專利名稱：：知母皂苷b-ii用于制備抗抑郁產(chǎn)品的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥和食品
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地說(shuō)是涉及中藥提取物的用途，更具體地說(shuō)是涉及中藥提取物知母皂苷B-II用于制備抗抑郁產(chǎn)品的用途。
背景技術(shù)：
：(一)知母的研究概況知母(<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>)為百合禾斗植物知母<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>的根莖，別名蒜瓣子草、連母，生于山地、干燥丘陵或草原地帶，主產(chǎn)河北。每年春、秋季采挖，除去須根及泥土，曬干，習(xí)稱"毛知母"；除去外皮，曬干稱"知母肉"。知母是多年生草本。葉基生，線形，質(zhì)稍硬，長(zhǎng)2070cm，寬(X30.6cm?；ㄇo高40~60cm，散生鱗片狀小苞片；花26朵一簇散生地花序軸上，花被片6，黃色或紫堇色；雄蘊(yùn)3，與內(nèi)輪花被片對(duì)生。蒴果長(zhǎng)卵形，具6縱棱。花期58月，果期89月。知母性寒，味苦、甘，具有滋陰降火、潤(rùn)燥滑腸的功效，清熱瀉火，生津潤(rùn)燥；傳統(tǒng)上用于外感熱病、肺熱燥咳、骨蒸潮熱、內(nèi)熱消渴、腸燥、便秘，臨床上多用于消渴證，藥用時(shí)主要為單味知母飲片或與其他中藥配伍煎湯后服用，用量612g。知母的化學(xué)成分主要為皂苷、黃酮類成分，其中已經(jīng)報(bào)道的皂苷類成分有二十多種，例如知母皂苷AI(A-I)、知母皂苷All(A-n)、知母皂苷AIII(A-in)、知母皂苷AIV(A-IV)、知母皂苷B、知母皂苷BI(B-I)、知母皂苷BII(B-II)、知母皂苷BIII、知母皂苷BIV、知母皂苷BV、知母皂苷BVI、西陵皂苷B、知母皂苷C、知母皂苷d、知母皂苷C2、知母皂苷D、知母皂苷D,、知母皂苷D2、知母皂苷E,、知母皂苷E2、知母皂苷F、知母皂苷G、知母皂苷Hi、知母皂苷H2、知母皂苷h、知母皂苷12、知母皂苷Ia、薩爾薩皂苷元、嗎爾考皂苷元、新吉托皂甙元等，并含芒果苷、異芒果苷、膽堿、煙酸、泛酸、多糖類成分等(①藥學(xué)學(xué)報(bào)，1992;27(1):26-32;②藥學(xué)學(xué)報(bào)，1996,31(4):271-277;③沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1996;13(1):34-40;④藥學(xué)學(xué)報(bào)，1997;32(6):473-475;⑤中國(guó)藥物化學(xué)雜志，1998;8(2):135-136，140;⑥沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1998;15(4):254-256;⑦藥學(xué)學(xué)報(bào)，1998;33(9):693-696;⑧沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1998;15(2):130-131;⑨中國(guó)藥物化學(xué)雜志，1999;9(4):294-298;⑩藥學(xué)學(xué)報(bào)，1999;34(7):514-517;(ll)藥學(xué)學(xué)報(bào)，1991;26(8):619-21;(鵬lantaMedica,1991;57:26-32;(13)ChemPharmBull,1994;42(11):2342-5;(14)PlantaMed，1997;63(4):376-9;(15)PlantaMed，1999;65(7):661-3;(16)天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2001;13(5):18-21)。知母皂苷BII是1963年川崎敏男等首次分離的，其結(jié)構(gòu)是1991年南云清二等首次闡明的(SeijiNAGUMOetal,藥學(xué)雜志(日)，1991;111(1):306—310)。經(jīng)國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究，知母皂苷是知母中的主要活性成分。知母皂苷B-II(TimosaponiaB-II)是中藥知母中的主要成分，分子量為920，結(jié)構(gòu)為(25S)-26-0-e-0-葡萄吡喃糖基-22-羥基-5P-吡甾-3{3、26-二醇-3-0-0-D-葡萄吡喃糖基(1—2)-e-D—半乳吡喃糖苷[(25S)-26-0-0-D-glucopyranosyl-22-hydroxy-50-furostane-30、26-diol—3-O-P-D-glucopyranosyl(1—2)-P隱D-galactopyranoside]。結(jié)構(gòu)式如下知母皂苷類成分的藥理作用文獻(xiàn)主要有如下報(bào)道1、知母皂苷元(簡(jiǎn)稱ZMS)、知母皂苷B能顯著改善老齡大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能(中藥藥理與臨床，1995;11(3):18-21;現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2000;9(18):1755-6;中國(guó)老年學(xué)雜志，21(5):379-80;中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)《用于治療阿爾茨海默病的甾類皂苷及其衍生物》，申請(qǐng)日1999年03月26日，進(jìn)入國(guó)家日期2000年11月14日，申請(qǐng)?zhí)?9806158.1，公開(kāi)號(hào)CN1301166)。中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)《用于治療阿爾茨海默病的甾類皂苷及其衍生物》公開(kāi)了許多皂苷和皂苷元，特別是那些甾類結(jié)構(gòu)的皂苷和皂苷元在治療認(rèn)知機(jī)能失常和類似疾病中的用途，還公開(kāi)了治療方法和藥物組合物。知母中甾體皂苷具有治療老年性癡呆作用(中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)《甾體皂苷防治老年性癡呆的用途及新的甾體皂苷》，申請(qǐng)日1997年09月26日，申請(qǐng)?zhí)?711968(XX，公開(kāi)號(hào)CN1212966)。中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)《甾體皂苷防治老年性癡呆的用途及新的甾體皂苷》公開(kāi)了式I甾體皂苷類化合物防治老年性癡呆的用途，新的式II甾體皂苷及含有所述式I甾體皂苷的藥物組合物。2、知母皂苷D具有保護(hù)心肌I/R損傷的作用，這一作用可能與其抗PAF、抗血小板聚集和清除自由基等機(jī)理有關(guān)(首都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1994;15(2):138)。知母皂苷h(Ia)、知母皂苷B-I、知母皂苷B-II、知母皂苷B-III、知母皂苷A-III具有顯著的抗人血小板聚集及延長(zhǎng)凝血時(shí)間的活性(ClinChimActa,1999;289(1-2):79-88)。3、知母甾體總皂苷具有雌激素樣抗骨質(zhì)疏松作用、抗炎、抑制中性粒細(xì)胞過(guò)氧化物產(chǎn)生的作用(中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)《中藥知母中甾體總皂苷的醫(yī)藥新用途及其制備方法》，申請(qǐng)日2001年02月26日，申請(qǐng)?zhí)?1106195.2，公開(kāi)號(hào)CN1370537)。中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)《中藥知母中甾體總皂苷的醫(yī)藥新用途及其制備方法》提供了中藥知母中甾體總皂苷的醫(yī)藥新用途及其制備方法，提出了知母甾體總皂苷具有雌性激素樣抗骨質(zhì)疏松作用、抗炎活性及具有抑制中性粒細(xì)胞過(guò)氧化物產(chǎn)生的作用，可為知母資源的利用提供新的途徑。知母藥材經(jīng)浸泡及煎煮，濾渣取液后再經(jīng)液體濃縮，直至其重量與所述知母藥材重量之比為13:1止，然后再吸附洗脫、脫色、去雜質(zhì)、經(jīng)回收干燥后得成品。本發(fā)明的工藝路線成本低，重金屬含量和農(nóng)藥殘留量小，生產(chǎn)過(guò)程對(duì)環(huán)境無(wú)污染。4、知母總皂苷提取物用于制備治療腦卒中藥物的用途(中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)《知母總皂苷用于制備防治腦卒中藥物的用途》，申請(qǐng)日2003年05月09日，申請(qǐng)?zhí)?3116824.8，公開(kāi)號(hào)CN1451384A)。中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)《知母總皂苷用于制備防治腦卒中藥物的用途》公開(kāi)了將知母總皂苷提取物用于制備防治腦卒中(即腦中風(fēng))藥物或食品的用途。該公開(kāi)文件指出，經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn)，知母總皂苷提取物可明顯改善大鼠腦缺血再灌注損傷引起的行為癥狀、縮小腦梗塞體積、降低腦缺血大鼠腦水腫。并認(rèn)為拓展了知母總皂苷提取物的用途，為防治腦卒中提供了一種新的藥物來(lái)源。5、知母總皂苷、知母皂苷BII均具有防治腦中風(fēng)作用(發(fā)明專利申請(qǐng)公開(kāi)說(shuō)明書，公開(kāi)號(hào)CN1451384，申請(qǐng)?zhí)?3116824.8;發(fā)明專利申請(qǐng)公開(kāi)說(shuō)明書，公開(kāi)號(hào)CN1690928A，申請(qǐng)?zhí)?00510059466.X)。6、知母總皂苷具有抗實(shí)驗(yàn)性抑郁作用(沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007;24(3):172-176，中藥新藥與臨床藥理,2007;18(1):28-31)(二)抑郁癥的研究概況當(dāng)今世界危害人類健康的五大疾病之一的情感性精神障礙，已經(jīng)給人類社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。中國(guó)衛(wèi)生部證實(shí)，情感性精神障礙在我國(guó)疾病總負(fù)擔(dān)的排名居前。情感性精神障礙中的抑郁癥是以顯著而持久的情緒低落，行為木僵和悲觀厭世為主要特征的一組疾病。實(shí)際上它很普通，以至被稱為精神疾病中的"普通感冒"，同時(shí)它還是嚴(yán)重的、威脅生命的疾病，折磨著世界上數(shù)以千萬(wàn)計(jì)的人。因此，迫切需要安全、高效、低廉的抗抑郁藥。目前用于治療抑郁癥的藥物主要有三環(huán)類抗抑郁劑、單胺氧化酶抑制劑和5—羥色胺重吸收抑制劑，但是均有不同程度的不良反應(yīng)，如嗜睡、視物模糊、高血壓、驚厥和性欲低下等，從而限制了其廣泛使用。貫葉連翹提取物(商品名路優(yōu)泰)是近年新上市的抗抑郁植物藥，其對(duì)腦細(xì)胞的5-羥色胺(簡(jiǎn)稱5-HT)、去甲腎上腺素(簡(jiǎn)稱NE)、多巴胺(簡(jiǎn)稱DA)的再攝取均有明顯的抑制作用，并且對(duì)此3個(gè)系統(tǒng)的再攝取抑制作用維持平衡，具有作用機(jī)制新穎、臨床療效明確、不良反應(yīng)小的優(yōu)點(diǎn)，但是其有效成分目前還不十分明確，臨床上一直使用其粗提物，對(duì)其藥品質(zhì)量的控制有一定影響。因此，尋找新型、成分明確、療效確切、不良反應(yīng)小的抗抑郁藥仍然勢(shì)在必行。(三)常用中草藥有效成分的提取分離方法1、溶劑提取法(1)原理溶劑提取法是根據(jù)中草藥中各種化學(xué)成分在溶劑中的溶解性質(zhì)，選用對(duì)活性成分溶解度大，對(duì)不需要溶出的成分溶解度小的溶劑，將有效成分從藥材組織內(nèi)溶解出來(lái)的方法。當(dāng)溶劑加到中草藥原料(需適當(dāng)粉碎)中時(shí)，溶劑由于擴(kuò)散、滲透作用逐漸通過(guò)細(xì)胞壁透入到細(xì)胞內(nèi)，溶解了可溶性物質(zhì)，而造成細(xì)胞內(nèi)外的濃度差，于是細(xì)胞內(nèi)的濃溶液不斷向外擴(kuò)散，溶劑又不斷進(jìn)入藥材組織細(xì)胞中，如此多次往返，直至細(xì)胞內(nèi)外溶液濃度達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡時(shí)，將此飽和溶液濾出，繼續(xù)多次加入新溶劑，就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部溶出。中草藥成分在溶劑中的溶解度直接與溶劑性質(zhì)有關(guān)。溶劑可分為親水性有機(jī)溶劑及親脂性有機(jī)溶劑，被溶解物質(zhì)也有親水性及親脂性的不同。有機(jī)化合物分子結(jié)構(gòu)中親水性基團(tuán)多，其極性大而疏于油；有的親水性基團(tuán)少，其極性小而疏于水。各類溶劑的性質(zhì)，同樣也與其分子結(jié)構(gòu)有關(guān)。這樣，發(fā)明人就可以通過(guò)對(duì)中草藥成分結(jié)構(gòu)分析，去估計(jì)它們的此類性質(zhì)和選用的溶劑。總的說(shuō)來(lái)，只要中草藥成分的親水性和親脂性與溶劑的此項(xiàng)性質(zhì)相當(dāng)，就會(huì)在其中有較大的溶解度，即所謂"相似相溶"的規(guī)律。這是選擇適當(dāng)溶劑自中草藥中提取所需要成分的依據(jù)之一。(2)溶劑的選擇運(yùn)用溶劑提取法的關(guān)鍵，是選擇適當(dāng)?shù)娜軇?。溶劑選擇適當(dāng)，就可以比較順利地將需要的成分提取出來(lái)。選擇溶劑要注意以下三點(diǎn)①溶劑對(duì)有效成分溶解度大，對(duì)雜質(zhì)溶解度??；②溶劑不能與中藥的成分起化學(xué)變化；③溶劑要經(jīng)濟(jì)、易得、使用安全等。常見(jiàn)的提取溶劑可分為以下三類①水水是一種強(qiáng)的極性溶劑。中草藥中親水性的成分，如無(wú)機(jī)鹽、糖類、分子不太大的多糖類、鞣質(zhì)、氨基酸、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸鹽、生物堿鹽及苷類等都能被水溶出。為了增加某些成分的溶解度，也常采用酸水及堿水作為提取溶劑。②親水性的有機(jī)溶劑也就是一般所說(shuō)的與水能混溶的有機(jī)溶劑，如乙醇(又稱酒精)、甲醇(又稱木精)、丙酮等，以乙醇最常用。乙醇的溶解性能比較好，對(duì)中草藥細(xì)胞的穿透能力較強(qiáng)。親水性的成分除蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、果膠、淀粉和部分多糖等外，大多能在乙醇中溶解。難溶于水的親脂性成分，在乙醇中的溶解度也較大。還可以根據(jù)被提取物質(zhì)的性質(zhì)，采用不同濃度的乙醇進(jìn)行提取。用乙醇提取比用水量較少，提取時(shí)間短，溶解出的水溶性雜質(zhì)也少。乙醇為有機(jī)溶劑，雖易燃，但毒性小，價(jià)格便宜，來(lái)源方便，有一定設(shè)備即可回收反復(fù)使用，而且乙醇的提取液不易發(fā)霉變質(zhì)。由于這些原因，用乙醇提取的方法是歷來(lái)最常用的方法之一。甲醇的性質(zhì)和乙醇相似，沸點(diǎn)較低(64°C)，但有毒性，使用時(shí)應(yīng)注意。③親脂性的有機(jī)溶劑也就是一般所說(shuō)的與水不能混溶的有機(jī)溶劑，如石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷等。這些溶劑的選擇性能強(qiáng)，不能或不容易提出親水性雜質(zhì)。但這類溶劑揮發(fā)性大，多易燃(氯仿除外)，一般有毒，價(jià)格較貴，設(shè)備要求較高，且它們透入植物組織的能力較弱，往往需要長(zhǎng)時(shí)間反復(fù)提取才能提取完全。如果藥材中含有較多的水分，用這類溶劑就很難浸出其有效成分，因此，大量提取中草藥原料時(shí)，直接應(yīng)用這類溶劑有一定的局限性。(3)提取方法用溶劑提取中草藥成分，常用浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法及連續(xù)回流提取法等。同時(shí)，原料的粉碎度、提取時(shí)間、提取溫度、設(shè)備條件等因素也都能影響提取效率，必須加以考慮。①浸漬提取法(簡(jiǎn)稱浸漬法)浸漬法系將中草藥粉末或碎塊裝入適當(dāng)?shù)娜萜髦?，加入適宜的溶劑(如乙醇、稀醇或水)，浸漬藥材以溶出其中成分的方法。本法比較簡(jiǎn)單易行，但浸出率較差，且如用水為溶劑，其提取液易發(fā)霉變質(zhì)，須注意加入適當(dāng)?shù)姆栏瘎?。②滲漉提取法(簡(jiǎn)稱滲漉法)滲漉法是將中草藥粉末裝在滲漉器中，不斷添加新溶劑，使其滲透過(guò)藥材，自上而下從滲漉器下部流出浸出液的一種浸出方法。當(dāng)溶劑滲進(jìn)藥粉、溶出成分比重加大而向下移動(dòng)時(shí)，上層的溶液或稀浸液便置換其位置，造成良好的濃度差，使擴(kuò)散能較好地進(jìn)行，故浸出效果優(yōu)于浸漬法。但應(yīng)控制流速，在滲渡過(guò)程中隨時(shí)自藥面上補(bǔ)充新溶劑，使藥材中有效成分充分浸出為止?；虍?dāng)滲滴液顏色極淺或滲涌液的體積相當(dāng)于原藥材重的10倍時(shí)，便可認(rèn)為基本上已提取完全。在大量生產(chǎn)中常將收集的稀浸出液作為另一批新原料的溶劑之用。(D煎煮提取法(簡(jiǎn)稱煎煮法)煎煮法是中國(guó)最早使用的傳統(tǒng)的浸出方法。所用容器一般為陶器、砂罐或銅制、搪瓷器皿，不宜用鐵鍋，以免藥液變色。直火加熱時(shí)最好時(shí)常攪拌，以免局部藥材受熱太高，容易焦糊。有蒸汽加熱設(shè)備的藥廠，多采用大反應(yīng)鍋、大銅鍋、大木桶，或水泥砌的池子中通入蒸汽加熱。還可將數(shù)個(gè)煎煮器通過(guò)管道互相連接，進(jìn)行連續(xù)煎浸。④加熱回流提取法應(yīng)用有機(jī)溶劑加熱提取，需采用回流加熱裝置，以免溶劑揮發(fā)損失。小量操作時(shí)，可在圓底燒瓶上連接回流冷凝器。瓶?jī)?nèi)裝藥材約為容量的20%60%，溶劑浸過(guò)藥材表面約12cm。在水浴中加熱回流，一般保持沸騰36小時(shí)，放冷過(guò)濾，再在藥渣中加溶劑，作第二、三次加熱回流分別約半小時(shí)，或至基本提盡有效成分為止。此法提取效率較冷浸法高，大量生產(chǎn)中多采用連續(xù)提取法。⑤連續(xù)回流提取法應(yīng)用揮發(fā)性有機(jī)溶劑提取中草藥有效成分，不論小型實(shí)驗(yàn)或大型生產(chǎn)，均以連續(xù)提取法為好，而且需用溶劑量較少，提取成分也較完全。實(shí)驗(yàn)室常用脂肪提取器或稱索氏提取器。連續(xù)提取法，一般需數(shù)小時(shí)才能提取完全。提取成分受熱時(shí)間較長(zhǎng)，遇熱不穩(wěn)定易變化的成分不宜采用此法。2、分離和純化方法上述提取法所得到的中草藥提取液或提取物仍然是混合物，需進(jìn)一步除去雜質(zhì)，分離并進(jìn)行精制。(1)溶劑分離法一般是將上述總提取物，選用三、四種不同極性的溶劑，由低極性到高極性分步進(jìn)行提取分離。水浸膏或乙醇浸膏常為膠狀物，難以均勻分散在低極性溶劑中，故不能提取完全，可拌入適量惰性填充劑，如硅藻土或纖維粉等，然后低溫或自然干燥，粉碎后，再以選用溶劑依次提取，使總提取物中各組成成分，依其在不同極性溶劑中溶解度的差異而得到分離。利用中草藥化學(xué)成分，在不同極性溶劑中的溶解度進(jìn)行分離純化，是最常用的方法。(2)溶劑萃取法①萃取法溶劑提取萃取法又簡(jiǎn)稱萃取法，是利用混合物中各成分在兩種互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的不同而達(dá)到分離的方法。萃取時(shí)如果各成分在溶劑中分配系數(shù)相差越大，則分離效率越高；如果在水提取液中的有效成分是親脂性的物質(zhì)，一般多用親脂性有機(jī)溶劑，如苯、氯仿或乙醚進(jìn)行萃取，如果有效成分是偏于親水性的物質(zhì)，在親脂性溶劑中難溶解，就需要改用弱親脂性的溶劑，例如乙酸乙酯、丁醇等。還可以在氯仿、乙醚中加入適量乙醇或甲醇以增大其親水性。提取黃酮類成分時(shí)，多用乙酸乙脂和水萃取。提取親水性強(qiáng)的皂苷則多選用正丁醇、異戊醇和水作萃取。不過(guò)，一般有機(jī)溶劑親水性越大，與水作萃取的效果就越不好，因?yàn)槟苁馆^多的親水性雜質(zhì)伴隨而出，對(duì)有效成分進(jìn)一步精制影響很大。②逆流連續(xù)萃取法是一種連續(xù)的溶劑萃取法。其裝置可具有一根、數(shù)根或更多的萃取管。管內(nèi)用小瓷圈或小的不銹鋼絲圈填充，以增加溶劑萃取時(shí)的接觸面。如果一種中草藥的水浸液需要用比水輕的苯、乙酸乙酯等進(jìn)行萃取，則需將水提濃縮液裝在萃取管內(nèi)，而苯、乙酸乙酯貯于高位容器內(nèi)。萃取是否完全，可取樣品用薄層層析、紙層析及顯色反應(yīng)或沉淀反應(yīng)進(jìn)行檢査。③逆流分配法逆流分配法又稱逆流分溶法、逆流分布法或反流分布法。逆流分配法與溶劑逆流萃取法原理一致，但加樣量一定，并不斷在一定容量的溶劑中，經(jīng)多次移位萃取分配而達(dá)到混合物的分離。④液滴逆流分配法液滴逆流分配法又稱液滴逆流層析法。為近年來(lái)在逆流分配法基礎(chǔ)上改進(jìn)的溶劑萃取法。對(duì)溶劑系統(tǒng)的選擇基本同逆流分配法，但要求能在短時(shí)間內(nèi)分離成，并可生成有效的液滴。由于移動(dòng)相形成液滴，在細(xì)的分配萃取管中與固定相有效地接觸、摩擦不斷形成新的表面，促進(jìn)溶質(zhì)在溶劑中的分配，故其分離效果往往比逆流分配法好。(3)大孔吸附樹(shù)脂法大孔吸附樹(shù)脂是20世紀(jì)60年代發(fā)展起來(lái)的一類有機(jī)高聚物吸附劑，具有良好的吸附性能，近十余年來(lái)逐漸被應(yīng)用于中草藥化學(xué)成分的提取分離和中藥新藥的開(kāi)發(fā)研制。大孔吸附樹(shù)脂為吸附和篩選原理相結(jié)合的分離材料。它的吸附性是由于范德華引力或生成氫鍵的結(jié)果。篩選原理是由于其本身多孔性結(jié)構(gòu)所決定。由于吸附和篩選原理，有機(jī)化合物根據(jù)吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附樹(shù)脂上經(jīng)一定的溶劑洗脫而分開(kāi)。這使得有機(jī)化合物尤其是水溶性化合物的提純得以大大簡(jiǎn)化。大孔吸附樹(shù)脂的骨架由苯乙烯和二乙烯苯縮聚而生成，由于改性劑的加入，大孔吸附樹(shù)脂的極性發(fā)生改變，按照樹(shù)脂的表面性質(zhì)，吸附樹(shù)脂一般分為非極性、中極性和極性三類。非極性吸附樹(shù)脂是由偶極矩很小的單體聚合物制得的不帶任何功能基的吸附樹(shù)脂。典型的例子是苯乙烯-二乙烯苯體系的吸附樹(shù)脂，如D101、XAD-1、DiakmHP-10大孔吸附樹(shù)脂。中極性吸附樹(shù)脂指含酯基的吸附樹(shù)脂，如丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯與雙甲基丙烯酸酯等交聯(lián)的一類共聚物。它是在非極性大孔吸附樹(shù)脂的基礎(chǔ)上，加入丙烯酸甲酯或丙烯腈縮聚而成，如中國(guó)國(guó)內(nèi)經(jīng)常使用的AB-8大孔吸附樹(shù)脂。極性吸附樹(shù)脂是指含酰胺基、腈基、酚羥基等含氮、氧、硫極性功能基的吸附樹(shù)脂。此外，有時(shí)把含氮、氧、硫等配體基團(tuán)的離子交換樹(shù)脂稱作強(qiáng)極性吸附樹(shù)脂，強(qiáng)極性吸附樹(shù)脂與離子交換樹(shù)脂的界限很難區(qū)別。極性大孔吸附樹(shù)脂可以由甲基丙烯酸甲酯、丙烯酰胺或亞砜類縮聚而成，如日本三菱化工的DiaionHP2MG、美國(guó)Rohm-hass公司的XAD-IO，XAD-9大孔吸附樹(shù)脂。與活性炭和其它吸附劑相比，大孔吸附樹(shù)脂具有很多的優(yōu)點(diǎn)，如對(duì)某種物質(zhì)的吸附選擇性較高；物理化學(xué)穩(wěn)定性和機(jī)械強(qiáng)度較好；品種規(guī)格較多，可根據(jù)需要改變樹(shù)脂物理或化學(xué)結(jié)構(gòu)；吸附樹(shù)脂一般為球狀顆粒，流體阻力較小等等。因而被廣泛應(yīng)用于化工、醫(yī)藥等領(lǐng)域，近年來(lái)關(guān)于大孔吸附樹(shù)脂在天然產(chǎn)物提取分離中的應(yīng)用研究報(bào)道越來(lái)越多。大孔吸附樹(shù)脂對(duì)中草藥化學(xué)成分如生物堿、黃酮、皂苷、香豆素及其他一些苷類成分都有一定的吸附作用。對(duì)糖的吸附能力很差，對(duì)色素的吸附能力較強(qiáng)。(4)沉淀法是在中草藥提取液中加入某些試劑使產(chǎn)生沉淀，以獲得有效成分或除去雜質(zhì)的方法。如鉛鹽沉淀法鉛鹽沉淀法為分離某些中草藥成分的經(jīng)典方法之一。由于醋酸鉛及堿式醋酸鉛在水及醇溶液中，能與多種中草藥成分生成難溶的鉛鹽或絡(luò)鹽沉淀，故可利用這種性質(zhì)使有效成分與雜質(zhì)分離。然后將鉛鹽沉淀懸浮于新溶劑中，通以硫化氫氣體，使分解并轉(zhuǎn)為不溶性硫化鉛而沉淀。(5)鹽析法鹽析法是在中草藥的水提液中，加入無(wú)機(jī)鹽至一定濃度，或達(dá)到飽和狀態(tài)，可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出，而與水溶性大的雜質(zhì)分離。常用作鹽析的無(wú)機(jī)鹽有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。(6)透析法透析法是利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過(guò)半透膜，而大分子物質(zhì)不能通過(guò)半透膜的性質(zhì)，達(dá)到分離的方法。反之也可將大分子的雜質(zhì)留在半透膜內(nèi)，而將小分子的物質(zhì)通過(guò)半透膜進(jìn)入膜外溶液中，而加以分離精制。(7)結(jié)晶、重結(jié)晶和分步結(jié)晶法鑒定中草藥化學(xué)成分，研究其化學(xué)結(jié)構(gòu)，必須首先將中草藥成分制備成單體純品。在常溫下，物質(zhì)本身性質(zhì)是液體的化合物，可分別用分餾法或?qū)游龇ㄟM(jìn)行分離精制。一般地說(shuō)，中草藥化學(xué)成分在常溫下多半是固體的物質(zhì)，都具有結(jié)晶體的通性，可以根據(jù)溶解度的不同用結(jié)晶法來(lái)達(dá)到分離精制的目的。3、常用干燥方法(1)真空干燥是基于這樣一基本原理水的飽和蒸氣壓與溫度緊密相關(guān)，在真空狀態(tài)下，水的沸點(diǎn)降低，即在真空下操作也就是在低溫下操作，可避免在高溫下?tīng)I(yíng)養(yǎng)成分如維生素等的破壞，同時(shí)提高了干燥速度。真空干燥在食品、制藥、化工等行業(yè)有廣泛的應(yīng)用，中國(guó)也開(kāi)發(fā)和引進(jìn)了各種真空干燥設(shè)備，其結(jié)構(gòu)形式多種多樣。常用的形式主要有箱式真空干燥器、雙錐式真空干燥器、帶式真空干燥器等。這些傳統(tǒng)的真空干燥裝置主要采用熱風(fēng)，蒸汽或電等加熱，利用熱傳導(dǎo)、對(duì)流或輻射原理將熱量從外部傳到物料內(nèi)部。真空干燥具有干燥溫度低，千燥室內(nèi)相對(duì)缺氧，可避免脂肪氧化，色素褐變等一系列優(yōu)點(diǎn)，適合于熱敏感性食品物料的干燥，此外設(shè)備成本、千燥費(fèi)用也相對(duì)較低。(2)噴霧干燥是流化技術(shù)用于液態(tài)物料干燥的一種方法。因是瞬間干燥，特別適用于熱敏性物料，故所得產(chǎn)品質(zhì)量好，保持原來(lái)的色香味，且易溶解。利用噴霧干燥來(lái)制備微囊的研究正在進(jìn)行，它是將心料混懸在衣料的溶液中，經(jīng)離心噴霧器將其噴入熱氣流中，所得的產(chǎn)品是衣料包心料而成的微囊，這種微囊粉末可采用于直接壓片，也可制備膠囊劑、糖漿劑或混懸劑。(3)冷凍干燥是將干燥液體物料冷凍成固體，在低溫減壓條件下利用冰的升華性能，使物料低溫脫水而達(dá)到干燥的一種方法。由于物料在高度真空及低溫條件下干燥，故對(duì)某些極不耐熱物品的干燥很適合。王大林報(bào)道了一種噴霧通氣凍干新技術(shù)，是利用冷的空氣或氮?dú)庾鳛榻橘|(zhì)，迅速流經(jīng)凍結(jié)物使水升華，噴霧凍干制得的產(chǎn)品微粒小、干燥快、時(shí)間短、均勻、流動(dòng)性好，并具良好的速溶性。近年來(lái)，對(duì)膏狀物料和粘稠物料干燥的研究取得了較大進(jìn)展，流態(tài)化技術(shù)、噴射技術(shù)、惰性載體技術(shù)，則是在此研究基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的。旋轉(zhuǎn)閃蒸干燥機(jī)、熱噴射氣流干燥機(jī)、惰性載體干燥機(jī)均適合熱敏性物料和膏狀物料的干燥。這些新的研究成果用于中藥制劑生產(chǎn)，將大大改善中藥加工的技術(shù)水平，提高生產(chǎn)效率。(4)遠(yuǎn)紅外加熱干燥法是一項(xiàng)新的干燥技術(shù)，其干燥原理是將電能轉(zhuǎn)變?yōu)檫h(yuǎn)紅外輻射，從而被藥材的分子吸收，產(chǎn)生共振，引起分子和原子的振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)，導(dǎo)致物體變熱，經(jīng)過(guò)熱擴(kuò)散、蒸發(fā)和化學(xué)變化，最終達(dá)到干燥的目的。遠(yuǎn)紅外干燥可節(jié)省電能20%50%，效果較好。(5)微波干燥法是一項(xiàng)20世紀(jì)60年代迅速發(fā)展起來(lái)的新技術(shù)，微波干燥實(shí)際上是通過(guò)感應(yīng)加熱和介質(zhì)加熱，使被干燥物中的水分和脂肪不同程度地吸收微波能量，并把它轉(zhuǎn)變?yōu)闊崃繌亩_(dá)到干燥的目的。微波干燥可殺滅微生物和霉菌，并具有消毒作用。目前中國(guó)生產(chǎn)的微波加熱成套設(shè)備有915mhz和2450mhz兩個(gè)頻率。4、超臨界C02萃取方法(1)有關(guān)動(dòng)、植物脂肪油成分的提取方法有水煮法、水媒分離法、分子蒸餾和減壓蒸餾法、金屬加合法、萃取結(jié)晶法、分盤冷凍壓搾法和有機(jī)溶劑法等。采用水煮加熱法，因加熱時(shí)間長(zhǎng)、溫度高，易使對(duì)熱不穩(wěn)定的揮發(fā)成分發(fā)生變化，如一些不飽和脂肪酸的氧化。水媒分離法，此分離法的明顯優(yōu)點(diǎn)是消除了有機(jī)溶劑法造成的高費(fèi)用和公害，但是這種技術(shù)的缺點(diǎn)是得到的飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸的純度或級(jí)別不如有機(jī)溶劑分離法高。分子蒸餾和減壓蒸餾法為減少熱變性，需用尿素加合物等方法來(lái)除去大部分飽和脂肪酸，在得到的產(chǎn)品中必須將其除去；雖然可得到較純的脂肪酸，但需幾步才能達(dá)到目標(biāo)，較費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，增加了生產(chǎn)成本。金屬加合法分離需要較低的低溫處理，最后還要設(shè)法去除金屬離子，清除不盡還會(huì)造成金屬離子污染。萃取結(jié)晶法得到脂肪酸純度較高，在較低的溫度下進(jìn)行，能防止脂肪酸的氧化，但時(shí)間較長(zhǎng)，不太適用于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。分盤冷凍壓榨法缺點(diǎn)是，安放盤架和液壓機(jī)的冷凍室需要數(shù)千平方米的面積和龐大的冷卻系統(tǒng)，大的設(shè)施需要多人操作，勞動(dòng)強(qiáng)度高，分離速度緩慢，效率低，不能連續(xù)操作。有機(jī)溶劑法是采用石油醚或乙醚有機(jī)溶劑在水浴上加熱情況下，進(jìn)行回流循環(huán)提取；由于所采用的有機(jī)溶劑如石油醚或乙醚等均為一種低沸點(diǎn)物質(zhì)，易燃易爆，同時(shí)，有機(jī)溶劑的使用一方面會(huì)污染環(huán)境，另一方面有機(jī)溶劑有可能在提取物中有殘留，會(huì)影響提取物在醫(yī)藥上的進(jìn)一步應(yīng)用。(2)有關(guān)動(dòng)、植物脂肪油成分的超臨界C02萃取方法一種流體當(dāng)處在其臨界溫度和壓力狀態(tài)時(shí)，被稱為超臨界流體。由于超臨界流體的密度接近于液體，具有與液體溶劑相當(dāng)?shù)妮腿∧芰?。又具有與氣體相當(dāng)?shù)牡驼扯龋瑪U(kuò)散能力比液體要大100倍，因而具有較高的傳質(zhì)性。采用超臨界萃取的時(shí)候，利用超臨界流體的這些性質(zhì)，使之與待分離的物質(zhì)相接觸穿透基體，從中萃取出目標(biāo)物質(zhì)。然后利用降壓和/或升溫的辦法降低其密度，從而降低溶質(zhì)在其中的溶解度，使被萃取物與溶劑分離。因?yàn)椴煌奈镔|(zhì)在相同的萃取條件下溶解度是不同的，因而有可能借助這種差異將它們進(jìn)一步分開(kāi)。超臨界流體萃取常常選用co2等臨界溫度低且化學(xué)惰性的物質(zhì)為萃取劑，它特別適用于熱敏物質(zhì)和易氧化物質(zhì)的分離，因此非常適用于對(duì)于動(dòng)物油脂的提取分離。因此，本發(fā)明采取該方法，能夠制備高純度的被提取物的脂肪油。超臨界C02萃取方法是這樣提取的把干燥的被提取物的粗粉放在超臨界萃取設(shè)備中用C02進(jìn)行萃取，減壓后即得被提取物的脂肪油，室溫條件下呈淺黃色透明油狀；提取的被提取物的脂肪油中總脂肪酸的純度在40以上，優(yōu)于其他提取方法；總脂肪酸一般包括油酸、亞油酸、棕櫚酸以及余量的其他組分等。超臨界C02萃取被提取物的脂肪油的方法包括如下步驟(1)將干燥的被提取物粉碎至1030目后，置于超臨界萃取釜中，連續(xù)地通入超臨界狀態(tài)下的C02進(jìn)行萃取，優(yōu)選的條件一般是C02流量1055kg/hkg原料、壓力550Mpa、溫度1575°C、時(shí)間0.56h;進(jìn)一步優(yōu)選的條件一般是C02流量45kg/hkg原料、壓力35Mpa、溫度5(TC、時(shí)間lh;(2)將萃取了被提取物的脂肪油的C02減壓至112MPa，即可獲得在室溫條件下被提取物的脂肪油，被提取物的脂肪油中總脂肪酸的純度在40%以上，萃取物的理化性狀和脂肪酸純度都優(yōu)于其他提取方法。萃取條件的選擇是通過(guò)以下辦法實(shí)現(xiàn)的首先選定四因素、三水平，根據(jù)正交設(shè)計(jì)方法，按L9(3,交設(shè)計(jì)表安排實(shí)驗(yàn)(正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)安排參考郭祖超主編的《醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)》，人民軍醫(yī)出版社，1999年第一版)。從正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分析得到萃取工藝條件。對(duì)超臨界C02萃取的被提取物的脂肪油進(jìn)行脂肪酸甲酯化后，進(jìn)行氣相色譜一質(zhì)譜分析。超臨界C02萃取被提取物的脂肪油的制備方法不使用有機(jī)溶劑等物質(zhì)，不會(huì)污染環(huán)境，也不存在有害溶劑殘留等問(wèn)題，而且操作簡(jiǎn)便、萃取時(shí)間短、產(chǎn)品純度高，使用的C02廉價(jià)而且可重復(fù)循環(huán)使用，工業(yè)生產(chǎn)成本低廉。經(jīng)文獻(xiàn)檢索等，到目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)有知母皂苷b-ii在用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病方面的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所需要解決的技術(shù)問(wèn)題是公開(kāi)了一種中藥知母總皂苷提取物知母皂苷b-ii的新用途，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷。也就是說(shuō)，本發(fā)明意在明確知母總皂苷提取物知母皂苷b-n在抗抑郁應(yīng)用方面的活性，進(jìn)而將知母總皂苷提取物知母皂苷b-ii用于制備抗抑郁產(chǎn)品；所述的抗抑郁產(chǎn)品是指用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究情感性精神障礙中抑郁癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品中的一種。所述的抗抑郁產(chǎn)品是包括醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域產(chǎn)品中的一種，是包括藥物、試劑或食品等中的一種，例如藥物、試劑、一般食品、保健食品、添加劑或飲料等，優(yōu)選藥物或食品中的一種，進(jìn)一步優(yōu)選藥物。(一)技術(shù)構(gòu)思自主開(kāi)發(fā)創(chuàng)新藥物是中國(guó)目前的一項(xiàng)緊迫任務(wù)，中國(guó)中醫(yī)藥學(xué)具有悠久的歷史，用中草藥預(yù)防和治療疾病方面也積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，因此從中藥中尋找有效的活性成分或發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有成分的新用途是一條有效的快捷途徑，也是中國(guó)創(chuàng)新藥物研制的優(yōu)勢(shì)之所在。發(fā)明人通過(guò)對(duì)單味知母藥材的總皂苷提取物進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，在對(duì)具有抗抑郁作用的天然藥物活性成分進(jìn)行篩選中，發(fā)明人篩選發(fā)現(xiàn)并證明該總皂苷提取物中知母皂苷b-ii對(duì)抑郁有較好的防治作用。根據(jù)文獻(xiàn)檢索，發(fā)明人通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)活性部位知母皂苷b-ii具有多種顯著的藥理活性。而經(jīng)過(guò)化學(xué)成分研究，證明知母活性部位知母總皂苷提取物中的主要成分為知母皂苷b-ii化合物。發(fā)明人從而推測(cè)知母的在預(yù)防、診斷、保護(hù)和治療抗抑郁等方面活性的臨床藥效，也應(yīng)主要是通過(guò)活性部位知母總皂苷提取物特別是知母皂苷b-ii的藥效來(lái)發(fā)揮的，研究結(jié)果也證明和證實(shí)了知母總皂苷提取物特別是知母皂苷b-ii具有顯著的藥理活性。情感性精神障礙在我國(guó)疾病總負(fù)擔(dān)的排名居前，研制治療抑郁癥的藥物，尤其是預(yù)防、診斷、保護(hù)和治療抑郁癥等方面產(chǎn)品特別是藥物具有顯著的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)效益。本發(fā)明的目的就是要研制一種安全、高效的情感性精神障礙中抑郁癥的防治藥物。(二)知母皂苦B-II的藥理活性本發(fā)明通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，知母皂苷b-ii(30mg/kg，60mg/kg，120mg/kg)各組連續(xù)灌胃給藥10d后，能顯著縮短小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間，明顯縮短小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間，從而表明知母皂苷B-II具有抗抑郁作用。本發(fā)明對(duì)知母皂苷B-II在抑郁癥的預(yù)防、診斷、保護(hù)、治療和研究等方面的活性還進(jìn)行了多方面的試驗(yàn)。供試樣品均是采取現(xiàn)有公開(kāi)的制備方法獲得，目前制備結(jié)果的具體數(shù)據(jù)一般如下(1)知母總皂苷提取物中含總皂苷一般為40%80%;(2)知母總皂苷提取物主要成分知母皂苷B-II含量一般為30%~70%;也就是說(shuō)，采用知母總皂苷提取物的主要成分知母皂苷B-II為原料，或者是直接采用含有知母皂苷B-II的知母總皂苷提取物為原料，都能夠直接或間接用于制備抗抑郁產(chǎn)品。知母皂苷B-II優(yōu)選以基本純的形式使用，如知母皂苷B-II的純度》900/。。具體的制備方法、驗(yàn)證方法、質(zhì)量控制等除了在本發(fā)明下文中介紹的部分內(nèi)容外，現(xiàn)有文獻(xiàn)資料均已公開(kāi)了知母皂苷B-II的相關(guān)內(nèi)容，本發(fā)明不再一一例舉。(三)知母皂苷B-II的用途1、概述本發(fā)明的目的是提供一種用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品，包括藥物、試劑或食品等中的一種，優(yōu)選藥物或食品中的一種，進(jìn)一步優(yōu)選藥物。通過(guò)藥理活性篩選證明，知母總皂苷提取物中知母皂苷B-n為其預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病的活性部位。已完成的急性毒性實(shí)驗(yàn)證明，小鼠灌胃給藥對(duì)知母皂苷B-II的最大耐受量超過(guò)2.0g/kg，相當(dāng)于臨床推薦用藥劑量的440倍，表明該有效部位安全可靠，解決了中藥復(fù)方中成分復(fù)雜、有效成分含量低且含有有毒成分的問(wèn)題。綜上所述，發(fā)明人對(duì)知母總皂苷提取物進(jìn)行了理論探索，經(jīng)過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)研究特別是長(zhǎng)期的藥理學(xué)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)所述及的知母皂苷B-II有顯著的預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病的活性。因此，知母皂苷B-II及其組合物能夠用于制備抗抑郁產(chǎn)品，優(yōu)選以本發(fā)明知母皂苷B-n或含有知母皂苷B-n的知母總皂苷提取物為原料制備而成的藥物。2、知母皂苷B-n及其組合物的使用方法與要求涉及治療抑郁癥的藥物組合物或產(chǎn)品，其包括作為活性成分的知母皂苷B-II和藥用載體或賦形劑。本發(fā)明知母皂苷B-n可以單獨(dú)或與其它活性組分聯(lián)合使用，包括用于制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品，包括藥物、試劑、食品等，尤其是藥物。在具體使用方面，本發(fā)明所述的知母皂苷B-II能夠單獨(dú)使用，還能夠與其他許多化學(xué)物質(zhì)一起使用。無(wú)論這些化學(xué)物質(zhì)是否具有生物活性或具有治療疾病的功能，包括輔助功能如協(xié)同放大作用、拮抗或緩解知母皂苷B-II的副作用等，這些化學(xué)物質(zhì)是包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體、食品、天然產(chǎn)物、化學(xué)合成藥物或人類用藥等中的一種或多種；優(yōu)選包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體或者食品等中的一種或多種；進(jìn)一步優(yōu)選醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體。本文使用的"醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體"包括任何和所有的生理適用的溶劑、分散介質(zhì)、胞衣、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑或吸收延遲劑等中的一種或多種。醫(yī)藥學(xué)上可接受載體的例子包括一種或多種的水、鹽水、磷酸緩沖鹽水、葡萄糖、甘油或乙醇等及其組合物中的一種或多種。在許多情況下，在該組合物中最好包括等滲劑，例如，糖、諸如甘露醇、山梨醇、山梨醇的多元醇或氯化鈉等中的一種或多種。醫(yī)藥學(xué)上可接受載體還可以包含少量的輔助物質(zhì)，例如潤(rùn)濕劑或乳化劑、防腐劑或緩沖液等中的一種或多種，它們?cè)鰪?qiáng)了該知母皂苷B-II的有效期或效力。從具體的分類上看，所說(shuō)的醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體是指醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，包括賦形劑，如淀粉或水等中的一種或多種；潤(rùn)滑劑，如甘油或硬脂酸鎂等中的一種或多種；崩解劑，如微晶纖維素等；填充劑，如淀粉或乳糖等中的一種或多種；粘接劑，如預(yù)膠化淀粉、糊精、纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯烷酮等中的一種或多種；滲透壓調(diào)節(jié)劑，如葡萄糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇等中的一種或多種；稀釋劑，如水等；崩解劑，如瓊脂、碳酸鈣或碳酸氫鈉等中的一種或多種；吸收促進(jìn)劑，如季銨化合物等；表面活性劑，如十六垸醇等；吸附載體，如高嶺土或皂粘土等中的一種或多種；潤(rùn)滑劑，如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂或聚乙二醇等中的一種或多種；另外，還可以在組合物中加入其它輔劑，如香味劑或甜味劑等中的一種或多種。例如，將活性組分知母皂苷B-II溶解、混懸或乳化于適宜的水性溶劑中(例如，蒸餾水、生理鹽水或格林溶液等中的一種或多種)或油性溶劑中(例如，植物油例如橄欖油、芝麻油、棉籽油、玉米油或丙二醇等中的一種或多種)中，即可制得注射制劑，其中溶劑中可含有分散劑(例如，聚山梨酯80、聚氧乙烯硬化蓖麻油60、聚乙二醇、苯甲醇、氯代丁醇或苯酚等中的一種或多種)、滲透壓調(diào)節(jié)劑(例如，氯化鈉、甘油、D9—甘露糖、D一山梨醇或葡萄糖等中的一種或多種)。在這種情況下，如有必要，可加入添加劑，例如增溶劑(例如，聚山梨酯80、聚氧乙烯蓖麻油、聚維酮、聚乙二醇40蓖麻油或普郎尼克F-68等中的一種或多種)、穩(wěn)定劑(例如，人血清白蛋白等)、止痛劑(例如，鹽酸普魯卡因或利多卡因等中的一種)等。本發(fā)明所述及的知母皂苷B-II還能夠以組合物的形式聯(lián)合使用，特別是與用其它化學(xué)物質(zhì)如藥物對(duì)動(dòng)物尤其是哺乳動(dòng)物包括人或其他動(dòng)物進(jìn)行治療所用的組合物或者是類似的組合物。所述哺乳動(dòng)物，包括人、小鼠、大鼠、羊、猴、牛、豬、馬、兔、犬、黑猩猩、狒狒、狨、獼猴或恒河猴等中的一種或多種，優(yōu)選人、小鼠、大鼠、猴、豬、兔或犬等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選人、大鼠或猴等中的一種或多種。例如，可以將本發(fā)明知母皂苷B-II加入適于給與受治療者的藥用組合物中。通常，該藥用組合物包含本發(fā)明知母皂苷B-II和藥學(xué)上可接受的載體。知母皂苷B-II的組合物特別是藥物組合物可以有各種形式，包括例如液體、半固體和固體等劑量形式中的一種或多種；其中所說(shuō)的藥物組合物包括治療有效量的知母皂苷B-II為活性成分，以及一種或多種醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體。知母皂苷B-II的藥物組合物可以采用本領(lǐng)域公知的常規(guī)生產(chǎn)方法制成各種劑型，例如使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。所述的劑型包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑或注射劑等中的一種或多種，采取口服或注射(包括靜脈注射、靜脈滴注、肌肉注射或皮下注射等中的一種或多種)、粘膜透析等中的一種或多種給藥途徑進(jìn)行抑郁癥及其直接相關(guān)疾病的預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療或科學(xué)研究。藥物組合物優(yōu)選含有重量比為0.5%99%的活性成分知母皂苷B-II，進(jìn)一步優(yōu)選含有重量比為1%95%的活性成分知母皂苷B-II，最優(yōu)選含有重量比為5%90%的活性成分知母皂苷B-II。知母皂苷B-II的藥物組合物一般必須無(wú)菌且在生產(chǎn)儲(chǔ)存條件下穩(wěn)定。可以將該組合物配制成溶液、微乳液、分散液、脂質(zhì)體或其它適合于高藥物濃度的有序結(jié)構(gòu)。通過(guò)將所需量的該知母皂苷B-II與所需上述成分的一種或組合一起加入適當(dāng)?shù)娜軇┲胁⒔又M(jìn)行除菌過(guò)濾制備無(wú)菌注射液。一般而言，通過(guò)將該知母皂苷B-II加入含有基本分散介質(zhì)和所需的上述其它成分的無(wú)菌溶媒中制備分散液。在用于制備無(wú)菌注射液的無(wú)菌粉劑的情況下，推薦的制備方法是真空干燥和冷凍干燥劑。例如，通過(guò)諸如卵磷脂的包衣、在分散液的情況下通過(guò)保持所需顆粒大小和通過(guò)使用表面活性劑，可以保持溶液的適當(dāng)流動(dòng)性。通過(guò)在該組合物中包括延遲吸收的藥劑(例如單硬脂酸鹽或明膠)可以達(dá)到注射組合物的延長(zhǎng)吸收。用于患者時(shí)，本發(fā)明所述的知母皂苷B-II劑量為520mg/kgd，該劑量或用量通常根據(jù)患者或使用者的年齡和體重以及身體狀況或患者癥狀的狀況來(lái)決定。本發(fā)明知母皂苷B-II及其藥用組合物可以包括"治療有效量"或"預(yù)防有效量"的本發(fā)明知母皂苷B-n。"治療有效量"是指在必要的劑量和時(shí)間下有效達(dá)到所需治療效果的量。知母皂苷B-II的治療有效量可以根據(jù)諸如個(gè)體的病況、年齡、性別和體重以及該知母皂苷B-II在該個(gè)體引起所需反應(yīng)的能力等因素而變化。治療有效量亦指該知母皂苷B-II的有益治療效果超過(guò)其任何毒性或有害效果的量。"預(yù)防有效量"是指在必要?jiǎng)┝亢蜁r(shí)間下有效達(dá)到所需預(yù)防效果的量。因?yàn)轭A(yù)防劑量用于患病前或疾病早期的受治療者，預(yù)防有效量通常小于治療有效量。本發(fā)明知母皂苷B-II的治療或預(yù)防有效量的典型的非限制性范圍是520mg/kg，更優(yōu)選為5~10mg/kg。應(yīng)注意，劑量值將根據(jù)欲減輕的疾病類型和嚴(yán)重性變化，也就是說(shuō)用于患者時(shí)，本發(fā)明所述的知母皂苷B-II劑量或用量，通常根據(jù)患者或使用者的年齡和體重以及身體狀況或患者癥狀的狀況來(lái)決定。另外，應(yīng)理解，對(duì)于任何特定受治療者，應(yīng)隨著時(shí)間根據(jù)個(gè)體需要和給與或監(jiān)督給與所述組合物的人的專業(yè)判斷調(diào)整特定劑量制度，并且本文設(shè)定的劑量范圍僅為例證性的，并不會(huì)限制要求保護(hù)的組合物的范圍或?qū)嵺`。也就是說(shuō)，需要根據(jù)治療的對(duì)象、給藥途徑、所治療疾病和狀況等，變化本發(fā)明知母皂苷B-II的每次和/或每日的劑量或用量。例如，經(jīng)靜脈給予哺乳動(dòng)物，尤其是成年人(如體重60kg)，所述知母皂苷B-II的單劑量約為50200mg，優(yōu)選約100mg，優(yōu)選每日給藥13次。可以調(diào)整劑量單位，以提拱最佳所需反應(yīng)(例如，治療或預(yù)防應(yīng)答)。例如，可以單次大劑量給藥，可以在一段時(shí)間內(nèi)給予幾個(gè)均分量或根據(jù)治療情況的迫切性按比例降低或增加劑量。配制易于給藥和劑量統(tǒng)一的劑量單位形式的非腸道組合物尤其有利。本文使用的劑量單位形式，指適于欲治療的哺乳動(dòng)物受治療者的單元?jiǎng)┝康奈锢矸蛛x單位；每個(gè)單位含有預(yù)定量的計(jì)算用于與所需藥用載體一同產(chǎn)生所需治療效果的活性物知母皂苷B-II。本發(fā)明的劑量單位形式的規(guī)格，由以下確定并直接取決于以下(a)該知母皂苷B-II的獨(dú)特特征和欲達(dá)到的特定治療或預(yù)防效果，和(B)在混合這種用于治療個(gè)體敏感性知母皂苷B-II的技術(shù)中的內(nèi)在限制。3、知母皂苷B-II及其組合物的藥物劑型和給藥途徑本發(fā)明所述的知母皂苷B-II及其組合物制備的用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品，其中按照飲料、食品
技術(shù)領(lǐng)域：
的要求制備的產(chǎn)品能夠用于預(yù)防、保護(hù)和治療抑郁癥及其直接相關(guān)疾病；按照醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
的要求制備的產(chǎn)品能夠用于患者的治療或保健，既能夠單獨(dú)直接用于制備治療或保健的藥物，也能夠與許多化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行混合或組合，直接或間接用于制備治療或保健的藥物。這里所述的化學(xué)物質(zhì)與本節(jié)上文中所述的相同。在本發(fā)明中，所需物料包括本發(fā)明的原料、上述配套使用的化學(xué)物質(zhì)等，均應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況和需要，采用食品級(jí)或藥用級(jí)的物料。本發(fā)明所述的知母皂苷B-II及其組合物，可以用本領(lǐng)域已知的各種方法給藥，盡管在許多治療用途中推薦的給藥途徑/給藥方式是噴霧劑或口服給藥。但是，技術(shù)人員會(huì)理解給藥途徑/給藥方式隨所需的結(jié)果而變化。在某些具體實(shí)施中，該活性化合物可以與保護(hù)該化合物免于快速釋放的載體一同制備例如空釋制劑，包括移植物傳遞系統(tǒng)、透皮貼傳遞系統(tǒng)或微囊傳遞系統(tǒng)等中的一種或多種。此外，還可以使用生物可降解的、生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙酯、聚酐、聚羥基乙酸、膠原蛋白、聚正酯或聚乳酸等中的一種或多種。制備這種制劑的許多方法均已申請(qǐng)專利或一般為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知(參見(jiàn)例如SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystems,J.R.RoBinson編車葺，MarcelDekker,Inc.,纟丑纟勺,1978)。本發(fā)明所述的知母皂苷B-n及其組合物，通常通過(guò)口服、鼻吸入、直腸或腸胃外給藥等中的一種或多種方式，施用于需要這種治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑如片劑、粉劑、粒劑或膠囊等中的一種或多種。在實(shí)施時(shí)，本發(fā)明知母皂苷B-II可以與例如惰性稀釋劑或可同化的食用載體一同口服。該知母皂苷B-n(和共它成分，如果需要)亦可以包于硬或軟殼明膠膠囊、壓制成片劑或直接加入受治療者的膳食中。關(guān)于口服治療給藥，可以將所述知母皂苷B-II與賦形劑一起加入并以可食片劑、頰含片劑、錠劑、膠囊、懸液、糖漿或糯米紙囊劑等等中的一種或多種形式使用。為了以非腸道給藥之外給予本發(fā)明知母皂苷b-ii，可能需要用防止其失活的材料對(duì)該知母皂苷B-n包衣或與該知母皂苷B-n—同給予。亦可以將補(bǔ)充的活性化合物加入該組合物中。在具體實(shí)施時(shí)，將本發(fā)明知母皂苷B-II與一種或多種可以用于治療疾病的其它治療藥物共配制和/或共給予。這種聯(lián)合使用，可以優(yōu)越地利用較低劑量的該給予的治療藥物，因此避免可能的毒性或與各種單一療法相關(guān)的并發(fā)癥。制成液體制劑如水劑、油懸浮劑或其它液體制劑中的一種或多種，如糖漿、酊劑或酏劑等中的一種或多種；用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液劑、水劑或油性懸浮劑等中的一種或多種。以上藥物或藥物組合物可以各種途徑使用，在所述的使用形式中，優(yōu)選的形式是口服制劑(如片劑、包衣片劑、膠囊、溶液或混懸液等中的一種或多種)、非腸道給予劑型(如注射劑、軟膏或貼劑等中的一種或多種)等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選片劑、膠囊或注射劑等中的一種或多種，特別優(yōu)選片劑或注射劑中的一種。此外，知母皂苷B-II所使用的藥材原料包括知母藥材或知母總皂苷提取物等在某些情況下也能夠單獨(dú)直接用于制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品，也能夠與許多化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行混合或組合，以組合物的形式直接或間接用于制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品。這里所述的化學(xué)物質(zhì)與本節(jié)上文中所述的相同。例如，知母皂苷B-n所使用的藥材原料包括知母藥材或知母總皂苷提取物等的粉末用于制備用于抑郁癥預(yù)防、診斷、保護(hù)和治療產(chǎn)品特別是藥物的各種劑型，或者是知母皂苷B-n所使用的藥材原料包括知母藥材或知母總皂苷提取物等的粉末與有關(guān)的輔料用于制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品尤其是藥物的各種劑型，或者是知母皂苷B-II所使用的藥材原料包括知母藥材或知母總皂苷提取物等包括知母藥材或知母總皂苷提取物等的粉末與有關(guān)的制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品如藥物一起用于制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品如藥物的各種劑型，或者是知母皂苷b-ii所使用的藥材原料包括知母藥材或知母總皂苷提取物等的粉末與有關(guān)的輔助藥物一起用于制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品如藥物的各種劑型，如片劑、膠囊劑或混懸劑等中的一種或多種，優(yōu)選膠囊劑。所述的方法之一是將知母皂苷B-II所使用的藥材原料包括知母藥材或知母總皂苷提取物等的粉末灌裝為膠囊劑，方法之二是將知母皂苷b-ii所使用的藥材原料包括知母藥材或知母總皂苷提取物等的粉末與有關(guān)的制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品如藥物一起灌裝為膠囊劑，方法之三是將知母皂苷b-ii所使用的藥材原料包括知母藥材或知母總皂苷提取物等的粉末與有關(guān)的輔助藥物一起灌裝為膠囊劑；方法之四是將知母皂苷b-ii所使用的藥材原料包括知母藥材或知母總皂苷提取物等的粉末與有關(guān)的輔料一起按常規(guī)方法直接壓為片劑，方法之五是將知母皂苷b-ii所使用的藥材原料包括知母藥材或知母總皂苷提取物等的粉末、有關(guān)的制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品如藥物一起與有關(guān)的輔料按常規(guī)方法直接壓為片劑，方法之六是將知母皂苷B-II所使用的藥材原料包括知母藥材或知母總皂苷提取物等的粉末、有關(guān)的輔助藥物一起與有關(guān)的輔料按常規(guī)方法直接壓為片劑等。除上述的六種基本方法外，還能夠選擇知母皂苷B-II所使用的藥材原料包括知母藥材或知母總皂苷提取物等的其他形式或?qū)χ冈碥誃-II所使用的藥材原料包括知母藥材或知母總皂苷提取物等進(jìn)行本領(lǐng)域公知的方法處理后，制備各種劑型的含有知母皂苷B-II所使用的藥材原料包括知母藥材或知母總皂苷提取物等的產(chǎn)品如藥物。但是，需要注意的是，在上述直接使用知母皂苷b-ii所使用的藥材原料包括知母藥材或知母總皂苷提取物等的時(shí)候，應(yīng)先根據(jù)所使用的知母皂苷b-ii的劑量要求，換算得到所需要使用的知母皂苷b-ii所使用的藥材原料包括知母藥材或知母總皂苷提取物等的用量。綜上所述，本發(fā)明知母皂苷B-n及其組合物可用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品，優(yōu)選藥物和食品，進(jìn)一步優(yōu)選藥物。本節(jié)以上所述的知母皂苷B-ii均可采用含有知母皂苷B-n的知母總皂苷提取物來(lái)替代，但是在使用量上要進(jìn)行折算，并要考慮該提取物中的其他成分的影響。(四)技術(shù)特長(zhǎng)本發(fā)明對(duì)以皂苷為主要成分的知母皂苷b-ii拓展了新的醫(yī)藥用途，也為預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病提供了一種新的藥物來(lái)源。本發(fā)明的知母皂苷B-II安全低毒，藥理作用較強(qiáng)，其原料來(lái)源豐富、價(jià)廉，制備工藝簡(jiǎn)單，可用于制備預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品。本發(fā)明有針對(duì)性地研究知母皂苷B-II，其藥理作用較強(qiáng)，其原料來(lái)源豐富，制備工藝簡(jiǎn)單，得率高；且使用安全，一物多用，最大限度地發(fā)揮了作用，而且使用范圍特別廣，因此容易推廣應(yīng)用，能夠在較短的時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。知母皂苷B-II性質(zhì)穩(wěn)定，使用制備的制劑質(zhì)量穩(wěn)定，預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病的效果明顯，故其更適于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病產(chǎn)品的工業(yè)化生產(chǎn)?？傊?，本發(fā)明積極適應(yīng)了現(xiàn)代醫(yī)療和科研領(lǐng)域的工作需要和人性化服務(wù)的需要，是用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病等方面的安全原料。具體實(shí)施方式本發(fā)明研究了現(xiàn)有的知母皂苷B-II新的藥理作用和新的用途，提供了一種能夠用于制備預(yù)防、診斷、保護(hù)和治療抑郁癥等產(chǎn)品的原料，便于醫(yī)療行業(yè)和相關(guān)行業(yè)如食品等領(lǐng)域的安全使用。(一)知母皂苷B-II的制備及其鑒定方法本發(fā)明所說(shuō)的知母總皂苷提取物的制備方法包括如下步驟(1)提取取知母原料若干，提取，得提取液，即知母總提取物；(2)分離純化將提取液分離純化，即得知母總皂苷提取物。所述的提取方法包括溶劑提取法等本領(lǐng)域公知的所有可以使用的方法。上文所述的溶劑提取法的提取方法是本領(lǐng)域的常規(guī)提取方法，也就是說(shuō)包括常用的超聲提取法、浸漬提取法、滲漉提取法、煎煮提取法、加熱回流提取法或連續(xù)回流提取法等中的一種或多種；提取次數(shù)可以是一次或者是多次。同時(shí)，原料的粉碎度、提取時(shí)間、提取溫度、設(shè)備條件等因素也都能影響提取效率，必須加以考慮。各種提取方法包括技術(shù)細(xì)節(jié)在內(nèi)的所有技術(shù)資料，均可以參見(jiàn)有關(guān)的教材和相關(guān)的技術(shù)文獻(xiàn)等。上文所述的溶劑提取法所使用的提取溶劑是本領(lǐng)域的常規(guī)提取溶劑，也就是說(shuō)包括常見(jiàn)的水、親水性的有機(jī)溶劑或親脂性的有機(jī)溶劑等三類提取溶劑的一種或多種；所述的水是包括水、酸水或堿水等中的一種；所述的親水性的有機(jī)溶劑是一般所說(shuō)的與水能混溶的有機(jī)溶劑，包括乙醇、乙醇水溶液、甲醇或丙酮等中的一種或多種，優(yōu)選乙醇或不同濃度的乙醇水溶液等中的一種或多種，進(jìn)一歩優(yōu)選不同濃度的乙醇水溶液；所述的親脂性的有機(jī)溶劑是一般所說(shuō)的與水不能混溶的有機(jī)溶劑，包括石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲垸或二氯乙垸等中的一種或多種，優(yōu)選石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲垸或二氯乙烷等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選氯仿、乙醚、乙酸乙酯或二氯甲烷等中的一種或多種。上述提取方法所得到的知母總提取物，需進(jìn)一步分離純化。所述的分離純化方法是本領(lǐng)域公知的所有可以使用的方法，包括溶劑分離法，溶劑萃取法(包括萃取法、逆流連續(xù)萃取法、逆流分配法或液滴逆流分配法等中的一種或多種)，大孔吸附樹(shù)脂法，沉淀法，鹽析法，柱層析法或結(jié)晶與重結(jié)晶和分歩結(jié)晶法等中的一種或多種；這些方法均是本領(lǐng)域的公知技術(shù)，在需要進(jìn)一步確證的時(shí)候，很容易從有關(guān)的教材和相關(guān)的技術(shù)文獻(xiàn)等査閱到包括技術(shù)細(xì)節(jié)在內(nèi)的所有技術(shù)資料。為了使產(chǎn)品性質(zhì)穩(wěn)定，便于使用和保存，還可增加一個(gè)優(yōu)化的步驟，即步驟三(3)干燥。所述的干燥方法是本領(lǐng)域公知的可以使用的方法，包括常壓干燥法如經(jīng)烘箱烘干、減壓干燥法、真空干燥法、噴霧干燥法、冷凍干燥法、遠(yuǎn)紅外加熱干燥法或微波干燥法等中的一種或多種。在具體實(shí)施時(shí)，需要根據(jù)現(xiàn)有的資金、技術(shù)和有關(guān)的要求，采用其中合適的方法，并選取合適的條件等必要的措施以達(dá)到預(yù)期的目標(biāo)。而這些方法也均是本領(lǐng)域的公知技術(shù)，在需要進(jìn)一步確證的時(shí)候，都是很容易從有關(guān)的教材和相關(guān)的技術(shù)文獻(xiàn)等査閱到包括技術(shù)細(xì)節(jié)在內(nèi)的所有技術(shù)資料。為進(jìn)一步闡述上述的知母總皂苷提取物的提取方法，下面通過(guò)舉例來(lái)說(shuō)明。例如，本發(fā)明所說(shuō)知母總皂苷提取物的制備方法可以為(1)提取按常規(guī)將知母藥材粉碎成粗粉，以10~95%乙醇滲漉提取，收集530倍藥材體積量滲漉液，即為提取液。(2)分離純化提取液濃縮到濃度為0.5-10:1(藥材重量溶液體積)，即為樣品液。將樣品液通過(guò)非極性或弱極性大孔樹(shù)脂吸附(非極性或弱極性大孔樹(shù)脂為以苯乙烯為架橋材料的聚苯乙烯型多孔性吸附樹(shù)脂，如D101、D201、ZTC-1、AB-8、1300-1型大孔樹(shù)脂等)，用水淋洗除去雜質(zhì)；再用含水低級(jí)醇洗脫，低級(jí)醇為甲醇、乙醇或丙醇等dCs醇類，其濃度為1040%，體積用量為樹(shù)脂床體積的5~24倍，收集低級(jí)醇洗脫液，濃縮至干，并粉碎；粉末用1.5-2.5倍量(丙酮體積/粉末重量)丙酮溶解，再加入212倍量(丙酮體積/粉末重量)丙酮，濾過(guò)，將濾液回收溶劑至2~8倍量(丙酮體積/粉末重量)，靜置，析出結(jié)晶，過(guò)濾，以丙酮洗滌結(jié)晶，即得本發(fā)明的知母總皂苷提取物。知母總皂苷提取物的主要成分知母皂苷B-II，根據(jù)實(shí)驗(yàn)、研究或臨床等實(shí)際需要，還可以對(duì)知母總皂苷提取物進(jìn)行進(jìn)一步純化以得到各種純度的知母皂苷B-II，該方法也是目前公知的常規(guī)技術(shù)。本發(fā)明綜合應(yīng)用質(zhì)譜(簡(jiǎn)稱MS)，核磁共振氫譜(簡(jiǎn)稱^-NMR)，核磁共振碳譜(簡(jiǎn)稱13C-NMR)以及核磁共振二維譜(簡(jiǎn)稱2D-NMR)等分析技術(shù)對(duì)知母總皂苷提取物中的知母皂苷B-II進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，其含量范圍是在30%70%。(二)常用的實(shí)用劑型本發(fā)明制備粉針劑一般采用常規(guī)的冷凍干燥法，以水作為溶媒，其步驟為取知母皂苷B-II，加入賦形劑，加水溶解，加入活性炭，過(guò)濾除菌，灌裝，半軋塞，冷凍干燥，壓塞軋蓋即可。所用的賦形劑選自甘露醇、水解明膠、葡萄糖、乳糖、右旋糖苷等中的一種或幾種。每瓶含知母皂苷B-II10100mg。本發(fā)明制備粉針劑也可采用噴霧干燥法，以水作為溶媒，其步驟為取知母皂苷B-II，加或不加賦形劑(賦形劑同上)，加水溶解，加入活性炭，過(guò)濾除菌，噴霧干燥，無(wú)菌分裝，壓塞軋蓋即可。每瓶含知母皂苷B-IIl(M00mg。本發(fā)明制備小針劑時(shí)，以注射用水作為溶媒配制即可，也可加適量輔料，輔料選自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸芐酯、二甲基乙酰胺中的一種或幾種。每支含知母皂苷B-II10100mg。本發(fā)明制備葡萄糖輸液或氯化鈉輸液，以注射用水作為溶媒，加入適量葡萄糖或氯化鈉配制即可，也可加適量輔料，輔料選自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸芐酯、二甲基乙酰胺中的一種或幾種。每瓶含知母皂苷B-II10100mg。本發(fā)明制備片劑、膠囊、顆粒劑、口服液等口服制劑，輔料可以是乳糖、淀粉、糊精、硬脂酸鹽等，按常規(guī)技術(shù)制備。在本發(fā)明中，以上所述的具體實(shí)施方式和以下所述的實(shí)例均是為了更好地闡述本發(fā)明，并不是用來(lái)限制發(fā)明的范圍。下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)描述。實(shí)施例1、知母皂苷B-II的制備方法知母總皂苷提取物的制備方法為(1)提取按常規(guī)將粉碎的知母藥材用2095%乙醇熱提，首次溶媒體積用量約為生藥的48倍；或?qū)⒎鬯榈闹杆幉挠?095%乙醇滲漉提取，溶媒體積用量約為生藥的4~12倍；得提取液；將提取液過(guò)濾、濃縮，濃縮液離心或過(guò)濾；(2)分離純化濃縮液的離心上清液或過(guò)濾液通過(guò)非極性或弱極性大孔樹(shù)脂吸附(非極性或弱極性大孔樹(shù)脂為以苯乙烯為架橋材料的聚苯乙烯型多孔性吸附樹(shù)脂，如DlOl、D201、ZTC-1、AB-8、1300-1型大孔樹(shù)脂等)，用水及20%以下的乙醇淋洗除去雜質(zhì)；再用含水低級(jí)醇洗脫，低級(jí)醇為甲醇、乙醇或丙醇等C1C5醇類，其濃度為30~95%，體積用量為生藥的515倍，收集低級(jí)醇洗脫液，濃縮至無(wú)醇；(3)干燥干燥粉碎或噴霧干燥，即為知母總皂苷提取物，成品收率為生藥量的1.5%以上。知母總皂苷提取物成分分析經(jīng)硅膠、sephadexLH-20、ODS等反相色譜擔(dān)體柱色譜獲得了6個(gè)化合物，用化學(xué)、波譜法測(cè)定了結(jié)構(gòu)，分別為薩爾薩皂苷元-3-0-P-D-吡喃葡萄糖基(1—2)-f3-D-吡喃半乳糖苷(簡(jiǎn)稱知母皂苷A-m)、嗎爾考皂苷元-3-o-e-D-吡喃葡萄糖基(1—2)-15-D-吡喃半乳糖苷、26-0-P-0-吡喃葡萄糖基呋甾-20(22)-烯-30,26-二醇-3-0-日-D-吡喃葡萄糖基(1—2)-e-D-吡喃半乳糖苷(簡(jiǎn)稱知母皂苷8)、薩爾薩皂苷元-3-0-13-D-吡喃葡萄糖基(1—3)-0-e-D-吡喃葡萄糖基(1—2)-P-D-吡喃半乳糖苷(簡(jiǎn)稱西陵皂苷B)、26-O-e-0-吡喃葡萄糖基呋甾-22，3P，26-三醇-3-0-P-D-吡喃葡萄糖基(l一2)-0-D-吡喃半乳糖苷(簡(jiǎn)稱知母皂苷B-II)、薩爾薩皂苷元。經(jīng)HPLC檢測(cè)，知母總皂苷提取物中知母皂苷B-II、知母皂苷B的含量之和》50%，知母皂苷B-II含量》30%，該提取物的最優(yōu)比例為知母皂苷B-II、知母皂苷B含量百分比例為7595:15~5。該知母總皂苷提取物的知母皂苷B-II巳能夠滿足一般的實(shí)驗(yàn)需要。實(shí)施例2、知母皂苷B-II的制備方法100公斤粉碎后的知母藥材，投入提取罐，在90100'C依次用70%乙醇400升熱提3次，每次提取時(shí)間為90分鐘，合并3次提取液，濃縮至80升，過(guò)濾，將濾液用蒸餾水調(diào)節(jié)至100升。再緩緩?fù)ㄟ^(guò)裝有350升ZTC-1型大孔樹(shù)脂(天津正天成澄清技術(shù)有限公司生產(chǎn))的吸附柱，用500升蒸餾水、1000升20%乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用1000升45%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，干燥粉碎后得黃色粉末，即為知母總皂苷提取物，共重2.7公斤，按生藥量計(jì)得率為2.7%。該知母總皂苷提取物的知母皂苷B-II也能夠滿足一般的實(shí)驗(yàn)需要。實(shí)施例3、知母皂苷B-II的另一種制備方法將知母藥材切成薄片，取100kg，以30%乙醇300L浸潤(rùn)12小時(shí)后滲漉提取，收集2400L滲漉液。將滲漉液濃縮到150L;濃縮液過(guò)濾，濾液通入裝有200L的D101型樹(shù)脂的色譜柱中，依次用蒸熘水3000L、20。/。乙醇3000L、60%乙醇1200L洗脫，收集60%乙醇洗脫部分，濃縮至干，干燥粉碎后得黃色粉末，即為知母總皂苷提取物，共重3.1公斤，按生藥量計(jì)得率為3.1%。該知母總皂苷提取物的知母皂苷B-II也能夠滿足一般的實(shí)驗(yàn)需要。實(shí)施例4、知母皂苷B-II的再一種制備方法知母干燥藥材2.5kg，用75%乙醇溶液50升回流提取2次，每次2小時(shí)，合并兩次提取液，減壓回收至無(wú)醇味，過(guò)濾得濾液，濾液用蒸餾水調(diào)至相對(duì)密度1.05左右，上AB-8大孔吸附樹(shù)脂柱，用水洗去水溶性雜質(zhì)，繼用不同濃度乙醇洗脫，收集50%乙醇洗脫部位，即得富含酚酸苷類和二萜苷類成分的洗脫液，減壓回收至干，得知知母總皂苷提取物45g。該知母總皂苷提取物的知母皂苷B-II也能夠滿足一般的實(shí)驗(yàn)需要。實(shí)施例5、知母皂苷B-II對(duì)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠3，19-22克，每10只/籠群養(yǎng)，自由覓食和飲水，室溫(23±2)°C，自然光昭。2.實(shí)驗(yàn)方法每組動(dòng)物10只，①空白對(duì)照組，給予與藥物組等體積的生理鹽水；②陽(yáng)性對(duì)照藥組，給予藥物多塞平，劑量50mg/kg;③試驗(yàn)藥物組，給予知母皂苷B-II，分低、中、高劑量，分別為30mg/kg，60mg/kg，120mg/kg。每天上午灌胃一次，連續(xù)給藥7d。末次給藥后1h，將動(dòng)物尾端2cm部位貼在一水平支撐物上，使動(dòng)物成倒掛狀態(tài)，支撐物放置于一敞口箱內(nèi)，其頭部離底面約5cm。記錄小鼠6min內(nèi)不動(dòng)時(shí)間，各組小鼠平行操作。數(shù)據(jù)以(Y士SD)表示，采用Student，s-t檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)差異的顯著性。結(jié)果見(jiàn)表l。表l、知母皂苷B-II對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間的影響(^士SZ)，n=10)懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間(秒)強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間(秒)生理鹽水組139.0±42.8171.9±27.6多塞平組(50mg/kg)承*91.5±41.6114.8士32.6"小劑量組(30mg/kg)105.3±18.6*144.9±25.7*中劑量組(60mg/kg)承水98.9±35.1承承136.6±29.9大劑量組(120mg/kg)承承87±31.9118.2士37.3"*p<0.05;**p<0.01實(shí)施例6、知母皂普B-II對(duì)小鼠游泳不動(dòng)時(shí)間的影響小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)每組動(dòng)物10只，①空白對(duì)照組，給予與藥物組等體積的生理鹽水；②陽(yáng)性對(duì)照藥組，給予藥物多塞平，劑量50mg/kg;③試驗(yàn)藥物組，給予知母皂苷B-II，分低、中、高劑量，分別為30mg/kg，60mg/kg，120mg/kg。每天上午灌胃一次，連續(xù)給藥7d。末次給藥后1h，將小鼠單獨(dú)放入高20cm，直徑14cm的圓柱型玻璃缸中，缸內(nèi)水深10cm，水溫23—25'C。從小鼠入水后記時(shí)6min,記錄后4min內(nèi)的累計(jì)不動(dòng)時(shí)間，各組小鼠平行操作。數(shù)據(jù)以(]f士SD)表示，采用Student，s-t檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)差異的顯著性。結(jié)果見(jiàn)表l。從表1結(jié)果可以看出知母皂苷B-II低、中、高3個(gè)劑量均能明顯縮短小鼠懸尾和強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間，表明知母皂苷B-II具有抗抑郁作用。實(shí)施例7、知母皂苦B-II的利血平對(duì)抗實(shí)驗(yàn)1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠^，19-22克。2.實(shí)驗(yàn)方法對(duì)利血平所致小鼠眼瞼下垂的影響按文獻(xiàn)方法。小鼠每組10只，分成4組，①空白對(duì)照組，給予與藥物組等體積的生理鹽水；②陽(yáng)性對(duì)照藥組，給予藥物多塞平，劑量50mg/kg;③知母皂苷B-I160、120mg/kg。小鼠尾靜脈注射利血平2mg/kg后,立即ig給藥，60min后將動(dòng)物單個(gè)豎放15s，觀察出現(xiàn)眼瞼下垂的動(dòng)物數(shù)，計(jì)算拮抗率，結(jié)果見(jiàn)表2。拮抗率(％)=(每組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)一眼瞼下垂的動(dòng)物數(shù))/每組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)表2、知母皂苷B-II利血平對(duì)抗作用<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>從表2結(jié)果可以看出知母皂苷B-II對(duì)利血平所致小鼠眼瞼下垂具有拮抗作用，表明知母皂苷b-ii具有抗抑郁作用。實(shí)施例8、知母皂苷B-II片劑的制備處方知母皂苷B-II150g淀粉30g乳糖40g羧甲基淀粉鈉5g淀粉衆(zhòng)(7%)適量硬脂酸鎂1%制成1000片工藝取處方量知母皂苷B-II，粉碎過(guò)100目篩，再將處方量的淀粉、乳糖粉碎過(guò)100目篩，混勻。將柚皮苷加入混勻的淀粉和乳糖中，混勻。加入適量50%乙醇拌勻，經(jīng)16目鐵篩絲網(wǎng)制粒，6(TC以下干燥，整粒，加入適量硬脂酸鎂混勻，分析含量后壓片?？芍瞥?000片每片含150mg知母皂苷B-II的片劑。實(shí)施例9、知母皂苷B-II膠嚢劑的制備處方知母皂苷B-II150g淀粉140g微粉硅膠10g制成1000粒工藝取處方量知母皂苷B-n，粉碎過(guò)ioo目篩，加入處方量的淀粉、微粉硅膠中，混勻，直接裝入膠囊，可制成1000粒每粒含150mg知母皂苷B-II的膠囊劑。實(shí)施例IO、知母皂苦B-II粉針劑的制備取知母皂苷B-II30g，加入右旋糖苷30g，加500ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至2000ml，加3.0g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過(guò)濾；用0.22|dm微孔濾膜過(guò)濾；灌裝到無(wú)菌的西林瓶中，每瓶2ml，半軋塞；冷凍干燥，再壓塞軋蓋即可。實(shí)施例11、知母皂苦B-II粉針劑的制備取知母皂苷B-II60g，加500ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加lg針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過(guò)濾；用0.22pm微孔濾膜過(guò)濾；冷凍干燥得無(wú)菌粉末，分裝成1000瓶。實(shí)施例12、知母皂苷B-II粉針劑的制備取知母皂苷B-II40g，加入乳糖50g，加100ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1.5g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過(guò)濾；用0.22^111微孔濾膜過(guò)濾；噴霧干燥得無(wú)菌粉末，分裝成1000瓶。實(shí)施例13、知母皂苦B-II粉針劑的制備(1)處方注射用知母皂苷B-II半成品150g甘露醇400g注射用水加至10000ml共制成10000瓶(2)制備工藝按以上處方稱取處方量知母皂苷B-II，加入到適量注射用水中，攪拌使其溶解；加入處方量甘露醇，攪拌使完全溶解，加注射用水至全量；加入液體量的0.1%針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過(guò)濾；用0.22pm微孔濾膜過(guò)濾；灌裝，半軋塞；冷凍干燥，壓塞軋蓋。共制得9735瓶，成品率為97.35%。實(shí)施例14、知母急苷B-II小針劑的制備取知母皂苷B-II5g，加100ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，用0.22pm微孔濾膜過(guò)濾；分裝灌封，每瓶10ml,滅菌即可。實(shí)施例15、知母皂苷B-II小針劑的制備取知母皂苷B-II10g，加入丙二醇30g，加200ml注射用水水至1000ml，加1.5g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過(guò)濾分裝灌封，每瓶5ml，滅菌即可。實(shí)施例16、知母皂苷B-n葡萄糖輸液的制備取知母皂苷B-II2g，加入聚乙二醇10g，加入葡萄糖500g，加2000ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至5000ml;用0.22|am微孔濾膜過(guò)濾；分裝灌封，每瓶100ml，滅菌即可。，攪拌使其溶解；加注射用;用0.22pm微孔濾膜過(guò)濾;實(shí)施例17、知母皂苷B-II葡萄糖輸液的制備取知母皂苷B-II2g，加入葡萄糖250g，加1000ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至5000ml;用0.22pm微孔濾膜過(guò)濾；分裝灌封，每瓶250ml，滅菌即可。實(shí)施例18、知母皂苷B-II氯化鈉輸液的制備取知母皂苷B-IIlg，加入氯化鈉卯g，加1000ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至10000ml;用0.22pm微孔濾膜過(guò)濾；分裝灌封，每瓶250ml，滅菌即可。權(quán)利要求1.知母皂苷B-II在制備抗抑郁產(chǎn)品中的應(yīng)用。2.知母皂苷b-ii的組合物在制備抗抑郁產(chǎn)品中的應(yīng)用。3.知母皂苷b-ii的藥材原料在制備抗抑郁產(chǎn)品中的應(yīng)用。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的知母皂苷b-ii的藥材原料在制備抗抑郁產(chǎn)品中的應(yīng)用，其特征在于，所述的知母皂苷b-ii的藥材原料是包括知母藥材或知母總皂苷提取物中的一種。5.知母皂苷b-ii的藥材原料的組合物在制備抗抑郁產(chǎn)品中的應(yīng)用。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的知母皂苷b-ii的藥材原料的組合物在制備抗抑郁產(chǎn)品中的應(yīng)用，其特征在于，所述的知母皂苷b-ii的藥材原料是包括知母藥材或知母總皂苷提取物中的一種。7.根據(jù)權(quán)利要求16任一項(xiàng)所述的知母皂苷b-ii的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗抑郁產(chǎn)品是指用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品中的一種。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的知母皂苷b-ii的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗抑郁產(chǎn)品是包括藥物、試劑或食品中的一種。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的知母皂苷b-ii的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗抑郁產(chǎn)品是藥物。10.根據(jù)權(quán)利要求16任一項(xiàng)所述的知母皂苷b-ii的應(yīng)用，其特征在于，所述的知母皂苷b-ii的結(jié)構(gòu)式如下扭3ctoseglucose全文摘要本發(fā)明涉及知母皂苷B-II的新用途。知母總皂苷提取物中知母皂苷B-II的抗抑郁試驗(yàn)顯示了顯著的抗抑郁活性，其藥理作用較強(qiáng)，性質(zhì)穩(wěn)定，其原料來(lái)源豐富、價(jià)廉，安全低毒，制備工藝簡(jiǎn)單，得率高，為預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抑郁癥及其直接相關(guān)疾病提供了一種新的藥物來(lái)源，適于工業(yè)化生產(chǎn)，且容易推廣應(yīng)用，對(duì)開(kāi)發(fā)利用我國(guó)的藥用植物資源具有重要價(jià)值。情感性精神障礙在我國(guó)疾病總負(fù)擔(dān)的排名居前，研制抑郁癥的防治藥物具有顯著的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。文檔編號(hào)A61K31/7042GK101214253SQ20081003232公開(kāi)日2008年7月9日申請(qǐng)日期2008年1月7日優(yōu)先權(quán)日2008年1月7日發(fā)明者佳伊,孫連娜,李鐵軍,毛俊琴,彥邱,陳萬(wàn)生申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)