專利名稱：：虎杖提取物用于制備抗艾滋病毒和抗乙肝病毒產(chǎn)品的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥和食品
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地說是涉及中藥提取物的用途，更具體地說是涉及中藥提取物虎杖提取物用于制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產(chǎn)品的用途，再具體地說是涉及中藥提取物虎杖提取物白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基鈉或鉀鹽(簡(jiǎn)稱化合物1)和白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基鈉或鉀鹽(簡(jiǎn)稱化合物2)用于制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產(chǎn)品的用途。
背景技術(shù)：
：(一)虎杖的研究概況虎杖為蓼科(Polygonaceae)蓼屬植物PolygonumcuspidatumSieb.etZucc.的根莖。多生于山谷、溪旁或岸邊，為多年生灌木狀草本，高達(dá)1米以上?；⒄仁寝た浦蟹浅Ｖ闹兴?。中醫(yī)認(rèn)為，虎杖性味苦、平，具有祛風(fēng)，利濕，破瘀，通經(jīng)的功效；能治風(fēng)濕，筋骨疼痛，濕熱黃疸，淋濁帶下，婦女經(jīng)閉，產(chǎn)后惡露不下，瘡漏下血，跌撲損傷，燙傷，惡瘡癬疾等疾病?；⒄确植加诮K、浙江、江西、福建、山東、河南、陜西、湖北、云南、四川、貴州等中部及南部地區(qū)，春秋均可采挖。由于近年來人們發(fā)現(xiàn)虎杖具有良好的臨床應(yīng)用，已逐漸成為新的研究熱點(diǎn)。虎杖中主要含有二苯乙烯、蒽醌、黃酮類等化學(xué)成分，并具有廣泛的生理活性。發(fā)明人曾經(jīng)對(duì)于虎杖的水溶性部位進(jìn)行了系統(tǒng)研究，分離得到了一系列新的化學(xué)成分。新化合物包括帶硫酸酯基的二苯乙烯類化合物的鈉或鉀鹽(XiaoK.XuanL.XuY.BaiD.StilbeneglycosidesulfatesfromPolygonumcuspidatum.J.Nat.Prod.2000，63(10)1373-1376)，二苯乙烯苷類二聚體(XiaoK.XuanL.XuY.BaiD.ZhongD.WuH.WangZ.ZhangN.DimericstilbeneglycosidesfromPolygonumcuspidatum.Europ.J.Org.Chem.2002564-568)；苯丙素類成分(XiaoK.XuanL.XuY.BaiD.ZhongD.ConstituentsfromPolygonumcuspidatum.Chem.&Pharm.Bull.2002，50(5)605-608)。另外還包括一些已知的化合物等(肖凱，宣利江，徐亞明等.虎杖的化學(xué)成分研究.中國(guó)藥學(xué)雜志.2003，38(1)12-14；肖凱，宣利江，徐亞明等.虎杖的水溶性成分研究，中草藥.2003，34(6)496-498)。其中的化合物1(sodiumorpotassiumtrans-resveratrol-3-O-β-D-glucopyranoside-2″-sulfate)和化合物2(sodiumorpotassiumtrans-resveratrol-3-O-β-D-glucopyranoside-4′-sulfate)為從虎杖中分離得到的兩種二苯乙烯類化合物，是兩種天然化合物，其分子式皆為C20H21O11SNa或者C20H21O11SK，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下化合物1化合物2M＝NaorK近代藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明虎杖具有較好的抗病毒活性，在體外對(duì)多種細(xì)菌及病毒有抑制和滅活作用。例如其對(duì)單純皰疹病毒、流感亞洲甲型京科68-1病毒及?？蒊I型等均有抑制作用(陰健，郭力弓.中藥現(xiàn)代研究與臨床(1)[M].北京學(xué)苑出版社.1993，434-439；NambaT，KurokawaM，KadotaS，ShirakiK.Developmentofantiviraltherapeuticagentsfromtraditionalmedicines.YakugakuZasshi，1998，118(9)383-400)，虎杖與黃芪聯(lián)用對(duì)單純皰疹病毒有很好的協(xié)同抑制作用(王志潔，程仲敏，方學(xué)韞.虎杖黃芪聯(lián)用抗I型皰疹病毒藥效分析.中國(guó)中藥雜志，1999，24(3)176-180.)。虎杖醇提物和水提物體外顯示了較強(qiáng)的抗HBV的活性(ChangJS，LiuHW，WangKC，ChenMC，ChiangLCetal.EthanolextractofPolygonumcuspidatuminhibitshepatitisBvirusinastableHBV-producingcellline.AntiviralResearch，2005，6629-34.)。虎杖水提液在體外可以抑制HIV-1表面的gp120與細(xì)胞表面的CD4結(jié)合，抑制HIV-1感染MT-4細(xì)胞，而且對(duì)HIV-1的逆轉(zhuǎn)錄酶具有顯著的滅活作用(JiangY，SanoK，MolimatoS，etal.Anti-HIV-1activityofPolygonumcuspidatumextractinvitro.JapaneseArchivesofSexuallyTransmitteddiseases，1994，5(1)138-146.)；在體內(nèi)虎杖水提液可以抑制LP-BM5病毒導(dǎo)致的艾滋病模型鼠的脾腫大、免疫抑制及病毒血癥等(蔣巖，王紅霞，鮑作義，等.用鼠艾滋病模型評(píng)價(jià)虎杖水提液的抗病毒作用.中國(guó)病毒學(xué)，1998，13(4)306-311.)。(二)常用中草藥有效成分的提取分離方法1、溶劑提取法(1)原理溶劑提取法是根據(jù)中草藥中各種成分在溶劑中的溶解性質(zhì)，選用對(duì)活性成分溶解度大，對(duì)不需要溶出成分溶解度小的溶劑，而將有效成分從藥材組織內(nèi)溶解出來的方法。當(dāng)溶劑加到中草藥原料(需適當(dāng)粉碎)中時(shí)，溶劑由于擴(kuò)散、滲透作用逐漸通過細(xì)胞壁透入到細(xì)胞內(nèi)，溶解了可溶性物質(zhì)，而造成細(xì)胞內(nèi)外的濃度差，于是細(xì)胞內(nèi)的濃溶液不斷向外擴(kuò)散，溶劑又不斷進(jìn)入藥材組織細(xì)胞中，如此多次往返，直至細(xì)胞內(nèi)外溶液濃度達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡時(shí)，將此飽和溶液濾出，繼續(xù)多次加入新溶劑，就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部溶出。中草藥成分在溶劑中的溶解度直接與溶劑性質(zhì)有關(guān)。溶劑可分為親水性有機(jī)溶劑及親脂性有機(jī)溶劑，被溶解物質(zhì)也有親水性及親脂性的不同。有機(jī)化合物分子結(jié)構(gòu)中親水性基團(tuán)多，其極性大而疏于油；有的親水性基團(tuán)少，其極性小而疏于水。各類溶劑的性質(zhì)，同樣也與其分子結(jié)構(gòu)有關(guān)。這樣，發(fā)明人就可以通過對(duì)中草藥成分結(jié)構(gòu)分析，去估計(jì)它們的此類性質(zhì)和選用的溶劑?？偟恼f來，只要中草藥成分的親水性和親脂性與溶劑的此項(xiàng)性質(zhì)相當(dāng)，就會(huì)在其中有較大的溶解度，即所謂“相似相溶”的規(guī)律。這是選擇適當(dāng)溶劑自中草藥中提取所需要成分的依據(jù)之一。(2)溶劑的選擇運(yùn)用溶劑提取法的關(guān)鍵，是選擇適當(dāng)?shù)娜軇Ｈ軇┻x擇適當(dāng)，就可以比較順利地將需要的成分提取出來。選擇溶劑要注意以下三點(diǎn)①溶劑對(duì)有效成分溶解度大，對(duì)雜質(zhì)溶解度小；②溶劑不能與中藥的成分起化學(xué)變化；③溶劑要經(jīng)濟(jì)、易得、使用安全等。常見的提取溶劑可分為以下三類①水水是一種強(qiáng)的極性溶劑。中草藥中親水性的成分，如無機(jī)鹽、糖類、分子不太大的多糖類、鞣質(zhì)、氨基酸、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸鹽、生物堿鹽及苷類等都能被水溶出。為了增加某些成分的溶解度，也常采用酸水及堿水作為提取溶劑。②親水性的有機(jī)溶劑也就是一般所說的與水能混溶的有機(jī)溶劑，如乙醇(又稱酒精)、甲醇(又稱木精)、丙酮等，以乙醇最常用。乙醇的溶解性能比較好，對(duì)中草藥細(xì)胞的穿透能力較強(qiáng)。親水性的成分除蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、果膠、淀粉和部分多糖等外，大多能在乙醇中溶解。難溶于水的親脂性成分，在乙醇中的溶解度也較大。還可以根據(jù)被提取物質(zhì)的性質(zhì)，采用不同濃度的乙醇進(jìn)行提取。用乙醇提取比用水量較少，提取時(shí)間短，溶解出的水溶性雜質(zhì)也少。乙醇為有機(jī)溶劑，雖易燃，但毒性小，價(jià)格便宜，來源方便，有一定設(shè)備即可回收反復(fù)使用，而且乙醇的提取液不易發(fā)霉變質(zhì)。由于這些原因，用乙醇提取的方法是歷來最常用的方法之一。甲醇的性質(zhì)和乙醇相似，沸點(diǎn)較低(64℃)，但有毒性，使用時(shí)應(yīng)注意。③親脂性的有機(jī)溶劑也就是一般所說的與水不能混溶的有機(jī)溶劑，如石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷等。這些溶劑的選擇性能強(qiáng)，不能或不容易提出親水性雜質(zhì)。但這類溶劑揮發(fā)性大，多易燃(氯仿除外)，一般有毒，價(jià)格較貴，設(shè)備要求較高，且它們透入植物組織的能力較弱，往往需要長(zhǎng)時(shí)間反復(fù)提取才能提取完全。如果藥材中含有較多的水分，用這類溶劑就很難浸出其有效成分，因此，大量提取中草藥原料時(shí)，直接應(yīng)用這類溶劑有一定的局限性。(3)提取方法用溶劑提取中草藥成分，常用浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法及連續(xù)回流提取法等。同時(shí)，原料的粉碎度、提取時(shí)間、提取溫度、設(shè)備條件等因素也都能影響提取效率，必須加以考慮。①浸漬提取法(簡(jiǎn)稱浸漬法)浸漬法系將中草藥粉末或碎塊裝入適當(dāng)?shù)娜萜髦?，加入適宜的溶劑(如乙醇、稀醇或水)，浸漬藥材以溶出其中成分的方法。本法比較簡(jiǎn)單易行，但浸出率較差，且如用水為溶劑，其提取液易發(fā)霉變質(zhì)，須注意加入適當(dāng)?shù)姆栏瘎?。②滲漉提取法(簡(jiǎn)稱滲漉法)滲漉法是將中草藥粉末裝在滲漉器中，不斷添加新溶劑，使其滲透過藥材，自上而下從滲漉器下部流出浸出液的一種浸出方法。當(dāng)溶劑滲進(jìn)藥粉、溶出成分比重加大而向下移動(dòng)時(shí)，上層的溶液或稀浸液便置換其位置，造成良好的濃度差，使擴(kuò)散能較好地進(jìn)行，故浸出效果優(yōu)于浸漬法。但應(yīng)控制流速，在滲渡過程中隨時(shí)自藥面上補(bǔ)充新溶劑，使藥材中有效成分充分浸出為止?；虍?dāng)滲滴液顏色極淺或滲涌液的體積相當(dāng)于原藥材重的10倍時(shí)，便可認(rèn)為基本上已提取完全。在大量生產(chǎn)中常將收集的稀浸出液作為另一批新原料的溶劑之用。③煎煮提取法(簡(jiǎn)稱煎煮法)煎煮法是中國(guó)最早使用的傳統(tǒng)的浸出方法。所用容器一般為陶器、砂罐或銅制、搪瓷器皿，不宜用鐵鍋，以免藥液變色。直火加熱時(shí)最好時(shí)常攪拌，以免局部藥材受熱太高，容易焦糊。有蒸汽加熱設(shè)備的藥廠，多采用大反應(yīng)鍋、大銅鍋、大木桶，或水泥砌的池子中通入蒸汽加熱。還可將數(shù)個(gè)煎煮器通過管道互相連接，進(jìn)行連續(xù)煎浸。④加熱回流提取法應(yīng)用有機(jī)溶劑加熱提取，需采用回流加熱裝置，以免溶劑揮發(fā)損失。小量操作時(shí)，可在圓底燒瓶上連接回流冷凝器。瓶?jī)?nèi)裝藥材約為容量的20％～60％，溶劑浸過藥材表面約1～2cm。在水浴中加熱回流，一般保持沸騰3～6小時(shí)，放冷過濾，再在藥渣中加溶劑，作第二、三次加熱回流分別約半小時(shí)，或至基本提盡有效成分為止。此法提取效率較冷浸法高，大量生產(chǎn)中多采用連續(xù)提取法。⑤連續(xù)回流提取法應(yīng)用揮發(fā)性有機(jī)溶劑提取中草藥有效成分，不論小型實(shí)驗(yàn)或大型生產(chǎn)，均以連續(xù)提取法為好，而且需用溶劑量較少，提取成分也較完全。實(shí)驗(yàn)室常用脂肪提取器或稱索氏提取器。連續(xù)提取法，一般需數(shù)小時(shí)才能提取完全。提取成分受熱時(shí)間較長(zhǎng)，遇熱不穩(wěn)定易變化的成分不宜采用此法。2、分離和純化方法上述提取法所得到的中草藥提取液或提取物仍然是混合物，需進(jìn)一步除去雜質(zhì)，分離并進(jìn)行精制。(1)溶劑分離法一般是將上述總提取物，選用三、四種不同極性的溶劑，由低極性到高極性分步進(jìn)行提取分離。水浸膏或乙醇浸膏常為膠狀物，難以均勻分散在低極性溶劑中，故不能提取完全，可拌入適量惰性填充劑，如硅藻土或纖維粉等，然后低溫或自然干燥，粉碎后，再以選用溶劑依次提取，使總提取物中各組成成分，依其在不同極性溶劑中溶解度的差異而得到分離。利用中草藥化學(xué)成分，在不同極性溶劑中的溶解度進(jìn)行分離純化，是最常用的方法。(2)溶劑萃取法①萃取法溶劑提取萃取法又簡(jiǎn)稱萃取法，是利用混合物中各成分在兩種互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的不同而達(dá)到分離的方法。萃取時(shí)如果各成分在溶劑中分配系數(shù)相差越大，則分離效率越高；如果在水提取液中的有效成分是親脂性的物質(zhì)，一般多用親脂性有機(jī)溶劑，如苯、氯仿或乙醚進(jìn)行萃取，如果有效成分是偏于親水性的物質(zhì)，在親脂性溶劑中難溶解，就需要改用弱親脂性的溶劑，例如乙酸乙酯、丁醇等。還可以在氯仿、乙醚中加入適量乙醇或甲醇以增大其親水性。提取黃酮類成分時(shí)，多用乙酸乙脂和水萃取。提取親水性強(qiáng)的皂苷則多選用正丁醇、異戊醇和水作萃取。不過，一般有機(jī)溶劑親水性越大，與水作萃取的效果就越不好，因?yàn)槟苁馆^多的親水性雜質(zhì)伴隨而出，對(duì)有效成分進(jìn)一步精制影響很大。②逆流連續(xù)萃取法是一種連續(xù)的溶劑萃取法。其裝置可具有一根、數(shù)根或更多的萃取管。管內(nèi)用小瓷圈或小的不銹鋼絲圈填充，以增加溶劑萃取時(shí)的接觸面。如果一種中草藥的水浸液需要用比水輕的苯、乙酸乙酯等進(jìn)行萃取，則需將水提濃縮液裝在萃取管內(nèi)，而苯、乙酸乙酯貯于高位容器內(nèi)。萃取是否完全，可取樣品用薄層層析、紙層析及顯色反應(yīng)或沉淀反應(yīng)進(jìn)行檢查。③逆流分配法逆流分配法又稱逆流分溶法、逆流分布法或反流分布法。逆流分配法與溶劑逆流萃取法原理一致，但加樣量一定，并不斷在一定容量的溶劑中，經(jīng)多次移位萃取分配而達(dá)到混合物的分離。④液滴逆流分配法液滴逆流分配法又稱液滴逆流層析法。為近年來在逆流分配法基礎(chǔ)上改進(jìn)的溶劑萃取法。對(duì)溶劑系統(tǒng)的選擇基本同逆流分配法，但要求能在短時(shí)間內(nèi)分離成，并可生成有效的液滴。由于移動(dòng)相形成液滴，在細(xì)的分配萃取管中與固定相有效地接觸、摩擦不斷形成新的表面，促進(jìn)溶質(zhì)在溶劑中的分配，故其分離效果往往比逆流分配法好。(3)大孔吸附樹脂法大孔吸附樹脂是20世紀(jì)60年代發(fā)展起來的一類有機(jī)高聚物吸附劑，具有良好的吸附性能，近十余年來逐漸被應(yīng)用于中草藥化學(xué)成分的提取分離和中藥新藥的開發(fā)研制。大孔吸附樹脂為吸附和篩選原理相結(jié)合的分離材料。它的吸附性是由于范德華引力或生成氫鍵的結(jié)果。篩選原理是由于其本身多孔性結(jié)構(gòu)所決定。由于吸附和篩選原理，有機(jī)化合物根據(jù)吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附樹脂上經(jīng)一定的溶劑洗脫而分開。這使得有機(jī)化合物尤其是水溶性化合物的提純得以大大簡(jiǎn)化。大孔吸附樹脂的骨架由苯乙烯和二乙烯苯縮聚而生成，由于改性劑的加入，大孔吸附樹脂的極性發(fā)生改變，按照樹脂的表面性質(zhì)，吸附樹脂一般分為非極性、中極性和極性三類。非極性吸附樹脂是由偶極矩很小的單體聚合物制得的不帶任何功能基的吸附樹脂。典型的例子是苯乙烯-二乙烯苯體系的吸附樹脂，如D101、XAD-1、DiaionHP-10大孔吸附樹脂。中極性吸附樹脂指含酯基的吸附樹脂，如丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯與雙甲基丙烯酸酯等交聯(lián)的一類共聚物。它是在非極性大孔吸附樹脂的基礎(chǔ)上，加入丙烯酸甲酯或丙烯腈縮聚而成，如中國(guó)國(guó)內(nèi)經(jīng)常使用的AB-8大孔吸附樹脂。極性吸附樹脂是指含酰胺基、腈基、酚羥基等含氮、氧、硫極性功能基的吸附樹脂。此外，有時(shí)把含氮、氧、硫等配體基團(tuán)的離子交換樹脂稱作強(qiáng)極性吸附樹脂，強(qiáng)極性吸附樹脂與離子交換樹脂的界限很難區(qū)別。極性大孔吸附樹脂可以由甲基丙烯酸甲酯、丙烯酰胺或亞砜類縮聚而成，如日本三菱化工的DiaionHP2MG、美國(guó)Rohm-hass公司的XAD-10，XAD-9大孔吸附樹脂。與活性炭和其它吸附劑相比，大孔吸附樹脂具有很多的優(yōu)點(diǎn)，如對(duì)某種物質(zhì)的吸附選擇性較高；物理化學(xué)穩(wěn)定性和機(jī)械強(qiáng)度較好；品種規(guī)格較多，可根據(jù)需要改變樹脂物理或化學(xué)結(jié)構(gòu)；吸附樹脂一般為球狀顆粒，流體阻力較小等等。因而被廣泛應(yīng)用于化工、醫(yī)藥等領(lǐng)域，近年來關(guān)于大孔吸附樹脂在天然產(chǎn)物提取分離中的應(yīng)用研究報(bào)道越來越多。大孔吸附樹脂對(duì)中草藥化學(xué)成分如生物堿、黃酮、皂苷、香豆素及其他一些苷類成分都有一定的吸附作用。對(duì)糖的吸附能力很差，對(duì)色素的吸附能力較強(qiáng)。(4)沉淀法是在中草藥提取液中加入某些試劑使產(chǎn)生沉淀，以獲得有效成分或除去雜質(zhì)的方法。如鉛鹽沉淀法鉛鹽沉淀法為分離某些中草藥成分的經(jīng)典方法之一。由于醋酸鉛及堿式醋酸鉛在水及醇溶液中，能與多種中草藥成分生成難溶的鉛鹽或絡(luò)鹽沉淀，故可利用這種性質(zhì)使有效成分與雜質(zhì)分離。然后將鉛鹽沉淀懸浮于新溶劑中，通以硫化氫氣體，使分解并轉(zhuǎn)為不溶性硫化鉛而沉淀。(5)鹽析法鹽析法是在中草藥的水提液中，加入無機(jī)鹽至一定濃度，或達(dá)到飽和狀態(tài)，可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出，而與水溶性大的雜質(zhì)分離。常用作鹽析的無機(jī)鹽有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。(6)透析法透析法是利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過半透膜，而大分子物質(zhì)不能通過半透膜的性質(zhì)，達(dá)到分離的方法。反之也可將大分子的雜質(zhì)留在半透膜內(nèi)，而將小分子的物質(zhì)通過半透膜進(jìn)入膜外溶液中，而加以分離精制。(7)結(jié)晶、重結(jié)晶和分步結(jié)晶法鑒定中草藥化學(xué)成分，研究其化學(xué)結(jié)構(gòu)，必須首先將中草藥成分制備成單體純品。在常溫下，物質(zhì)本身性質(zhì)是液體的化合物，可分別用分餾法或?qū)游龇ㄟM(jìn)行分離精制。一般地說，中草藥化學(xué)成分在常溫下多半是固體的物質(zhì)，都具有結(jié)晶體的通性，可以根據(jù)溶解度的不同用結(jié)晶法來達(dá)到分離精制的目的。3、常用干燥方法(1)真空干燥是基于這樣一基本原理水的飽和蒸氣壓與溫度緊密相關(guān)，在真空狀態(tài)下，水的沸點(diǎn)降低，即在真空下操作也就是在低溫下操作，可避免在高溫下營(yíng)養(yǎng)成分如維生素等的破壞，同時(shí)提高了干燥速度。真空干燥在食品、制藥、化工等行業(yè)有廣泛的應(yīng)用，中國(guó)也開發(fā)和引進(jìn)了各種真空干燥設(shè)備，其結(jié)構(gòu)形式多種多樣。常用的形式主要有箱式真空干燥器、雙錐式真空干燥器、帶式真空干燥器等。這些傳統(tǒng)的真空干燥裝置主要采用熱風(fēng)，蒸汽或電等加熱，利用熱傳導(dǎo)、對(duì)流或輻射原理將熱量從外部傳到物料內(nèi)部。真空干燥具有干燥溫度低，干燥室內(nèi)相對(duì)缺氧，可避免脂肪氧化，色素褐變等一系列優(yōu)點(diǎn)，適合于熱敏感性食品物料的干燥，此外設(shè)備成本、干燥費(fèi)用也相對(duì)較低。(2)噴霧干燥是流化技術(shù)用于液態(tài)物料干燥的一種方法。因是瞬間干燥，特別適用于熱敏性物料，故所得產(chǎn)品質(zhì)量好，保持原來的色香味，且易溶解。利用噴霧干燥來制備微囊的研究正在進(jìn)行，它是將心料混懸在衣料的溶液中，經(jīng)離心噴霧器將其噴入熱氣流中，所得的產(chǎn)品是衣料包心料而成的微囊，這種微囊粉末可采用于直接壓片，也可制備膠囊劑、糖漿劑或混懸劑。(3)冷凍干燥是將干燥液體物料冷凍成固體，在低溫減壓條件下利用冰的升華性能，使物料低溫脫水而達(dá)到干燥的一種方法。由于物料在高度真空及低溫條件下干燥，故對(duì)某些極不耐熱物品的干燥很適合。王大林報(bào)道了一種噴霧通氣凍干新技術(shù)，是利用冷的空氣或氮?dú)庾鳛榻橘|(zhì)，迅速流經(jīng)凍結(jié)物使水升華，噴霧凍干制得的產(chǎn)品微粒小、干燥快、時(shí)間短、均勻、流動(dòng)性好，并具良好的速溶性。近年來，對(duì)膏狀物料和粘稠物料干燥的研究取得了較大進(jìn)展，流態(tài)化技術(shù)、噴射技術(shù)、惰性載體技術(shù)，則是在此研究基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。旋轉(zhuǎn)閃蒸干燥機(jī)、熱噴射氣流干燥機(jī)、惰性載體干燥機(jī)均適合熱敏性物料和膏狀物料的干燥。這些新的研究成果用于中藥制劑生產(chǎn)，將大大改善中藥加工的技術(shù)水平，提高生產(chǎn)效率。(4)遠(yuǎn)紅外加熱干燥法是一項(xiàng)新的干燥技術(shù)，其干燥原理是將電能轉(zhuǎn)變?yōu)檫h(yuǎn)紅外輻射，從而被藥材的分子吸收，產(chǎn)生共振，引起分子和原子的振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)，導(dǎo)致物體變熱，經(jīng)過熱擴(kuò)散、蒸發(fā)和化學(xué)變化，最終達(dá)到干燥的目的。遠(yuǎn)紅外干燥可節(jié)省電能20％～50％，效果較好。(5)微波干燥法是一項(xiàng)20世紀(jì)60年代迅速發(fā)展起來的新技術(shù)，微波干燥實(shí)際上是通過感應(yīng)加熱和介質(zhì)加熱，使被干燥物中的水分和脂肪不同程度地吸收微波能量，并把它轉(zhuǎn)變?yōu)闊崃繌亩_(dá)到干燥的目的。微波干燥可殺滅微生物和霉菌，并具有消毒作用。目前中國(guó)生產(chǎn)的微波加熱成套設(shè)備有915mhz和2450mhz兩個(gè)頻率。(三)艾滋病和乙型肝炎的研究概況1、概述病毒感染性疾病特別是艾滋病和乙型肝炎嚴(yán)重威脅人類健康和生命。目前艾滋病在全球流行日益猖獗，聯(lián)合國(guó)艾滋病聯(lián)合規(guī)劃署公布，截止到2005年底全球艾滋病毒(humanimmunodeficiencyvirus，簡(jiǎn)稱HIV)感染者達(dá)6500萬以上(①WHOhttp://www.unaids.org/en/KnowledgeCentre/HIVData/GlobalReport/Default.asp；②劉佳，高峰，魯鳳民，莊輝.HIV/AIDS全球流行現(xiàn)狀.傳染病信息.2006，19(5)228-232.)。艾滋病在亞洲也正以驚人速度蔓延，中國(guó)艾滋病流行情況也非常嚴(yán)重，目前有感染者約100萬，且每年以30％的速度增長(zhǎng)，估計(jì)到2010年將達(dá)到1000萬，相當(dāng)于整個(gè)比利時(shí)的人口(①傅繼華.艾滋病流行現(xiàn)況及面臨的問題與挑戰(zhàn).預(yù)防醫(yī)學(xué)論壇.2007，13(3)I0001-I0002，②PortsmouthS，StebbingJ，KeyiX，JianpingZ，GuohuaP.HIVandAIDSinthePeople′sRepublicofChinaacollaborativereview.IntJSTDAIDS，2003，14(11)757-61.)。乙型肝炎是影響人類健康的主要疾病之一。全世界感染過HBV的人數(shù)大約超過20億，目前有3.5億慢性乙肝患者(參見①Fung，S.K.Luk，A.S.Viralhepatitis.Curr.Opin.Gastroenterol.2003，20241-247，②McMahonBJ.EpidemiologyandnaturalhistoryofhepatitisB.SeminLiverDis，2005，25(Suppl1)3-8)。中國(guó)則是病毒性肝炎發(fā)病率較高的國(guó)家，七億多人感染過乙肝病毒，總感染率達(dá)57％，共有一億多人攜帶乙肝病毒，現(xiàn)有慢性乙肝患者三千萬人以上，并且每年急性乙肝新發(fā)病例多達(dá)三百萬例。所謂的“無癥狀帶毒者”中60％～70％肝活檢病理報(bào)告為慢性遷延性肝炎或慢性活動(dòng)性肝炎，長(zhǎng)期的乙肝病毒感染將導(dǎo)致肝硬化、部分發(fā)展成肝癌，是主要死因之一(畢勝利.針對(duì)問題深入研究中國(guó)的病毒性肝炎.中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志，2002，16(1)5-6.)。2、抗病毒藥物自艾滋病流行以來，抗病毒藥物的研究與開發(fā)進(jìn)入了快速發(fā)展時(shí)期，新的藥物不斷面市。主要有以下幾種核苷類藥物，如阿昔洛韋(acyclovir)，羥甲基無環(huán)鳥苷(更昔洛韋，ganciclovir)，拉米夫定(lamivudine)等；非核苷類藥物，利巴韋林(vibarvirin)和金剛烷胺(amantadine)；其他類藥物如α-干擾素等(α-interferon)。上述幾類藥物可以部分緩解癥狀，延長(zhǎng)生存期，但也有明顯的缺點(diǎn)。即它們大都具有嚴(yán)重的毒副反應(yīng)，且由于病毒很容易變異，故很快會(huì)出現(xiàn)耐藥性；由于嚴(yán)重的毒副反應(yīng)，患者治療依從性差，不能堅(jiān)持，進(jìn)一步促進(jìn)耐藥性的產(chǎn)生；藥品價(jià)格昂貴；它們大都是對(duì)活躍復(fù)制的病毒有效，而不能清除潛伏狀態(tài)或非復(fù)制期病毒，且停藥后易復(fù)發(fā)。這使得它們的應(yīng)用受到極大限制(參見①陶佩珍.抗艾滋病病毒藥物研究進(jìn)展.中國(guó)新藥雜志，2002，11(11)842-846，②GulickRM.Newantiretroviraldrugs.ClinMicrobiolInfect，2003，9(3)186-193，③LaurenceJ.HIVtherapeuticsinchildrenandadultsandtheirsideeffects.AIDSRead，2004，14(1)6-7，④BourinbaiarAS，JirathitikalV.Low-costanti-HIVcompoundspotentialapplicationforAIDStherapyindevelopingcountries.CurrPharmDes，2003，9(18)1419-1431，⑤ThomasC，NelsonM，StebbingJ.HIVandHepatitisBAReview.AIDSPatientCareandSTDs.2003，17(12)623-633.)。3、體外抗艾滋病毒模型采用化合物對(duì)HIV誘導(dǎo)宿主細(xì)胞形成合胞體的抑制實(shí)驗(yàn)。HIV在體內(nèi)外均能感染人T淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞。一般來說，細(xì)胞水平的方法可用于篩選和研究抑制病毒復(fù)制周期中任一靶點(diǎn)的化合物。化合物對(duì)HIV誘導(dǎo)宿主細(xì)胞形成合胞體的抑制實(shí)驗(yàn)就是一個(gè)常用來篩選抗HIV活性的細(xì)胞模型。我們體外抗艾滋病毒實(shí)驗(yàn)采用人T淋巴細(xì)胞系C8166。HIV感染C8166細(xì)胞產(chǎn)生大的合胞體細(xì)胞和膨脹化效應(yīng)，4～6d內(nèi)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。利用MTT法測(cè)試藥物對(duì)于對(duì)HIV-1IIIB致細(xì)胞病變(CPE)的抑制活性，確定其對(duì)C8166細(xì)胞存活和增殖的影響。在倒置顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù)含有不同稀釋濃度的化合物和不含待測(cè)化合物培養(yǎng)孔中的合胞體細(xì)胞數(shù)，計(jì)算出抑制率和EC50(鄭永唐.抗HIV藥物的體外篩選和研究方法.中國(guó)新藥雜志，2002，11(8)596-600.)。4、體內(nèi)抗艾滋病毒模型包括靈長(zhǎng)類和非靈長(zhǎng)類動(dòng)物模型。靈長(zhǎng)類包括人免疫缺陷病毒I型(黑猩猩)、II型(狒狒)、猴免疫缺陷病毒(簡(jiǎn)稱SIV)等模型。非靈長(zhǎng)類動(dòng)物這類動(dòng)物模型屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒慢病毒感染所致。其中研究最多的是感染并使有蹄動(dòng)物致病的病毒綿羊肺腺瘤-脫髓鞘性腦白質(zhì)炎病毒(簡(jiǎn)稱MVV)、山羊關(guān)節(jié)-腦炎病毒(簡(jiǎn)稱CAEV)、馬傳染性貧血病毒(簡(jiǎn)稱EIAV)和新發(fā)現(xiàn)的牛免疫缺陷病毒(簡(jiǎn)稱BIV)(參見楊傳波，徐興然，蔡家利.人類艾滋病動(dòng)物模型研究進(jìn)展.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展.2005，26(3)46-50.)。5、抗乙型肝炎病毒細(xì)胞模型選用HBV轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株HepG2-2.2.15細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)的模型。由于缺乏更好的細(xì)胞和動(dòng)物模型，能在體外長(zhǎng)期培養(yǎng)的肝源性腫瘤細(xì)胞株HepG2-2.2.15是目前用于體外篩選抗HBV藥物的主要細(xì)胞模型。HepG2-2.2.15細(xì)胞是將含有HBV基因組(2個(gè)HBV頭對(duì)尾二聚體以尾對(duì)尾方向串聯(lián))的重組載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG-2細(xì)胞，經(jīng)G418篩選，得到的克隆能穩(wěn)定分泌HBsAg、HBeAg、HBcAg及Dane顆粒，并可檢測(cè)到細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA等各種中間復(fù)制體，還能分泌前s1和前S2。該細(xì)胞株能夠穩(wěn)定復(fù)制HBV病毒顆粒，是一個(gè)非常成熟的體外模型，廣泛被用于抗HBV藥物的體外篩選與評(píng)價(jià)。(參見①SellMA，ChenML，AcsG.ProductionofhepatitisBvirusparticlesinHepG2cells.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1987，84，1005-1009；②SellsMA，ZelentAZ，ShvartsmanM，AcsG.ReplicativeintermediatesofhepatitisBvirusinHepG2cellsthatproduceinfectiousvirions.J.Virol.1988，622836-2844；③LamperticoP，MaherJS，GerberMA.Developmentandapplicationofaninvitromodelforscreeninganti-hepatitisBvirustherapeutics.Hepatology，1991，13422-426.)。6、抗乙型肝炎病毒體內(nèi)模型應(yīng)用NOD.CB17-Prkdcscid/JHBV轉(zhuǎn)基因鼠模型。NOD.CB17-Prkdcscid/JHBV轉(zhuǎn)基因鼠模型是一個(gè)應(yīng)用較為廣泛的乙型肝炎病毒(HBV)動(dòng)物模型(LarkinJ，ClaytonM，SunB，PerchonockCE，etal.HepatitisBvirustransgenicmousemodelofchronicliverdisease.Nat.Med.1999，5907-912；MorrisseyDV，LockridgeJA，ShawL，BlanchardK，etal.Potentandpersistentinvivoanti-HBVactivityofchemicallymodifiedsiRNAs.Nat.Biotechnol.23(8)1002-1007.)。該模型是將HBV載體尾靜脈高壓注射入NOD.CB17-Prkdcscid/J鼠，該鼠是免疫缺陷小鼠，缺乏成熟的T細(xì)胞和B細(xì)胞，并且自然殺傷細(xì)胞的活性也大部分缺失。全長(zhǎng)HBV基因的頭尾二聚體pWTD被用作HBV的載體尾靜脈高壓注射入。這種HBV轉(zhuǎn)基因鼠伴有單核細(xì)胞侵潤(rùn)的肝炎可以模擬人類的肝炎，可以用于研究導(dǎo)致乙肝發(fā)病的免疫成分和病毒的抗原靶標(biāo)。因此結(jié)合中國(guó)的傳統(tǒng)中草藥，從中發(fā)掘有效、低毒、價(jià)廉的抗病毒藥物特別是抗艾滋病毒和乙型肝炎病毒藥物，具有非常重要的意義。經(jīng)文獻(xiàn)檢索等，到目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)有此兩種化合物在用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病毒和乙型肝炎病毒及其直接相關(guān)疾病方面的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所需要解決的技術(shù)問題是公開了一種中藥虎杖提取物抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒的作用，即該提取物用于制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產(chǎn)品的活性成分化合物1和化合物2，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷。也就是說，本發(fā)明通過細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等研究，意在明確一種虎杖提取物在抗艾滋病毒和乙型肝炎病毒應(yīng)用方面的活性，即本發(fā)明涉及一種虎杖提取物的新用途。所述的虎杖提取物是指白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基鈉或鉀鹽(簡(jiǎn)稱化合物1)和白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基鈉或鉀鹽(簡(jiǎn)稱化合物2)。虎杖提取物中的化合物1和化合物2均是抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒的活性成分，其使用方式是包括分別單獨(dú)使用、兩者合并使用或與其他化學(xué)物質(zhì)聯(lián)合使用等中的一種，優(yōu)選分別單獨(dú)使用，均能夠用于制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產(chǎn)品。所述的抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產(chǎn)品是指用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品中的一種或多種；所述的艾滋病是包括HIV-1型艾滋病和HIV-2型艾滋病中的一種，優(yōu)選HIV-1型艾滋病。所述的抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產(chǎn)品均是包括醫(yī)藥和食品等領(lǐng)域產(chǎn)品中的一種，是包括藥物、試劑或食品等中的一種或多種，優(yōu)選藥物。(一)技術(shù)構(gòu)思自主開發(fā)創(chuàng)新藥物是中國(guó)目前的一項(xiàng)緊迫任務(wù)，中國(guó)中醫(yī)藥學(xué)具有悠久的歷史，用中草藥預(yù)防和治療疾病方面也積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，因此從中藥中尋找有效的活性成分或發(fā)現(xiàn)其新的用途均是有效的快捷途徑，也是中國(guó)創(chuàng)新藥物研制的優(yōu)勢(shì)之所在。發(fā)明人通過對(duì)單味虎杖藥材的提取物進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，篩選并證明該提取物的活性和用途。發(fā)明人從而推測(cè)虎杖的在預(yù)防、診斷、保護(hù)和治療艾滋病和乙型肝炎等方面活性的臨床藥效，也應(yīng)主要是通過活性部位虎杖提取物特別是化合物1和化合物2的藥效來發(fā)揮的，研究結(jié)果也證明和證實(shí)了虎杖提取物特別是化合物1和化合物2具有顯著的藥理活性。艾滋病和乙型肝炎嚴(yán)重影響中國(guó)人口的健康，研制治療艾滋病和乙型肝炎藥物，尤其是預(yù)防、診斷、保護(hù)和治療艾滋病和乙型肝炎等方面產(chǎn)品特別是藥物具有顯著的社會(huì)效益、經(jīng)濟(jì)效益。(二)虎杖提取物的藥理活性本發(fā)明對(duì)虎杖提取物在預(yù)防、診斷、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎等方面的活性進(jìn)行了多方面的試驗(yàn)。供試樣品均是采取常規(guī)的制備方法獲得，所得到的虎杖粗提物中的化合物1含量一般＜50％、化合物2含量一般＜60％，但是通過對(duì)虎杖粗提物進(jìn)行純化，能夠得到純化后的虎杖提取物，其中的化合物1和化合物2的純度均能夠在95％以上，即本發(fā)明所定義的虎杖提取物。也就是說，采用虎杖提取物的主要成分化合物1和化合物2為原料，或者是直接采用含有化合物1和化合物2的虎杖藥材為原料，或者直接采用含有化合物1和化合物2的虎杖粗提物為原料，都能夠直接或間接用于制備抗抑郁產(chǎn)品?；⒄忍崛∥飪?yōu)選以基本純的形式使用，如化合物1和化合物2的純度均≥95％。虎杖提取物艾滋病和乙型肝炎預(yù)防、診斷、保護(hù)和治療活性的體外試驗(yàn)1、化合物1和化合物2的抗HIV活性體外抗艾滋病毒實(shí)驗(yàn)采用人T淋巴細(xì)胞系C8166。利用MTT法測(cè)試藥物對(duì)于對(duì)HIV-1IIIB致細(xì)胞病變(簡(jiǎn)稱CPE)的抑制活性，結(jié)果表明，化合物1對(duì)HIV誘導(dǎo)C8166細(xì)胞形成合胞體有明顯的抑制活性，對(duì)艾滋病毒具有顯著的抑制作用，其CC50＞2000μg/mL，EC50為153.42μg/mL，治療指數(shù)為＞13.04(見表1和表2)。并且該化合物水溶性很好，細(xì)胞毒性很低或者說無毒可以作為治療艾滋病的先導(dǎo)化合物。表1、化合物1和化合物2對(duì)C8166細(xì)胞的毒性作用表2、化合物1和化合物2對(duì)HIV-1IIIB誘導(dǎo)C8166細(xì)胞病變的抑制作用2、化合物1和化合物2的體外抗HBV活性體外抗乙型肝炎病毒試驗(yàn)選用HBV轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株HepG2-2.2.15細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)的模型。該細(xì)胞株能夠穩(wěn)定復(fù)制HBV病毒顆粒，廣泛被用于抗HBV藥物的體外篩選。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(見表3、表4)化合物1和化合物2均對(duì)HBVDNA的復(fù)制具有顯著抑制活性，化合物1和化合物2還能夠明顯抑制HBV表面抗原HBsAg的分泌。進(jìn)一步研究表明該作用具有一定的劑效關(guān)系。并且發(fā)現(xiàn)該化合物在實(shí)驗(yàn)濃度下，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)無明顯的毒性。表3、化合物不同濃度對(duì)HepG2-2.2.15細(xì)胞中HBVDNA拷貝數(shù)(log10copies/mL)影響*P＜0.05，與DMSO組比較；**P＜0.01，與DMSO組比較；***P＜0.001，與DMSO組比較。表4、化合物不同濃度對(duì)HepG2-2.2.15細(xì)胞中HBVHbsAg(ng/mL)分泌的影響*P＜0.05，與DMSO組比較；**P＜0.01，與DMSO組比較；***P＜0.001，與DMSO組比較。3、化合物1和化合物2的體內(nèi)抗HBV活性體內(nèi)抗乙型肝炎病毒(簡(jiǎn)稱HBV)活性應(yīng)用NOD.CB17-Prkdcscid/JHBV轉(zhuǎn)基因鼠模型。研究發(fā)現(xiàn)，化合物1和化合物2可以顯著降低模型鼠體內(nèi)HBVDNA的拷貝數(shù)(見表5)，降低血清中HbsAg的水平(見表6)。研究還發(fā)現(xiàn)，化合物1和化合物2在轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)的抗HBV活性呈現(xiàn)一定的的劑效關(guān)系(見表7和表8)。表5、化合物對(duì)轉(zhuǎn)基因鼠中HBVDNA拷貝數(shù)(log10copies/mL)的影響*P＜0.05，在相同時(shí)段里，與PBS組比較；**P＜0.01在相同時(shí)段里，與PBS組比較。表6、化合物對(duì)轉(zhuǎn)基因鼠中HBVHbsAg(ng/mL)分泌的影響*P＜0.05，在相同時(shí)段里，與PBS組比較；**P＜0.01，在相同時(shí)段里，與PBS組比較。表7、化合物不同劑量對(duì)轉(zhuǎn)基因鼠中HBVDNA拷貝數(shù)(log10copies/mL)的影響*P＜0.05，與PBS組比較；**P＜0.01，與PBS組比較；***P＜0.001，與PBS組比較。表8、化合物不同劑量對(duì)轉(zhuǎn)基因鼠中HBVHbsAg(ng/mL)分泌的影響*P＜0.05，與PBS組比較；**P＜0.01與PBS組比較；***P＜0.001，與PBS組比較。(三)虎杖提取物的提取方法本發(fā)明以中國(guó)江蘇所產(chǎn)的虎杖為原料，采用溶劑提取和多種層析方法，分離得到此兩種天然化合物。采用紫外光普、紅外光譜、質(zhì)譜、核磁共振氫譜和碳譜等方法，確定了該兩種化合物的結(jié)構(gòu)為白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基鈉或鉀鹽和白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基鈉或鉀鹽。本發(fā)明所述的虎杖提取物特別是化合物1和化合物2能夠通過下述方法制備得到本發(fā)明所說的虎杖提取物的制備方法包括如下步驟(1)提取取虎杖原料若干，提取，得提取液，即虎杖粗提物；(2)分離純化將該粗提物分離純化，即得虎杖提取物。所述的提取方法包括溶劑提取法等本領(lǐng)域公知的所有可以使用的方法。上文所述的溶劑提取法的提取方法是本領(lǐng)域的常規(guī)提取方法，也就是說包括常用的超聲提取法、浸漬提取法、滲漉提取法、煎煮提取法、加熱回流提取法或連續(xù)回流提取法等中的一種或多種，優(yōu)選加熱回流提取法或滲漉提取法；提取次數(shù)可以是一次或者是多次。同時(shí)，原料的粉碎度、提取時(shí)間、提取溫度、設(shè)備條件等因素也都能影響提取效率，必須加以考慮。各種提取方法包括技術(shù)細(xì)節(jié)在內(nèi)的所有技術(shù)資料，均可以參見有關(guān)的教材和相關(guān)的技術(shù)文獻(xiàn)等。上文所述的溶劑提取法所使用的提取溶劑是本領(lǐng)域的常規(guī)提取溶劑，也就是說包括常見的水、親水性的有機(jī)溶劑或親脂性的有機(jī)溶劑等三類提取溶劑的一種或多種；所述的水是包括水、酸水或堿水等中的一種；所述的親水性的有機(jī)溶劑是一般所說的與水能混溶的有機(jī)溶劑，包括乙醇、乙醇水溶液、甲醇或丙酮等中的一種或多種，優(yōu)選乙醇或不同濃度的乙醇水溶液等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選不同濃度的乙醇水溶液；所述的親脂性的有機(jī)溶劑是一般所說的與水不能混溶的有機(jī)溶劑，包括石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷或二氯乙烷等中的一種或多種，優(yōu)選石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷或二氯乙烷等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選氯仿、乙醚、乙酸乙酯或二氯甲烷等中的一種或多種。上述提取方法所得到的虎杖粗提物，需進(jìn)一步分離純化。所述的分離純化方法是本領(lǐng)域公知的所有可以使用的方法，包括溶劑分離法，溶劑萃取法(包括萃取法、逆流連續(xù)萃取法、逆流分配法或液滴逆流分配法等中的一種或多種)，大孔吸附樹脂法，沉淀法，鹽析法，柱層析法或結(jié)晶與重結(jié)晶和分步結(jié)晶法等中的一種或多種；這些方法均是本領(lǐng)域的公知技術(shù)，在需要進(jìn)一步確證的時(shí)候，很容易從有關(guān)的教材和相關(guān)的技術(shù)文獻(xiàn)等查閱到包括技術(shù)細(xì)節(jié)在內(nèi)的所有技術(shù)資料。為了使產(chǎn)品性質(zhì)穩(wěn)定，便于使用和保存，還可增加一個(gè)優(yōu)化的步驟，即步驟三(3)干燥。所述的干燥方法是本領(lǐng)域公知的可以使用的方法，包括常壓干燥法如經(jīng)烘箱烘干、減壓干燥法、真空干燥法、噴霧干燥法、冷凍干燥法、遠(yuǎn)紅外加熱干燥法或微波干燥法等中的一種或多種。在具體實(shí)施時(shí)，需要根據(jù)現(xiàn)有的資金、技術(shù)和有關(guān)的要求，采用其中合適的方法，并選取合適的條件等必要的措施以達(dá)到預(yù)期的目標(biāo)。而這些方法也均是本領(lǐng)域的公知技術(shù)，在需要進(jìn)一步確證的時(shí)候，都是很容易從有關(guān)的教材和相關(guān)的技術(shù)文獻(xiàn)等查閱到包括技術(shù)細(xì)節(jié)在內(nèi)的所有技術(shù)資料。(四)虎杖提取物的用途1、概述本發(fā)明的目的是提供一種用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品，包括藥物、試劑、食品等中的一種或多種，優(yōu)選藥物。通過藥理活性篩選證明，虎杖提取物為其預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病的活性部位。經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究表明，虎杖提取物體外能夠抑制艾滋病病毒和乙型肝炎病毒，能夠顯著抑制小鼠體內(nèi)的乙型肝炎病毒。已完成的急性毒性實(shí)驗(yàn)證明，小鼠灌胃給藥對(duì)該活性部位的最大耐受量超過1.0g/kg，相當(dāng)于臨床推薦用藥劑量的200倍以上，表明該有效部位安全可靠，解決了中藥復(fù)方中成分復(fù)雜、有效成分含量低且含有有毒成分的問題。綜上所述，發(fā)明人對(duì)虎杖提取物進(jìn)行了理論探索，經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)研究特別是長(zhǎng)期的藥理學(xué)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)所述及的虎杖提取物有顯著的預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病的活性。因此，虎杖提取物及其組合物可用于制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產(chǎn)品，優(yōu)選以本發(fā)明虎杖提取物為原料制備而成的藥物。2、虎杖提取物及其組合物的使用方法與要求本發(fā)明虎杖提取物可以單獨(dú)或與其它活性組分聯(lián)合使用，包括用于制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品，包括藥物、試劑或食品等，尤其是藥物。在具體使用方面，本發(fā)明所述的虎杖提取物能夠單獨(dú)使用，還能夠與其他許多化學(xué)物質(zhì)一起使用。無論這些化學(xué)物質(zhì)是否具有生物活性或具有治療疾病的功能，包括輔助功能如協(xié)同放大作用、拮抗或緩解虎杖提取物的副作用等，這些化學(xué)物質(zhì)是包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體、食品、天然產(chǎn)物、化學(xué)合成藥物或人類用藥等中的一種或多種；優(yōu)選包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體或者食品等中的一種或多種；進(jìn)一步優(yōu)選醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體。本文使用的“醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體”包括任何和所有的生理適用的溶劑、分散介質(zhì)、胞衣、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑或吸收延遲劑等中的一種或多種。醫(yī)藥學(xué)上可接受載體的例子包括一種或多種的水、鹽水、磷酸緩沖鹽水、葡萄糖、甘油或乙醇等及其組合物中的一種或多種。在許多情況下，在該組合物中最好包括等滲劑，例如，糖、諸如甘露醇、山梨醇、山梨醇的多元醇或氯化鈉等中的一種或多種。醫(yī)藥學(xué)上可接受載體還可以包含少量的輔助物質(zhì)，例如潤(rùn)濕劑或乳化劑、防腐劑或緩沖液等中的一種或多種，它們?cè)鰪?qiáng)了該虎杖提取物的有效期或效力。從具體的分類上看，所說的醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體是指醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，包括賦形劑，如淀粉或水等中的一種或多種；潤(rùn)滑劑，如甘油或硬脂酸鎂等中的一種或多種；崩解劑，如微晶纖維素等；填充劑，如淀粉或乳糖等中的一種或多種；粘接劑，如預(yù)膠化淀粉、糊精、纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯烷酮等中的一種或多種；滲透壓調(diào)節(jié)劑，如葡萄糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇等中的一種或多種；稀釋劑，如水等；崩解劑，如瓊脂、碳酸鈣或碳酸氫鈉等中的一種或多種；吸收促進(jìn)劑，如季銨化合物等；表面活性劑，如十六烷醇等；吸附載體，如高嶺土或皂粘土等中的一種或多種；潤(rùn)滑劑，如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂或聚乙二醇等中的一種或多種；另外，還可以在組合物中加入其它輔劑，如香味劑或甜味劑等中的一種或多種。例如，將活性組分虎杖提取物溶解、混懸或乳化于適宜的水性溶劑中(例如，蒸餾水、生理鹽水或格林溶液等中的一種或多種)或油性溶劑中(例如，植物油例如橄欖油、芝麻油、棉籽油、玉米油或丙二醇等中的一種或多種)中，即可制得注射制劑，其中溶劑中可含有分散劑(例如，聚山梨酯80、聚氧乙烯硬化蓖麻油60、聚乙二醇、苯甲醇、氯代丁醇或苯酚等中的一種或多種)、滲透壓調(diào)節(jié)劑(例如，氯化鈉、甘油、D9-甘露糖、D-山梨醇或葡萄糖等中的一種或多種)。在這種情況下，如有必要，可加入添加劑，例如增溶劑(例如，聚山梨酯80、聚氧乙烯蓖麻油、聚維酮、聚乙二醇40蓖麻油或普郎尼克F-68等中的一種或多種)、穩(wěn)定劑(例如，人血清白蛋白等)、止痛劑(例如，鹽酸普魯卡因或利多卡因等中的一種或多種)等。本發(fā)明所述及的虎杖提取物還可以以組合物的形式聯(lián)合使用，特別是與用其它化學(xué)物質(zhì)如藥物對(duì)動(dòng)物尤其是哺乳動(dòng)物包括人或其他動(dòng)物進(jìn)行治療所用的組合物或者是類似的組合物。所述哺乳動(dòng)物，包括人、小鼠、大鼠、羊、猴、牛、豬、馬、兔、犬、黑猩猩、狒狒、狨、獼猴或恒河猴等中的一種或多種，優(yōu)選人、小鼠、大鼠、猴、豬、兔或犬等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選人、大鼠或猴等中的一種或多種。例如，可以將本發(fā)明虎杖提取物加入適于給與受治療者的藥用組合物中。通常，該藥用組合物包含本發(fā)明虎杖提取物和藥學(xué)上可接受的載體。虎杖提取物的組合物特別是藥物組合物可以有各種形式，包括例如液體、半固體和固體等劑量形式中的一種或多種；其中所說的藥物組合物包括治療有效量的虎杖提取物為活性成分，以及一種或多種醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體?；⒄忍崛∥锏乃幬锝M合物可以采用本領(lǐng)域公知的常規(guī)生產(chǎn)方法制成各種劑型，例如使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。所述的劑型包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑或注射劑等中的一種或多種，采取口服或注射(包括靜脈注射、靜脈滴注、肌肉注射或皮下注射等中的一種或多種)、粘膜透析等中的一種或多種給藥途徑進(jìn)行艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病的預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療或科學(xué)研究。藥物組合物優(yōu)選含有重量比為0.5％～99％的活性成分虎杖提取物，進(jìn)一步優(yōu)選含有重量比為1％～95％的活性成分虎杖提取物，最優(yōu)選含有重量比為5％～90％的活性成分虎杖提取物?；⒄忍崛∥锏乃幬锝M合物一般必須無菌且在生產(chǎn)儲(chǔ)存條件下穩(wěn)定?？梢詫⒃摻M合物配制成溶液、微乳液、分散液、脂質(zhì)體或其它適合于高藥物濃度的有序結(jié)構(gòu)。通過將所需量的該虎杖提取物與所需上述成分的一種或組合一起加入適當(dāng)?shù)娜軇┲胁⒔又M(jìn)行除菌過濾制備無菌注射液。一般而言，通過將該虎杖提取物加入含有基本分散介質(zhì)和所需的上述其它成分的無菌溶媒中制備分散液。在用于制備無菌注射液的無菌粉劑的情況下，推薦的制備方法是真空干燥和冷凍干燥劑。例如，通過諸如卵磷脂的包衣、在分散液的情況下通過保持所需顆粒大小和通過使用表面活性劑，可以保持溶液的適當(dāng)流動(dòng)性。通過在該組合物中包括延遲吸收的藥劑(例如單硬脂酸鹽或明膠)可以達(dá)到注射組合物的延長(zhǎng)吸收。用于患者時(shí)，本發(fā)明所述的虎杖提取物劑量為5～20mg/kg·d，該劑量或用量通常根據(jù)患者或使用者的年齡和體重以及身體狀況或患者癥狀的狀況來決定。本發(fā)明虎杖提取物及其藥用組合物可以包括“治療有效量”或“預(yù)防有效量”的本發(fā)明虎杖提取物?！爸委熡行Я俊笔侵冈诒匾膭┝亢蜁r(shí)間下有效達(dá)到所需治療效果的量。虎杖提取物的治療有效量可以根據(jù)諸如個(gè)體的病況、年齡、性別和體重以及該虎杖提取物在該個(gè)體引起所需反應(yīng)的能力等因素而變化。治療有效量亦指該虎杖提取物的有益治療效果超過其任何毒性或有害效果的量。“預(yù)防有效量”是指在必要?jiǎng)┝亢蜁r(shí)間下有效達(dá)到所需預(yù)防效果的量。因?yàn)轭A(yù)防劑量用于患病前或疾病早期的受治療者，預(yù)防有效量通常小于治療有效量。本發(fā)明虎杖提取物的治療或預(yù)防有效量的典型的非限制性范圍是5～20mg/kg，更優(yōu)選為5～10mg/kg。應(yīng)注意，劑量值將根據(jù)欲減輕的疾病類型和嚴(yán)重性變化，也就是說用于患者時(shí)，本發(fā)明所述的虎杖提取物劑量或用量，通常根據(jù)患者或使用者的年齡和體重以及身體狀況或患者癥狀的狀況來決定。另外，應(yīng)理解，對(duì)于任何特定受治療者，應(yīng)隨著時(shí)間根據(jù)個(gè)體需要和給與或監(jiān)督給與所述組合物的人的專業(yè)判斷調(diào)整特定劑量制度，并且本文設(shè)定的劑量范圍僅為例證性的，并不會(huì)限制要求保護(hù)的組合物的范圍或?qū)嵺`。也就是說，需要根據(jù)治療的對(duì)象、給藥途徑、所治療疾病和狀況等，變化本發(fā)明虎杖提取物的每次和/或每日的劑量或用量。例如，經(jīng)靜脈給予哺乳動(dòng)物，尤其是成年人(如體重60kg)，所述虎杖提取物的單劑量約為50～400mg，優(yōu)選約100mg，優(yōu)選每日給藥1～3次?？梢哉{(diào)整劑量單位，以提拱最佳所需反應(yīng)(例如，治療或預(yù)防應(yīng)答)。例如，可以單次大劑量給藥，可以在一段時(shí)間內(nèi)給予幾個(gè)均分量或根據(jù)治療情況的迫切性按比例降低或增加劑量。配制易于給藥和劑量統(tǒng)一的劑量單位形式的非腸道組合物尤其有利。本文使用的劑量單位形式，指適于欲治療的哺乳動(dòng)物受治療者的單元?jiǎng)┝康奈锢矸蛛x單位；每個(gè)單位含有預(yù)定量的計(jì)算用于與所需藥用載體一同產(chǎn)生所需治療效果的活性物虎杖提取物。本發(fā)明的劑量單位形式的規(guī)格，由以下確定并直接取決于以下(a)該虎杖提取物的獨(dú)特特征和欲達(dá)到的特定治療或預(yù)防效果，和(b)在混合這種用于治療個(gè)體敏感性虎杖提取物的技術(shù)中的內(nèi)在限制。3、虎杖提取物及其組合物的藥物劑型和給藥途徑本發(fā)明所述的虎杖提取物及其組合物制備的用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品，其中按照飲料、食品
技術(shù)領(lǐng)域：
的要求制備的產(chǎn)品能夠用于預(yù)防、保護(hù)和治療艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾??；按照醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
的要求制備的產(chǎn)品能夠用于患者的治療或保健，既能夠單獨(dú)直接用于制備治療或保健的藥物，也能夠與許多化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行混合或組合，直接或間接用于制備治療或保健的藥物。這里所述的化學(xué)物質(zhì)與本節(jié)上文中所述的相同。在本發(fā)明中，所需物料包括本發(fā)明的原料、上述配套使用的化學(xué)物質(zhì)等，均應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況和需要，采用食品級(jí)或藥用級(jí)的物料。本發(fā)明所述的虎杖提取物及其組合物，可以用本領(lǐng)域已知的各種方法給藥，盡管在許多治療用途中推薦的給藥途徑/給藥方式是噴霧劑或口服給藥。但是，技術(shù)人員會(huì)理解給藥途徑/給藥方式隨所需的結(jié)果而變化。在某些具體實(shí)施中，該活性化合物可以與保護(hù)該化合物免于快速釋放的載體一同制備例如空釋制劑，包括移植物傳遞系統(tǒng)、透皮貼傳遞系統(tǒng)或微囊傳遞系統(tǒng)等中的一種或多種。此外，還可以使用生物可降解的、生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙酯、聚酐、聚羥基乙酸、膠原蛋白、聚正酯或聚乳酸等中的一種或多種。制備這種制劑的許多方法均已申請(qǐng)專利或一般為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知(例如SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystems，J.R.Robinson編輯，MarcelDekker，Inc.紐約，1978)。本發(fā)明所述的虎杖提取物及其組合物，通常通過口服、直腸或腸胃外給藥等中的一種或多種方式，施用于需要這種治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑如片劑、粉劑、粒劑或膠囊等中的一種或多種。在實(shí)施時(shí)，本發(fā)明虎杖提取物可以與例如惰性稀釋劑或可同化的食用載體一同口服。該虎杖提取物(和共它成分，如果需要)亦可以包于硬或軟殼明膠膠囊、壓制成片劑或直接加入受治療者的膳食中。關(guān)于口服治療給藥，可以將所述虎杖提取物與賦形劑一起加入并以可食片劑、頰含片劑、錠劑、膠囊、懸液、糖漿或糯米紙囊劑等等中的一種或多種形式使用。為了以非腸道給藥之外給予本發(fā)明虎杖提取物，可能需要用防止其失活的材料對(duì)該虎杖提取物包衣或與該虎杖提取物一同給予。亦可以將補(bǔ)充的活性化合物加入該組合物中。在具體實(shí)施時(shí)，將本發(fā)明虎杖提取物與一種或多種可以用于治療疾病的其它治療藥物共配制和/或共給予。這種聯(lián)合使用，可以優(yōu)越地利用較低劑量的該給予的治療藥物，因此避免可能的毒性或與各種單一療法相關(guān)的并發(fā)癥。制成液體制劑如水劑、油懸浮劑或其它液體制劑中的一種或多種，如糖漿、酊劑或酏劑等中的一種或多種；用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液劑、水劑或油性懸浮劑等中的一種或多種。以上藥物或藥物組合物能夠使用各種途徑，在所述的使用形式中，優(yōu)選的形式是口服制劑(如片劑、包衣片劑、膠囊、溶液或混懸液等中的一種或多種)、非腸道給予劑型(如注射劑、軟膏或貼劑等中的一種或多種)等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選片劑、膠囊或注射劑等中的一種或多種，特別優(yōu)選片劑或注射劑中的一種。此外，虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等在某些情況下也能夠單獨(dú)直接用于制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品，也能夠與許多化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行混合或組合，以組合物的形式直接或間接用于制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品。這里所述的化學(xué)物質(zhì)與本節(jié)上文中所述的相同。例如，虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末用于制備用于艾滋病和乙型肝炎預(yù)防、診斷、保護(hù)和治療產(chǎn)品特別是藥物的各種劑型，或者是虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末與有關(guān)的輔料用于制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品尤其是藥物的各種劑型，或者是虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末與有關(guān)的制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品如藥物一起用于制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品如藥物的各種劑型，或者是虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末與有關(guān)的輔助藥物一起用于制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品如藥物的各種劑型，如片劑、膠囊劑或混懸劑等中的一種或多種，優(yōu)選膠囊劑。所述的方法之一是將虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末灌裝為膠囊劑，方法之二是將虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末與有關(guān)的制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品如藥物一起灌裝為膠囊劑，方法之三是將虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末與有關(guān)的輔助藥物一起灌裝為膠囊劑；方法之四是將虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末與有關(guān)的輔料一起按常規(guī)方法直接壓為片劑，方法之五是將虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末、有關(guān)的制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品如藥物一起與有關(guān)的輔料按常規(guī)方法直接壓為片劑，方法之六是將虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的粉末、有關(guān)的輔助藥物一起與有關(guān)的輔料按常規(guī)方法直接壓為片劑等。除上述的六種基本方法外，還能夠選擇虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的其他形式或?qū)⒄忍崛∥锼褂玫乃幉脑线M(jìn)行本領(lǐng)域公知的方法處理后，制備各種劑型的含有虎杖提取物所使用的藥材原料的產(chǎn)品如藥物。但是，需要注意的是，在上述直接使用虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的時(shí)候，應(yīng)先根據(jù)所使用的虎杖提取物的劑量要求，換算得到所需要使用的虎杖提取物所使用的藥材原料包括虎杖藥材或虎杖粗提物等的用量。綜上所述，本發(fā)明虎杖提取物及其組合物可用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品，優(yōu)選藥物和食品，進(jìn)一步優(yōu)選藥物。(四)技術(shù)特長(zhǎng)本發(fā)明對(duì)以二苯乙烯苷為主要成分的虎杖提取物拓展了新的醫(yī)藥用途，也為預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病提供了一種新的藥物來源。本發(fā)明的虎杖提取物安全低毒，藥理作用較強(qiáng)，其原料來源豐富、價(jià)廉，制備工藝簡(jiǎn)單，得率高，可用于制備預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品。本發(fā)明有針對(duì)性地研究虎杖提取物，虎杖提取物藥理作用較強(qiáng)，其使用安全，一物多用，最大限度地發(fā)揮了作用；虎杖提取物性質(zhì)穩(wěn)定，使用制備的制劑質(zhì)量穩(wěn)定，更適于抗艾滋病和乙型肝炎產(chǎn)品的工業(yè)化生產(chǎn)；預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病的效果明顯，且使用范圍特別廣，因此容易推廣應(yīng)用，能夠在較短的時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益?？傊景l(fā)明積極適應(yīng)了現(xiàn)代醫(yī)療和科研領(lǐng)域的工作需要和人性化服務(wù)的需要，本發(fā)明為研究開發(fā)新的抗HIV和抗HBV產(chǎn)品提供了新的來源，對(duì)開發(fā)利用中國(guó)的藥用植物資源具有重要價(jià)值，是用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病等方面的安全原料。具體實(shí)施例方式本發(fā)明研究了現(xiàn)有的虎杖提取物的新的藥理作用和新的用途，提供了一種能夠用于制備艾滋病和乙型肝炎預(yù)防、診斷、保護(hù)和治療等產(chǎn)品的原料，便于醫(yī)療行業(yè)和相關(guān)行業(yè)如食品、飲料等領(lǐng)域的安全使用。(一)虎杖提取物的制備方法為進(jìn)一步闡述上述的虎杖提取物特別是化合物1和化合物2的提取方法，下面通過舉例來說明。例如，本發(fā)明所說虎杖提取物的制備方法可以為(1)提取按常規(guī)將虎杖藥材粉碎成粗粉，以10～95％乙醇滲漉提取，收集5～30倍藥材體積量滲漉液，即為提取液?；虬闯Ｒ?guī)將粉碎的虎杖藥材用20～95％乙醇熱提，首次溶媒體積用量約為生藥的4～8倍；或?qū)⒎鬯榈幕⒄人幉挠?0～95％乙醇滲漉提取，溶媒體積用量約為生藥的4～12倍；得提取液；將提取液過濾、濃縮，濃縮液離心或過濾；(2)分離純化提取液濃縮到濃度為0.5～10∶1(藥材重量∶溶液體積)，即為樣品液。將樣品液通過非極性或弱極性大孔樹脂吸附(非極性或弱極性大孔樹脂為以苯乙烯為架橋材料的聚苯乙烯型多孔性吸附樹脂，如D101、D201、ZTC-1、AB-8、1300-1型大孔樹脂等)或MCIgelCHP20P柱層析或SephadexLH-20柱層析，用水淋洗除去雜質(zhì)；再用含水低級(jí)醇洗脫，低級(jí)醇為甲醇、乙醇或丙醇等C1～C5醇類，其濃度為10～70％，體積用量為樹脂床體積的5～24倍，收集低級(jí)醇洗脫液，濃縮至合適體積；進(jìn)一步用MCIgelCHP20P柱層析，用水淋洗除去雜質(zhì)；再用含水低級(jí)醇洗脫，低級(jí)醇為甲醇、乙醇或丙醇等C1～C5醇類，其濃度為10～70％，體積用量為樹脂床體積的5～24倍，收集10％～50％洗脫部位，濃縮至合適體積；再進(jìn)一步用ToyopearlHW-40F柱層析，用水淋洗除去雜質(zhì)；再用含水低級(jí)醇洗脫，低級(jí)醇為甲醇、乙醇或丙醇等C1～C5醇類，其濃度為10～60％，體積用量為樹脂床體積的5～24倍，收集10％～30％洗脫部位，濃縮至合適體積，即為主要含有化合物1和化合物2的虎杖提取物；再進(jìn)一步柱層析，能夠分別得到分離出的純化合物1和純化合物2。(二)虎杖提取物的鑒定方法本發(fā)明綜合應(yīng)用質(zhì)譜(簡(jiǎn)稱MS)，核磁共振氫譜(簡(jiǎn)稱1H-NMR)，核磁共振碳譜(簡(jiǎn)稱13C-NMR)以及核磁共振二維譜(簡(jiǎn)稱2D-NMR)等分析技術(shù)對(duì)虎杖提取物中的虎杖提取物中的化合物1和化合物2進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定?；衔?具有如下理化性質(zhì)分子式C20H21O11SNa或者C20H21O11SK，MW492or508；白色無定形粉末，易溶于水及含水的甲醇；[α]24D-60°(c0.19MeOH)；紫外光譜UV(MeOH)λmax215，233(sh)，306，319nm；紅外光譜IR(KBr)vmax3406，1609，1539，1514，1447，1258，1173，1072，997cm-1；核磁共振氫譜(400MHz，CD3OD+D2O)δ7.03(1H，t，2.0，H-2)，6.71(1H，t，2.0，H-4)，6.85(1H，t，2.0，H-6)，7.57(2H，d，8.7，H-2′，6′)，7.00(2H，d，8.7，H-3′，5′)，7.04(1H，d，16.3，H-α)，7.23(1H，d，16.3，H-β)，5.25(1H，d，7.7，H-1″)，4.50(1H，dd，7.7，9.0，H-2″)，3.97(1H，dd，9.0，9.4，H-3″)，3.74(1H，dd，9.4，9.6，H-4″)，3.74(1H，m，H-5″)，4.14(1H，dd，11.2，1.8，H-6″-α)，3.94(1H，overlapped，H-6″-β)。核磁共振碳譜(100MHz，CD3OD+D2O)δ141.6(C-1)，107.9(C-2)，160.4(C-3)，104.7(C-4)，159.3(C-5)，108.9(C-6)，130.7(C-1′)，129.2(C-2′，6′)，116.8(C-3′，5′)，158.2(C-4′)，129.2(C-6′)，126.8(C-α)，130.3(C-β)，100.8(C-1″)，81.5(C-2″)，77.2(C-3″)，71.3(C-4″)，78.0(C-5″)，62.0(C-6″)。質(zhì)譜FABMSm/z547[M+K]+，531[M+Na]+，508[M]+(參見XiaoK.XuanL.XuY.BaiD.StilbeneglycosidesulfatesfromPolygonumcuspidatum.J.Nat.Prod.2000，63(10)1373-1376)?；衔?具有如下理化性質(zhì)分子式C20H21O11SNa或者C20H21O11SK，MW492or508；白色無定形粉末，易溶于水及含水的甲醇；[α]24D-70.6°(c0.08MeOH)；紫外光譜UV(MeOH)λmax211，229(sh)，301，312nm；紅外光譜IR(KBr)vmax3406，1597，1504，1444，1263，1165，1074，1047，871，843cm-1；核磁共振氫譜(400MHz，D2O)δ6.78(1H，t，2.1，H-2)，6.48(1H，t，2.1，H-4)，6.68(1H，t，2.1，H-6)，7.48(2H，d，8.7，H-2′，6′)，6.29(2H，d，8.7，H-3′，5′)，6.89(1H，d，16.4，H-α)，7.00(1H，d，16.4，H-β)，4.98(1H，d，7.6，H-1″)，3.56(overlapped)，3.63(1H，dd，9.2，8.7，H-3″)，3.51(1H，dd，8.7，9.4，H-4″)，3.59(1H，m，H-5″)，3.95(1H，dd，12.5，2.0，H-6″-α)，3.76(1H，12.5，5.7，H-6″-β)。核磁共振碳譜(100MHz，D2O)δ142.5(C-1)，109.2(C-2)，160.7(C-3)，106.1(C-4)，159.5(C-5)，110.9(C-6)，137.4(C-1′)，130.5(C-2′，6′)，124.4(C-3′，5′)，153.3(C-4′)，130.5(C-6′)，130.5(C-α)，131.1(C-β)，103.0(C-1″)，75.6(C-2″)，78.3(C-3″)，72.2(C-4″)，78.8(C-5″)，63.3(C-6″)。質(zhì)譜FABMSm/z547[M+K]+，531[M+Na]+，508[M]+(參見XiaoK.XuanL.XuY.BaiD.StilbeneglycosidesulfatesfromPolygonumcuspidatum.J.Nat.Prod.2000，63(10)1373-1376)。(三)常用的實(shí)用劑型本發(fā)明制備粉針劑一般采用常規(guī)的冷凍干燥法，以水作為溶媒，其步驟為取虎杖提取物，加入賦形劑，加水溶解，加入活性炭，過濾除菌，灌裝，半軋塞，冷凍干燥，壓塞軋蓋即可。所用的賦形劑選自甘露醇、水解明膠、葡萄糖、乳糖、右旋糖苷等中的一種或幾種。每瓶含虎杖提取物10～100mg。本發(fā)明制備粉針劑也可采用噴霧干燥法，以水作為溶媒，其步驟為取虎杖提取物，加或不加賦形劑(賦形劑同上)，加水溶解，加入活性炭，過濾除菌，噴霧干燥，無菌分裝，壓塞軋蓋即可。每瓶含虎杖提取物10～100mg。本發(fā)明制備小針劑時(shí)，以注射用水作為溶媒配制即可，也可加適量輔料，輔料選自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸芐酯、二甲基乙酰胺中的一種或幾種。每支含虎杖提取物10～100mg。本發(fā)明制備葡萄糖輸液或氯化鈉輸液，以注射用水作為溶媒，加入適量葡萄糖或氯化鈉配制即可，也可加適量輔料，輔料選自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸芐酯、二甲基乙酰胺中的一種或幾種。每瓶含虎杖提取物10～100mg。本發(fā)明制備片劑、膠囊、顆粒劑、口服液等口服制劑，輔料可以是乳糖、淀粉、糊精、硬脂酸鹽等，按常規(guī)技術(shù)制備。在本發(fā)明中，以上所述的具體實(shí)施方式和以下所述的實(shí)例均是為了更好地闡述本發(fā)明，并不是用來限制發(fā)明的范圍。下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)描述。實(shí)施例1、抗艾滋病毒試驗(yàn)C8166細(xì)胞模型測(cè)試藥品體外抗HIV-1活性的材料、方法與步驟(1)試劑HEPES、MTT、DMF、青霉素(Penicillin)、硫酸鏈霉素(Streptomycinsulfate)、谷氨酰胺(Glutamine)均購(gòu)自Sigma公司；2-巰基乙醇(2-ME，2-Mercaptoethanol)為Bio-Rad公司產(chǎn)品。RPMI-1640和新生小牛血清為Gibco公司產(chǎn)品。(2)培養(yǎng)基RPMI-1640完全培養(yǎng)基，含有10％新生小牛血清，2mML-谷氨酰胺，10mMHEPES，50μM2-巰基乙醇，100,000IU青霉素，100μg/ml鏈霉素。(3)細(xì)胞和病毒人T淋巴細(xì)胞系C8166以及HIV-1實(shí)驗(yàn)株HIV-1IIIB均由英國(guó)MedicalResearchCouncil，AIDSReagentProject惠贈(zèng)。所有細(xì)胞和病毒均以含15％小牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。按常規(guī)方法制備HIV-1IIIB，滴定并計(jì)算出病毒的TCID50。病毒貯存液分裝后，置-70℃保存。細(xì)胞和病毒按常規(guī)方法凍存和復(fù)蘇。(4)HIV-1感染性滴定HIV-1IIIB按Johnson&Byington(1990)所述方法改良進(jìn)行滴定，簡(jiǎn)述如下將HIV-1貯存液在96孔板上作4倍稀釋，10個(gè)梯度，每梯度6個(gè)重復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置對(duì)照孔6孔。每孔加入C8166細(xì)胞50μl，每孔終體積為200μl。37.5℃CO2培養(yǎng)。第三天補(bǔ)加新鮮RPMI-1640完全培養(yǎng)基100μl，第七天在倒置顯微鏡下觀察每孔中HIV-1誘導(dǎo)的細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)，以每孔是否有合胞體(Syncytium)的形成確定；按Reed&Muench方法計(jì)算病毒的TCID50(50％Tissuecultureinfectiondose)。(5)對(duì)C8166細(xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn)4×105/mlC8166細(xì)胞懸液100ul與不同的待測(cè)藥物溶液混合，設(shè)三個(gè)重復(fù)孔。同時(shí)設(shè)置不含藥物的對(duì)照孔，37.5℃CO2培養(yǎng)3天，采用MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞毒性。ELx800酶標(biāo)儀測(cè)定OD值，測(cè)定波長(zhǎng)為595nm，參考波長(zhǎng)為630nm。計(jì)算得到CC50值(50％Cytotoxicconcentration)，即對(duì)50％的正常T淋巴細(xì)胞系C8166產(chǎn)生毒性時(shí)的藥物濃度。(6)對(duì)HIV-1IIIB致細(xì)胞病變(CPE)的抑制實(shí)驗(yàn)將8×105/mlC8166細(xì)胞50ul/孔接種到含有100μl/孔梯度倍比稀釋藥物的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，然后加入50μl的HIV-1IIIB稀釋上清，1300TCID50/孔。設(shè)3個(gè)重復(fù)孔。同時(shí)設(shè)置不含藥物的正常細(xì)胞對(duì)照孔。AZT為陽性藥物對(duì)照。37.5℃CO2培養(yǎng)3天，倒置顯微鏡下(100×)計(jì)數(shù)合胞體的形成。EC50(50％Effectiveconcentration)為抑制合胞體形成50％時(shí)的藥物濃度。(7)計(jì)算公式根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果繪制劑量反應(yīng)曲線，按Reed&Muench法計(jì)算出化合物抑制病毒的50％有效濃度(EC50)，50％抑制細(xì)胞生長(zhǎng)濃度(CC50)及抗HIV-1活性的治療指數(shù)TI值(Therapeuticindex)為TI＝CC50/EC50。①細(xì)胞生長(zhǎng)存活率(％)＝實(shí)驗(yàn)孔OD值/對(duì)照孔OD值×100。②HIV-1致細(xì)胞病變的抑制率(％)＝(1-實(shí)驗(yàn)孔合胞體數(shù)/對(duì)照孔合胞體數(shù))×100實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論化合物1對(duì)HIV誘導(dǎo)C8166細(xì)胞形成合胞體有明顯的抑制活性，對(duì)HIV具有顯著的抑制作用，其CC50＞2000μg/mL，EC50為153.42μg/mL，治療指數(shù)為＞13.04(見表1和表2)。并且該化合物水溶性很好，細(xì)胞毒性很低或者說無毒可以作為治療艾滋病的活性化合物。實(shí)施例2、體外抗乙型肝炎病毒試驗(yàn)(1)材料與試劑細(xì)胞HBV-DNA克隆轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞的HepG2-2.2.15，由美國(guó)TheMountSinaiMedicalCenter于1987年構(gòu)建。二甲亞砜(簡(jiǎn)稱DMSO)、卡那霉素、MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽)均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；RPMI1640培養(yǎng)基和胎牛血清，美國(guó)Gibco公司產(chǎn)品；ELISAHBsAg檢測(cè)試劑盒Bio/Rad公司產(chǎn)品；病毒DNA水平用ABIPrism7000序列檢測(cè)儀(AppliedBiosystems)檢測(cè)。(2)試驗(yàn)方法本實(shí)驗(yàn)在體外培養(yǎng)的HepG2-2.2.15(2*106/ml)中加入不同濃度的待選藥物，藥物作用一周后，分別通過定量PCR和Elisa法檢測(cè)細(xì)胞HBVDNA的拷貝數(shù)和HBV表面抗原HBsAg的濃度，來初步篩選對(duì)HBV有抑制作用的藥物.本研究還觀察了待選藥物作用下HepG2-2.2.15的生長(zhǎng)曲線，發(fā)現(xiàn)待選藥物在實(shí)驗(yàn)濃度下，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)無明顯的毒性。乙型肝炎病毒DNA分析病毒DNA用QIAmp96DNABloodkit(Qiagen)根據(jù)說明書從50μL培養(yǎng)基提取。病毒DNA水平用ABIPrism7000序列檢測(cè)儀(AppliedBiosystems)檢測(cè)。定量實(shí)時(shí)PCR使用以下引物和探針序列正向引物5′-CCTGTATTCCCATCCCATCGT-3′(HBV核苷酸2006-2026)，反向引物5′-TGAGCCAAGAGAAACGGACTG-3′(HBV核苷酸2063-2083)和探針FAM5′-TTCGCAAAATACCTATGGGAGTGGGCC-3′(HBV核苷酸2035-2062)。含有全長(zhǎng)HBV基因組的psHBV-1載體用來作為計(jì)算每mL培養(yǎng)基含有多少拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。乙型肝炎表面抗原(簡(jiǎn)稱HBsAg)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(簡(jiǎn)稱ELISA)HbsAg的水平用GeneticSystems/Bio-RadHBsAgELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)，未轉(zhuǎn)染HBV載體的細(xì)胞用來作為分析的背景。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論化合物1和化合物2對(duì)HBVDNA的復(fù)制具有顯著抑制活性，化合物1和化合物2還能夠明顯抑制HBV表面抗原HBsAg的分泌。進(jìn)一步研究表明該作用具有一定的劑效關(guān)系(見表3、表4)。并且發(fā)現(xiàn)該化合物在實(shí)驗(yàn)濃度下，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)無明顯的毒性。實(shí)施例3、體內(nèi)抗乙型肝炎病毒試驗(yàn)(1)動(dòng)物與試劑小鼠采用5-6周的NOD.CB17-Prkdcscid/J雌鼠(JacksonLaboratory)，每只20g左右。(2)試驗(yàn)方法0.3μgpWTDHBV載體質(zhì)粒通過尾靜脈高壓注射入NOD.CB17-Prkdcscid/J鼠(JacsonLaboratory)。化合物1和化合物2在尾靜脈高壓注射HBV質(zhì)粒后第7天和第10天，分別腹腔注射1mg/kg或者10mg/kg的劑量。HBVDNA拷貝數(shù)用定量實(shí)時(shí)PCR測(cè)定，用log10copies/mL(±s.e.m.)表示。血清HBsAg水平用ELISA法分析，用ng/ml(±s.e.m.)表示(n＝5)。化合物1和化合物2劑效關(guān)系研究。HBVDNA分析病毒DNA用QIAmp96DNABloodkit(Qiagen)根據(jù)說明書從50μL鼠血清中提取，HBVDNA水平用ABIPrism7000測(cè)序儀(AppliedBiosystems)測(cè)定。定量實(shí)時(shí)PCR用如下引物和探針來進(jìn)行檢測(cè)正向引物5′-CCTGTATTCCCATCCCATCGT-3′(HBV核苷酸2006-2026)，反向引物5′-TGAGCCAAGAGAAACGGACTG-3′(HBV核苷酸2063-2083)和探針FAM5′-TTCGCAAAATACCTATGGGAGTGGGCC-3′(HBV核苷酸2035-2062)。含有全長(zhǎng)HBV基因組的psHBV-1載體用來作為計(jì)算每mL血清含有多少拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。乙型肝炎表面抗原酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法HBsAg的水平用GeneticSystems/Bio-RadHBsAgELISA檢測(cè)試劑盒根據(jù)說明書檢測(cè)，未轉(zhuǎn)染HBV載體的細(xì)胞用來作為分析的背景。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論化合物1和化合物2可以顯著降低模型鼠體內(nèi)HBVDNA的拷貝數(shù)，降低血清中HbsAg的水平(見表5、表6)。研究還發(fā)現(xiàn)，化合物1和化合物2在轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)的抗HBV活性呈現(xiàn)一定的的劑效關(guān)系(見表7、表8)。實(shí)施例4、虎杖提取物的制備購(gòu)自上海市藥材公司的中藥虎杖10Kg，用60％的丙酮滲漉提取三遍，濃縮蒸去丙酮，沉淀，過濾，除掉大部分脂溶性物質(zhì)。剩余部分經(jīng)濃縮至適當(dāng)體積后，再加水沉淀部分脂溶性物質(zhì)，濃縮至小體積后，分次上MCIgelCHP20P柱層析，先用水洗脫以去除相當(dāng)部分的糖，后用10-80％甲醇洗脫，再用80％-100％甲醇洗脫以除去大量的大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷；50-80％甲醇洗脫部分上LH-20柱層析，先用水洗脫，然后用10-80％的甲醇梯度洗脫，30％的甲醇洗脫組分經(jīng)過各種層析方法MCIgelCHP20P、LH-20、ODSC-18綜合應(yīng)用，分離得到50mg所需的化合物1、70mg化合物2，經(jīng)理化性質(zhì)分析，波譜解析(主要是紫外光普、紅外光譜、質(zhì)譜、核磁共振氫譜和碳譜)確定結(jié)構(gòu)。實(shí)施例5、虎杖提取物粉針劑的制備取虎杖提取物30g，加入右旋糖苷30g，加500ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至2000ml，加3.0g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；灌裝到無菌的西林瓶中，每瓶2ml，半軋塞；冷凍干燥，再壓塞軋蓋即可。實(shí)施例6、虎杖提取物粉針劑的制備取虎杖提取物60g，加500ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；冷凍干燥得無菌粉末，分裝成1000瓶。實(shí)施例7、虎杖提取物粉針劑的制備取虎杖提取物40g，加入乳糖50g，加100ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1.5g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；噴霧干燥得無菌粉末，分裝成1000瓶。實(shí)施例8、虎杖提取物粉針劑的制備(1)處方注射用虎杖提取物半成品150g甘露醇400g注射用水加至10000ml共制成10000瓶(2)制備工藝按以上處方稱取處方量虎杖提取物，加入到適量注射用水中，攪拌使其溶解；加入處方量甘露醇，攪拌使完全溶解，加注射用水至全量；加入液體量的0.1％針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；灌裝，半軋塞；冷凍干燥，壓塞軋蓋。共制得9735瓶，成品率為97.35％。實(shí)施例9、虎杖提取物小針劑的制備取虎杖提取物5g，加100ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶10ml，滅菌即可。實(shí)施例10、虎杖提取物小針劑的制備取虎杖提取物10g，加入丙二醇30g，加200ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1.5g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶5ml，滅菌即可。實(shí)施例11、虎杖提取物葡萄糖輸液的制備取虎杖提取物2g，加入聚乙二醇10g，加入葡萄糖500g，加2000ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至5000ml；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶100ml，滅菌即可。實(shí)施例12、虎杖提取物葡萄糖輸液的制備取虎杖提取物2g，加入葡萄糖250g，加1000ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至5000ml；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶250ml，滅菌即可。實(shí)施例13、虎杖提取物氯化鈉輸液的制備取虎杖提取物1g，加入氯化鈉90g，加1000ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至10000ml；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶250ml，滅菌即可。實(shí)施例14、虎杖提取物片劑的制備(1)處方虎杖提取物1000.0g微晶纖維素1170.0g預(yù)膠化淀粉690.0g乳糖125.0g5％PVP無水乙醇適量硬脂酸鎂15.0g共制成10000片(2)制備工藝按以上處方分別稱取處方量的主藥與輔料，按等量遞加法混合均勻后照處方工藝項(xiàng)下進(jìn)行制軟材、制顆粒，干燥，整粒等過程，計(jì)算好片重后用單沖壓片機(jī)和10.5mm淺凹沖模壓片，控制裸片硬度5～7kg，共制得片劑9698片，成品率為96.98％。采用滾轉(zhuǎn)噴霧法包衣，包衣工藝如下包衣液的配制胃溶薄膜衣料85G61235，由上?？房蛋录夹g(shù)有限公司提供包衣工藝將待包衣裸片(硬度5～7kg)放入包衣鍋中，啟動(dòng)攪拌裝置和鼓風(fēng)加熱裝置，待裸片溫度升至40℃時(shí)，開始打開噴槍對(duì)準(zhǔn)片床的上1/3處噴入包衣液包衣，控制片床溫度38～42℃，氣磅壓力6kg，包衣液流速為50mL/min，包衣膜重占包衣片重的3％。實(shí)施例15、虎杖提取物片劑的制備取虎杖提取物100g，微晶纖維素80g、乳糖15g、預(yù)膠化淀粉60g，過篩，混合均勻，用適量10％PVP乙醇溶液制軟材，制粒，干燥，加入硬脂酸鎂3g，整粒，壓片，制成1000片。實(shí)施例16、虎杖提取物膠囊劑的制備(1)處方虎杖提取物1000.0g微晶纖維素1000g羧甲基淀粉鈉140g無水乙醇適量滑石粉80g共制成10000膠囊(2)制備工藝按以上處方分別取原料藥虎杖提取物及處方中其它輔料分別過100目篩，置60℃烘干，稱取處方量虎杖提取物與微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉等量遞加法混合均勻，用適量無水乙醇制軟材，30目篩制粒，50～60℃干燥2小時(shí)，用30目篩整粒，加入處方量的滑石粉和羧甲基淀粉鈉混合均勻。權(quán)利要求1.虎杖提取物在制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產(chǎn)品中的應(yīng)用。2.虎杖提取物的組合物在制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產(chǎn)品中的應(yīng)用。3.虎杖提取物的藥材原料在制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產(chǎn)品中的應(yīng)用。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的虎杖提取物的藥材原料在制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產(chǎn)品中的應(yīng)用，其特征在于，所述的虎杖提取物的藥材原料是包括虎杖藥材或虎杖粗提物中的一種。5.虎杖提取物的藥材原料的組合物在制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產(chǎn)品中的應(yīng)用。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的虎杖提取物的藥材原料的組合物在制備抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產(chǎn)品中的應(yīng)用，其特征在于，所述的虎杖提取物的藥材原料是包括虎杖藥材或虎杖粗提物中的一種。7.根據(jù)權(quán)利要求1～6任一項(xiàng)所述的虎杖提取物的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產(chǎn)品是指用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究艾滋病和乙型肝炎及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品中的一種。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的虎杖提取物的應(yīng)用，其特征在于，所述的艾滋病是包括HIV-1型艾滋病和HIV-2型艾滋病中的一種。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的虎杖提取物的應(yīng)用，其特征在于，所述的艾滋病是HIV-1型艾滋病。10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的虎杖提取物的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產(chǎn)品是包括藥物、試劑或食品中的一種。11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的虎杖提取物的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒產(chǎn)品是藥物。12.根據(jù)權(quán)利要求1～6任一項(xiàng)所述的虎杖提取物的應(yīng)用，其特征在于，該虎杖提取物是指①白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基鈉，結(jié)構(gòu)式如左其中，M＝Na或M＝K；和②鉀鹽和白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基鈉或鉀鹽，結(jié)構(gòu)式如下其中，M＝Na或M＝K。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的虎杖提取物，其特征在于，所述的該虎杖提取物中的白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基鈉或鉀鹽和白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基鈉或鉀鹽的純度均≥95％。14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的虎杖提取物，其特征在于，所述的該虎杖提取物中的白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基鈉或鉀鹽和白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基鈉或鉀鹽的使用方式是包括分別單獨(dú)使用、兩者合并使用或與其他化學(xué)物質(zhì)聯(lián)合使用中的一種。全文摘要本發(fā)明涉及虎杖提取物的用途。經(jīng)體外抗艾滋病毒試驗(yàn)顯示，其中的白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基鈉或鉀鹽和白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷4′-硫酸酯基鈉或鉀鹽在細(xì)胞模型及體內(nèi)轉(zhuǎn)基因鼠模型上，顯示了顯著的抗乙型肝炎病毒的活性；白藜蘆醇3-O-β-D-葡萄糖苷2″-硫酸酯基鈉或鉀鹽還對(duì)艾滋病毒具有顯著的抑制作用。病毒感染性疾病特別是艾滋病和乙型肝炎嚴(yán)重威脅人類健康和生命，乙型肝炎是影響人類健康的主要疾病之一，本發(fā)明為研究開發(fā)新的抗艾滋病毒和抗乙型肝炎病毒藥物提供了先導(dǎo)化合物，為臨床提供了一種新的藥物來源，對(duì)開發(fā)利用我國(guó)的藥用植物資源具有重要價(jià)值。文檔編號(hào)A61K36/704GK101214285SQ20081003232公開日2008年7月9日申請(qǐng)日期2008年1月7日優(yōu)先權(quán)日2008年1月7日發(fā)明者凱肖,鄭永唐,何曉文,楊柳萌,王云華,藺紅偉,宣利江,徐亞明,張黎明,杰趙,蔡建明申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)