本發(fā)明涉及一種地榆皂苷元聚合物膠束及其制備方法,屬于醫(yī)藥領域。
背景技術:
骨髓抑制是臨床上常見的造血系統(tǒng)疾病,各系統(tǒng)腫瘤性疾病的放射治療和/或化學治療、電離輻射引起的放射損傷、病毒性肝炎、微小病毒感染或藥物等因素均可引起骨髓抑制。骨髓抑制主要表現(xiàn)為骨髓微環(huán)境、造血干細胞、造血細胞生長因子等的損傷,粒、紅、巨核細胞系統(tǒng)一系、二系或三系細胞受抑制;其中,粒細胞缺乏會引起嚴重感染,紅細胞明顯減少會引起嚴重貧血,血小板明顯下降引起嚴重出血,甚至導致死亡。由于骨髓抑制嚴重威脅著患者的生命健康,尤其對進行放化療的腫瘤患者的生活質(zhì)量帶來不利影響,因此目前許多研究小組都致力于尋找有效的藥物來防治骨髓抑制。
地榆皂苷元,化學名:3β,19β-羥基烏索-12烯-28-羧酸,其結構如式ⅲ所示:
地榆皂苷元是從薔薇科地榆屬植物地榆(sanguisorbaofficinalisl.)或長葉地榆[s.officinalisl.var.longifolia(bertol.)yuetli]的根中提取得到的一種有效成分。cn101119740a公開了地榆皂苷ⅱ在制備升高紅細胞和血紅蛋白的藥物中的用途。然而,地榆皂苷元在水中溶解度低,口服胃腸吸收率小,造成該藥物口服生物利用度低,大大限制了在臨床上的應用。
聚合物膠束作為藥用載體可使難溶藥物增溶,且具有結構穩(wěn)定、優(yōu)良的組織滲透性、體內(nèi)滯留時間長、能使藥物有效地到達靶點等特點,對難溶性 藥物來說是一種優(yōu)良的載體。目前,用于制備聚合物膠束的載體材料種類繁多,通常采用兩親性嵌段共聚物,親水段可選用聚乙二醇、聚氧乙烯、聚維酮、殼聚糖等,疏水段材料主要有聚丙烯、聚苯乙烯、聚氨基酸、聚乳酸、精胺或短鏈磷脂等等。
然而,將藥物與聚合物載體材料組合制備得到載藥量高、粒徑小或適于注射的膠束卻非常困難,制劑質(zhì)量很大程度上取決于特定藥物的化學結構和物理性質(zhì),是否可以選擇得到合適的載體材料與特定藥物配合制備成質(zhì)量較好的膠束是難以預測的。由于對于藥物-載體材料的相互作用所知甚少,選擇適宜的載體材料通常困難且費時。根據(jù)主藥理化性質(zhì)選擇合適的聚合物材料,從而制備得到制劑質(zhì)量符合要求的膠束,并使藥物能夠從中有效地釋放進而在生物體內(nèi)發(fā)揮藥效,是設計聚合物膠束面臨的主要難題之一。
因此,開發(fā)一種制劑質(zhì)量較好且藥效明確的地榆皂苷元聚合物膠束,用于治療和/或預防骨髓抑制,成為了一個亟待解決的問題。
技術實現(xiàn)要素:
本發(fā)明的目的在于提供一種地榆皂苷元聚合物膠束及其制備方法。
本發(fā)明提供了一種聚合物膠束,它是包含下述重量配比的原輔料制備而成:地榆皂苷元30份、mpeg-pla-phe(boc)100份~5000份。
進一步的,它是由下述重量配比的原輔料制備而成:地榆皂苷元30份、mpeg-pla-phe(boc)450份~3600份。
優(yōu)選的,它是由下述重量配比的原輔料制備而成:地榆皂苷元30份、mpeg-pla-phe(boc)900份~3600份。
進一步優(yōu)選的,它是由下述重量配比的原輔料制備而成:地榆皂苷元30份、mpeg-pla-phe(boc)1800份。
其中,所述的聚合物膠束還包含糖0~5000份,所述的糖選自葡萄糖、蔗糖、海藻糖、果糖、甘露醇或乳糖中的一種或幾種。
其中,所述的mpeg-pla-phe(boc)中mpeg數(shù)均分子量在2000~5000之間,pla數(shù)均分子量在3000~5000之間。
進一步的,所述的mpeg-pla-phe(boc)中mpeg數(shù)均分子量為2000,pla數(shù)均分子量為4000。
本發(fā)明提供了一種所述聚合物膠束的制備方法,包括如下步驟:取各重量配比的地榆皂苷元、mpeg-pla-phe(boc),溶解于12~125倍體積量的乙醇中,再將乙醇蒸發(fā)除去,即得聚合物膠束。
進一步的,所述的制備方法還包括如下步驟:取0~5000份糖,與所述的聚合物膠束一并溶解于水中,使地榆皂苷元的濃度0.01mg/ml~20mg/ml,用0.22um微孔濾膜過濾,冷凍干燥,即得聚合物膠束凍干粉。
本發(fā)明提供了所述聚合物膠束在制備治療和/或預防骨髓抑制的藥物中的用途。
進一步的,所述的藥物是治療和/或預防化學物質(zhì)所致骨髓抑制的藥物。
更進一步的,所述的藥物是升高外周血白細胞(wbc)、中性粒細(neut)、紅細胞(rbc)、血小板(plt)或血紅蛋白(hgb)中一種或幾種的數(shù)量的藥物。
本發(fā)明提供了一種地榆皂苷元聚合物膠束及其制備方法。質(zhì)量評價實驗表明,僅有在使用本發(fā)明mpeg-pla-phe(boc)作為載體材料時,制備得到的地榆皂苷元聚合物膠束質(zhì)量最佳,采用其他材料則會導致制劑質(zhì)量的下降。藥效實驗中,與模型組比較,本發(fā)明地榆皂苷元膠束能顯著升高外周血wbc、rbc、plt、neut和hgb數(shù)量,且藥效明顯優(yōu)于地榆皂苷元原藥,表明本發(fā)明地榆皂苷元聚合物膠束對骨髓抑制有較好的治療和/或預防作用,能提高難溶性藥物地榆皂苷元的生物利用度。
顯然,根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容,按照本領域的普通技術知識和慣用手段,在不脫離本發(fā)明上述基本技術思想前提下,還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過實施例形式的具體實施方式,對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術均屬于本發(fā)明的范圍。
具體實施方式
本發(fā)明具體實施方式中使用的原料、設備均為已知產(chǎn)品,通過購買市售產(chǎn)品獲得。
實施例1本發(fā)明聚合物膠束的制備
取30mg地榆皂苷元、1500mgmpeg1000-pla1000-phe(boc),溶解于15ml乙醇,55℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑。
加入50ml注射用糖水(含5g葡萄糖)溶解藥膜,所得膠束溶液經(jīng)0.22μm除菌膜過濾后凍干,得地榆皂苷元膠束凍干粉。
實施例2本發(fā)明聚合物膠束的制備
取30mg地榆皂苷元、900mgmpeg2000-pla4000-phe(boc),溶解于 15ml乙醇,55℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑。
加入50ml注射用糖水(含5g蔗糖)溶解藥膜,所得膠束溶液經(jīng)0.22μm除菌膜過濾后凍干,得地榆皂苷元膠束凍干粉。
上述地榆皂苷元膠束凍干粉復溶性好,復溶前后粒徑分布變化較小。其主藥含量達0.4mg/ml,包封率>99%,粒徑<100nm,pdi<0.3。
實施例3本發(fā)明聚合物膠束的制備
取30mg地榆皂苷元、1200mgmpeg5000-pla3000-phe(boc),溶解于50ml乙醇,55℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑。
加入50ml注射用糖水(含5g海藻糖)溶解藥膜,所得膠束溶液經(jīng)0.22μm除菌膜過濾后凍干,得地榆皂苷元膠束凍干粉。
實施例4本發(fā)明聚合物膠束的制備
取30mg地榆皂苷元、1800mgmpeg2000-pla5000-phe(boc),溶解于50ml乙醇,55℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑。
加入50ml注射用糖水(含5g果糖)溶解藥膜,所得膠束溶液經(jīng)0.22μm除菌膜過濾后凍干,得地榆皂苷元膠束凍干粉。
以下通過實驗例證明本發(fā)明的有益效果。
含量測定:
儀器:高效液相色譜儀waterse2695
色譜條件:色譜柱:十八烷基鍵合硅膠(4.6×250mm,5μm)
檢測波長:203nm
流動相:甲醇:0.1%甲酸=80:20
流速:1ml/min
柱溫:25℃
進樣量:20μl
樣品配制:取地榆皂苷膠束溶液以甲醇稀釋適當倍數(shù),注入高效液相色譜儀中測量粒徑及分布。
粒徑及分布測定:
儀器:馬爾文zs90
樣品配制:取地榆皂苷膠束溶液以超純水稀釋適當倍數(shù),注入粒度儀中測量粒徑及分布。
實驗例1采用不同載體材料制備的聚合物膠束的質(zhì)量評價
本研究前期根據(jù)地榆皂苷元的性質(zhì)考察了多種親水段、疏水段材料組成 的兩親性嵌段共聚物,以下列出所得聚合物膠束質(zhì)量較好的五種材料。
1、mpeg-pla-phe(boc):為叔丁氧基苯丙氨酸封端的甲氧基聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物,其親水鏈為數(shù)均分子量為1000~5000的mpeg,親酯鏈為數(shù)均分子量為1000~5000的pla,結構如式i:
該高分子聚合物合成方法見文獻:[1]陳雪冬,楊世林,馮育林,劉珂等,牛蒡子苷元mpeg-pdlla聚合物膠束的制備及表征[j].醫(yī)藥,2015,18(8):153;[2]陳雪冬,一種新型載多西他賽mpeg-pdlla-phe(boc)膠束的制備及評價,江西中醫(yī)藥大學碩士學位論文,2016.6。
2、mpeg-pla:為甲氧基聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物,其親水鏈為數(shù)均分子量為1000~5000的mpeg,親酯鏈為數(shù)均分子量為1000~5000的pla,結構如式ii:
該高分子聚合物合成方法見上述文獻。
3、poloxamerf68即泊洛沙姆,為聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物。
4、solutolhs15為聚乙二醇-12-羥基硬脂酸酯。
5、聚氧乙烯蓖麻油el35。
poloxamerf68,solutolhs15,聚氧乙烯蓖麻油el35均購于德國basf公司。
實驗方法
1、分別稱取30mg地榆皂苷元及900mg的不同高分子材料mpeg2000-pla4000-phe(boc),mpeg2000-pla4000,poloxamerf68,solutolhs15及聚氧乙烯蓖麻油el35溶解于15ml乙醇,55℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑后加入50ml注射用水溶解藥膜,所得膠束溶液經(jīng)0.22μm除菌膜過濾后,測定膠束中地榆皂苷元含量及粒徑分布,結果見表1。
表1采用不同載體材料制備的聚合物膠束的質(zhì)量評價
實驗結果:采用本發(fā)明載體材料mpeg-pla-phe(boc)制備的聚合物膠束中地榆皂苷元含量最高(達到0.588mg/ml),平均粒徑較小(69nm),且分散指數(shù)(pdi)僅0.19,表明所得膠束的粒徑非常均勻。另兩種材料mpeg-pla、poloxamerf68會導致藥物含量或粒徑均勻度的明顯降低,而且采用mpeg-pla得到的膠束平均粒徑較大,不適于注射。使用solutolhs15、聚氧乙烯蓖麻油el35同樣存在藥物含量下降的問題。
以上實驗結果表明:僅有在使用本發(fā)明mpeg-pla-phe(boc)作為載體材料時,制備得到的地榆皂苷元聚合物膠束質(zhì)量最佳,采用其他材料則會導致制劑質(zhì)量的下降。
2、分別稱取30mg地榆皂苷元及900mg的不同數(shù)均分子量的mpeg-pla-phe(boc)溶解于15ml乙醇,55℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑后加入50ml注射用水溶解藥膜,所得膠束溶液經(jīng)0.22μm除菌膜過濾后,測定膠束中地榆皂苷元含量及粒徑分布,結果見表2。
表2采用不同分子量mpeg-pla-phe(boc)制備的聚合物膠束的質(zhì)量評價
實驗結果:僅在采用本發(fā)明數(shù)均分子量范圍內(nèi)的mpeg-pla-phe(boc)作為載體材料時,才能制備得到地榆皂苷元聚合物膠束;其中,采用mpeg2000-pla4000-phe(boc)制備的聚合物膠束中地榆皂苷元含量最高(達到0.588mg/ml),平均粒徑較小(69nm),且分散指數(shù)(pdi)僅0.19,表明所得膠束的質(zhì)量最佳。
實驗例2根據(jù)不同載體材料用量制備的聚合物膠束的質(zhì)量評價
按照質(zhì)量比1:10-1:120的比例稱取地榆皂苷元及mpeg2000-pla4000-phe(boc)(固定地榆皂苷元質(zhì)量為30mg,mpeg-pla-phe(boc)質(zhì)量隨比例變化),溶解于50ml乙醇,55℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑后加入50ml注射用水溶解藥膜,所得膠束溶液經(jīng)0.22μm除菌膜過濾后,測定膠束中地榆皂苷元含量及粒徑分布,結果見表3。
表3根據(jù)不同載體材料用量制備的聚合物膠束的質(zhì)量評價
實驗結果:載體材料mpeg-pla-phe(boc)用量為地榆皂苷元15~120倍時所得聚合物膠束質(zhì)量較好:藥物含量不低于0.2mg/ml,平均粒徑在112nm以下,pdi均低于0.3;其中,mpeg-pla-phe(boc)用量在地榆皂苷元質(zhì)量30~120倍范圍內(nèi),制劑質(zhì)量可得到進一步優(yōu)化,主要表現(xiàn)在藥物含量較高,可達到0.5mg/ml以上,平均粒徑在80nm以下,pdi均低于0.2;綜合比較,地榆皂苷元:mpeg-pla-phe(boc)質(zhì)量比為1:60時膠束質(zhì)量最佳:藥物含量較高、平均粒徑較小、粒徑分布較為均勻。
實驗例3本發(fā)明地榆皂苷元聚合物膠束的藥效實驗
1、實驗材料、試劑、儀器
受試藥物地榆皂苷元膠束、地榆皂苷元原粉。
工具藥物環(huán)磷酰胺。
實驗動物km-小鼠:18.5~22.5g。
實驗儀器:全自動血球分析儀;bs-600l電子天平:規(guī)格:600g/0.1g,上海友聲衡器有限公司。
2、統(tǒng)計方法
用spss17.0軟件進行統(tǒng)計分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x±s)表示,組間采用單因素方差分析,方差齊者組間進行l(wèi)sd檢驗,方差不齊者進行tamhane’st2檢驗。
3、實驗方法
3.1實驗動物分組及模型制備
所有動物適應性喂養(yǎng)1周后按體重隨機分為:空白組;模型組;地榆皂苷元膠束樣品①~④組(分別使用實施例1~4制備的膠束),給藥劑量2.5mg·kg-1,臨用前配制;地榆皂苷元組:地榆皂苷元原藥粉末,用10%dmso-生理鹽水溶解,給藥劑量2.5mg·kg-1,臨用前配制。實驗第1天,除空白組外,其余各組小鼠按120mg·kg-1劑量腹腔注射環(huán)磷酰胺生理鹽水溶液,空白組小鼠腹腔注射等體積生理鹽水。
3.2給藥
各實驗組自實驗第1天開始按劑量、給藥方式給予相應藥物,空白組和模型組小鼠尾靜脈注射等體積生理鹽水,連續(xù)6天。
3.3標本采集
實驗第7天,各實驗組小鼠眼眶取血,用裝有edta抗凝劑的0.5mlep管收集待測。
3.4檢測指標及方法
采用全自動血球計數(shù)儀對各實驗組小鼠外周血白細胞(wbc)、中性粒細胞(neut)紅細胞(rbc)、血小板(plt)、血紅蛋白(hgb)進行計數(shù)。
4、實驗結果
表4各實驗組小鼠外周血wbc、rbc和plt數(shù)量
注:與模型組比較,*p<0.05,**p<0.01;注:與地榆皂苷元組比較,△p<0.05,△△p<0.01。
實驗結果:與模型組比較,本發(fā)明地榆皂苷元膠束樣品實驗組①~④小鼠外周血wbc、rbc、plt數(shù)量均有顯著升高(p<0.05),地榆皂苷元組則沒有顯著性差異;與地榆皂苷元組比較,本發(fā)明地榆皂苷元膠束樣品實驗組①~④小鼠外周血wbc、rbc、plt數(shù)量均有顯著升高(p<0.05)。
表5各實驗組小鼠外周血neut、hgb計數(shù)
注:與模型組比較,*p<0.05,**p<0.01;與地榆皂苷元組比較,△p<0.05,△△p<0.01。
實驗結果:與模型組比較,本發(fā)明地榆皂苷元膠束樣品實驗組①~④小鼠外周血neut和hgb數(shù)量均有顯著升高(p<0.05),地榆皂苷元組無顯著性差異;與地榆皂苷元組比較,本發(fā)明地榆皂苷元膠束樣品實驗組①~④小鼠外周血neut和hgb數(shù)量均有顯著升高(p<0.05)。
以上實驗結果表明:本發(fā)明地榆皂苷元聚合物膠束對骨髓抑制有較好的治療和/或預防作用,藥效明顯優(yōu)于直接用地榆皂苷元原藥給藥。