本發(fā)明屬于中藥和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種芒果皮提取物及其制備方法和在制備治療心腦血管疾病的藥物中的用途。

背景技術(shù)：

心腦血管系統(tǒng)疾病是人類最為常見的一類疾病，已成為當(dāng)今世界人口的第一大死因。在我國，隨著人口老齡化加速，人民生活水平提高，生活節(jié)奏加快，飲食習(xí)慣向高熱、高脂化發(fā)展，人群中高血壓、高血脂、心力衰竭、腦卒中等心血管系統(tǒng)疾病己成為危害人類健康及生命的嚴(yán)重疾病之一。心血管疾病的高發(fā)生率與死亡率，引導(dǎo)了藥物研發(fā)與生產(chǎn)的方向。在世界藥品市場中，該類藥物的研發(fā)、生產(chǎn)和市場狀況日益受到制藥企業(yè)、醫(yī)藥商業(yè)企業(yè)、投資機構(gòu)和廣大人民的關(guān)注。

芒果為漆樹科植物芒果(Mangifera indica)的果實，含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)。近年來的研究表明，芒果中因含有類胡蘿卜素，黃酮及其衍生物以及酚酸類等活性物質(zhì)而具有抗氧化，消炎，抑菌，免疫調(diào)節(jié)，抑制腫瘤以及降血糖等活性，受到人們的廣泛關(guān)注。

專利文獻CN201310230247.8涉及芒果粗提物在制備防治心血管疾病的藥物和食品用途。該粗提物的主要成分為五倍沒食子單寧及芒果苷。所述心血管疾病是因血管內(nèi)皮細胞損傷所致。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種芒果皮提取物及其制備方法和在制備治療心腦血管疾病的藥物中的用途。

由此，本發(fā)明的第一個目的是提供一種芒果皮提取物，其總黃酮的重量百分比含量為20～32％，且通過以下方法制備而成：芒果皮原料用3～10倍重量的體積濃度45～55％乙醇水溶液加熱回流提取1～3次，每次提取時間為0.4～1小時，提取液過濾，合并，濃縮至0.25～0.5g原料/mL，過濾后通過大孔樹脂柱，芒果皮與大孔樹脂的重量比為1:0.8～1.2，上柱流速0.8～1.2BV/h，樹脂柱徑高比為1:3～5；用水洗滌樹脂3～5BV，流速為2～4BV/h，水洗脫液棄去；然后用體積濃度45～70％乙醇水溶液洗脫，流速為2～4BV/h，收集含有乙醇的洗脫液，減壓濃縮或噴霧干燥，粉碎，即得所述芒果皮提取物。

優(yōu)選地，所述芒果皮提取物的總黃酮的重量百分比含量為24～30％，且通過以下方法制備而成：芒果皮原料用4～6倍重量的體積濃度45～55％乙醇水溶液加熱回流提取2次，每次提取時間為0.5小時，提取液過濾，合并，濃縮至0.3g原料/mL，過濾后通過大孔樹脂柱，芒果皮與大孔樹脂的重量比為1:1，上柱流速1BV/h，樹脂柱徑高比為1:4；用水洗滌樹脂4BV，流速為3BV/h，水洗脫液棄去；然后用體積濃度50～60％乙醇水溶液洗脫，流速為3BV/h，收集含有乙醇的洗脫液，減壓濃縮或噴霧干燥，粉碎，即得所述芒果皮提取物。

優(yōu)選地，所述大孔樹脂為AB-8大孔樹脂或D101大孔樹脂。

本發(fā)明的第二個目的是提供一種芒果皮提取物的制備方法，其包括以下步驟：芒果皮原料用3～10倍重量的體積濃度45～55％乙醇水溶液加熱回流提取1～3次，每次提取時間為0.4～1小時，提取液過濾，合并，濃縮至0.25～0.5g原料/mL，過濾后通過大孔樹脂柱，芒果皮與大孔樹脂的重量比為1:0.8～1.2，上柱流速0.8～1.2BV/h，樹脂柱徑高比為1:3～5；用水洗滌樹脂3～5BV，流速為2～4BV/h，水洗脫液棄去；然后用體積濃度45～70％乙醇水溶液洗脫，流速為2～4BV/h，收集含有乙醇的洗脫液，減壓濃縮或噴霧干燥，粉碎，即得芒果皮提取物。

優(yōu)選地，所述芒果皮提取物的制備方法，其包括以下步驟：芒果皮原料用4～6倍重量的體積濃度45～55％乙醇水溶液加熱回流提取2次，每次提取時間為0.5小時，提取液過濾，合并，濃縮至0.3g原料/mL，過濾后通過大孔樹脂柱，芒果皮與大孔樹脂的重量比為1:1，上柱流速1BV/h，樹脂柱徑高比為1:4；用水洗滌樹脂4BV，流速為3BV/h，水洗脫液棄去；然后用體積濃度50～60％乙醇水溶液洗脫，流速為3BV/h，收集含有乙醇的洗脫液，減壓濃縮或噴霧干燥，粉碎，即得所述芒果皮提取物。

優(yōu)選地，所述大孔樹脂為AB-8大孔樹脂或D101大孔樹脂。

一種藥物組合物，其含有上述的芒果皮提取物或者上述方法制備的芒果皮提取物，以及一種或多種藥學(xué)上可以接受的輔料。

此外，本發(fā)明提供上述的芒果皮提取物或者上述方法制備的芒果皮提取物或者上述的藥物組合物在制備清除自由基、抗氧化、擴張血管、降低血清膽固醇、增加冠脈流量、抗心率失常、改善心肌缺血缺氧、改善缺血腦組織損傷、延緩血栓形成或降低血黏度的藥物中的用途。

優(yōu)選地，本發(fā)明提供上述的芒果皮提取物或者上述方法制備的芒果皮提取物或者上述的藥物組合物在制備通過清除自由基、抗氧化、擴張血管、降低血清膽固醇、增加冠脈流量、抗心率失常、改善心肌缺血缺氧、改善缺血腦組織損傷、延緩血栓形成或降低血黏度從而治療心腦血管疾病的藥物中的用途。

附圖說明

圖1為本發(fā)明芒果皮提取物對小鼠血清中MDA的影響

圖2為本發(fā)明芒果皮提取物對小鼠血清中NO的影響

圖3為本發(fā)明芒果皮提取物對小鼠血清中SOD的影響

圖4為本發(fā)明芒果皮提取物對豚鼠離體心臟冠脈流量影響

圖5為給予垂體后葉素前后，本發(fā)明芒果皮提取物影響T波高度的變化

圖6為本發(fā)明芒果皮提取物對小鼠常壓缺氧存活時間影響

圖7為本發(fā)明芒果皮提取物對大鼠實驗性腦梗死的保護作用

圖8為本發(fā)明芒果皮提取物對大鼠體內(nèi)血栓形成時間的影響

圖9為本發(fā)明芒果皮提取物對大鼠全血黏度的影響

圖10為本發(fā)明芒果皮提取物對麻醉犬ICBF的影響

圖11為本發(fā)明芒果皮提取物對麻醉犬ICBR的影響

具體實施方式

下面參照實施例進一步詳細闡述本發(fā)明，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明并不限于這些實施例以及使用的制備方法。而且，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的描述可以對本發(fā)明進行等同替換、組合、改良或修飾，但這些都將包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

制備實施例1：

芒果皮原料用4倍重量的體積濃度50％乙醇水溶液加熱回流提取2次，每次提取時間為0.5小時，提取液過濾，合并，濃縮至0.3g原料/mL，過濾后通過AB-8大孔樹脂柱，芒果皮與AB-8大孔樹脂的重量比為1:1，上柱流速1BV/h，樹脂柱徑高比為1:4；用水洗滌樹脂4BV，流速為3BV/h，水洗脫液棄去；然后用體積濃度50％乙醇水溶液洗脫，流速為3BV/h，收集含有乙醇的洗脫液，減壓濃縮或噴霧干燥，粉碎，即得芒果皮提取物。該芒果皮提取物中總黃酮的含量為24％。

制備實施例2：

芒果皮原料用10倍重量的體積濃度55％乙醇水溶液加熱回流提取3次，每次提取時間為0.5小時，提取液過濾，合并，濃縮至0.5g原料/mL，過濾后通過D101大孔樹脂柱，芒果皮與大孔樹脂的重量比為1:1，上柱流速1BV/h，樹脂柱徑高比為1:4；用水洗滌樹脂5BV，流速為4BV/h，水洗脫液棄去；然后用體積濃度70％乙醇水溶液洗脫，流速為4BV/h，收集含有乙醇的洗脫液，減壓濃縮干燥，即得芒果皮提取物。該芒果皮提取物中總黃酮的含量為30％。

實驗實施例1：抗氧化作用

取C57BL小鼠40只，雌雄各半，體重20±2g，隨機分為4組：空白組、銀杏葉提取物對照組、制備實施例1芒果皮提取物低劑量組和高劑量組，每天給藥1次，連續(xù)給藥1周后，腹主靜脈取血1mL，離心分離出血清，測定MDA、NO及SOD含量。結(jié)果見圖1、圖2和圖3。圖1為本發(fā)明芒果皮提取物對小鼠血清中MDA的影響(X±s)；注：與空白組比較，*P<0.05,**P<0.01。圖2為本發(fā)明芒果皮提取物對小鼠血清中NO的影響(X±s)；注：與空白組比較，*P<0.05,**P<0.01。圖3為本發(fā)明芒果皮提取物對小鼠血清中SOD的影響(X±s)；注：與空白組比較，*P<0.05,**P<0.01。

試驗證明，本發(fā)明芒果皮提取物能使小鼠血清中SOD含量升高，具有清除氧自由基和抗氧化的能力。

實驗實施例2：豚鼠離體心臟冠脈流量試驗

取豚鼠20只，每組5只，隨機分為4組；空白組、銀杏葉提取物對照組、制備實施例1芒果皮提取物低劑量和高劑量組。擊頭致昏，迅速取心臟，在4℃任洛氏液中清洗，排除積血。將主動脈套入灌流裝置的套管上，并結(jié)扎固定，以純氧飽和的任洛氏液(Ringer-Locke's)恒速灌流。灌流平衡10min后，連續(xù)測定3min的每分冠脈流量，以其平均值作為藥前值。加藥后，記錄3min內(nèi)每分冠脈流量，取極值，作為藥后值，計算前后變化率，見圖4。圖4為本發(fā)明芒果皮提取物對豚鼠離體心臟冠脈流量影響(X±s)；注：與空白組比較，**P<0.01。

試驗證明，本發(fā)明芒果皮提取物均可增加豚鼠離體心臟的冠脈流量。

實驗實施例3：垂體后葉素所致大鼠心肌缺血試驗

取大鼠40只，雌雄各半，體重180-220g，隨機分成4組：空白組、銀杏葉提取物對照組、制備實施例1芒果皮提取物低劑量和高劑量組。分別靜脈注射給藥，給藥20min后，烏拉坦5mL/kg.ip麻醉，固定于鼠臺上，記錄正常II導(dǎo)連心電圖后，舌靜脈注射垂體后葉素0.8單位/kg，5s注完。分別記錄0s,30s,60s,3min的II導(dǎo)連心電圖，比較給予垂體后葉素前后，T波高度的變化，進行組間t檢驗。結(jié)果見圖5。圖5為給予垂體后葉素前后，本發(fā)明芒果皮提取物影響T波高度的變化(X±s)；注：與空白組比較，*P<0.05,**P<0.01。

試驗證明，本發(fā)明芒果皮提取物可改善心肌缺血。

實驗實施例4：小鼠常壓缺氧試驗

取小鼠40只，雌雄各半，體重20±2g，隨機分成4組：空白組、銀杏葉提取物對照組、制備實施例1芒果皮提取物低劑量和高劑量組。尾靜脈注射給藥20min后分別放入盛有10g堿石灰的容量為250mL磨口瓶內(nèi)，加蓋密封。觀察其存活時間，以呼吸停止為死亡特征。結(jié)果見圖6。圖6為本發(fā)明芒果皮提取物對小鼠常壓缺氧存活時間影響(X±s)；注：與空白組比較，*P<0.05,**P<0.01。

試驗證明，本發(fā)明芒果皮提取物可延長常壓缺氧存活時間。

實驗實施例5：對實驗性大鼠腦梗死損傷的保護

取大鼠(雄性，體重300-350g)用戊巴比妥鈉40mg/kg ip麻醉，然后在右眼和右耳之間的中點作l.5cm長的切口，分開顳肌，暴露顴突和顳骨，在顴突之頭端1～2mm處，用牙科鉆開一直徑為2mm的小孔，將軟腦膜開一小孔，暴露中腦動脈起始部位，用刮刀將腦組織輕輕移開，用微小雙極電凝器灼斷大腦中動脈，然后將肌肉和皮膚分層縫合。取手術(shù)成功的32只大鼠，分成4組：空白組、腦血栓片對照組、制備實施例1芒果皮提取物低劑量組和高劑量組。連續(xù)用藥15d后，將動物處死，取其大腦，以均等間距橫切5個斷面，用1％四氮哇藍(TTG)磷酸緩沖液在37℃染色10min后，分離梗死區(qū)與非梗死區(qū)，稱重，用重量法計算梗死面積。結(jié)果見圖7。圖7為本發(fā)明芒果皮提取物對大鼠實驗性腦梗死的保護作用(X±s)；注：與空白組比較，*P<0.01。

試驗證明，本發(fā)明芒果皮提取物對大鼠腦梗死模型的損傷有明顯的保護作用，使病灶面積顯著縮小。

實驗實施例6：對大鼠體內(nèi)血栓形成的影響

取大鼠40只，雌雄各半，隨機分成4組：空白組、腦血栓片對照組、制備實施例1芒果皮提取物低劑量組和高劑量組，各組連續(xù)灌胃7d，于末次給藥后1h進行體內(nèi)血栓形成實驗(戊巴比妥鈉40mg/kg ip麻醉大鼠，切開頸部皮膚，分離右側(cè)頸動脈，在動脈近心端下放置刺激電極，遠心端下放連接儀器的溫度探頭，開通體內(nèi)血栓形成測定儀，通過刺激電極給予1.5mV直流電刺激7min,以損傷動脈內(nèi)皮細胞，隨著動脈管腔內(nèi)血栓逐漸形成，血流逐漸被阻斷，溫度突降，儀器報警，記錄堵塞形成時間)最后將各組動物頸總動脈采血，肝素抗凝，測定血液黏度參數(shù)。結(jié)果見圖8和圖9。圖8為本發(fā)明芒果皮提取物對大鼠體內(nèi)血栓形成時間的影響(X±s)；注：與空白組比較，*P<0.01。圖9為本發(fā)明芒果皮提取物對大鼠全血黏度的影響(X±s)；注：與空白組比較，*P<0.01。

試驗說明，本發(fā)明芒果皮提取物能夠明顯延長大鼠體內(nèi)血栓形成時間，同時各給藥組動物的全血黏度均有不同程度的降低，說明芒果皮提取物具有較好的抗血栓和改善血液流變學(xué)的作用。

實驗實施例7：對麻醉犬腦血流量及腦血管阻力的影響

取犬20只，每組5只，分成4組：空白組、腦血栓片對照組、制備實施例1芒果皮提取物低劑量組和高劑量組。用戊巴比妥鈉30mg/kg iv麻醉，氣管插管，分離股動脈，插心導(dǎo)管至腹主動脈，與壓力換能器相連，再接于多道生理記錄儀記錄血壓波形，并讀取主動脈收縮壓(SAP)、舒張壓(DAP)、平均動脈壓(MAP)和心率(HR)，同時，記錄標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)程心電圖；分離頸總動脈和頸外動脈，結(jié)扎頸外動脈，將內(nèi)徑3mm的電磁流量計探頭放置在頸總動脈上，以電磁流量計測定頸內(nèi)動脈血流量(ICBF)。頸內(nèi)動脈血管阻力(ICVR)二MAP/ICBF，手術(shù)后穩(wěn)定20-30min，待上述各項穩(wěn)定后測正常值，然后進行十二指腸給藥。給藥后1h和2h分別記錄頸內(nèi)動脈血流量及血管阻力。結(jié)果見圖10和圖11。圖10為本發(fā)明芒果皮提取物對麻醉犬ICBF的影響(X±s)；注：與空白組比較，*P<0.05,**P<0.01。圖11為本發(fā)明芒果皮提取物對麻醉犬ICBR的影響(X±s)；注：與空白組比較，*P<0.05,**P<0.01。

試驗說明，與空白組相比，芒果皮提取物組在各用藥時間點，對犬的血壓、心電、心律均無明改變，但有增加其ICBF和降低ICVR的作用。

最后有必要在此說明的是：以上實施例只用于對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步詳細地說明，不能理解為對本發(fā)明保護范圍的限制，本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容作出的一些非本質(zhì)的改進和調(diào)整均屬于本發(fā)明的保護范圍。