本發(fā)明涉及中藥活性成分，特別涉及一種款冬酮的新用途，具體是款冬酮在制備抗衰老藥物和保健食品中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

隨著醫(yī)療條件的改善，人類平均壽命在不斷地延長(zhǎng)，同時(shí)人口老齡化問(wèn)題也逐漸嚴(yán)重。截至2006年底，全國(guó)65歲以上人口10419萬(wàn)人，占全國(guó)總?cè)丝诘?.9％。預(yù)計(jì)到2050年人口達(dá)到最高峰值時(shí)，老年人口總量將超過(guò)4億，老齡化水平推進(jìn)到30％以上，接近于1980年全世界老年人口之和。隨著人口老齡化形勢(shì)日趨嚴(yán)峻，衰老機(jī)制、延緩衰老藥物研究已經(jīng)成為生命科學(xué)的熱點(diǎn)和重點(diǎn)問(wèn)題。衰老的機(jī)制復(fù)雜、學(xué)說(shuō)繁多，迄今為止，解釋衰老機(jī)理的理論或?qū)W說(shuō)多達(dá)200余種，其中包括：遺傳控制說(shuō)、細(xì)胞端粒說(shuō)、自由基損傷說(shuō)、體細(xì)胞突變說(shuō)、免疫紊亂說(shuō)、線粒體損傷學(xué)說(shuō)等(FosselM.Cell Senescence in HmanAging and Disease.In：Harman D.(Ed.)：Increasing healthy lifespan，conventionalmeasures and slowing the innate aging process.ANN N Y ACAD SCI，2002，959：14～23)。

款冬酮(tussilagone)是從中藥款冬花(Tussilagofarfara L.)中分離出的一種活性單體成分。研究表明款冬酮具有抗炎、抗過(guò)敏、抗癌等活性，但是否具有抗衰老作用未見(jiàn)任何報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種款冬酮的醫(yī)藥新用途，以充分發(fā)揮款冬酮的藥用價(jià)值。

本發(fā)明提供一種以款冬酮為活性成分在制備抗衰老藥物或保健品中的應(yīng)用。

所述款冬酮的結(jié)構(gòu)式如下：

所述款冬酮采用現(xiàn)有技術(shù)制備得到。

本發(fā)明以款冬酮為活性成分，采用線蟲(chóng)這一模式生物，觀察款冬酮對(duì)線蟲(chóng)壽命的影響，發(fā)現(xiàn)20μM濃度的款冬酮能延長(zhǎng)線蟲(chóng)23.6％的平均壽命，25％的中位壽命以及25.8％的最高壽命?？疃鳛榛钚猿煞挚稍谥苽淇顾ダ纤幬锘虮＝∑分袘?yīng)用。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例2的線蟲(chóng)生存曲線圖。

圖2為本發(fā)明實(shí)施例2中不同劑量款冬酮給藥組存活時(shí)間和和最高壽命圖(各劑量組與空白組相比：P＜0.05*P＜0.01**)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)、完整的說(shuō)明。

實(shí)施例1款冬酮的制備

取干燥的款冬花1kg粉碎，用石油醚超聲提取3次，每次100min，提取液過(guò)濾，減壓濃縮得粗提取物1.23g。

取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水(10:5:11:3)置于分液漏斗中，靜置分層，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，用泵將固定相灌滿分離柱，取粗提取物溶于固定相中上樣，當(dāng)主機(jī)轉(zhuǎn)速達(dá)到800rpm，以2ml/min流速泵入流動(dòng)相，當(dāng)流動(dòng)相流出時(shí)根據(jù)檢測(cè)器圖譜收集目標(biāo)成分，濃縮、干燥得款冬酮粗品。以石油醚-乙酸乙酯(35:1)為洗脫劑，采用硅膠柱對(duì)款冬酮粗品進(jìn)行分離，用石油醚-乙酸乙酯(10:3)對(duì)各餾分進(jìn)行薄層檢測(cè)，合并含款冬酮的流分，減壓濃縮干燥得款冬酮純品。經(jīng)高效液相色譜檢測(cè)其純度為99.3％。

實(shí)施例2款冬酮抗衰老藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)

1材料

1.1模式生物

秀麗隱桿線蟲(chóng)(Caenorhabditiselegans，C.elegans)N2由山西大學(xué)應(yīng)用生物學(xué)研究所馬恩波課題組友情提供。

1.2藥物和試劑

大腸桿菌Escherichia coli OP50(E.coil OP50)由山西大學(xué)應(yīng)用生物學(xué)研究所馬恩波課題組友情提供，5-氟-2′-脫氧尿苷(FUdR)購(gòu)自sigma公司(美國(guó))，瓊脂粉購(gòu)自Solarbio公司(北京)，蛋白胨購(gòu)自北京奧博星生物科技有限責(zé)任公司，其他無(wú)機(jī)試劑均購(gòu)自天津市風(fēng)船化學(xué)試劑有限公司。標(biāo)準(zhǔn)線蟲(chóng)培養(yǎng)基NGM培養(yǎng)基：每升培養(yǎng)基含3g氯化鈉、21g瓊脂粉、2.5g蛋白胨、1mL膽固醇乙醇溶液(濃度為5mg/mL)、1mL CaCl₂溶液(1mol/L)、1mL MgSO₄溶液(1mol/L)和25mLKH₂PO₄-K₂HPO₄緩沖溶液(pH＝6，濃度為1mol/L)。堿裂解液由0.5mol/L NaOH和0.5％NaOCl配制而成。

1.3儀器

恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)，體視顯微鏡(重慶澳浦光電科技有限公司)，高壓滅菌鍋(上海申安醫(yī)療器械廠)。

2方法

2.1實(shí)驗(yàn)分組

分為對(duì)照組和三個(gè)給藥組，款冬酮給藥組在培養(yǎng)基中的濃度分別為20μM，40μM，60μM。

2.2線蟲(chóng)同步化

用堿裂解液對(duì)在20℃培養(yǎng)的處于混合發(fā)育時(shí)期的線蟲(chóng)進(jìn)行處理，獲得蟲(chóng)卵，置于標(biāo)準(zhǔn)線蟲(chóng)培養(yǎng)基(NGM)板上培養(yǎng)，從而獲得同步發(fā)育的幼蟲(chóng)。

2.3線蟲(chóng)常規(guī)培養(yǎng)

選用L4期雌雄同體N2線蟲(chóng)，轉(zhuǎn)移至預(yù)先接種了E.coil OP50的NGM平板，于20℃培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)。

2.4受試培養(yǎng)基的制備

對(duì)照組培養(yǎng)基中含50μmol/LFUdR；藥物組培養(yǎng)基中含50μmol/LFUdR及不同濃度的款冬酮(20μM，40μM，60μM)。

2.5壽命觀察

挑取同步化的L4線蟲(chóng)到各組培養(yǎng)基中，每組90條，每個(gè)板中有30條。從轉(zhuǎn)移時(shí)刻起開(kāi)始計(jì)算線蟲(chóng)存活天數(shù)，轉(zhuǎn)移當(dāng)天記為壽命實(shí)驗(yàn)第0天(day 0)。每天對(duì)線蟲(chóng)進(jìn)行觀察，記錄線蟲(chóng)的死亡數(shù)。線蟲(chóng)死亡標(biāo)準(zhǔn)：?jiǎn)适н\(yùn)動(dòng)能力，多次觸碰無(wú)反應(yīng)。對(duì)平均壽命、中位壽命(每組線蟲(chóng)的中間壽命)、最高壽命(每組線蟲(chóng)最后存活的10只線蟲(chóng)的平均壽命)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。

3結(jié)果分析

運(yùn)用SPSS16.0軟件對(duì)線蟲(chóng)存活狀況進(jìn)行分析。繪制生存曲線圖，結(jié)果顯示20μM濃度的款冬酮能使空白組線蟲(chóng)的生存曲線右移，即有明顯效果；40μM濃度的款冬酮對(duì)空白組線蟲(chóng)的生存曲線無(wú)明改變，即無(wú)明顯效果；60μM濃度的款冬酮?jiǎng)t使空白組線蟲(chóng)的生存曲線左移，即有抑制作用(圖1)。

用Kaplan-Meier(KM)法對(duì)其平均壽命、最高壽命和中位壽命進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，與對(duì)照組相比，濃度為20μM的款冬酮能顯著延長(zhǎng)線蟲(chóng)的平均壽命、中位壽命和最高壽命，結(jié)果見(jiàn)表1(分別延長(zhǎng)23.6％，25％，25.8％)。

表1 款冬酮對(duì)線蟲(chóng)壽命的影響(n＝90)

與空白組相比，P＜0.05*P＜0.01**

運(yùn)用T檢驗(yàn)對(duì)每個(gè)劑量組線蟲(chóng)存活天數(shù)及最高壽命進(jìn)行分析(圖2)。結(jié)果顯示，20μM，40μM濃度的款冬酮給藥組能明顯延長(zhǎng)線蟲(chóng)的存活天數(shù)(P<0.01)；60μM濃度的款冬酮給藥組能明顯降低線蟲(chóng)存活天數(shù)(P<0.01)。20μM濃度的款冬酮組最高壽命與空白組之間存在明顯差異(P<0.01)，能明顯延長(zhǎng)線蟲(chóng)的最高壽命；40μM濃度的款冬酮最高壽命與空白組之間無(wú)明顯差異，即對(duì)線蟲(chóng)的最高壽命無(wú)明顯影響；60μM濃度的款冬酮最高壽命與空白組之間存在明顯差異(P<0.01)，能降低線蟲(chóng)的最高壽命。

運(yùn)用卡方分析對(duì)20μM款冬酮組與空白組線蟲(chóng)的(根據(jù)生存曲線圖1第4天差異開(kāi)始)存活率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。發(fā)現(xiàn)從第11天起20μM濃度的款冬酮能明顯延長(zhǎng)(p<0.05)空白組線蟲(chóng)的壽命(表2)。

表2 20μM款冬酮與空白組比較卡方檢驗(yàn)結(jié)果表(P值)