本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，涉及一種提高難溶性藥物口服吸收的納晶組合物。

背景技術(shù)：

口服是最簡單、方便、患者順應(yīng)性好的給藥方式，尤其對(duì)于慢性病的治療。但是，口服藥物需要在腸道溶解、吸收入血后才能發(fā)揮療效。而對(duì)于新化合物實(shí)體，約70％難溶；對(duì)于上市藥物，高達(dá)40-70％為水不溶或難溶藥物，常因吸收少而導(dǎo)致療效差，只能以增大劑量提高療效為代價(jià)，這會(huì)引起毒副作用的增加和用藥成本的上升。因此，提高難溶性藥物的口服吸收是藥劑學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)和難點(diǎn)。

多種制劑學(xué)方法可提高難溶性藥物的水溶性和口服吸收，包括成鹽、應(yīng)用潛溶劑、助溶劑、增溶劑、制備包合物和固體分散體等。然而，這些傳統(tǒng)方法存在著各種各樣的問題，如藥物不一定都有成鹽基團(tuán)、可用的潛溶劑或助溶劑很少、增溶劑和包合物的毒副作用較大、固體分散體易陳化等，因此很難從根本上解決難溶性藥物的口服吸收問題。納米技術(shù)的快速發(fā)展為難溶性藥物口服吸收問題的解決帶來了曙光。其中納米結(jié)晶避免了上述方法的弊端，具有明顯優(yōu)勢(shì)，近來最為引人關(guān)注。

納米結(jié)晶是一種不用載體材料，只利用少量表面活性劑或聚合物的穩(wěn)定作用，將藥物顆粒分散在水中，通過自組裝技術(shù)或破碎技術(shù)形成穩(wěn)定的納米膠體分散體。體系中納米級(jí)粒徑的純藥物顆粒依靠表面活性劑或聚合物的電荷效應(yīng)和/或立體效應(yīng)穩(wěn)定地懸浮在溶液中，其中藥物的平均粒徑一般為100-1000nm。與其他納米制劑相比，納米結(jié)晶有其自身的優(yōu)點(diǎn)：適用于水油都不溶的藥物，解決了非溶解必須的藥物遞送問題；凍干納米結(jié)晶可解決物理或化學(xué)不相容問題，再分散性能好；致密的固體粒子載藥量大，可以減少用藥劑量及次數(shù)，降低不良反應(yīng)，特別適合大劑量口服和注射給藥；既可以提高溶解度，也可以提高溶出速率，還可以增強(qiáng)粘附性，能解決許多與口服生物利用度低的相關(guān)問題。此外，由于處方中不含載體和共溶劑，注射給藥的安全性顯著提高，而且也可經(jīng)多種途徑給藥。例如，與市售制劑lipidil^tmez相比，專利cn102988339a公開的非諾貝特納米結(jié)晶的相對(duì)生物利用度為89.6％。

此外，小腸上皮細(xì)胞表達(dá)有特異性受體，若將納米結(jié)晶表面用這些特異性受體的配體進(jìn)行修飾，預(yù)期可增強(qiáng)小腸上皮細(xì)胞對(duì)納米結(jié)晶的轉(zhuǎn)運(yùn)，促進(jìn)藥物吸收，實(shí)現(xiàn)提高難溶藥物生物利用度的目的?，F(xiàn)有技術(shù)中并未見有關(guān)配體修飾的納米結(jié)晶用于口服的研究報(bào)道。

因此，研制一種提高難溶藥物的溶解度、增強(qiáng)小腸上皮細(xì)胞的攝取以促進(jìn)難溶藥物的口服吸收的納米結(jié)晶，有著廣闊的應(yīng)用前景。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服難溶性藥物常規(guī)增溶方式的不足以及吸收不高的問題。

一方面，本發(fā)明提供一種用于提高難溶性藥物口服吸收的納晶組合物。

另一方面，本發(fā)明提供難溶性藥物納晶組合物用于口服給藥的用途。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，其提供一種用于口服的難溶性藥物納晶組合物，其包含難溶性藥物、穩(wěn)定劑、小腸上皮細(xì)胞表達(dá)的特異性受體的配體和/或轉(zhuǎn)運(yùn)體的底物以及任選的可藥用輔料。

本發(fā)明還涉及制備難溶性藥物納晶組合物的方法，該方法選自溶劑非溶劑法、介質(zhì)研磨法、高壓均質(zhì)法、沉淀-高壓均質(zhì)組合法、凍干-高壓均質(zhì)組合法等本領(lǐng)域公知的方法。納晶粒子的平均粒徑在500nm以下，優(yōu)選300nm以下。

本發(fā)明組合物可根據(jù)任何常規(guī)方法配制成各種口服制劑，例如口服液、片劑、膠囊劑、顆粒劑等。

本發(fā)明組合物包括作為活性成分的難溶性藥物，還包括穩(wěn)定劑、小腸上皮細(xì)胞表達(dá)的特異性受體。所述的難溶性藥物選自但不限于紫杉醇、多西他賽、9-硝基喜樹堿、10-羥基喜樹堿類藥物如、伊曲康唑、替尼泊苷、依托泊苷、阿霉素、姜黃素、和厚樸酚、環(huán)孢素a、他克莫司、布洛芬、布地奈德、氟米龍、酚丁胺、地塞米松、醋酸可的松、丙酸氟卡替松、水飛薊賓、水飛薊素、阿瑞匹坦和非諾貝特，優(yōu)選選自紫杉醇、多西紫杉醇、和厚樸酚、環(huán)孢素a和他克莫司。

所述的穩(wěn)定劑選自但不限于tween80、十二烷基硫酸鈉(sds)、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油、卵磷脂、豆磷脂、dspe-peg、聚乙二醇、普朗尼克、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、聚乙二醇維生素e琥珀酸酯(tpgs)、膽酸、膽酸鈉、甲基纖維素(mc)、羥丙基纖維素(hpc)、羥丙基甲基纖維素(hpmc)和聚乙烯醇，優(yōu)選選自卵磷脂、豆磷脂、dspe-peg、聚乙二醇、普朗尼克、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、聚乙二醇維生素e琥珀酸酯(tpgs)、羥丙基甲基纖維素(hpmc)和聚乙烯醇，更優(yōu)選選自卵磷脂、豆磷脂、普朗尼克、聚乙二醇維生素e琥珀酸酯(tpgs)、羥丙基甲基纖維素(hpmc)和聚乙烯醇。

所述的難溶性藥物與穩(wěn)定劑的質(zhì)量比為1:0.1-1:15，優(yōu)選1:0.5-1:10，更優(yōu)選1:2-1:6。

所述的小腸上皮細(xì)胞表達(dá)的特異性受體的配體選自但不限于轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的配體，例如轉(zhuǎn)鐵蛋白、新生兒fc受體(fcrn)的配體，例如fcbp、葉酸受體的配體，例如葉酸、表皮生長因子受體egfr的配體，例如egf，和整合素受體αvβ3的配體，例如rgd。

所述的小腸上皮細(xì)胞表達(dá)的攝取性轉(zhuǎn)運(yùn)體的底物選自但不限于寡肽轉(zhuǎn)運(yùn)體pept1的底物，例如二肽和三肽、有機(jī)陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)體oct的底物，例如膽堿、有機(jī)陽離子/肉毒堿轉(zhuǎn)運(yùn)體octns 的底物，例如肉毒堿、有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體oats的底物，例如?；悄懰猁}、單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)體mct的底物，例如水楊酸、氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體lat的底物，例如各種氨基酸。

所述的納晶組合物，其中小腸上皮細(xì)胞表達(dá)的特異性受體的配體和/或轉(zhuǎn)運(yùn)體的底物的含量為組合物質(zhì)量的至少5％，優(yōu)選至少20％，更優(yōu)選至少50％。

另外，本發(fā)明的組合物還可以包含藥學(xué)上可接受的添加劑。

另一方面，本發(fā)明還涉及難溶性藥物納晶組合物用于治療相關(guān)疾病的用途。

另一方面，本發(fā)明涉及以下方案：

方案1.一種提高難溶性藥物口服吸收的納晶組合物，其包含難溶性藥物、穩(wěn)定劑、小腸上皮細(xì)胞表達(dá)的特異性受體的配體和/或轉(zhuǎn)運(yùn)體的底物以及任選的可藥用輔料。

方案2.如方案1所述的納晶組合物，其中的難溶性藥物選自但不限于紫杉醇、多西他賽、9-硝基喜樹堿、10-羥基喜樹堿類藥物如、伊曲康唑、替尼泊苷、依托泊苷、阿霉素、姜黃素、和厚樸酚、環(huán)孢素a、他克莫司、布洛芬、布地奈德、氟米龍、酚丁胺、地塞米松、醋酸可的松、丙酸氟卡替松、水飛薊賓、水飛薊素、阿瑞匹坦和非諾貝特，優(yōu)選選自紫杉醇、多西紫杉醇、和厚樸酚、環(huán)孢素a和他克莫司。

方案3.如方案1-2任一項(xiàng)所述的納晶組合物，其中的穩(wěn)定劑選自但不限于tween80、十二烷基硫酸鈉(sds)、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油、卵磷脂、豆磷脂、dspe-peg、聚乙二醇、普朗尼克、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、聚乙二醇維生素e琥珀酸酯(tpgs)、膽酸、膽酸鈉、甲基纖維素(mc)、羥丙基纖維素(hpc)、羥丙基甲基纖維素(hpmc)和聚乙烯醇，優(yōu)選選自卵磷脂、豆磷脂、dspe-peg、聚乙二醇、普朗尼克、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、聚乙二醇維生素e琥珀酸酯(tpgs)、羥丙基甲基纖維素(hpmc)和聚乙烯醇，更優(yōu)選選自卵磷脂、豆磷脂、普朗尼克、聚乙二醇維生素e琥珀酸酯(tpgs)、羥丙基甲基纖維素(hpmc)和聚乙烯醇。

方案4.如方案1-3任一項(xiàng)所述的納晶組合物，其中的難溶性藥物與穩(wěn)定劑的質(zhì)量比為1:0.1-1:15，優(yōu)選1:0.5-1:10，更優(yōu)選1:2-1:6。

方案5.如方案1-4任一項(xiàng)所述的納晶組合物，其中的小腸上皮細(xì)胞表達(dá)的特異性受體的配體選自但不限于轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的配體，例如轉(zhuǎn)鐵蛋白、新生兒fc受體(fcrn)的配體，例如fcbp、葉酸受體的配體，例如葉酸、表皮生長因子受體egfr的配體，例如egf，和整合素受體αvβ3的配體，例如rgd。

方案6.如方案1-4任一項(xiàng)所述的納晶組合物，其中的小腸上皮細(xì)胞表達(dá)的攝取性轉(zhuǎn)運(yùn)體的底物選自但不限于寡肽轉(zhuǎn)運(yùn)體pept1的底物，例如二肽和三肽、有機(jī)陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)體oct的底物，例如膽堿、有機(jī)陽離子/肉毒堿轉(zhuǎn)運(yùn)體octns的底物，例如肉毒堿、有機(jī)陰離子轉(zhuǎn) 運(yùn)體oats的底物，例如?；悄懰猁}、單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)體mct的底物，例如水楊酸，和氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體lat的底物，例如各種氨基酸。

方案7.如方案1-6任一項(xiàng)所述的納晶組合物，其中小腸上皮細(xì)胞表達(dá)的特異性受體的配體和/或轉(zhuǎn)運(yùn)體的底物的含量為組合物質(zhì)量的至少5％，優(yōu)選至少20％，更優(yōu)選至少50％。

方案8.如方案1-7任一項(xiàng)所述的納晶組合物，其中所述納晶的平均粒徑在500nm以下，優(yōu)選300nm以下。

方案9.如方案1-8任一項(xiàng)所述的納晶組合物用于制備治療相關(guān)疾病的藥物的用途。

為了達(dá)到本發(fā)明的目的，本發(fā)明進(jìn)行了本發(fā)明組合物的體外釋放實(shí)驗(yàn)、離體小腸吸收實(shí)驗(yàn)和藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)。

附圖說明參考附圖1-圖5，通過本發(fā)明的以下描述，本發(fā)明的上述及其它目的和特征將是顯而易見的。

附圖1為本發(fā)明實(shí)施例2的粒徑分布圖。

附圖2顯示了本發(fā)明實(shí)施例2的透射電鏡圖。

附圖3顯示了本發(fā)明實(shí)施例1和實(shí)施例2的體外釋放曲線。

附圖4顯示了本發(fā)明實(shí)施例1和實(shí)施例2的離體小腸吸收百分率。

附圖5顯示了本發(fā)明實(shí)施例1和實(shí)施例2的藥時(shí)曲線。

如上所述，本發(fā)明的組合物使難溶性藥物的口服吸收顯著提高。

具體實(shí)施方式

以下實(shí)施例用于進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明，但絕對(duì)不是對(duì)本發(fā)明范圍的限制。

實(shí)施例1紫杉醇納晶的制備

將10mg紫杉醇和40mgtpgs溶于5ml二氯甲烷中，水浴超聲使其全溶解后，氮?dú)獯蹈伞Ｖ糜诟稍锲髦?，減壓干燥30min后，加入4ml的蒸餾水，水化2h。渦旋5min，水浴超聲15min即得紫杉醇納晶的混懸液，凍干可得紫杉醇納晶粉末。

實(shí)施例2轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的紫杉醇納晶的制備

將10mg紫杉醇和40mgtpgs溶于5ml二氯甲烷中，水浴超聲使其完全溶解后，氮?dú)獯蹈?。置于干燥器中，減壓干燥30min后，加入4ml含有22mg轉(zhuǎn)鐵蛋白的蒸餾水，水化2h。渦旋5min，水浴超聲15min即得轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的紫杉醇納晶的混懸液，凍干可得轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的紫杉醇納晶粉末。

將制得的納晶混懸液采用malvern使zetasizernanozs儀進(jìn)行進(jìn)行動(dòng)態(tài)光散射(dynamiclightscattering，dls)分析，測定膠束的粒徑及其分布。儀器的激光束波長設(shè)定為525nm，入射光與散射光束的夾角為173°，測定溫度為25℃。測定結(jié)果見附圖1。由圖可見，該實(shí) 施例的本發(fā)明膠束的平均粒徑為230nm，粒度分布均勻，多分散性指數(shù)小于0.30。

采用醋酸雙氧鈾負(fù)染法，用透射電子顯微鏡觀察納晶的形態(tài)。結(jié)果見圖2。由圖可見，該實(shí)施例的本發(fā)明納晶呈棒狀，大小較均勻。

實(shí)施例3多西他賽納晶的制備

將16mg多西他賽和80mg普朗尼克f127溶于4ml的氯仿中，超聲使其完全溶解，然后用氮?dú)夂闼俅蹈?，室溫下置于真空干燥箱?2h以除去殘余有機(jī)溶劑。加入4ml蒸餾水水化30min，渦旋10min，超聲15min，即得多西他賽納晶的混懸液，凍干可得多西他賽納晶粉末。

實(shí)施例4rgd修飾的多西他賽納晶的制備

將16mg多西他賽和80mg普朗尼克f127溶于4ml的氯仿中，超聲使其完全溶解，然后用氮?dú)夂闼俅蹈?，室溫下置于真空干燥箱?2h以除去殘余有機(jī)溶劑。加入4ml含有24mgrgd的蒸餾水水化30min，渦旋10min，超聲15min，即得rgd修飾的多西他賽納晶的混懸液，凍干可得rgd修飾的多西他賽納晶粉末。

實(shí)施例59-羥基喜樹堿納晶的制備

將8mg9-羥基喜樹堿和32mgtpgs溶于2ml的二氯甲烷中，超聲使其完全溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，室溫下置于真空干燥箱中12h以除去殘余有機(jī)溶劑。加入5ml蒸餾水水化40min，渦旋10min，超聲15min，即得9-羥基喜樹堿納晶的混懸液，凍干可得9-羥基喜樹堿納晶粉末。

實(shí)施例6葉酸修飾的9-羥基喜樹堿納晶的制備

將8mg9-羥基喜樹堿和32mgtpgs溶于2ml的二氯甲烷中，超聲使其完全溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，室溫下置于真空干燥箱中12h以除去殘余有機(jī)溶劑。加入5ml含有26mg葉酸的ph9的碳酸鹽緩沖液水化40min，渦旋10min，超聲15min，即得葉酸修飾的9-羥基喜樹堿納晶的混懸液，凍干可得葉酸修飾的9-羥基喜樹堿納晶粉末。

實(shí)施例7替尼泊苷納晶的制備

將8mg替尼泊苷和24mgtween80溶于2ml的無水乙醇中，超聲使其完全溶解，氮?dú)夂闼俅蹈?，室溫下置于真空干燥箱?2h以除去殘余有機(jī)溶劑。加入5ml蒸餾水水化40min，渦旋10min，超聲15min，即得替尼泊苷納晶的混懸液，凍干可得替尼泊苷納晶粉末。實(shí)施例8l-肉毒堿修飾的替尼泊苷納晶的制備

將8mg替尼泊苷和24mgtween80溶于2ml的無水乙醇中，超聲使其完全溶解，氮?dú)夂闼俅蹈?，室溫下置于真空干燥箱?2h以除去殘余有機(jī)溶劑。加入5ml含有8mgl-肉毒堿的蒸餾水水化40min，渦旋10min，超聲15min，即得l-肉毒堿修飾的替尼泊苷納晶 的混懸液，凍干可得l-肉毒堿修飾的替尼泊苷納晶粉末。

實(shí)施例9他克莫司納晶的制備

將150mg卵磷脂分散于30ml蒸餾水中，加入15mg他克莫司，超聲分散均勻，然后用高速剪切機(jī)于20000rpm剪切5min。接著用高壓均質(zhì)機(jī)分別在200bar循環(huán)10次、500bar循環(huán)10次、1000bar循環(huán)20次，即得他克莫司納晶的混懸液，凍干可得他克莫司納晶粉末。

實(shí)施例10phe-gly修飾的他克莫司納晶的制備

將150mg卵磷脂分散于30ml蒸餾水中，加入15mg他克莫司、18mggly-phe-tpgs，超聲分散均勻，然后用高速剪切機(jī)于20000rpm剪切3min。接著用高壓均質(zhì)機(jī)分別在200bar循環(huán)10次、500bar循環(huán)10次、1000bar循環(huán)20次，即得phe-gly修飾的他克莫司納晶的混懸液，凍干可得phe-gly修飾的他克莫司納晶粉末。

實(shí)施例11阿瑞匹坦納晶的制備

將0.5ghpmc和0.5g卵磷脂分散于50ml蒸餾水中，加入1g阿瑞匹坦，超聲分散均勻，然后用高速剪切機(jī)于15000rpm剪切5min。接著用高壓均質(zhì)機(jī)分別在500bar循環(huán)10次、1500bar循環(huán)20次，即得阿瑞匹坦納晶的混懸液，凍干可得阿瑞匹坦納晶粉末。

實(shí)施例12phe-gly-gly修飾的阿瑞匹坦納晶的制備

將0.5ghpmc和0.5g卵磷脂分散于50ml蒸餾水中，加入1g阿瑞匹坦、0.25ggly-gly-phe-peg-dspe，超聲分散均勻，然后用高速剪切機(jī)于15000rpm剪切5min。接著用高壓均質(zhì)機(jī)分別在500bar循環(huán)10次、1500bar循環(huán)20次，即得phe-gly-gly修飾的阿瑞匹坦納晶的混懸液，凍干可得phe-gly-gly修飾的阿瑞匹坦納晶粉末。

實(shí)施例13水飛薊賓納晶的制備

將25mg水飛薊賓溶于5ml丙酮中，超聲5min，得到淡黃色的澄清溶液。再將20mgtpgs和5mgpvp溶于50ml的蒸餾水，超聲5min，得到透明的溶液。將丙酮溶液緩慢加入攪拌的水溶液中，加完后，繼續(xù)攪拌10min。在50℃下，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去丙酮。然后在高速剪切機(jī)中于15000rpm剪切10min，得到水飛薊賓納晶的混懸液，凍干可得水飛薊賓納晶粉末。

實(shí)施例14egf修飾的水飛薊賓納晶的制備

將25mg水飛薊賓溶于5ml丙酮中，超聲5min，得到淡黃色的澄清溶液。再將20mgtpgs、5mgpvp和8.8mgegf-tpgs溶于50ml的蒸餾水，超聲5min，得到透明的溶液。將丙酮溶液緩慢加入攪拌的水溶液中，加完后，繼續(xù)攪拌10min。在50℃下，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去丙酮。然后在高速剪切機(jī)中于15000rpm剪切10min，得到egf修飾的水飛薊賓納晶的混懸液，凍干可得egf修飾的水飛薊賓納晶粉末。

試驗(yàn)例1體外釋放試驗(yàn)

為了評(píng)價(jià)本發(fā)明納晶組合物的體外釋放特性，如下對(duì)實(shí)施例1、2中的本發(fā)明組合物在生理ph下的體外釋放進(jìn)行考察。

采用透析袋法。分別吸取1ml的本發(fā)明實(shí)施例2混懸液(0.1mg/ml)置于活化好的透析袋(mwco：8000-14000)中，并用透析夾密封，然后置于25ml含0.1％tween80的ph7.4的pbs中，于37℃、100rpm的水浴搖床中振蕩，每個(gè)樣品平行操作三份。分別在0.25、0.5、1、2、4、8、12、24和48h取出0.5ml釋放介質(zhì)，同時(shí)補(bǔ)充0.5ml新鮮的釋放介質(zhì)。將各時(shí)間點(diǎn)取出的釋放介質(zhì)經(jīng)0.22μm濾膜過濾后，用rp-hplc方法測定紫杉醇的含量，并計(jì)算藥物的累積釋放百分?jǐn)?shù)，繪制釋放曲線。并以實(shí)施例1和taxol作為對(duì)照。

色譜條件如下：diamobsilodsc18色譜柱，250×4.6mm，5μm；流動(dòng)相：乙腈∶水＝2∶1；流速：1ml/min；柱溫：50℃；檢測波長：227nm；進(jìn)樣量：20μl。

釋放曲線見圖3。結(jié)果顯示，在37℃下的48h內(nèi)，實(shí)施例2的累積釋放量為42.6±2.3％，實(shí)施例1的累積釋放量為76.0±2.0％，而taxol的累積釋放量為86.9±0.5％，說明本發(fā)明制備的納晶組合物具有緩慢釋放的特征。

試驗(yàn)例2離體小腸吸收試驗(yàn)

采用腸囊翻轉(zhuǎn)法。選取健康的sd大鼠，實(shí)驗(yàn)前禁食24h(自由飲水)。用20％的烏拉坦腹腔注射麻醉，沿腹中線打開腹腔，取出實(shí)驗(yàn)的小腸段。將取出的小腸立即置于預(yù)熱37℃的krebs液中，用krebs液沖洗小腸表面，并仔細(xì)清除漿膜層外面的脂肪組織。剪取大約5cm的一段小腸，用手術(shù)線結(jié)扎腸段一端，用圓頭細(xì)玻璃棒將腸段翻轉(zhuǎn)，使粘膜層在外，漿膜層在內(nèi)，洗凈內(nèi)容物。用手術(shù)線結(jié)扎腸段另一端，腸囊內(nèi)注入1.0mlkrebs液，濾紙吸干表面，立即放入含有本發(fā)明實(shí)施例2的krebs液的小試管中，持續(xù)通入氧氣，置于37℃水浴中孵育，每個(gè)樣品平行操作三份。1.5h后，取出腸囊中的200μl腸液于5mlep管中，加入內(nèi)標(biāo)液地西泮20μl(300μg/ml)和3ml叔丁基甲醚，渦旋混合5min，1000rpm離心15min。取上清1ml，氮?dú)獯蹈?，加?00μl甲醇復(fù)溶。用rp-hplc法測定藥物的含量，計(jì)算吸收百分?jǐn)?shù)。并以實(shí)施例1作為對(duì)照。

色譜條件如下：diamobsilodsc18色譜柱，250×4.6mm，5μm；流動(dòng)相：乙腈∶水＝2∶1；流速：1ml/min；柱溫：30℃；檢測波長：227nm；進(jìn)樣量：20μl。

結(jié)果如圖4所示。結(jié)果表明，供試液與小腸囊共孵育1.5h后，測得實(shí)施例1(紫杉醇納晶)的吸收百分?jǐn)?shù)為5.8±0.6％(n＝3)；而實(shí)施例2(轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的紫杉醇納晶)的吸收百分?jǐn)?shù)為15.0±2.1％(n＝3)，即實(shí)施例2的吸收百分?jǐn)?shù)是實(shí)施例1的2.59倍，顯示了本發(fā) 明組合物的優(yōu)越性。

試驗(yàn)例3藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)

為了評(píng)價(jià)本發(fā)明納晶組合物的口服吸收情況，如下對(duì)本發(fā)明組合物進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。

取15只雄性sd大鼠，體重為(300±20)g，隨機(jī)分為三組：taxol組、本發(fā)明實(shí)施例1組、本發(fā)明實(shí)施例2組。實(shí)驗(yàn)前禁食12h，可自由飲水。給藥劑量為15mg/kg。給藥前，大鼠腹腔內(nèi)注射水合氯醛溶液進(jìn)行麻醉，劑量為300mg/kg。麻醉后將大鼠仰臥固定，于劍突下方開口，開口盡量與腹中線平行,開口盡量小。確定胃的位置，取出十二指腸，于血管較少處注射給藥。給藥后肌肉與皮膚分開縫合，皮膚止血。分別于給藥前和給藥0.5、1、2、4、6、10、24、48h定時(shí)從大鼠眼眶后靜脈叢取血0.5ml至肝素化的ep管中，8000rpm離心15min得血清。精密吸取100μl于5mlep管中，加入內(nèi)標(biāo)液地西泮10μl(300μg/ml)和3ml的叔丁基甲醚，渦旋5min，1000rpm離心15min。取上清1ml，氮?dú)獯蹈?，加?00μl甲醇復(fù)溶，用0.2μm濾膜過濾后，采用rp-hplc法測定血中藥物濃度。

色譜條件如下：色譜條件如下：diamobsilodsc18色譜柱，250×4.6mm，5μm；流動(dòng)相：乙腈∶水＝1∶1；流速：1ml/min；柱溫：50℃；檢測波長：227nm；進(jìn)樣量：20μl。

藥時(shí)曲線如圖5所示。結(jié)果表明，與taxol組相比，實(shí)施例1和實(shí)施例2組的血藥濃度峰值分別提高了629和5592倍，auc值分別提高了122倍和598倍；而實(shí)施例2組的血藥濃度峰值又比實(shí)施例1組提高了681倍，auc提高了4.8倍。因此，本發(fā)明組合物能夠明顯提高紫杉醇的口服吸收，且配體修飾的納晶組合物促吸收作用更優(yōu)，與離體小腸吸收的結(jié)果一致，顯示了本發(fā)明組合物的優(yōu)越性。

雖然已利用上述具體的實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，但應(yīng)認(rèn)識(shí)到，本領(lǐng)域的技術(shù)人員還可進(jìn)行各種的改進(jìn)和改變，而且它們也應(yīng)如權(quán)利要求書限定的本發(fā)明的范圍之內(nèi)。