本發(fā)明具體涉及一種用于治療口腔真菌的口腔粘膜粘貼劑及其制備方法。

背景技術(shù)：

口腔真菌病是一種由真菌在口腔中感染引起的疾病，免疫抑制增加如癌癥化療或骨髓移植或傳染艾滋病后是誘發(fā)口腔真菌病的重要因素?？谇徽婢≈饕强谇荒钪榫?簡稱OPC)，通常是HIV感染的最初癥狀。有報(bào)道超過90％的AIDS患者伴有OPC(Pharmacotherapy,19(1):76-87))。OPC還是抗癌治療中常見的并發(fā)癥，特別是化療、骨髓移植或局部放療都是促進(jìn)局部念珠菌病感染的重要因素。一項(xiàng)對27個(gè)臨床試驗(yàn)的分析報(bào)道，依癌癥位置的不同，口腔念珠菌的發(fā)病率為30％-70％(Cochrane Database Syst Rev.2000；(2):CD000978)。另外，長期服用抗生素、甾體激素等也可能引起念珠菌感染。來自四川大學(xué)的一項(xiàng)調(diào)查，年齡超過60歲的老人，口腔真菌檢出率高達(dá)52.1％，其中女性高于男性。由于癌癥和艾滋很難治愈，患者免疫力一直受到抑制，口腔粘膜炎時(shí)常會(huì)出現(xiàn)反復(fù)的發(fā)作。有報(bào)道口腔粘膜炎3個(gè)月內(nèi)復(fù)發(fā)率超過60％。

OPC的治療分全身治療和局部治療兩種。全身治療是口服或注射抗真菌藥如酮康唑、氟康唑和伊曲康唑等。這種治療藥物進(jìn)入血液，分布全身，易出現(xiàn)耐藥、誘發(fā)藥物相互作用并其它毒副作用。目前AIDs患者對抗真菌藥耐藥已成令人關(guān)注的棘手問題。三唑類抗真菌藥對肝臟CYP3A4異構(gòu)酶有不同程度的抑制作用，普遍存在較嚴(yán)重的藥物相互作用問題。他們可以與抗病毒藥、抗菌藥及其它需CYP3A4異構(gòu)酶代謝的藥物產(chǎn)生藥物相互作用，輕者需調(diào)整給藥劑量，重者會(huì)推高毒副反應(yīng)。多項(xiàng)指南指出，應(yīng)用唑類藥物應(yīng)進(jìn)行藥物濃度監(jiān)測至少4～7天，因此，除非非常必要，應(yīng)盡量少用或不用全身治療。

局部治療藥物直接給在感菌部位，感菌部位藥物濃度高，是一種比較理想的淺表性真菌感染治療方式。

OPC是一種淺表性真菌感染，但因感菌部位是在口腔或食管內(nèi)，治療有其特殊性。OPC局部治療國內(nèi)外目前有三種藥：克霉唑含片、咪康唑凝膠和咪康唑口腔貼片?？嗣惯颉⑦淇颠蚴巧鲜兰o(jì)70年代上市的第一代抗真菌藥，抑制真菌作用相對較弱。含片和凝膠，藥物與感染部位接觸時(shí)間短，唾液濃度低，治療效果差。臨床期待更多殺菌效果更好，能長時(shí)間維持有效藥物唾液濃度的OPC治療藥物。

因此，研究一種抗真菌效果優(yōu)良，并且藥物活性成分極少進(jìn)入血液，對全身系統(tǒng)幾乎無影響的口腔藥物具有非常重要的意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種口腔粘膜粘貼劑，所述口腔粘膜粘貼劑以式(I)所示化合物作為藥物活性成分：

其中，R₁和R₂各自獨(dú)立地為F或H；

優(yōu)選地，所述式(I)中所述的R₁和R₂中至少有一個(gè)為F；

更優(yōu)選地，所述R₁＝F，R₂＝H或R₁＝H，R₂＝F；

優(yōu)選地，所述藥物活性成分的量為每單位劑量5～100mg，優(yōu)選10～50mg，更優(yōu)選為25mg或50mg；

其中，當(dāng)R₁＝F，R₂＝H時(shí)，式(I)所述化合物為里氟康唑(Ravuconazole)；當(dāng)R₁＝H，R₂＝F時(shí)，式(I)所述化合物為艾莎康唑(Isavuconazole)；

優(yōu)選地，所述藥物活性組分選自里氟康唑和艾莎康唑中的至少一種。

里氟康唑和艾沙康唑(結(jié)構(gòu)式如下所示)是第三代抗真菌藥，對白色念珠菌有較好的抑制作用，MIC₉₀小于1ug/ml，如表1、表2所示。

表1里氟康唑?qū)τ谀钪榫鷮僬婢w外抗菌活性的比較(MIC₅₀(μg/ml))

表2艾莎康唑?qū)τ谀钪榫鷮僬婢w外抗菌活性的比較

注：MIC為最小抑制濃度

此兩化合物，雖有文獻(xiàn)報(bào)道其抗真菌作用較好，但并未將其作為口服抗真菌藥進(jìn)行開發(fā)，也未有文獻(xiàn)報(bào)道將其用于治療口腔真菌病，更沒有文獻(xiàn)報(bào)道或提示將其制成口腔粘膜粘貼劑。目前上述兩個(gè)化合物只是作為中間體，用于合成藥物BMS-292655和BAL-8557-002：

申請人驚喜地發(fā)現(xiàn)，直接將里氟康唑或艾莎康唑作為活性成分制成口腔粘膜粘貼劑，在本發(fā)明提供的藥物活性成分劑量范圍內(nèi)，能夠很好地治療口腔真菌病，即使發(fā)生吞咽或吞服，藥物也不會(huì)進(jìn)入血液或者即便進(jìn)入血液，其在血液中的濃度也極低，對全身系統(tǒng)幾乎沒有影響。

申請人進(jìn)一步提供了一種粘附釋藥系統(tǒng)，將其應(yīng)用于上述口腔粘膜粘貼劑，使得本發(fā)明所述的口腔粘膜粘貼劑在以下性能上得到了更好的提升：

(1)本發(fā)明的口腔粘膜粘貼劑在口腔粘膜上有足夠的粘附力，在口腔中不會(huì)很快融化崩解，也不易脫落，能保持本發(fā)明所述口腔粘膜粘貼劑在粘膜上停留至少10小時(shí)，有效地延長了藥物的作用時(shí)間；

(2)在延長藥物作用時(shí)間的同時(shí)保證了藥物有足夠的釋放速度，能長時(shí)間保持唾液藥物濃度在MIC₉₀以上；

(3)使用藥物的期間不影響正常的飲食和飲水。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述的口腔粘膜粘貼劑中含有粘膜粘附釋藥系統(tǒng)；

優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)選自但不限于羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚丙烯酸樹酯、羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、牛奶蛋白、殼聚糖、海藻酸鈉、卡泊姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉(SDS)中的一種或多種；

優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)選自羥丙基甲基纖維素、牛奶蛋白、殼聚糖、海藻酸鈉、十二烷基硫酸鈉中的一種或多種；

優(yōu)選地，按重量百分比計(jì)，所述粘附釋藥系統(tǒng)的用量占口腔粘膜粘貼劑處方總量的5～80％，優(yōu)選為10～60％，更優(yōu)選為25～50％，最優(yōu)選為27.5％～46.1％；

優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)由羥丙基甲基纖維素、牛奶蛋白、十二烷基硫酸鈉組成；優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)的組成，按重量百分比計(jì)為：

羥丙基甲基纖維素 25～50％，

十二烷基硫酸鈉 5～15％，

牛奶蛋白 40～65％；

更優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)的組成，按重量百分比計(jì)為：

羥丙基甲基纖維素 29.2～43.3％，

十二烷基硫酸鈉 8.3～10.9％，

牛奶蛋白 46.7～62.5％；

優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)由羥丙基甲基纖維素、殼聚糖、十二烷基硫酸鈉組成；更優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)的組成，按重量百分比計(jì)為：

羥丙基甲基纖維素 25～50％，

十二烷基硫酸鈉 5～15％，

殼聚糖 40～65％；

最優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)的組成，按重量百分比計(jì)為：

羥丙基甲基纖維素 29.2～43.3％；

十二烷基硫酸鈉 8.3～10.9％；

殼聚糖 46.7～62.5％；

優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)由羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉、十二烷基硫酸鈉組成；更優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)的組成，按重量百分比計(jì)為：

羥丙基甲基纖維素 25～50％，

十二烷基硫酸鈉 5～15％，

海藻酸鈉 40～65％；

最優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)的組成，按重量百分比計(jì)為：

羥丙基甲基纖維素 29.2～43.3％，

十二烷基硫酸鈉 8.3～10.9％，

海藻酸鈉 46.7～62.5％。

所述口腔粘膜粘貼劑中可以包含或不包含其它藥用輔料；優(yōu)選地，所述藥物輔料選自稀釋劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、矯味劑中的一種或多種；

優(yōu)選地，所述稀釋劑為藥學(xué)上可接受的用于制劑的稀釋劑；優(yōu)選地，所述稀釋劑選自纖維素例如粉狀纖維素和微晶纖維素、乳糖例如一水乳糖、淀粉例如可直接壓片淀粉、甘露醇、葡萄糖中的一種或多種；更優(yōu)選地，所述稀釋劑為微晶纖維素或一水乳糖；

優(yōu)選地，按重量百分比計(jì)，所述稀釋劑占口腔粘膜粘貼劑處方總量的0.2～30％，優(yōu)選0.9～20％，更優(yōu)選為0.9～15％；

優(yōu)選地，所述粘合劑為藥學(xué)上可接受的用于制劑的粘合劑；優(yōu)選地，所述粘合劑選自阿拉伯膠、蔗糖、淀粉、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮中的一種或多種；更優(yōu)選地，所述粘合劑為淀粉或聚乙烯吡咯烷酮例如PVP K30；

優(yōu)選地，按重量百分比計(jì)，所述粘合劑占口腔粘膜粘貼劑處方總量的0.2～35％，優(yōu)選為7.6～30.2％，更優(yōu)選為7.6～26.7％；

優(yōu)選地，所述潤滑劑為藥學(xué)上可接受的用于制劑的潤滑劑；優(yōu)選地，所述潤滑劑選自硬脂酸鹽、氫化植物油、滑石粉、硬脂富馬酸鈉中的一種或多種；更優(yōu)選地，所述潤滑劑選自硬脂酸鎂、滑石粉和硬脂富馬酸鈉中的一種或多種；最優(yōu)選地，所述潤滑劑為硬脂酸鎂和滑石粉；

優(yōu)選地，按重量百分比計(jì)，所述潤滑劑占口腔粘膜粘貼劑處方總量的0.1～10％，優(yōu)選0.2～8％，更優(yōu)選0.2～5％，最優(yōu)選為2～2.3％；

優(yōu)選地，所述崩解劑為藥學(xué)上可接受的用于制劑的崩解劑；優(yōu)選地，所述崩解劑選自淀粉例如預(yù)膠化淀粉、羧甲基淀粉鈉、羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮、海藻酸鈉、樹膠中的一種或多種；

優(yōu)選地，按重量百分比計(jì)，所述崩解劑占口腔粘膜粘貼劑處方總量的0.2～30％，優(yōu)選為0.2～20％，最優(yōu)選0.2～15％；

優(yōu)選地，所述矯味劑為藥學(xué)上可接受的用于制劑的矯味劑；優(yōu)選地，所述矯味劑選自甜味劑或薄荷劑；優(yōu)選地，所述甜味劑選自蔗糖、乳糖、甜蜜素、阿斯巴甜、紐甜中的一種或多種，優(yōu)選為乳糖或紐甜；

優(yōu)選地，按重量百分比計(jì)，所述矯味劑占口腔粘膜粘貼劑處方總量的0.1～10％，優(yōu)選0.1～3％。

優(yōu)選地，根據(jù)上述的口腔粘膜粘貼劑，按重量百分比計(jì)，所述口腔粘膜粘貼劑由以下成分組成：藥物活性成分2.5～50％，優(yōu)選20～50％，更優(yōu)選25％～43.5％；粘附釋藥系統(tǒng)5～80％，優(yōu)選10～60％，更優(yōu)選25～50％，最優(yōu)選27.5％～46.1％；稀釋劑0.2～30％，優(yōu)選0.9～20％，更優(yōu)選0.9～15％；粘合劑0.2～35％，優(yōu)選7.6～30.2％，更優(yōu)選為7.6～26.7％；潤滑劑0.1～10％，優(yōu)選0.2～8％，更優(yōu)選0.2～5％，最優(yōu)選2～2.3％；

所述粘附釋藥系統(tǒng)選自但不限于羥丙基甲基纖維素、聚丙烯酸樹酯、羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、牛奶蛋白、殼聚糖、海藻酸鈉、卡泊姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉中的一種或多種；

更優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)選自羥丙基甲基纖維素、牛奶蛋白、殼聚糖、海藻酸鈉、十二烷基硫酸鈉中的一種或多種；

優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)由羥丙基甲基纖維素、牛奶蛋白、十二烷基硫酸鈉組成；更優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)的組成，按重量百分比計(jì)為：

羥丙基甲基纖維素 25～50％，

十二烷基硫酸鈉 5～15％，

牛奶蛋白 40～65％；

最優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)的組成，按重量百分比計(jì)為：

羥丙基甲基纖維素 29.2～43.3％，

十二烷基硫酸鈉 8.3～10.9％，

牛奶蛋白 46.7～62.5％；

優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)由羥丙基甲基纖維素、殼聚糖、十二烷基硫酸鈉組成；更優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)的組成，按重量百分比計(jì)為：

羥丙基甲基纖維素 25～50％，

十二烷基硫酸鈉 5～15％，

殼聚糖 40～65％；

最優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)的組成，按重量百分比計(jì)為：

羥丙基甲基纖維素 29.2～43.3％，

十二烷基硫酸鈉 8.3～10.9％，

殼聚糖 46.7～62.5％；

優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)由羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉、十二烷基硫酸鈉組成；更優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)的組成，按重量百分比計(jì)為：

羥丙基甲基纖維素 25～50％，

十二烷基硫酸鈉 5～15％，

海藻酸鈉 40～65％；

最優(yōu)選地，所述粘附釋藥系統(tǒng)的組成，按重量百分比計(jì)為：

羥丙基甲基纖維素 29.2～43.3％，

十二烷基硫酸鈉 8.3～10.9％，

海藻酸鈉 46.7～62.5％；

優(yōu)選地，在所述粘附釋藥系統(tǒng)中，所述羥丙基甲基纖維素的粘度為100～150000湹泊，更優(yōu)選為4000～100000湹泊；優(yōu)選地，按重量百分比計(jì)，所述羥丙基甲基纖維素占口腔粘膜粘貼劑處方總量的5～60％，優(yōu)選為10～30％，更優(yōu)選為10％～20％，最優(yōu)選為10.5％～17.8％；

本發(fā)明適用的羥丙基甲基纖維素的型號(hào)如美國陶氏的E4M、E10M、K100LV、K4M、K10M和K100M等或日本信越的90SH-100、90SH-400、90SH-4000、90SH-15000和90SH-100000等。

優(yōu)選地，所述牛奶蛋白為食用或藥用牛奶蛋白，優(yōu)選純度為85％以上；優(yōu)選地，按重量百分比計(jì)，所述牛奶蛋白占口腔粘膜粘貼劑處方總量的5～60％，優(yōu)選15～35％，更優(yōu)選為15％～25％，最優(yōu)選為17.5％～23.9％；

優(yōu)選地，所述殼聚糖為水溶性殼聚糖；優(yōu)選地，按重量百分比計(jì)，所述殼聚糖占口腔粘膜粘貼劑處方總量的5～60％，優(yōu)選15～35％，更優(yōu)選為15％～25％，最優(yōu)選為17.5％～23.9％；

優(yōu)選地，所述海藻酸鈉為寡聚海藻酸鈉，優(yōu)選平均分子量為約35000；優(yōu)選地，按重量百分比計(jì)，所述海藻酸鈉占口腔粘膜粘貼劑處方總量的5～60％，優(yōu)選15～35％，更優(yōu)選為15～25％，最優(yōu)選為17.5～23.9％；

優(yōu)選地，按重量百分比計(jì)，所述十二烷基硫酸鈉占口腔粘膜粘貼劑處方總量的0.5～10％，優(yōu)選3～7％，更優(yōu)選為3～4.3％；

優(yōu)選地，所述稀釋劑為藥學(xué)上可接受的用于制劑的稀釋劑；優(yōu)選地，所述稀釋劑選自纖維素例如粉狀纖維素和微晶纖維素、乳糖例如一水乳糖、淀粉例如可直接壓片淀粉、甘露醇、葡萄糖中的一種或多種；更優(yōu)選地，所述稀釋劑為微晶纖維素或一水乳糖；

優(yōu)選地，所述粘合劑為藥學(xué)上可接受的用于制劑的粘合劑；優(yōu)選地，所述粘合劑選自阿拉伯膠、蔗糖、淀粉、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮中的一種或多種；更優(yōu)選地，所述粘合劑為淀粉或聚乙烯吡咯烷酮例如PVP K30；

優(yōu)選地，所述潤滑劑為藥學(xué)上可接受的用于制劑的潤滑劑；優(yōu)選地，所述潤滑劑選自硬脂酸鹽、氫化植物油、滑石粉、硬脂富馬酸鈉中的一種或多種；更優(yōu)選地，所述潤滑劑選自硬脂酸鎂、滑石粉和硬脂富馬酸鈉中的一種或多種；最優(yōu)選地，所述潤滑劑為硬脂酸鎂和滑石粉；

優(yōu)選地，根據(jù)上述的口腔粘膜粘貼劑，按重量百分比計(jì)，所述口腔粘膜粘貼劑由25％～43.5％的藥物活性組分，10.5％～17.8％的羥丙基甲基纖維素，3％～4.3％的十二烷基硫酸鈉，14％～23.9％的牛奶蛋白或17.5％～23.9％的殼聚糖或17.5％～23.9％的海藻酸鈉，7.6％～30.2％的淀粉，0.9％～15％的乳糖，0.9％～1％的滑石粉及1.1％～1.3％的硬脂酸鎂組成。

本發(fā)明所述粘附釋藥系統(tǒng)的組成及其含量的組合能夠很好地控制藥物粘附性能與釋放速度之間的平衡，在保證足夠粘附力的同時(shí)又能夠維持均勻而持久的釋放速度，從而在與式(Ⅰ)所示藥物活性成分(在本發(fā)明所述處方量的范圍內(nèi))結(jié)合使用時(shí)既保證了藥物在口腔內(nèi)的停留時(shí)間，又保證了藥物在口腔中的藥物唾液濃度能夠長時(shí)間維持在MIC₉₀以上，以達(dá)到治療口腔真菌病的效果。

當(dāng)然，本申請所述的口腔粘膜粘貼劑中還可以根據(jù)需要加入第二種或第三種活性成分，如甾體抗炎藥、非甾體抗炎藥、抗菌藥和抗病毒藥等。

本發(fā)明所述的口腔粘膜粘貼劑可以為口腔粘膜粘貼片或口腔粘膜粘貼膜，優(yōu)選為口腔粘膜粘貼片。

本發(fā)明所述的口腔粘膜粘貼劑在使用時(shí)只需將其貼于上方牙齦處例如犬齒窩，放置好的口腔粘膜粘貼劑會(huì)慢慢溶解，釋放出藥物，并長時(shí)間、高濃度的提供藥物活性成分，詳細(xì)操作如圖1所示。

另一方面，本發(fā)明還提供了一種制備上述口腔粘膜粘貼劑的方法，所述方法可以為濕法制粒法、干法制粒法或直接壓片法，優(yōu)選為濕法制粒法；

優(yōu)選地，在濕法制粒中，所述口腔粘膜粘貼劑處方中所述的粘附釋藥系統(tǒng)分為兩部分加入；優(yōu)選地，所述濕法制粒的方法為將處方量的藥物活性成分、第一部分粘附釋藥系統(tǒng)、粘合劑、稀釋劑分別粉碎過篩混合后加水制粒，然后加入潤滑劑及第二部分粘附釋藥系統(tǒng)，混合均勻，壓片；

優(yōu)選地，所述第一部分粘附釋藥系統(tǒng)的加入量為粘附釋藥系統(tǒng)處方量的85～95％，優(yōu)選89.1～91.7％，剩余為第二部分粘附釋藥系統(tǒng)；

優(yōu)選地，所述第一部分粘附釋藥系統(tǒng)和/或第二部分粘附釋藥系統(tǒng)選自但不限于羥丙基甲基纖維素、聚丙烯酸樹酯、羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、牛奶蛋白、殼聚糖、海藻酸鈉、卡泊姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉中的一種或多種；

更優(yōu)選地，所述第一部分粘附釋藥系統(tǒng)和/或第二部分粘附釋藥系統(tǒng)選自羥丙基甲基纖維素、牛奶蛋白、殼聚糖、海藻酸鈉、十二烷基硫酸鈉中的一種或多種；

最優(yōu)選地，所述第一部分粘附釋藥系統(tǒng)為羥丙基甲基纖維素和牛奶蛋白或殼聚糖或海藻酸鈉，所述第二部分粘附釋藥系統(tǒng)為十二烷基硫酸鈉。

附圖說明

以下附圖用以輔助說明本發(fā)明的實(shí)施方案，其中：

圖1為口腔粘膜粘貼劑放置示意圖；

圖2為口腔粘膜粘貼劑在人體唾液中的藥物濃度-時(shí)間曲線圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步闡述。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明給出的實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明的范圍。

除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同，文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。

下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的藥材原料、試劑材料等，如無特殊說明，均為市售可購得的化學(xué)純或分析純試劑或藥用原輔料，可經(jīng)處理或不經(jīng)處理直接使用。

一、制備例 口腔粘膜粘貼劑的制備

里氟康唑按照Pesti J等人的方法制備得到(參考：Organic Process Research&Development,2009,13(4):716-728.)，艾莎康唑按照此方法將2,4-二氟溴苯替換為2,5-二氟溴苯制備得到。

1、制備例1-10

按表3所示處方量將里氟康唑、HPMC15000、牛奶蛋白(或殼聚糖或海藻酸鈉)、淀粉、一水乳糖分別粉碎過篩，混合，加適當(dāng)水制粒，烘干，粉碎，整粒。加入滑石粉、硬脂酸鎂和十二烷基硫酸鈉，混合均勻，壓片，包裝。

表3制備例1-10的處方(組分以mg計(jì))

2、制備例11-20

按表4所示處方量將艾莎康唑、HPMC15000、牛奶蛋白(或殼聚糖或海藻酸鈉)、淀粉、一水乳糖分別粉碎過篩，混合，加適當(dāng)水制粒，烘干，粉碎，整粒。加入滑石粉、硬脂酸鎂和十二烷基硫酸鈉，混合均勻，壓片，包裝。

表4制備例11-20的處方(組分以mg計(jì))

二、效果評價(jià)實(shí)驗(yàn)

1、體外溶出試驗(yàn)

體外溶出試驗(yàn)是對藥物制劑質(zhì)量進(jìn)行體外評價(jià)的指標(biāo)。

儀器型號(hào)：

溶出儀：RCZ-8M溶出儀，天津市天大天發(fā)科技有限公司生產(chǎn)

高效液相色譜儀：Agilent 1260,紫外檢測器

色譜柱：Agilent XDB C18色譜柱(4.6X100mm,3.5μm)

方法：取本品，照溶出度測定法(中國藥典2010年版二部附錄XC第一法)，以PH 6.0～7.0的0.5％十二烷基硫酸鈉水溶液1000ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘60轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)1、2、4、6、8、10和12小時(shí)，取溶出液用高效液相色譜測定溶出液藥物濃度，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)累積溶出量。

結(jié)果：口腔粘貼片體外溶出試驗(yàn)結(jié)果見表5。

表5藥物溶出結(jié)果

從上述結(jié)果可以看出：所有制備例1-20制備得到的口腔粘膜粘貼劑均有較好的緩釋效果，能夠長時(shí)間持續(xù)釋放藥物，至第10個(gè)小時(shí)，活性成分基本釋放完畢，溶出超過88％。

2、粘附力測試

粘附力是評價(jià)口腔粘貼片在口腔粘膜上粘貼能力的指標(biāo)。它對藥物的釋放有一定的影響。

儀器：數(shù)顯式推拉力計(jì)，型號(hào)HP-5，生產(chǎn)廠：浙江省溫州市樂清艾德堡儀器有限公司

測試過程：將一片不銹鋼平板水平置于培養(yǎng)皿中，加入去離子水至浸過鋼板約1mm止。

將待測藥片用膠水固定在推拉計(jì)平頭探針上，將探針垂直朝下，讓藥片浸入水中與鋼板緊密接觸一分鐘，慢慢向上移動(dòng)推拉力計(jì)，讀取藥片與鋼板脫離瞬間顯示的數(shù)字(最大值)即為藥片的粘著力。

結(jié)果：粘附力測試結(jié)果見表6。

表6口腔粘膜粘貼劑的粘附力實(shí)驗(yàn)結(jié)果

從表6中可見，制備例1-20制備得到的口腔粘膜粘貼劑的粘附力平均值超過3.5牛，最大可達(dá)4.12牛，最小也接近3牛，因此，本發(fā)明制備得到的口腔粘膜粘貼劑能夠長時(shí)間牢固地粘貼在口腔粘膜上。

3、人體藥物唾液和血液濃度的測定

9名健康志愿者在實(shí)驗(yàn)前2天均未服用受試藥或其它藥品。每個(gè)人都試用制備例1、制備例6、制備例7、制備例8和制備例18五種受試藥，每次一種。用藥順序隨機(jī)，各次用藥時(shí)間分別在第1、4、7、10、13日的早餐后1小時(shí)使用。

用藥方法為將一片受試藥貼于上牙齦處(犬齒窩處)，使用期間正常吃飯飲水，在規(guī)定的時(shí)間點(diǎn)取唾液和血液，測定藥物濃度。

唾液的取樣時(shí)間為第0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12小時(shí)，血液的取樣時(shí)間為第0、0.5、1、2、3、4、6、8、12小時(shí)。

評價(jià)指標(biāo)：1、觀察受試藥有無脫落，若有脫落，則記錄脫落的時(shí)間；若無脫落，則記錄融化完畢的時(shí)間；2、口感；3、唾液濃度；4、血液濃度。

結(jié)果：

1、所有志愿者在試驗(yàn)期間均未發(fā)生受試藥脫落現(xiàn)象；受試藥物均在11～12小時(shí)融化完畢。

2、藥物唾液濃度測試結(jié)果見表7和圖2。

表7五種受試藥物的人體唾液濃度

從表7和圖2可以看出，五種受試藥物在唾液中的濃度均超過了2μg/ml，有的甚至達(dá)到了8μg/ml，均已超過里氟康唑或艾莎康唑抑制大多數(shù)念珠菌的MIC₉₀(抑制90％真菌所需要的濃度)值即1μg/ml，說明本發(fā)明提供的口腔粘膜粘貼劑在唾液中可提供長時(shí)間的有效的藥物濃度。

3、制備例8和制備例18藥物在個(gè)別時(shí)間點(diǎn)可以在血液中檢測到受試藥物，但檢測到的藥物濃度都低于定量限。其它受試藥物和測試時(shí)間點(diǎn)均未在血液中檢測到受試藥物，結(jié)果表明本發(fā)明的口腔粘膜粘貼劑，在用藥期間血液藥物濃度極低，對患者全身系統(tǒng)幾乎沒有影響。

三、給藥途徑的比較

將艾莎康唑或里氟康唑制成普通片劑，口服給藥，采集血樣和唾液。與本發(fā)明制備例1、6、7、8、18制備得到的的口腔粘膜黏貼劑進(jìn)行藥物血液濃度和唾液濃度的比較。為有效比較，本發(fā)明將對比例艾莎康唑或里氟康唑口服片的劑量加大到100mg/片。

1、艾莎康唑或里氟康唑口服素片的制備

按表8所示量將艾莎康唑或里氟康唑、預(yù)膠化淀粉、乳糖、羧甲基淀粉鈉、PVP k30及十二烷基硫酸鈉分別粉碎，過60目篩。然后將艾莎康唑或里氟康唑、預(yù)膠化淀粉、乳糖、羧甲基淀粉鈉(半量)、PVP k30及十二烷基硫酸鈉混和，濕法制粒，干燥，再與羧甲基淀粉鈉(剩余半量)、微粉硅膠、硬脂酸鎂混合，壓片，得艾莎康唑或里氟康唑口服素片。

表8艾莎康唑或里氟康唑口服素片處方(組分以mg計(jì))

2、人體唾液藥物濃度和血液藥物濃度的測定

9名健康志愿者，實(shí)驗(yàn)前兩天，均未服用受試藥或其它藥品。每個(gè)人都于早餐前服用按上述方法及處方制備的艾莎康唑口服片一片，一周后服用里氟康唑口服片一片。正常吃飯飲水，在規(guī)定的時(shí)間點(diǎn)取唾液和血液，測定藥物濃度。唾液的取樣時(shí)間為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12小時(shí)，血液的取樣時(shí)間為0、0.5、1、2、3、4、6、8、12小時(shí)。

結(jié)果：

1、所有志愿者，唾液中均未檢測到試驗(yàn)藥物。

2、除在1小時(shí)、2小時(shí)時(shí)間點(diǎn)可以在血液中檢測到受試藥物外，其它受試藥物和測試時(shí)間點(diǎn)均未在血液中檢測到受試藥物。在可以檢測到受試藥物的血液中，血液藥物濃度低于1ug/ml即低于這兩個(gè)藥物的MIC90。

結(jié)果顯示將艾莎康唑或里氟康唑制備成口服素片，即使將其劑量加大至本發(fā)明制備例的2～4倍(表6中為100mg)，仍然無法提供有效的唾液和血液藥濃，因此，相比于本發(fā)明的口腔粘膜粘貼劑，口服片治療口腔念珠菌難以產(chǎn)生較好的治療效果。

四、藥物劑量范圍的確定

制備例21-24的制備工藝：

按表9所示處方量將里氟康唑、HPMC15000、牛奶蛋白、淀粉、一水乳糖分別粉碎過篩，混合，加適當(dāng)水制粒，烘干，粉碎，整粒。加入滑石粉、硬脂酸鎂和十二烷基硫酸鈉，混合均勻，壓片，包裝。

表9制備例21-24的處方

按表9中處方制成不同劑量的口腔粘膜粘貼劑。讓健康志愿者試用，在1、4、8小時(shí)取唾液，測藥物濃度，確定藥物劑量范圍。

9名健康志愿者在實(shí)驗(yàn)前2天均未服用受試藥或其它藥品。每個(gè)人都試用制備例1、制備例8、制備例21-24六種受試藥，每次一種。用藥順序隨機(jī)，各次用藥時(shí)間分別在第1、4、7、10、13和16日的早餐后1小時(shí)使用。

用藥方法為將一片受試藥貼于上牙齦處(犬齒窩處)，使用期間正常吃飯飲水，在0、1、4、8小時(shí)點(diǎn)取唾液，測定藥物濃度。

評價(jià)指標(biāo)：1、觀察受試藥有無脫落，若有脫落，則記錄脫落的時(shí)間；若無脫落，則記錄融化完畢的時(shí)間；2、口感；3、唾液藥物濃度。

結(jié)果：

1、所有志愿者在試驗(yàn)期間均未發(fā)生受試藥脫落現(xiàn)象；受試藥物均在10～12小時(shí)融化完畢。

2、藥物唾液濃度測試結(jié)果見表10

表10制備例1、8、21～24的唾液濃度

從表10中可以看出，當(dāng)藥物活性成分劑量低于每片5mg時(shí)，唾液中藥物濃度低于里氟康唑MIC₉₀；當(dāng)每片藥物活性劑量高于50mg時(shí)，唾液藥物濃度增加不明顯。

五、其它測試

1、穩(wěn)定性試驗(yàn)

對本發(fā)明制備例制備得到的產(chǎn)品在光照(45000lx±500lx)、高溫(60℃)、高濕(RH 92.5％，25℃)等條件下各放置5天、10天進(jìn)行影響因素試驗(yàn)；并加速試驗(yàn)(在40℃±2℃、RH75％)條件下放置1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月，以及室溫(25℃±2℃、RH60％±10％)條件下放置0個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月、12個(gè)月考察穩(wěn)定性變化，試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明的產(chǎn)品性狀穩(wěn)定、有關(guān)物質(zhì)量、含量、粘附力、釋藥性等均未發(fā)生明顯變化，因此，本發(fā)明的產(chǎn)品具有很好的穩(wěn)定性。

2、粘膜刺激試驗(yàn)

在志愿者使用本發(fā)明產(chǎn)品前，對本發(fā)明進(jìn)行粘膜刺激試驗(yàn)，將本發(fā)明制備得到的產(chǎn)品貼于比格犬的口腔牙齦出處，觀察給藥第0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12小時(shí)比格犬牙齦粘膜的反應(yīng)，與給藥前及另外一側(cè)牙齦處粘膜進(jìn)行比較，結(jié)果無明顯差異，因此，本發(fā)明的產(chǎn)品對粘膜沒有刺激性。