本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。

背景技術(shù)：

氧是人類及許多生物賴以生存的重要條件。低氧(Hypoxia)是指機體生命活動所需的氧不能得到充足的供給。氧和低氧是生命活動最重要的關(guān)鍵因素，是生命科學(xué)基本理論的重要課題。低氧的形成可分為三類：第一類是外界環(huán)境氧含量降低，使正常生理活動過程不能攝取足夠氧，如高原和航空缺氧；第二類是指因疾病等導(dǎo)致外界正常氧量不能充分到達(dá)機體內(nèi)，造成心、腦和呼吸系統(tǒng)等的缺氧；第三類是機體活動所需氧消耗量，超過了生理動員能力，造成相對氧供給不足，常見于劇烈運動和超限量勞動。長期低氧是危害人體健康的重要隱患，嚴(yán)重者可危及生命。因此，低氧造成心、腦和呼吸系統(tǒng)等損傷已成為21世紀(jì)醫(yī)學(xué)界急待解決的主要問題之一。

從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物最有重要價值。

本發(fā)明涉及的化合物I是一個2009年發(fā)表(Pei Tang et al.,2009.Atropurpuran,a novel diterpene with an unprecedented pentacyclic cage skeleton,from Aconitum hemsleyanum var.atropurpureum.Tetrahedron Letters 50(2009)460–462)的化合物，我們對化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物的抗缺氧活性進(jìn)行了評價，其具有抗缺氧活性。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為30％和70％。

本發(fā)明公開的化合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。

藥效學(xué)實驗表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗缺氧作用。本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽具有同樣的藥效。

以下通過實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。

具體實施方式

實施例1 化合物Atropurpuran的制備

化合物Atropurpuran(I)的制備方法參照Pei Tang等人發(fā)表的文獻(xiàn)(Pei Tang et al.,2009.Atropurpuran,a novel diterpene with an unprecedented pentacyclic cage skeleton,from Aconitum hemsleyanum var.atropurpureum.Tetrahedron Letters 50 (2009)460–462)的方法。

實施例2 Atropurpuran的O-溴乙基衍生物(II)的合成

將化合物I(312mg，1.00mmol)溶于10mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨(TBAB)(0.08g)，1,2-二溴乙烷(3.760g，20.00mmol)和6mL的50％氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5攝氏度攪拌6h。6h之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相溶液。然后對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌3次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:1.0，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的黃色粉末(309mg，74％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.86(s,1H),5.23(s,1H),4.87(s,1H),4.83(s,1H),4.39(s,1H),4.00(s,2H),3.91(s,1H),3.58(s,2H),3.01(s,1H),2.27(s,1H),2.15(d,J＝6.3Hz,2H),2.09–2.00(m,5H),1.78(dd,J＝35.2,19.2Hz,2H),1.71–1.65(m,1H),1.41(s,2H),0.99(s,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ208.55(s),203.16(s),150.94(s),125.16(s),111.66(s),78.63(s),71.39(s),57.77(s),47.73(s),40.79(s),34.58(s),33.01(s),32.69(s),29.25(s),29.34(s),26.52(s),24.23(s),22.30(s),20.64(s).

HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd for C₂₂H₂₈BrO₃:419.1222；found 419.1226.

實施例3 Atropurpuran的O-(哌嗪基)乙基衍生物(III)的合成

將化合物II(209mg，0.5mmol)溶于16mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg，2.5mmol)，碘化鉀(84mg，0.5mmol)和無水哌嗪(6892mg，80mmol)，混合物加熱回流2h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:0.7，v/v)，收集棕色集中洗脫帶，濃縮即得到化合物III的棕色固體(163mg,77％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.69(s,1H),5.12(s,1H),4.65–4.55(m,3H),3.80(s,1H),3.53(s,2H),2.91(s,1H),2.61(s,4H),2.50(s,2H),2.28(s,4H),2.17(s,1H),2.05(s,1H),1.96(dd,J＝25.4,15.5Hz,4H),1.87–1.59(m,3H),1.47(d,J＝28.9Hz,4H),1.05(s,1H),0.90(s,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ208.52(s),203.24(s),150.91(s),125.24(s),111.63(s),78.71(s),67.07(s),57.85(s),54.25(s),53.94(s),47.70(s),45.04(s),40.87(s),34.55(s),32.66(s),29.33(s),29.09(s),26.49(s),24.31(s),22.27(s),20.72(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₂₆H₃₇N₂O₃:425.2804；found:425.2801。

實施例4 Atropurpuran的O-(二羥乙胺)乙基衍生物的合成

將化合物II(209mg，0.5mmol)溶于15mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg，2.5mmol)，碘化鉀(84mg，0.5mmol)和二乙醇胺(1051mg，10mmol)，混合物加熱回流1h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入15mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:0.5，v/v)，收集淺棕色集中洗脫帶，濃縮即得到化合物III的黃色固體(159.5mg,72％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.74(s,1H),5.13(s,1H),4.61(d,J＝10.5Hz,2H),4.25(s,1H),3.75(s,1H),3.54(s,2H),3.36(s,4H),2.89(s,1H),2.62(s,2H),2.51(s,4H),2.32(s,2H),2.17(s,1H),2.05(s,1H),1.95(dd,J＝13.4,11.6Hz,4H),1.78(s,1H),1.76–1.69(m,4H),1.44(s,2H),0.89(s,3H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ208.46(s),203.18(s),150.85(s),125.18(s),111.57(s),78.65(s),67.01(s),58.86(s),57.79(s),56.41(s),53.21(s),47.64(s),40.81(s),34.49(s),32.60(s),29.27(s),29.03(s),26.43(s),24.25(s),22.21(s),20.66(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₂₆H₃₈N₁O₅:444.2750；found:444.2744。

實施例5 小鼠特異性心肌缺氧實驗

1、方法：

組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的30mg化合物III的粉末和研磨之后過200目網(wǎng)的70mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物，使用時用水溶解這100mg的組合物即得到組合物的溶液。

50只昆明小鼠，體重(20±2)g。隨機分為5組，灌胃給藥。前2組給予0.3％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液，后3組分貝給予化合物III、化合物IV和組合物，50min后，除第1組外，均腹腔注射異丙腎上腺素(ISO)15mg·Kg^-1，15min后，將小鼠放入常壓缺氧裝置中，記錄小鼠死亡時間及耗氧量。

結(jié)果：

異丙腎上腺素可通過興奮心臟β受體，使心肌耗氧量增加。本實驗顯示，與溶媒對照組相比，組合物0.010g·Kg^-1能顯著對抗異丙腎上腺素(ISO)導(dǎo)致的心肌耗氧量增加(P<0.01)，同時延長小鼠缺氧密閉狀態(tài)下的存活時間(P<0.01)，結(jié)果見表1。而化合物III和化合物IV均不具備此作用。

表1 待試物對異丙腎上腺素致特異性缺氧小鼠的影響(x，n＝10)

注：¹⁾P<0.01，與對照組比較，²⁾P<0.01，與異丙腎上腺素組比較。

實施例6 小鼠常壓窒息性缺氧實驗

1、方法：

40只昆明小鼠，體重(20±2)g。隨機分為4組，灌胃給藥。第1組給予0.3％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液，后3組分別給予含組合物、化合物III和化合物IV的CMC-Na溶液，濃度為0.010g·Kg^-1。給藥50min后，置于廣口瓶中并蓋緊瓶塞(瓶內(nèi)放置5g鈉石灰)。以呼吸停止為標(biāo)志，記錄小鼠存活時間。

2、結(jié)果：

與溶媒對照組相比，組合物的0.010g·Kg^-1使小鼠在常壓密閉條件下的存活時間延長了44.51％，差異具有顯著性(P<0.01)，而化合物III和化合物IV均未能使小鼠在常壓密閉條件下的存活時間顯著延長。

實施例7 小鼠減壓缺氧實驗

1、方法：

40只昆明小鼠，體重(20±2)g。隨機分為4組，灌胃給藥。給藥組分別給予組合物、化合物III和化合物IV，濃度為0.010g·Kg^-1，對照組給予0.3％CMC-Na溶液，灌胃體積均為2ml·Kg^-1。50min后，各給藥組和對照組各取5只，放入減壓裝置中，在26.7Kpa(相當(dāng)于海拔約10000m)時停止減壓，保持此壓力不變，待對照組動物死亡80％時，立即停止減壓，緩緩放入空氣，取出動物，記錄各組死亡及存活數(shù)目，重復(fù)操作至實驗完成。

2、結(jié)果：

組合物0.010g·Kg^-1使小鼠在減壓缺氧條件下的存活率由對照組的20％提高至40％，差異具有顯著性(P<0.05)；而化合物III和化合物IV對小鼠在減壓缺氧條件下的存活率為20％，均未有提高。

結(jié)論：組合物可顯著提高異丙腎上腺素致特異性缺氧的存活時間，窒息性缺氧和急性減壓缺氧小鼠的存活率，提供了組合物在制備抗缺氧藥物中的用途。而化合物III和化合物IV均不具有上述活性。

實施例8 本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備

取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機制成100片。

實施例9 本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備

取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。