本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，涉及一種多西他賽聚合物納米膠束注射劑、制備方法及其在治療腫瘤的藥物中的用途。

背景技術(shù)：

多西他賽(docetaxel)為第二代半合成紫杉醇衍生物,采用正丁醇基替代紫杉醇上的苯基，藥物作用機(jī)制是促進(jìn)微管蛋白聚合并抑制微管解聚作用，形成穩(wěn)定無(wú)功能性微管束，從而破壞腫瘤細(xì)胞有絲分裂，抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。多西他賽對(duì)微管的親和力是紫杉醇的2倍，所以藥理作用和活性比紫杉醇強(qiáng)。多西他賽在體外細(xì)胞試驗(yàn)中表現(xiàn)出高于紫杉醇2-10倍的抗癌活性，對(duì)非小細(xì)胞性肺癌，卵巢癌，前列腺癌，晚期乳腺癌、肝癌和胃癌等均有治療效果。

多西他賽和紫杉醇類似，屬于水中難溶藥物，水溶性差(約10～20μm)，目前市售的多西他賽注射劑采用增溶劑吐溫-80，并用13％乙醇為稀釋液。多西他賽毒副作用包括神經(jīng)毒性、骨骼毒性和嗜中性白細(xì)胞減少等，同時(shí)制劑中的增溶劑會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的體液縮留和過(guò)敏反應(yīng)等。除了溶解度問(wèn)題以外，多藥耐藥性也是另一個(gè)限制紫杉醇類藥物臨床使用的重要因素。所以目前相關(guān)的給藥系統(tǒng)研究致力于提高多西他賽的溶解度，以新的無(wú)毒副作用的遞送介質(zhì)取代現(xiàn)在的吐溫增溶劑，并試圖克服多藥耐藥性以及增加多西他賽在腫瘤部位的分布和濃度，并減少多西他賽在正常組織的分布，降低毒性。

國(guó)內(nèi)外研究人員已針對(duì)多西他賽的衍生物及新制劑做了很多研究，比如高分子偶聯(lián)物(高分子如hpma、pluronic等)；脂質(zhì)體納米粒；和嵌段聚合物膠束等，以增加水溶性，雖然制劑方面取得很大進(jìn)展，但目前能工業(yè)化生產(chǎn)和符合安全性評(píng)價(jià)的品種不多見(jiàn)。目前雖然脂質(zhì)體紫杉醇制劑已經(jīng)上市，但脂質(zhì)體多西他賽產(chǎn)品正在臨床階段。另外白蛋白多西他賽制劑正處于臨床研究中，然而白蛋白制劑的成本較高。嵌段聚合物膠束在、上市的報(bào)道。

相比之下納米膠束制劑近二十年成為研究熱點(diǎn)。它可提高藥物的溶解度，控制藥物釋放，可通過(guò)epr效應(yīng)被動(dòng)靶向到腫瘤部位，也可以在膠束表面進(jìn)行修飾以達(dá)到主動(dòng)靶向作用。目前的納米膠束制劑主要是使用兩親性聚合物，載藥量比較高，穩(wěn)定性好。兩親性聚合物為嵌段共聚物，包括親水嵌段和親脂嵌段，形成的納米膠束為殼核結(jié)構(gòu)，親水嵌段為表面的殼，可以分散于水和生理鹽水中，親脂嵌段則形成膠束的核，用于裝載疏水性藥物。目前最常用的親水嵌段為聚乙二醇(peg)，水溶性好，毒性低。然而25％的患者體內(nèi)已經(jīng)存在抗peg抗體(由于洗發(fā)水等其他日化產(chǎn)品以及有些食品中含大量的peg所致)，并且在多次給藥后可能會(huì)產(chǎn)生抗peg抗體，從而限制了peg類聚合物膠束的臨床應(yīng)用。兩性聚合物中親脂嵌段多為fda批準(zhǔn)的藥品和醫(yī)用材料中廣泛使用的聚合物(如聚乳酸-羥乙基酸plga，聚乳酸pla等)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種一種多西他賽聚合物納米膠束注射劑。

本發(fā)明涉及的兩親性聚合物采用了聚(2-甲基-2-噁唑啉)或聚(2-乙基-2-噁唑啉)作為親水嵌段以取代peg，用pla作為親脂嵌段，將聚合物納米膠束用作多西他賽的載體，為臨床提供一種穩(wěn)定的多西他賽聚合物納米膠束注射劑，能大大增加多西他賽的水溶性和制劑的穩(wěn)定性，延長(zhǎng)多西他賽在血液中的循環(huán)時(shí)間，消除現(xiàn)有制劑中的增溶劑毒副作用，并通過(guò)epr效應(yīng)被動(dòng)靶向到腫瘤部位，從而提高多西他賽的抗腫瘤療效，并可以克服抗peg抗體和多次給藥后產(chǎn)生抗體等問(wèn)題，意義重大。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種多西他賽聚合物納米膠束注射劑，所述制劑中包含多西他賽1重量份；納米膠束聚合物10～100重量份。優(yōu)選地，所述制劑中包含多西他賽1重量份；納米膠束聚合物10重量份。

所述的納米膠束聚合物為聚(2-乙基-2-噁唑啉)-聚乳酸，即peoz-pla，或者聚(2-甲基-2-噁唑啉)-聚乳酸，即pmoz-pla。

所述聚(2-乙基-2-噁唑啉)peoz或者聚(2-甲基-2-噁唑啉)pmoz的聚合度為20～60個(gè)單位,平均分子量在1700至5100da。優(yōu)選地，所述聚(2-乙基-2-噁唑啉)peoz或者聚(2-甲基-2-噁唑啉)pmoz的聚合度為50個(gè)單位,平均分子量在4400da。

所述聚乳酸pla的聚合度為30～115個(gè)單位，平均分子量在850至3300da。優(yōu)選地，所述聚乳酸pla的聚合度為115個(gè)單位，平均分子量在3300da。

所述多西他賽聚合物納米膠束注射劑的平均粒徑為20～200nm。優(yōu)選地，所述多西他賽聚合物納米膠束注射劑的平均粒徑為30～100nm。最優(yōu)選地，所述多西他賽聚合物納米膠束注射劑的平均粒徑為35nm。

所述的多西他賽聚合物納米膠束注射劑的制備方法，包括如下步驟：

1)將多西他賽和納米膠束聚合物分別溶于乙醇或乙腈，配成10mg/ml的儲(chǔ)備液,然后按照處方量取多西他賽和納米膠束聚合物儲(chǔ)備液混合,振蕩混勻；

2)將得到的多西他賽和納米膠束聚合物混合有機(jī)相注入到圓底燒瓶或其它樣品瓶中，在稍許加熱過(guò)程中，減壓或常壓下將有機(jī)溶劑緩慢揮發(fā)至完全干，在瓶底形成藥物和納米膠束聚合物材料混合薄層膜；

3)升溫至35～50攝氏度(優(yōu)選45攝氏度)，加入蒸餾水或者注射用水，輕微振蕩至薄層膜完全溶解成澄清溶液；

4)將澄清溶液放置冷卻至室溫，7000rpm離心5分鐘，將未裝載在膠束內(nèi)的多西他賽離心沉淀除去，取上清液冷凍干燥得所述多西他賽聚合物納米膠束注射劑凍干粉。

優(yōu)選地，所述的制備步驟4)中，冷凍干燥時(shí)加入保護(hù)劑，所述的凍干保護(hù)劑選自甘露醇、蔗糖、乳糖、海藻糖、麥芽糖和葡萄糖中的任一種或其混合物，所述的凍干保護(hù)劑的用量為5-20克/100毫升多西他賽聚合物納米膠束。加入凍干保護(hù)劑可以增加多西他賽聚合物膠束注射劑的穩(wěn)定性，延長(zhǎng)其有效期。

所述的多西他賽聚合物納米膠束注射劑在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述腫瘤為非小細(xì)胞性肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肝癌或胃癌。

本發(fā)明具有如下技術(shù)效果：

本發(fā)明提供的多西他賽聚合物納米膠束的制備方法簡(jiǎn)單，易于操作，重復(fù)性好，可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)。

本發(fā)明提供了一種所述多西他賽聚合物納米膠束注射劑，在治療腫瘤、有抗peg抗體的患者以及多次給藥后產(chǎn)生peg抗體的患者中的用途，其中，優(yōu)選地，所述腫瘤為非小細(xì)胞性肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肝癌與胃癌等。

相比于現(xiàn)有多西他賽注射劑，本發(fā)明提供的多西他賽聚合物納米膠束具有以下優(yōu)勢(shì)：

1.所述聚合物材料生物相容性好，安全性高，不會(huì)產(chǎn)生現(xiàn)有制劑中使用吐溫-80作增溶劑帶來(lái)的過(guò)敏反應(yīng)、體液縮留等毒副作用。

2.本發(fā)明將多西他賽包載于聚合物納米膠束中，提高了多西他賽的水溶性和穩(wěn)定性，延長(zhǎng)其有效期。

3.本發(fā)明提供的多西他賽聚合物納米膠束粒徑較小，能有效穿透腫瘤血管，通過(guò)epr效應(yīng)聚集在腫瘤部位，實(shí)現(xiàn)被動(dòng)靶向作用，從而提高藥物的治療效果。

4.本發(fā)明提供的多西他賽聚合物納米膠束注射劑能大大延長(zhǎng)多西他賽在血液中的循環(huán)時(shí)間，改善多西他賽的組織分布及藥動(dòng)學(xué)特征，大大提高多西他賽的抗腫瘤療效，降低其毒性。

5.本發(fā)明提供的多西他賽聚合物納米膠束注射劑涉及的兩親性聚合物中采用了聚(2-甲基-2-噁唑啉)或聚(2-乙基-2-噁唑啉)作為親水嵌段以取代peg，其親水性和peg相當(dāng)，并和peg有類似的“隱形”作用，作為膠束的殼層，既可以保護(hù)膠束的內(nèi)核和所載的藥物，又可以防止被單核巨噬細(xì)胞的吞噬。

6.本發(fā)明提供的多西他賽聚合物納米膠束注射劑可克服聚乙二醇(peg)作為殼層的聚合物納米膠束類制劑不適用的情況(例如治療對(duì)peg有抗體的患者或者多次給藥產(chǎn)生抗peg抗體的患者)。

7.本發(fā)明提供的多西他賽聚合物納米膠束注射劑的制備方法采用制備方法簡(jiǎn)便易行，材料來(lái)源廣泛，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，便于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。并且相比于處于臨床研究中的白蛋白多西他賽注射劑中使用的藥物載體(即白蛋白)，成本顯著降低。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例中制備的多西他賽聚合物納米膠束掃描電鏡圖。

圖2為本發(fā)明實(shí)施例中制備的多西他賽聚合物納米膠束注射劑凍干粉再分散液的粒徑分布圖。

圖3為本發(fā)明實(shí)施例中制備的多西他賽聚合物納米膠束注射劑凍干粉再分散液體外釋放曲線圖。

圖4為本發(fā)明實(shí)施例中制備的多西他賽聚合物納米膠束注射劑在裸鼠中的最大耐受劑量mtd(50mg/kg)。

圖5為根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例中制備的多西他賽聚合物納米膠束注射劑凍干粉再分散液在小鼠腫瘤模型中的藥效圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明，但該實(shí)施例并不意味著對(duì)本發(fā)明加以任何限制。

實(shí)施例1

本發(fā)明中，多西他賽聚合物納米膠束的制備，包括如下步驟：

1)稱取多西他賽10mg加入1ml無(wú)水己醇超聲溶解；稱取pmoz-pla聚合物100mg加入10ml無(wú)水乙醇超聲溶解；將多西他賽和pmoz-pla聚合物混合。pmoz的聚合度為50個(gè)單位,平均分子量在4400da。聚乳酸pla的聚合度為115個(gè)單位，平均分子量在3300da。

2)將混合液加入50毫升圓底燒瓶，在40攝氏度下減壓緩慢將溶劑揮發(fā)，并抽真空以除去溶劑殘留，在圓底燒瓶底部形成薄層膜(藥物+pmoz-pla聚合物)。

3)在45攝氏度情況下，加入蒸餾水10毫升，輕微振蕩至薄層膜完全溶解成澄清溶液；

4)將澄清溶液放置冷卻至室溫，7000rpm離心5分鐘，將未裝載在膠束內(nèi)的多西他賽離心沉淀除去，取上清液冷凍干燥得所述多西他賽聚合物納米膠束注射劑凍干粉。

取實(shí)施例制得的多西他賽聚合物納米膠束凍干粉進(jìn)行包封率的測(cè)定。

色譜條件：色譜柱nucleosilc18(4.6mmx250mm，5μm)；流動(dòng)相為乙腈-水＝55:45；流速1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)227nm；進(jìn)樣量20μ1。

取實(shí)施例制得的多西他賽聚合物納米膠束凍干粉，加入蒸餾水再分散成大約1毫克每毫升的多西他賽濃度，取分散液20微升，加入180微升乙腈，振蕩充分溶解，然后離心，取上清液20μ1于hplc進(jìn)樣。另取取標(biāo)準(zhǔn)多西他賽儲(chǔ)備液，配成濃度為10，20，50，100，和200微克/毫升乙腈標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別取20μ1于hplc進(jìn)樣，對(duì)各濃度下所得峰面積進(jìn)行曲線回歸的標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線以及納米膠束凍干粉再分散液中的多西他賽藥物濃度，計(jì)算得多西他賽聚合物納米膠束的包封率為91.5％。

取實(shí)施例制得的多西他賽聚合物納米膠束凍干粉，加入蒸餾水再分散成大約0.1毫克每毫升的多西他賽濃度，將一滴再稀釋500倍的多西他賽聚合物納米膠束凍干粉再分散液滴在銅網(wǎng)/碳膜上，放置5分鐘，去除多余的分散液，加上染劑1％乙酸鈾酰10秒鐘，于leoem910透射電鏡在80kv下檢測(cè)納米膠束的形態(tài)(見(jiàn)圖1)。電鏡結(jié)果顯示納米膠束為均一的球形結(jié)構(gòu)，粒徑約30nm。將0.1毫克每毫升多西他賽聚合物納米膠束凍干粉再分散液于馬爾文納米粒徑儀中測(cè)定膠束的粒徑，獲得的平均粒徑在35nm,分散度為pdi＝0.12(見(jiàn)圖2)。

精密移取實(shí)施例中制備的多西他賽聚合物納米膠束凍干粉的再分散液0.1ml，放入透析裝置中(截留分子量為3500)，放入燒杯中，釋放介質(zhì)為1oomlpbs緩沖液；設(shè)置溫度為37攝氏度，水平緩慢振蕩，于0.5、1、2、4、6、8、12小時(shí)后取樣，用hplc分別測(cè)量透析裝置中的未釋放藥物濃度多西他賽的濃度，計(jì)算藥物的累計(jì)釋放率和時(shí)間做出體外釋藥曲線，見(jiàn)圖3。

取6-8周雌性裸鼠，在小鼠皮下或者乳腺脂肪墊處注射5-8x10⁶個(gè)卵巢癌a2780細(xì)胞(細(xì)胞分散于50％的培養(yǎng)基和50％的基質(zhì)膠內(nèi))或者乳腺癌mda-mb-435細(xì)胞。當(dāng)腫瘤體積約為200立方毫米時(shí)，將小鼠隨機(jī)分配到各治療組中并進(jìn)行尾靜脈注射給藥，給藥方案為每四天注射一次，總共四次給藥。治療組包括生理鹽水空白對(duì)照組，多西他賽聚合物納米膠束和市售的多西他賽注射液。用卡尺測(cè)量各裸鼠腫瘤的長(zhǎng)徑(a)及短徑(b)，按(axb²)/2公式計(jì)算腫瘤體積。

由圖4可以看出，本發(fā)明實(shí)施例中制備的多西他賽聚合物納米膠束在裸鼠中的最大耐受劑量mtd為50mg/kg,是多西他賽市售制劑(mtd為20mg/kg)的2.5倍。

由圖5可以看出，多西他賽市售制劑及本發(fā)明實(shí)施例中制備的多西他賽聚合物納米膠束對(duì)裸鼠mda-mb-435乳腺癌模型中的腫瘤均有較好的抑制作用，兩組制劑腫瘤體積與對(duì)照組相比均顯著降低，同劑量的聚合物納米膠束組較市售制劑組具有更好的抑瘤效果(p<0.05)。