一種雞血藤的乙酸乙酯提取物及其制備、檢測方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及雞血藤提取物及其制備方法和應(yīng)用，具體涉一種雞血藤的乙酸乙酯提取物及其制備方法和應(yīng)用，通過石油醚過濾取渣、醇提取、濃縮提取液、乙酸乙酯萃取等步驟得到所述的提取物，本發(fā)明的提取物能夠用于制備抑制EGFR活性藥物，經(jīng)過體外試驗，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明提供的雞血藤的乙酸乙酯提取物抑制EGFR活性效果明顯。
【專利說明】一種雞血藤的乙酸乙酯提取物及其制備、檢測方法和用途
[【技術(shù)領(lǐng)域】]
[0001]本發(fā)明涉及雞血藤提取物及其制備、檢測方法和應(yīng)用，具體涉一種雞血藤的乙酸乙酯提取物及其制備、檢測方法和應(yīng)用。
[【背景技術(shù)】]
[0002]表皮生長因子受體(EGFR)是EGFR酪氨酸激酶家族的成員之一，它包含有一個細(xì)胞外配體結(jié)合區(qū)、單一的跨膜區(qū)和一個含酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)的胞內(nèi)區(qū)。EGFR與配體結(jié)合導(dǎo)致重要的構(gòu)象變化，暴露受體中的二聚環(huán)結(jié)構(gòu)，引發(fā)自身磷酸化，轉(zhuǎn)導(dǎo)下游信號，調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移、存活和一系列復(fù)雜的過程。EGRF在腫瘤細(xì)胞中常處于過度激活狀態(tài)，使細(xì)胞周期失去調(diào)控，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞無限制生長，如神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、頭頸部鱗癌、宮頸癌、食管癌、前列腺癌、肝癌、結(jié)腸癌、胃癌等。EGFR是目前抗腫瘤分子靶向治療中，最成功也是最受關(guān)注的治療靶點之一。FDA已批準(zhǔn)兩種靶向EGFR的小分子抑制齊[|,gefitinib(吉非替尼，易瑞沙)和erlotinib (厄洛替尼,特羅凱),隨著時間的推移,在治療中出現(xiàn)了耐藥現(xiàn)象。而國內(nèi)迄今為止，尚未有特異性EGFR抑制劑出現(xiàn)。
[0003]雞血藤,來源于豆科植物密花豆Spatholobus suberctus Dunn的干藤莖，具有補(bǔ)血活血作用:
[0004]1、對血液系統(tǒng)的影響:雞血藤水提液能明顯恢復(fù)模型小鼠骨髓的造血組織容量、血竇容量及巨核細(xì)胞數(shù)，抑制脂肪組織容量的增加；雞血藤乙醇提取物可升高白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、紅細(xì)胞容積和血小板。
[0005]2、對心血管系統(tǒng)的作用:雞血藤乙醇提取物具有擴(kuò)血管作用；雞血藤的熱水提取物有強(qiáng)的血小板聚集抑制作用。
[0006]3、對免疫系統(tǒng)的作用:雞血藤提取物對異常免疫功能顯示雙向調(diào)節(jié)作用。
[0007]4、抗腫瘤的作用:雞血藤水提物對六種腫瘤細(xì)胞均有一定生長抑制作用；雞血藤水煎醇提液具有直接抗腫瘤作用。
[0008]5、抗病毒的作用:雞血藤水提物具有極強(qiáng)的抑制HIV-RT活性作用，同時對腸道病毒具有明顯的抑制作用。
[0009]6、抗氧化的作用:雞血藤總黃酮提取液對Fenton體系產(chǎn)生的? OH自由基有很好的清除作用；雞血藤水提取液能抑制肝勻漿MDA的生成，抑制蛋白質(zhì)的糖基化作用。
[0010]7.其它作用:雞血藤醇提物對衰老小鼠一氧化氮合酶(NOS)活力有顯著升高作用；雞血藤的乙醇提取物對酪氨酸酶具有混合性激活作用；雞血藤可促進(jìn)肝細(xì)胞再生，恢復(fù)肝功能的作用。
[0011]迄今為止，尚未有關(guān)于雞血藤的乙酸乙酯提取物及其相關(guān)應(yīng)用的報道。
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【發(fā)明內(nèi)容】
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[0012]為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)尚無用雞血藤乙酸乙酯提取物用于制造抑制EGFR活性的藥物的空白，本發(fā)明提供了雞血藤的乙酸乙酯提取物及其制備方法、檢測方法和用途。[0013]為實現(xiàn)上述目的，設(shè)計一種雞血藤的乙酸乙酯提取物的方法，該方法由以下步驟組成:
[0014]a.將雞血藤加入到石油醚中浸泡12~48小時，每100g雞血藤需要300~500毫升的石油醚，然后滲濾回收殘渣，；
[0015]b.所述的殘渣用濃度為60%~90的乙醇分2~3次提取，每100克殘渣每次需要300~500毫升的乙醇，每次提取的時間是I~3小時，收集得到提取液；
[0016]c.所述的提取液進(jìn)行濃縮得到濃縮液；
[0017]d.用等體積的乙酸乙酯對所述的濃縮液進(jìn)行萃取，收集乙酸乙酯的萃取液；
[0018]e.蒸干所述的萃取液得到提取物。
[0019]本發(fā)明還具有如下優(yōu)化方案
[0020]每100g雞血藤優(yōu)選添加300毫升的石油醚。石油醚的溫度為60~90°C。
[0021]所述的浸泡時間優(yōu)選為18~36小時。更優(yōu)選為24小時。
[0022]所述的乙醇濃度為70~90%。更優(yōu)選為80%。
[0023]每100克殘渣每次提取優(yōu)選需要300毫升的乙醇。
[0024]步驟(b)中的提取，優(yōu)選次數(shù)為2次。
[0025]本發(fā)明還包括一種用上述方法提取的雞血藤的乙酸乙酯提取物，該提取物含有主要成分:兒茶素-兒茶素、阿福豆素-兒茶素、楊梅素_3’ -O-^-D吡喃木糖苷、芒柄花苷、芒柄花黃素、阿弗羅莫辛、表沒食子兒茶素、催吐蘿芙木醇-9-0-木糖-(I — 6)葡萄糖苷、木犀草苷和沒食子兒茶素-兒茶素。
[0026]本發(fā)明還包括一種藥物制劑，由上述的雞血藤的乙酸乙酯提取物和藥學(xué)上可接受的載體組成。
[0027]所述制劑為片劑、膠囊、顆?；蛲鑴?br> [0028]所述藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，選自填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、潤濕劑、溶劑、表面活性劑或矯味劑中的一種或幾種。
[0029]所述填充劑選自淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素或葡萄糖等;
[0030]所述粘合劑選自纖維素衍生物、藻酸鹽、淀粉、糊精、明膠或聚乙烯吡咯烷酮等；
[0031]所述崩解劑選自微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙基纖維素或交聯(lián)羧甲基纖維素鈉；
[0032]所述潤滑劑選自硬脂酸、聚乙二醇、碳酸鈣、碳酸氫鈉、微粉硅膠、滑石粉或硬脂酸鎂；
[0033]所述助懸劑選自微粉硅膠、蜂蠟、纖維素、固態(tài)聚乙二醇；
[0034]所述潤濕劑選自甘油、吐溫-80、乙氧基氫化蓖麻油或卵磷脂；
[0035]所述溶劑選自乙醇、液態(tài)聚乙二醇、異丙醇、吐溫-80、甘油、丙二醇或植物油，所述植物油選自大豆油、蓖麻油、花生油、調(diào)和油等；
[0036]所述表面活性劑選自十二烷基苯磺酸鈉、硬脂酸、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、月旨肪酸山梨坦或聚山梨酯(吐溫)等；
[0037]所述矯味劑選自阿斯巴甜、蔗糖素、香精、檸檬酸或糖精鈉。
[0038]本發(fā)明的雞血藤的乙酸乙酯提取物還可以用于制備抑制EGFR活性藥物。[0039]本發(fā)明還包括一種檢測所述雞血藤的乙酸乙酯提取物的方法，用超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)儀對所述雞血藤提取物進(jìn)行分析，以獲得乙酸乙酯提取物的UPLC-Q-T0F-MS 圖譜，其中
[0040]a.質(zhì)譜條件為:ESI離子源，正離子模式檢測；霧化器N2壓力為50psi ;干燥氣N2流速為15L/min ;質(zhì)量掃描范圍50—1200 ;自動3級質(zhì)譜；
[0041]b.色譜分析條件為:色譜柱:Waters ACQUITY UPLC ? BEHC18Column (5(tomX 2.1謹(jǐn)? i d., 1.7 u m) ;二元梯度洗脫，A相為0.1%甲酸水溶液；B相為乙腈，流速為0.35mL/min,梯度洗脫的程序如下:
【權(quán)利要求】
1.一種雞血藤的乙酸乙酯提取物的方法，其特征在于該方法由以下步驟組成: a.將雞血藤加入到石油醚中浸泡12~48小時，每100g雞血藤需要300~500毫升的石油醚，然后滲濾回收殘渣； b.所述的殘渣用濃度為60%~90%的乙醇分2~3次提取，每100克殘渣每次需要300~500毫升的乙醇，每次提取的時間是I~3小時，收集得到提取液； c.所述的提取液進(jìn)行濃縮得到濃縮液； d.用與濃縮液等體積的乙酸乙酯對所述的濃縮液進(jìn)行萃取，收集乙酸乙酯的萃取液； e.蒸干所述的萃取液得到提取物。
2.如權(quán)利要求1所述的雞血藤的乙酸乙酯提取物的方法，其特征在于每100g雞血藤需要300毫升的石油醚浸泡。
3.如權(quán)利要求1所述的雞血藤的乙酸乙酯提取物的方法，其特征在于所述的浸泡時間為18~36小時。
4.如權(quán)利要求1所述的雞血藤的乙酸乙酯提取物的方法，其特征在于所述的乙醇濃度為70~90%o
5.如權(quán)利要求1所述的雞血藤的乙酸乙酯提取物的方法，其特征在于所述的浸泡時間為24小時，每100克殘 渣每次需要300毫升的乙醇，所述的乙醇濃度為80%，所述的步驟(b)中的提取次數(shù)為2次。
6.一種用權(quán)利要求1所述方法提取的雞血藤的乙酸乙酯提取物，其特征在于該提取物含有主要成分:兒茶素-兒茶素、阿福豆素-兒茶素、楊梅素_3’ -O-^-D吡喃木糖苷、芒柄花苷、芒柄花黃素、阿弗羅莫辛、表沒食子兒茶素、催吐蘿芙木醇-9-0-木糖-(I — 6)葡萄糖苷、木犀草苷和沒食子兒茶素-兒茶素。
7.—種藥物制劑，由權(quán)利要求6所述的雞血藤的乙酸乙酯提取物和藥學(xué)上可接受的載體組成。
8.權(quán)利要求6所述雞血藤的乙酸乙酯提取物在制備抑制EGFR活性藥物中的應(yīng)用。
9.一種檢測權(quán)利要求6所述雞血藤的乙酸乙酯提取物的方法，用超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)儀對所述雞血藤提取物進(jìn)行分析，以獲得乙酸乙酯提取物的UPLC-Q-T0F-MS圖譜，其特征在于: a.質(zhì)譜條件為:ESI離子源，正離子模式檢測；霧化器N2壓力為50psi;干燥氣N2流速為15L/min ;質(zhì)量掃描范圍50—1200 ;自動3級質(zhì)譜； b.色譜分析條件為:色譜柱:ffatersACQUITY UPLC ? BEH C18Column(50mmX2.lmm.1d., 1.7um) ;二元梯度洗脫，A相為0.1%甲酸水溶液；B相為乙腈，流速為0.35mL/min，梯度洗脫的程序如下:
【文檔編號】A61P35/00GK103705569SQ201310674955
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2013年12月11日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月20日
【發(fā)明者】陳士林, 黃林芳, 王冬梅, 林森森, 卞兆祥, 徐宏喜, 楊大堅, 陳新滋 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所, 香港浸會大學(xué)