48(s,2H),2.66(s,3H),2.04(s,2H),1.80(s,2H),1.58(d,J＝6.7Hz,3H),1.40(d,J＝4.2Hz,6H)¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝19.64,19.99,21.16,30.62,31.75,34.48,37.04,38.34,79.41,100.08,117.42,120.43,123.86,126.20,129.52,129.74,131.43,137.11。

實(shí)例十一 2-(3-甲基苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-11)

反應(yīng)同實(shí)例一，用3-甲基苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率58.7％，熔點(diǎn)：110.5～116.3℃。¹H-NMR(300M,CDCl₃),δ＝9.95(s,1H),7.80(d,J＝25.0Hz,3H),7.44(s,1H),7.32(s,1H),7.19(s,1H),4.83(s,1H),4.33(s,1H),4.10(s,1H),3.43(s,2H),2.37(s,3H),2.02(d,J＝4.4Hz,2H),1.88–1.65(m,2H),1.51(d,J＝6.4Hz,3H),1.34(d,J＝4.0Hz,6H)；¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝9.77,19.73,21.38,25.30,26.94,29.73,30.52,31.81,34.49,37.00,38.42,79.27,117.52,120.39,123.00,123.73,124.15,126.73,128.89,130.17,130.57,138.85,143.70。

實(shí)例十二 2-(4-甲基苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-12)

反應(yīng)同實(shí)例，用4-甲基苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率，收率收50.9％，熔點(diǎn)：130.9～140.2℃。¹H-NMR(300M,CDCl₃)，δ＝7.87(s,3H),7.45(s,1H),7.19(s,2H),4.80(s,1H),4.32(s,1H),4.04(s,1H),3.48(s,2H),2.31(s,3H),2.01(d,J＝4.8Hz,2H),1.74(dd,J＝7.7,4.1Hz,2H),1.49(d,J＝6.8Hz,3H),1.33(d,J＝4.6Hz,6H)。¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝14.14,19.74,21.36,22.68,25.30,29.72,30.53,31.81,34.48,37.02,38.43,79.26,120.33,123.57,126.10,129.61,143.60。ESI-MS:m/z:396.2278。

實(shí)例十三 2-(2-甲氧基苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-13)

反應(yīng)同實(shí)例一，用2-甲氧基苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率60.7％，熔點(diǎn)：180.4～182.8℃。¹H-NMR(300M,CDCl₃),δ＝11.72(s,1H),8.64(d,J＝7.5Hz,1H),7.92(d,J＝8.7Hz,1H),7.49(d,J＝8.7Hz,1H),7.38(t,J＝8.6Hz,1H),7.16(t,J＝7.5Hz,1H),7.06(d,J＝8.3Hz,1H),4.94(t,J＝8.8Hz,1H),4.48–4.36(m,1H),4.28–4.15(m,1H),4.11(s,3H),3.45(t,J＝6.3Hz,2H),2.07(d,J＝6.2Hz,2H),1.82(dd,J＝7.7,3.9Hz,2H),1.64(d,J＝6.8Hz,3H),1.41(d,J＝2.3Hz,6H)；¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝19.81,29.82,31.71,34.34,37.25,38.26,56.27,79.29,111.42,117.22,120.52,120.87,121.97,123.30,128.43,129.54,130.36,143.49,156.15。

實(shí)例十四 2-(3-甲氧基苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-14)

反應(yīng)同實(shí)例一，用3-甲氧基苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率63.6％，熔點(diǎn)：118.7～125.3℃。¹H-NMR(300M,CDCl₃),δ＝10.10(s,1H),7.92(d,J＝8.7Hz,1H),7.67(s,1H),7.59(d,J＝7.5Hz,1H),7.52(d,J＝8.7Hz,1H),7.38(t,J＝7.9Hz,1H),6.95(d,J＝8.4Hz,1H),4.87(t,J＝8.7Hz,1H),4.38(dd,J＝8.6,5.7Hz,1H),4.07(s,3H),3.51(s,2H),2.07(d,J＝4.4Hz,2H),1.82(d,J＝5.4Hz,2H),1.54(d,J＝5.9Hz,3H),1.41(d,J＝4.4Hz,6H)。¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝19.78,30.27,31.79,34.48,37.11,38.64,55.54,79.38,111.76,115.22,117.41,118.83,120.99,124.45,130.03,160.60。

實(shí)例十五 2-(4-甲氧基苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-15)

反應(yīng)同實(shí)例一，用4-甲氧基苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率55.8％，熔點(diǎn)：105.9～110.4℃。¹H-NMR(300M,CDCl₃),δ＝9.88(s,1H),8.00(s,3H),7.52(s,1H),6.94(s,2H),4.85(s,1H),4.37(s,1H),4.06(s,1H),3.83(s,3H),3.53(s,2H),2.07(s,2H),1.80(s,2H),1.56(s,3H),1.42(s,6H)。¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝19.76,19.86,26.93,29.72,30.53,31.79,34.46,37.05,38.44,55.36,79.22,114.34,117.11,120.31,123.37,127.59,143.42,160.64。

實(shí)例十六 2-(2-羥基苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-16)

反應(yīng)同實(shí)例一，用2-羥基苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率64.7％，熔點(diǎn)：270.8～273.9℃。¹H-NMR(300M,CDCl₃),δ＝7.83(d,J＝8.7Hz,1H),7.56(d,J＝7.8Hz,1H),7.45(d,J＝8.7Hz,1H),7.23(t,J＝7.3Hz,1H),7.06(d,J＝8.3Hz,1H),6.85(t,J＝7.4Hz,1H),4.86(t,J＝8.9Hz,1H),4.33(dd,J＝8.6,6.0Hz,1H),3.95(d,J＝8.1Hz,1H),3.53(s,2H),1.98(s,2H),1.72(d,J＝6.6Hz,2H),1.46(d,J＝6.8Hz,3H),1.32(d,J＝4.0Hz,6H)；¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝19.71,26.94,30.48,31.77,34.51,36.80,38.34,79.30,117.86,119.02,120.27,123.99,131.07,144.29,158.05。

實(shí)例十七 2-(3-羥基苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-17)

反應(yīng)同實(shí)例一，用3-羥基苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率58.8％，熔點(diǎn)：120.4～133.8℃。¹H-NMR(300M,CDCl₃),δ＝7.91(d,J＝8.7Hz,1H),7.82(s,1H),7.52(d,J＝8.8Hz,1H),7.33(d,J＝7.7Hz,1H),7.19(t,J＝6.6Hz,1H),6.85(d,J＝8.4Hz,1H),4.80(t,J＝8.7Hz,1H),4.51–4.23(m,1H),4.12(dd,J＝14.3,7.2Hz,1H),3.64–3.24(m,2H),2.03(s,2H),1.77(s,2H),1.45(d,J＝6.6Hz,3H),1.39(d,J＝6.8Hz,6H)。¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝14.43,20.07,20.29,26.81,31.08,32.33,34.69,36.71,79.03,110.53,113.26,116.26,116.70,117.24,119.87,123.12,125.22,129.51,130.22,132.49,132.62,135.71,143.21,147.03,152.34,158.14。

實(shí)例十八 2-(4-羥基苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-18)

反應(yīng)同實(shí)例一，用4-羥基苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率53.9％，熔點(diǎn)：169.6～176.5℃。¹H-NMR(300M,CDCl₃),δ＝7.92(d,J＝8.7Hz,1H),7.74(d,J＝8.6Hz,2H),7.51(d,J＝8.8Hz,1H),6.85(d,J＝8.6Hz,2H),4.83(t,J＝8.7Hz,1H),4.41(d,J＝4.1Hz,1H),4.11(s,1H),3.40(s,2H),2.07(s,2H),1.79(s,2H),1.47(d,J＝6.8Hz,3H),1.39(d,J＝2.0Hz,6H)。¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝19.60,20.28,26.93,30.41,31.69,34.42,36.96,38.27,55.63,79.45,107.19,116.52,117.26,120.41,123.66,128.00,143.72。

實(shí)例十九 2-(2-硝基苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-19)

反應(yīng)同實(shí)例一，用2-硝基苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率65.6％，熔點(diǎn)：244.9～249.6℃。¹H-NMR(300M,d₆-DMSO),δ＝8.13(d,J＝7.8Hz,1H),7.92(d,J＝8.0Hz,1H),7.84(t,J＝7.6Hz,1H),7.76(d,J＝8.6Hz,1H),7.66(t,J＝8.3Hz,1H),7.51(d,J＝8.7Hz,1H),4.89(t,J＝8.9Hz,1H),4.42(dd,J＝8.8,4.8Hz,1H),3.95(dd,J＝12.8,8.0Hz,1H),3.59(t,J＝6.1Hz,2H),1.88(s,2H),1.72(s,2H),1.45(d,J＝6.8Hz,3H),1.33(s,6H)；¹³C-NMR(125MHZ,d₆-DMSO),δ＝20.08,30.51,32.20,32.27,34.69,36.62,38.91,79.16,110.30,116.88,119.84,123.53,123.89,124.34,125.17,129.45,130.00,132.26,132.53,135.72,141.93,143.67,149.47,153.05。

實(shí)例二十 2-(3-硝基苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-20)

反應(yīng)同實(shí)例一，用3-硝基苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率71.7％，熔點(diǎn)：275.4～278.3℃。¹H-NMR(300M,d₆-DMSO),δ＝9.04(s,1H),8.65(d,J＝7.9Hz,1H),8.23(d,J＝8.2Hz,1H),7.79(dd,J＝19.7,8.3Hz,2H),7.50(d,J＝8.7Hz,1H),4.88(t,J＝8.8Hz,1H),4.44(dd,J＝8.8,4.4Hz,1H),3.96(d,J＝4.2Hz,1H),3.86(t,J＝5.7Hz,2H),1.93(s,2H),1.74(s,2H),1.46(d,J＝6.8Hz,3H),1.35(s,6H)。¹³C-NMR(125MHZ,d₆-DMSO),δ＝20.03,20.30,31.01,32.30,34.71,36.63,38.93,39.49，39.66,39.83,39.99,40.16,40.33,40.49,79.18,110.38,117.04,119.95,120.22,123.35,125.27,130.01,130.91,132.41,132.63,132.84,135.83,143.68,144.61,148.88,153.07。

實(shí)例二十一 2-(4-硝基苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-21)

反應(yīng)同實(shí)例一，用4-硝基苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率67.8％，熔點(diǎn)：132.9～137.6℃；¹H-NMR(300M,d₆-DMSO),δ＝8.55–8.29(m,4H),7.76(d,J＝8.7Hz,1H),7.52(d,J＝8.7Hz,1H),4.88(t,J＝8.9Hz,1H),4.44(dd,J＝8.8,4.4Hz,1H),4.05–3.90(m,1H),3.86(t,J＝5.4Hz,2H),1.93(s,2H),1.74(s,2H),1.45(d,J＝6.8Hz,3H),1.34(d,J＝3.1Hz,6H)。¹³C-NMR(125MHZ,d₆-DMSO),δ＝20.01,20.24,31.04,32.29,34.74,36.58,38.91,79.26，110.31,117.24,120.03,123.87,124.79,125.31,126.76,130.50,132.79,136.49,137.12,143.93,144.59,153.51。

實(shí)例二十二 2-(3，5-二甲氧基苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-22)

反應(yīng)同實(shí)例一，用3，5-二甲氧基苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率55.7％，熔點(diǎn)：85.4～91.7℃。¹H-NMR(300M，CDCl₃),δ＝9.97(s,1H),7.92(d,J＝8.7Hz,1H),7.53(d,J＝8.7Hz,1H),6.47(s,1H),4.83(s,1H),4.36(dd,J＝8.5,5.6Hz,1H),4.03(s,1H),3.84(s,6H),3.53(s,2H),2.07(d,J＝5.5Hz,2H),1.81(dd,J＝7.3,4.3Hz,2H),1.51(s,3H),1.41(d,J＝5.4Hz,6H)¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝19.71,21.92,30.58,31.82,34.50,36.99,38.42,55.58,79.29,101.36,104.43,117.50,120.33,123.78,143.79,161.18。

實(shí)例二十三 2-(2，4-二甲氧基苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-23)

反應(yīng)同實(shí)例一，用2，4-二甲氧基苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率61.8％，熔點(diǎn)：228.3～233.7℃。¹H-NMR(300M,CDCl₃),δ＝8.61(s,1H),7.91(d,J＝8.7Hz,1H),7.48(d,J＝8.8Hz,1H),6.69(d,J＝10.9Hz,1H),6.56(s,1H),4.93(t,J＝8.7Hz,1H),4.40(dd,J＝8.4,6.0Hz,1H),4.22(d,J＝8.4Hz,1H),4.06(s,3H),3.85(s,3H),3.41(t,J＝6.2Hz,2H),2.06(d,J＝7.1Hz,2H),1.88–1.74(m,2H),1.64(d,J＝6.8Hz,3H),1.40(d,J＝2.6Hz,6H)；¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝19.81,29.74,31.71,34.35,37.24,38.24,55.50,56.24,79.32,98.73,106.19,115.20,116.96,120.49,123.17,128.33,130.70,143.25,157.40,161.80。

實(shí)例二十四 2-(3，4，5-三甲氧基苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-24)

反應(yīng)同實(shí)例一，用3，4，5-三甲氧基苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率50.7％，熔點(diǎn)：110.5～113.3℃。¹H-NMR(300M,CDCl₃),δ＝9.97(s,1H),7.92(d,J＝8.4Hz,1H),7.54(d,J＝8.8Hz,2H),7.31(s,2H),4.77(s,1H),4.34(s,1H),3.92(d,J＝11.2Hz,9H),3.44(s,2H),2.08(d,J＝20.2Hz,2H),1.93–1.70(m,2H),1.41(d,J＝6.2Hz,9H)；¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝14.14,19.74,19.99,22.71,26.93,30.48,31.79,34.54,36.91,38.39,56.54,61.00,79.25,104.29,117.47,120.40,124.00，154.65；ESI-MS:m/z:472.2438。

實(shí)例二十五 2-(3-羥基-4-甲氧基苯基)咪唑[4,5-f][10,11]-1,6,6-三甲基-1,6,6-三甲基-1,2,6,7,8,9-六氫菲并[1,2-b]-呋喃(CTS-25)

反應(yīng)同實(shí)例一，用3-羥基-4-甲氧基苯甲醛代替2-氟苯甲醛，得目標(biāo)產(chǎn)品，收率56.7％，熔點(diǎn)：137.7～143.5℃。¹H-NMR(300M,CDCl₃),δ＝7.83(d,J＝8.6Hz,1H),7.54(s,2H),7.44(d,J＝8.5Hz,1H),6.78(d,J＝8.8Hz,1H),4.93–4.70(m,1H),4.31(d,J＝5.1Hz,1H),4.04(s,1H),3.81(s,3H),3.45(d,J＝19.9Hz,2H),2.01(d,J＝16.4Hz,2H),1.73(s,2H),1.47(d,J＝6.5Hz,3H),1.33(d,J＝5.0Hz,6H)；¹³C-NMR(125MHZ,CDCl₃),δ＝19.69,19.90,29.72,30.52,31.79,34.47,39.97,38.41,55.89,79.28,110.90,112.41,117.19,118.79,120.28,123.52,143.55,145.97,148.14。

生物活性測(cè)定

以上所示化合物篩選如下：發(fā)現(xiàn)具有下表1中所示抗癌和抗雄激素受體活性。

我們用人類胚胎腎細(xì)胞HEK 293和人前列腺癌細(xì)胞LNCaP來(lái)檢驗(yàn)上述化合物對(duì)雄性激素受體生物活性的影響。

細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染

將人類胚胎腎細(xì)胞HEK 293和人前列腺癌細(xì)胞LNCaP分別保存在含有10％胎牛血清的DMEM和RPMI培養(yǎng)基(100單位/ml青霉素，100mg/L鏈霉素和10％胎牛血清)中。

雄激素受體反向激活是一種雄激素依賴性報(bào)道基團(tuán)轉(zhuǎn)錄因子試驗(yàn)，用該試驗(yàn)作為鑒定抗雄激素活性的主要篩選方法。先在HEK 293細(xì)胞中進(jìn)行測(cè)定，HEK 293細(xì)胞缺乏內(nèi)源性AR，我們對(duì)HEK 293細(xì)胞進(jìn)行野生型AR轉(zhuǎn)染激活測(cè)定，一旦HEK 293細(xì)胞野生型AR反向激活測(cè)定顯示出隱丹參酮類化合物有抗雄激素生物活性，再進(jìn)一步用LNCaP細(xì)胞進(jìn)行AR活性確定，LNCaP細(xì)胞有與臨床上相關(guān)的突變型AR表達(dá)，進(jìn)一步考察隱丹參酮類化合物的抗AR活性。

熒光素酶活性測(cè)定。

將HEK 293細(xì)胞接種在具有10％CS-FBS DMEM培養(yǎng)基的24孔或48孔組織培養(yǎng)皿中，保持24小時(shí)更新培養(yǎng)基，然后用pSG5-AR、MMTV-Luc和pRL-TK-luc使用Lipofectamin2000(Invitrogen)進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染24小時(shí)后。再用1nM DHT和/或5nM比卡魯胺及各濃度隱丹參酮類化合物對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理24小時(shí)，收獲細(xì)胞，用雙熒光素酶測(cè)定系統(tǒng)(Dual Luciferase Assay Systen)(Promega，WI)進(jìn)行雙熒光素酶測(cè)定，得到數(shù)據(jù)用歸一化至內(nèi)部熒光素酶對(duì)照雙熒光素酶活性表示。DHT誘導(dǎo)基團(tuán)顯著表達(dá)，將能顯著抑制該雄激素誘導(dǎo)的報(bào)道基因表達(dá)的隱丹參酮類化合物鑒定為潛在的抗雄激素活性化合物。

將LNCaP細(xì)胞接種在具有10％CS-FBS RPMI培養(yǎng)基的24孔或48孔組織培養(yǎng)皿中，保持24小時(shí)，更新培養(yǎng)基，然后用MMTV-Luc和pRL-TK-lu進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染24小時(shí)后。再用1nM DHT和/或5nM比卡魯胺及各濃度隱丹參酮類化合物處理細(xì)胞24小時(shí)，收獲細(xì)胞，用雙熒光素酶測(cè)定系統(tǒng)進(jìn)行雙熒光素酶測(cè)定，對(duì)上述測(cè)試化合物活性進(jìn)一步測(cè)定和確認(rèn)。

LNCaP細(xì)胞生長(zhǎng)測(cè)定

如上所述，隱丹參酮類化合物細(xì)胞含有大量突變型AR，當(dāng)有雄激素參與時(shí)，這些細(xì)胞生長(zhǎng)可被顯著激活。用LNCaP細(xì)胞生長(zhǎng)測(cè)定作為替代方法，來(lái)確定由上述AR反向激活測(cè)定的化合物進(jìn)一步鑒定為潛在的抗雄激素藥物，應(yīng)用MTT分析法。

將LNCaP細(xì)胞接種在96孔組織培板中，然后在1nM DHT和/或隱丹參酮類化合物的存在下，在含有10％CS-FBS RPMI培養(yǎng)基中連續(xù)溫育3天。溫育結(jié)束后，將MTT(5mg/ml的PBS溶液)給予細(xì)胞，在37℃下保持3小時(shí)。將得到的沉淀溶于溶胞緩沖液，然后用微量培養(yǎng)板讀出器，在595nm波長(zhǎng)處定量測(cè)定，為確保MTT分析得出的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性，用一式兩份樣品進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。將對(duì)雄激素誘導(dǎo)的前列腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)顯示不良的隱丹參酮類化合物鑒定為潛在的抗雄激素類藥物。

一、隱丹參酮類化合物抗AR活性。見圖1為化合物對(duì)LNCaP細(xì)胞的相對(duì)抑制生長(zhǎng)能力和圖2為化合物對(duì)CWR22RV1細(xì)胞的相對(duì)抑制生長(zhǎng)能力及表1。

表1、隱丹參酮類化合物人類前列腺癌細(xì)胞LNCaP細(xì)胞的(IC₅₀)。