本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。

背景技術(shù)：

炎癥發(fā)生在局部，同時(shí)也可影響全身。局部臨床特征是紅、熱、腫、痛和功能障礙。紅、熱是由于炎癥局部血管擴(kuò)張、血流加快所致。腫是由于局部炎癥性充血、血流成分滲出引起。研發(fā)具有抗炎作用的藥物對(duì)于緩解驗(yàn)證、減輕痛苦有重要意義。

炎癥的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問(wèn)題，從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物有重要價(jià)值。

本發(fā)明涉及的化合物I是一個(gè)2009年發(fā)表(Pei Tang et al.,2009.Atropurpuran,a novel diterpene with an unprecedented pentacyclic cage skeleton,from Aconitum hemsleyanum var.atropurpureum.Tetrahedron Letters 50(2009)460–462)的化合物，我們對(duì)化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個(gè)新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對(duì)該組合物抗炎癥活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，其具有抗炎癥活性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開了一個(gè)新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為15％和85％。

本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。

本發(fā)明的目的是提供組合物在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。所述的炎癥為無(wú)菌性炎癥。

本發(fā)明組合物在制備抗炎藥物中應(yīng)用的有益效果如下：

首先證明了本發(fā)明組合物具有有效抗炎作用。采用了經(jīng)典的二甲苯所致的小鼠耳腫脹模型以及大鼠瓊脂性足腫脹模型，觀察本發(fā)明組合物在一定時(shí)間內(nèi)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抗炎作用。研究表明：

1、本發(fā)明組合物對(duì)二甲苯所致的小鼠耳腫脹有明顯抑制作用。

2、本發(fā)明組合物對(duì)大鼠瓊脂性足腫脹有明顯抑制作用。

以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí)施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1化合物Atropurpuran的制備

化合物Atropurpuran(I)的制備方法參照Pei Tang等人發(fā)表的文獻(xiàn)(Pei Tang et al.,2009.Atropurpuran,a novel diterpene with an unprecedented pentacyclic cage skeleton,from Aconitum hemsleyanum var.atropurpureum.Tetrahedron Letters 50(2009)460–462)的方法。

實(shí)施例2 Atropurpuran的O-溴乙基衍生物(II)的合成

將化合物I(312mg，1.00mmol)溶于10mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨(TBAB)(0.08g)，1,2-二溴乙烷(3.760g，20.00mmol)和6mL的50％氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5攝氏度攪拌6h。6h之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相溶液。然后對(duì)有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌3次，再用無(wú)水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:1.0，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的黃色粉末(309mg，74％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.86(s,1H),5.23(s,1H),4.87(s,1H),4.83(s,1H),4.39(s,1H),4.00(s,2H),3.91(s,1H),3.58(s,2H),3.01(s,1H),2.27(s,1H),2.15(d,J＝6.3Hz,2H),2.09–2.00(m,5H),1.78(dd,J＝35.2,19.2Hz,2H),1.71–1.65(m,1H),1.41(s,2H),0.99(s,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ208.55(s),203.16(s),150.94(s),125.16(s),111.66(s),78.63(s),71.39(s),57.77(s),47.73(s),40.79(s),34.58(s),33.01(s),32.69(s),29.25(s),29.34(s),26.52(s),24.23(s),22.30(s),20.64(s).

HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd for C₂₂H₂₈BrO₃:419.1222；found 419.1226.

實(shí)施例3 Atropurpuran的O-(二乙胺基)乙基衍生物(III)的合成

將化合物II(209mg，0.5mmol)溶于10mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無(wú)水碳酸鉀(345mg，2.5mmol)，碘化鉀(84mg，0.5mmol)和二乙胺(2920mg，40mmol)，混合物加熱回流2h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:0.4，v/v)，收集棕色集中洗脫帶，濃縮即得到化合物III的棕色固體(152mg,74％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.34(s,1H),5.12(s,1H),4.77(s,1H),4.72(s,1H),4.43(s,1H),3.74(s,1H),3.47(s,2H),2.91(s,1H),2.82(s,4H),2.57(s,2H),2.16(s,1H),2.04(s,1H),1.98–1.84(m,5H),1.74–1.68(m,4H),1.24(s,2H),1.07(s,6H),0.88(s,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ208.41(s),203.13(s),150.80(s),125.13(s),111.52(s),78.60(s),66.92(s),57.74(s),52.16(s),47.59(s),47.36(s),40.76(s),34.44(s),32.55(s),29.22(s),28.98(s),26.38(s),24.20(s),22.16(s),20.61(s),11.96(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₂₆H₃₈N₁O₃:412.2852；found:412.2849。

實(shí)施例4 Atropurpuran的O-(二(2-甲硫基乙基))乙基衍生物的合成

1、Atropurpuran的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物的合成

將化合物II(209mg，0.5mmol)溶于15mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無(wú)水碳酸鉀(345mg，2.5mmol)，碘化鉀(84mg，0.5mmol)和二乙醇胺(1051mg，10mmol)，混合物加熱回流1h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入15mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:0.5，v/v)，收集淺棕色集中洗脫帶，濃縮即得到化合物Atropurpuran的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物的黃色固體(159.5mg,72％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.74(s,1H),5.13(s,1H),4.61(d,J＝10.5Hz,2H),4.25(s,1H),3.75(s,1H),3.54(s,2H),3.36(s,4H),2.89(s,1H),2.62(s,2H),2.51(s,4H),2.32(s,2H),2.17(s,1H),2.05(s,1H),1.95(dd,J＝13.4,11.6Hz,4H),1.78(s,1H),1.76–1.69(m,4H),1.44(s,2H),0.89(s,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ208.46(s),203.18(s),150.85(s),125.18(s),111.57(s),78.65(s),67.01(s),58.86(s),57.79(s),56.41(s),53.21(s),47.64(s),40.81(s),34.49(s),32.60(s),29.27(s),29.03(s),26.43(s),24.25(s),22.21(s),20.66(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₂₆H₃₈N₁O₅:444.2750；found:444.2744。

Atropurpuran的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物

2、Atropurpuran的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物的合成

合成足夠多的Atropurpuran的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物，將Atropurpuran的O-(二羥乙胺基)乙基衍生物(0.222g，0.5mmol)溶于6mL氯仿，逐滴加入氯化亞砜(2.38g，20mmol)，反應(yīng)物加熱回流3h。將反應(yīng)物冷卻至室溫，滴加甲醇分解過(guò)量的氯化亞砜，減壓濃縮除去溶劑。產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化(石油醚/丙酮100:0.5，v/v)，得到化合物Atropurpuran的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物的淡黃色固體(143.7mg，60％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.69(s,1H),5.11(s,1H),4.76(s,1H),4.71(s,1H),4.59(s,1H),3.84(s,1H),3.66(s,4H),3.53(s,2H),2.93(s,1H),2.76(s,2H),2.68(s,2H),2.61(s,2H),2.16(s,1H),2.04(s,1H),1.95(dd,J＝21.9,12.0Hz,4H),1.77(s,1H),1.71(d,J＝5.4Hz,2H),1.46(d,J＝17.9Hz,4H),0.89(s,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ208.41(s),203.13(s),150.80(s),125.13(s),111.52(s),78.60(s),66.96(s),57.74(s),55.76(s),53.16(s),47.59(s),40.76(s),39.18(s),34.44(s),32.55(s),29.22(s),28.98(s),26.38(s),24.20(s),22.16(s),20.61(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₂₆H₃₆Cl₂N₁O₃:480.2072；found:480.2069。

Atropurpuran的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物的合成

3、Atropurpuran的O-(二(2-甲硫基乙基))乙基衍生物的合成

制備足夠多的化合物Atropurpuran的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物，將化合物Atropurpuran的O-(二氯乙胺基)乙基衍生物(0.240g，0.5mmol)溶于12mL乙醇，室溫下加入甲硫醇鈉(2.1g，30mmol)，反應(yīng)物加熱回流2h。減壓濃縮除去溶劑，所得產(chǎn)物用硅膠柱層析進(jìn)行純化(石油醚/丙酮100:0.5，v/v)，得到黃色固體物，即化合物IV(0.153g，61％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.72(s,1H),5.13(s,1H),4.68–4.58(m,3H),3.84(s,1H),3.54(s,2H),2.94(s,1H),2.64(s,2H),2.58(d,J＝9.4Hz,8H),2.18(s,1H),2.08–1.91(m,11H),1.89–1.62(m,3H),1.48(d,J＝18.3Hz,4H),0.91(s,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ208.56(s),203.28(s),150.85(s),125.28(s),111.67(s),78.75(s),67.11(s),57.89(s),53.31(s),52.25(s),47.74(s),40.91(s),34.59(s),32.70(s),31.98(s),29.37(s),29.13(s),26.53(s),24.35(s),22.31(s),20.76(s),14.60(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₂₈H₄₂N₁O₃S₂:504.2606；found:504.2600。

實(shí)施例5組合物抗炎藥效學(xué)研究

試驗(yàn)材料

1.昆明(KM)種小鼠：雄性，6周，18.5-22.5g，由江蘇省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2.大鼠(Wistar)：雄性，體質(zhì)量140～160g，由江蘇省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

3.組合物的制備：將研磨之后過(guò)200目網(wǎng)的15mg化合物III的粉末和研磨之后過(guò)200目網(wǎng)的85mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物，使用時(shí)用水溶解這100mg的組合物即得到組合物的溶液。

試驗(yàn)方法

1.灌胃組合物對(duì)小鼠耳部炎癥的作用：取體質(zhì)量18.5～22.5g健康雄性小鼠50只，隨機(jī)分成5組，每組10只。分組為：組合物2.5mg·kg^-1、化合物III 2.5mg·kg^-1、化合物IV 2.5mg·kg^-1、阿司匹林組(200mg·kg^-1)、空白對(duì)照組(生理鹽水)。各組分別灌胃給藥，連續(xù)7d，第七天灌胃后1h，3組小鼠均在小鼠右耳前、后面均勻涂二甲苯0.02mL，制備耳廓炎癥模型。1h后后頸脫臼處死小鼠，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑8mm打孔器分別在兩耳的同一部位打下圓耳片，稱重精確到0.0001g。立即用電子天平分別稱質(zhì)量，以左右兩耳質(zhì)量差作為腫脹度，并計(jì)算其腫脹度。

腫脹度＝右耳片重—左耳片重

2.灌胃組合物對(duì)大鼠瓊脂性足腫脹的作用：取體質(zhì)量140～160g健康雄性Wistar大鼠40只，隨機(jī)分成5組。組合物2.5mg·kg^-1、化合物III 2.5mg·kg^-1、化合物IV 2.5mg·kg^-1、阿司匹林組(200mg·kg^-1)、空白對(duì)照組(生理鹽水)。分別灌胃給藥，連續(xù)7d，第七天灌胃后1h，大鼠的右后足跎皮下注射10g/L瓊脂0.1mL制備足腫急性炎癥模型，用大鼠足容量測(cè)量?jī)x測(cè)其右后足正常容積。致炎后5h測(cè)量各鼠右后足容積，并計(jì)算腫脹度。

腫脹度＝右后足容積—左后足容積

試驗(yàn)結(jié)果

1、組合物對(duì)小鼠耳部炎癥的影響

致炎后，各組小鼠右耳立刻出現(xiàn)高度紅腫現(xiàn)象。阿司匹林組和組合物組對(duì)二甲苯所致的小鼠耳腫脹均有顯著抑制作用，而化合物III和化合物IV則對(duì)二甲苯所致的小鼠耳腫脹沒(méi)有顯著抑制作用，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1組合物對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響

與模型組比較*P<0.01

2、組合物對(duì)大鼠瓊脂性足腫脹的影響

注射瓊脂后，各組大鼠足爪均有一定程度的腫脹現(xiàn)象。在肉眼觀察下，模型組腫脹發(fā)紅最明顯，阿司匹林組稍有腫脹無(wú)明顯發(fā)紅現(xiàn)象，組合物組有腫脹無(wú)明顯發(fā)紅現(xiàn)象。組合物對(duì)大鼠足腫有顯著抑制作用，而化合物III和化合物IV則對(duì)大鼠足腫無(wú)顯著抑制作用，見(jiàn)表2。

表2組合物對(duì)大鼠瓊脂性足趾腫脹度的影響

與模型組比較*P<0.05

結(jié)論：組合物對(duì)二甲苯所致的小鼠耳腫脹有明顯抑制作用；組合物對(duì)大鼠瓊脂性足腫脹有明顯抑制作用。而化合物III和化合物IV則對(duì)二甲苯所致的小鼠耳腫脹無(wú)明顯抑制作用；化合物III和化合物IV則對(duì)大鼠瓊脂性足腫脹無(wú)明顯抑制作用。組合物可以用于制備抗炎藥物，化合物III和化合物IV不能用于制備抗炎藥物。

實(shí)施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備

取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。

實(shí)施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備

取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。