本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。

背景技術：

引起肝損傷的原因有多個：1、病毒感染：由多種肝炎病毒引起，具有傳染性強，傳播途徑復雜，流行面廣泛，發(fā)病率高等特點。2、藥物或化學毒物：許多藥物和化學毒物都可引起肝臟損傷，發(fā)生藥物性肝炎或中毒性肝炎。3、酗酒：酒精對肝臟的損害是很嚴重的，損害的后果包括酒精性肝炎、酒精性脂肪肝、酒精性肝硬化，主要是由于酒精(乙醇)及其代謝產物乙醛的毒性對肝細胞直接損害造成的。4、其他原因：原發(fā)和繼發(fā)的肝臟腫瘤、心功能不全導致肝臟淤血、某些先天性肝臟疾病、靜脈高價營養(yǎng)等，都可以造成不同程度的肝損害，這些肝損害的早期表現(xiàn)往往是ALT(轉氨酶)或膽紅素的升高，不祛除病因，肝臟的損害會進一步加重。目前在我國由于上述原因每年發(fā)生肝損傷的人數(shù)眾多，形勢不容樂觀。急需研發(fā)高效低毒的防治肝臟損傷藥物。

肝臟損傷的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產物中尋找化合物或先導化合物并進行結構修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物具有重要價值。

本發(fā)明涉及的化合物I是一個2009年發(fā)表(Sheng Yin et al.,2009.Harrisotones A–E,five novel prenylated polyketides with a rare spirocyclic skeleton from Harrisonia perforata.Tetrahedron 65(2009)1147–1152)的化合物，我們對化合物I進行了結構修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗肝臟損傷活性進行了評價，其具有抗肝臟損傷活性。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物III和化合物IV的質量百分數(shù)分別為10％和90％。

本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學上可接受的鹽或藥學上可接受的載體。

藥效學實驗表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗肝臟損傷作用。本發(fā)明的藥學上可接受的鹽具有同樣的藥效。

以下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但本發(fā)明的保護范圍不受具體實施例的任何限制，而是由權利要求加以限定。

具體實施方式

實施例1化合物Harrisotone A的制備

化合物Harrisotone A(I)的制備方法參照Sheng Yin等人發(fā)表的文獻(Sheng Yin et al.,2009.Harrisotones A–E,five novel prenylated polyketides with a rare spirocyclic skeleton from Harrisonia perforata.Tetrahedron 65(2009)1147–1152)的方法。

實施例2 Harrisotone A的O-溴乙基衍生物(II)的合成

將化合物I(472mg，1.00mmol)溶于15mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨(TBAB)(0.08g)，1,2-二溴乙烷(3.760g，20.00mmol)和6mL的50％氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5攝氏度攪拌3h。3h之后將反應液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相溶液。然后對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌2次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶劑得到產物粗品。產物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:1.5，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的黃色粉末(602mg，76％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ5.18(s,2H),4.56(s,2H),3.93(d,J＝16.7Hz,4H),3.79(s,2H),3.62(d,J＝0.9Hz,4H),3.15(s,2H),2.48(s,2H),2.41(d,J＝9.4Hz,4H),2.27(s,1H),1.95(s,1H),1.88–1.80(m,8H),1.77(d,J＝15.5Hz,7H),1.68(s,1H),1.61(s,1H),1.51(s,1H),1.25(d,J＝58.1Hz,1H),1.15–0.75(m,6H).¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.46(s),198.24(s),195.44(s),190.27(s),135.27(s),120.09(s),115.02(s),84.45(s),76.58(s),74.12(s),63.67(s),62.76(s),60.36(s),50.96(s),45.22(s),39.69(s),36.61(s),34.40(s),32.63(s),30.81(d,J＝8.9Hz),28.77(s),25.30(s),24.09(d,J＝19.2Hz),22.77(s),18.20(s).

HRMS(ESI)m/z[M+H]⁺calcd for C₃₄H₅₀Br₃O₆:793.1137；found 793.1134.

實施例3 Harrisotone A的O-(咪唑基)乙基衍生物(III)的合成

將化合物II(396mg，0.5mmol)溶于20mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg，2.5mmol)，碘化鉀(84mg，0.5mmol)和咪唑(3480mg，40mmol)，混合物加熱回流1h。反應結束后將反應液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產物粗品。產物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:0.6，v/v)，收集淺棕色集中洗脫帶，濃縮即得到化合物III的淡棕色固體(271.4mg,72％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.85(s,3H),7.09(s,3H),6.71(s,3H),5.08(s,2H),4.48(s,2H),4.40(s,2H),4.14–4.07(m,3H),3.95(s,1H),3.85(s,2H),3.79(s,2H),3.35(s,2H),2.98(s,1H),2.45(s,1H),2.31(s,3H),2.15(s,2H),1.84(d,J＝10.9Hz,2H),1.81–1.69(m,8H),1.65(s,6H),1.62(s,1H),1.51(s,1H),1.45(s,1H),1.09(s,6H),0.93(s,1H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.45(s),198.22(s),195.43(s),190.25(s),139.82(s),135.27(s),128.86(s),120.07(s),119.48(s),115.02(s),84.42(s),76.58(s),66.07(s),62.74(s),60.34(d,J＝2.2Hz),50.94(s),45.21(s),44.01(d,J＝17.2Hz),39.66(s),36.61(s),30.78(d,J＝8.9Hz),28.77(s),25.27(s),24.09(d,J＝19.2Hz),22.74(s),18.20(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₄₃H₅₉N₆O₆:755.4496；found:755.4491。

實施例4 Harrisotone A的O-(苯并咪唑基)乙基衍生物的合成

將化合物II(396mg，0.5mmol)溶于25mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀(690mg，5.0mmol)，碘化鉀(252mg，1.5mmol)和苯并咪唑(4720mg，40mmol)，混合物加熱回流2h。反應結束后將反應液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產物粗品。產物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為：石油醚/丙酮＝100:0.6，v/v)，收集淡棕色集中洗脫帶即得到化合物IV的棕色固體(244.1mg,54％)。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)8.22(s,3H),7.60(d,J＝25.0Hz,6H),7.24(s,3H),7.14(s,3H),5.11(s,2H),4.47(s,2H),4.44(s,2H),4.07(dd,J＝23.9,7.8Hz,4H),3.88(d,J＝14.6Hz,4H),3.12(s,2H),2.93(s,1H),2.61(s,2H),2.33(s,3H),1.89(s,1H),1.86(s,1H),1.75(d,J＝5.0Hz,7H),1.72–1.63(m,8H),1.59(s,1H),1.53(d,J＝8.5Hz,2H),1.42(s,1H),1.10(s,6H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.13(s),197.89(s),195.11(s),189.92(s),146.30(s),139.65(s),134.94(s),133.50(s),123.95(s),123.38(s),119.74(s),118.56(s),114.69(s),110.87(s),84.10(s),76.25(s),65.35(s),62.41(s),60.06(d,J＝7.3Hz),50.61(s),44.91(d,J＝5.4Hz),44.65(s),39.34(s),36.28(s),30.46(d,J＝8.9Hz),28.44(s),24.95(s),23.76(d,J＝19.2Hz),22.62(s),17.87(s).

HRMS(ESI):m/z[M+H]⁺calcd for C₅₅H₆₅N₆O₆:905.4966；found:905.4963。

實施例5組合物防治肝損傷的作用

(一)組合物對D-氨基半乳糖胺(D-galactosamine，D-GalN)誘導的小鼠急性肝損傷的防護作用

組合物的制備：將研磨之后過200目網的10mg化合物III的粉末和研磨之后過200目網的90mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物，使用時用水溶解這100mg的組合物即得到組合物的溶液。

小鼠分5組。對照組以生理鹽水灌胃(0.3mL·d^-1)，連續(xù)7d；且于第7d還要腹腔注射生理鹽水(0.15mL·10g^-1)，腹腔注射16h后取血，測AST及ALT活力。D-GalN組、組合物3.0mg·kg^-1組、化合物III組和化合物IV組分別以生理鹽水、組合物、化合物III和化合物IV灌胃(0.3mL·d^-1)，連續(xù)7d；且于第7d還要腹腔注射D-GalN(800mg·kg^-1，0.15mL·10g^-1)，腹腔注射16h后取血，測AST及ALT活力。

表1組合物對D-GalN誘導的急性肝損傷的防護作用

注：¹⁾p<0.01vs對照組，²⁾p<0.01vs D-GalN組

由表1可知，組合物能有效抑制D-GalN引起的小鼠AST及ALT活性的顯著上升。化合物III和化合物IV無此作用。

(二)組合物對CCl₄誘導的小鼠急性肝損傷的防護作用

小鼠分5組，對照組以生理鹽水灌胃(0.3mL·d^-1)，連續(xù)5d，第6d腹腔注射植物油每只0.1mL·10g^-1；CCl₄組及組合物、化合物III和化合物IV給藥組(3.0mg·kg^-1)分別以生理鹽水及組合物、化合物III和化合物IV灌胃(0.3mL·d^-1)，連續(xù)5d，于第6d腹腔注射0.1％CCl₄ 0.1mL·10g^-1。24h后處死動物，取血清測AST及ALT活力。

表2組合物對CCl₄誘導的急性肝損傷的防護作用

注：¹⁾p<0.01vs對照組，²⁾p<0.01vs CCl₄組

由表2可知，組合物能抑制CCl₄引起的小鼠AST及ALT活性的顯著上升?；衔颕II和化合物IV無此作用。

結論：組合物能有效保護D-GalN引起的小鼠肝損傷，組合物能有效保護CCl₄引起的小鼠肝損傷，可以用來制備抗肝損傷藥物。化合物III和化合物IV不能有效保護D-GalN引起的小鼠肝損傷，不能有效保護CCl₄引起的小鼠肝損傷，不可以用來制備抗肝損傷藥物。

實施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備

取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機制成100片。

實施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備

取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。