專利名稱：N-苯基鄰氨基苯甲酸衍生物及其用途的制作方法
N-苯基鄰氨基苯甲酸衍生物及其用途
發(fā)明領(lǐng)域和背景本發(fā)明在其一些實施方案中涉及新的二苯胺衍生物及其在治療各種病況中的用 途，所述病況包括與通過電壓依賴性鉀通道的鉀離子流相關(guān)和/或與皮層及外周神經(jīng)活性 相關(guān)的病況和與TRPVl相關(guān)的的病況。離子通道是調(diào)節(jié)離子流進出細(xì)胞的細(xì)胞蛋白，所述離子包括鈣、鈉和氯離子。在 離子通道中，鉀通道最為普遍和具多樣性，并影響各種基本生物學(xué)過程，其已在多種動物細(xì) 胞例如神經(jīng)、肌肉、腺體、免疫、生殖和上皮組織中發(fā)現(xiàn)。一旦鉀通道開放，鉀離子外流造成 細(xì)胞內(nèi)更具負(fù)電性，這抵消了施加于細(xì)胞的去極化電壓。這些通道可例如通過鈣敏、電壓門 控、第二信使、胞外配體和ATP-敏感性來調(diào)節(jié)。生理M-電流是一種在許多神經(jīng)細(xì)胞類型中發(fā)現(xiàn)的非失活型鉀電流。在每一細(xì)胞 類型中，因其是動作電位啟動中唯一的持續(xù)電流，故其在控制細(xì)胞膜興奮性中起到了決定 性作用。M-電流的調(diào)節(jié)對神經(jīng)興奮性具有極其重要的作用。M-電流可通過一大系列受體 類型來調(diào)節(jié)，且所述調(diào)節(jié)既可通過抑制(鈍化，阻滯)也可通過加強(激活，開放)來進行。 在本文中和本領(lǐng)域中通常稱能介導(dǎo)M-電流的通道為M-通道。鉀通道與很多生理過程有關(guān)，包括心跳調(diào)節(jié)、動脈擴張、胰島素釋放、神經(jīng)細(xì)胞興 奮和腎臟電解質(zhì)轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)。因此，鉀通道調(diào)節(jié)劑是主要的候選藥物，且開發(fā)新的調(diào)節(jié)劑作為 治療劑已成為不斷進行的研究工作。鉀通道調(diào)節(jié)劑分為通道開放劑和通道阻滯劑?，F(xiàn)被高度關(guān)注的鉀通道開放劑是 瑞替加濱(N-(2-氨基-4-(4-氟芐基氨基)-苯基)氨基甲酸乙酯)。瑞替加濱對由亞基 KCNQ2和KCNQ3組成的KCNQ型鉀通道具有高度選擇性，其在1993年于EP0554543中首次報 道。用瑞替加濱治療神經(jīng)病性疼痛在例如美國專利6，117，900和EP1223927中已公開。還 有人提出將瑞替加濱相關(guān)的化合物用作鉀通道調(diào)節(jié)劑，參見例如美國專利申請10/022，579 和美國專利6，472，165。其他KCNQ鉀通道調(diào)節(jié)劑已在例如美國專利申請10/075,521中有述，該申請 教導(dǎo)了將2，4_ 二取代嘧啶-5-甲酰胺衍生物用作KCNQ鉀通道調(diào)節(jié)劑；美國專利申請 10/160, 582教導(dǎo)了將肉桂酰胺衍生物用作KCNQ鉀通道調(diào)節(jié)劑；美國專利5，565，483和美 國專利申請10/312，123、10/075，703與10/075，522教導(dǎo)了 3-取代羥吲哚衍生物用作KCNQ 鉀通道調(diào)節(jié)劑；美國專利5，384，330教導(dǎo)了 1，2，4_三氨基苯衍生物用作KCNQ鉀通道調(diào) 節(jié)劑；而美國專利6，593，349教導(dǎo)了二芳基胺衍生物用作KCNQ鉀通道調(diào)節(jié)劑。美國專利 6，291，442教導(dǎo)了用于調(diào)節(jié)Shaker型電壓門控鉀通道的化合物，所述化合物包含兩個或三 個芳香環(huán)，所述芳香環(huán)具有連接到其中一個環(huán)上的自由羧基或通過酯鍵連接到低級烴基酯 的羧基?，F(xiàn)已表明，兩種在化學(xué)上相關(guān)的非留族消炎藥(NSAIDs)雙氯芬酸和甲氧芬那酸 作為Kv7. 2/3(KCNQ2/3)通道開放劑表現(xiàn)出鉀通道調(diào)節(jié)活性[1]，更進一步表明，它們將引 起那些被稱作M-通道的神經(jīng)M-電流。M-通道的藥物靶點至關(guān)重要。在這些通道開放劑表 現(xiàn)出治療如偏頭痛、癲癇和神經(jīng)病性疼痛的神經(jīng)興奮過度的治療效力的同時，這些通道的阻滯劑在治療記憶缺失和阿爾茨海默氏病中具有潛在的用途[2，3]。這些非甾族消炎藥(NSAIDs)衍生物已被作為M-通道調(diào)節(jié)劑研究。W02004/035037 和美國專利申請20050250833，該文獻通過全文引用結(jié)合到本文，教導(dǎo)了將N-苯基鄰氨基 苯甲酸和2-苯并咪唑酮用作鉀通道開放劑，特別是電壓依賴性鉀通道例如KCNQ2通道、 KCNQ3通道和KCNQ2/3通道開放劑，和用作神經(jīng)活性調(diào)節(jié)劑。瞬時受體電位香草酸受體I(TRPVl)受體是一種配體門控非選擇 性陽離子通道， 其可被以下因素激活熱(通常高于43°C)、低PH(<6)和內(nèi)源性脂分子例如花生四烯酸 乙醇胺、N-花生四烯?；?arachidonoyl)-多巴胺、N-酰基-多巴胺和被稱做內(nèi)源辣椒素 (endovanilloids)的脂氧合酶的產(chǎn)物(例如12-和15-(S)-HPETE))。除了外周初級傳入 神經(jīng)元和背根神經(jīng)節(jié)，TRPVl受體也在整個大腦中表達。最近的證據(jù)表明內(nèi)源花生四烯酸 乙醇胺或辣椒素引起的TRPVl受體興奮導(dǎo)致痛覺缺失，且此效應(yīng)與谷氨酸酯增加和延髓頭 端腹內(nèi)側(cè)區(qū)(RVM) OFF細(xì)胞群的激活有關(guān)?，F(xiàn)在還發(fā)現(xiàn)TRPVl參與體溫調(diào)節(jié)、焦慮和海馬長時程抑制(LTD)的調(diào)節(jié)。TRPVl通 道也存在于神經(jīng)支配膀胱的感覺傳入神經(jīng)。抑制TRPVl已證明緩解尿失禁綜合征。TRPVl調(diào)節(jié)劑已在例如W02007/054480中有述，其中教導(dǎo)了 2_(苯并咪 唑-1-基)-乙酰胺衍生物在TRPVl相關(guān)疾病治療中的效用。W02008/079683教導(dǎo)了將 為環(huán)己基和苯基的共軛雙環(huán)體系的化合物用于抑制TRPVl受體。EP01939173教導(dǎo)了 將0-取代-二芐基脲-或硫脲-衍生物用作TRPVl受體拮抗劑。W02008/076752教 導(dǎo)了將苯并咪唑化合物用作有效的TRPVl調(diào)節(jié)劑，而EP01908753教導(dǎo)了為亞雜環(huán)烴基 (heterocyclidene)-乙酰胺衍生物的TRPVl調(diào)節(jié)劑。發(fā)明概述本發(fā)明在其一些實施方案中涉及為有效的鉀通道調(diào)節(jié)劑的化合物，更具體而言， 所述化合物為電壓依賴性鉀通道例如KCNQ2通道、KCNQ3通道和KCNQ2/3通道的開放劑或 阻滯劑，其可用作治療需要開放或阻滯這些通道的醫(yī)學(xué)病癥的藥物。本發(fā)明在其一些實施 方案中還涉及為TRPVl調(diào)節(jié)劑的化合物，所述化合物可用作治療需要阻滯這些通道的醫(yī)學(xué) 病癥的藥物。本文所述化合物的設(shè)計和活性來自構(gòu)效關(guān)系(SAR)研究，其中著重研究了開放劑 和/或阻滯劑結(jié)合和調(diào)節(jié)鉀通道的化學(xué)和結(jié)構(gòu)決定因素。本文所述化合物在結(jié)構(gòu)上基于二 苯胺的羧酸類衍生物，例如2-(苯基氨基)苯甲酸和2-(2-(苯基氨基)苯基)乙酸，而鉀 通道開放劑特別地基于具有一個或多個吸電子取代基的衍生物，所述一個或多個吸電子取 代基位于二苯胺部分的一個或兩個苯基環(huán)上，且鉀通道阻滯劑可例如用其他基團來置換官 能團例如羥基而衍生制得。除了調(diào)節(jié)鉀通道，還發(fā)現(xiàn)本文所述的一些化合物表現(xiàn)出TRPVl 通道的調(diào)節(jié)作用(例如，阻滯)。因此，根據(jù)本發(fā)明一些實施方案的一方面，提供了具有通式I的化合物或其藥學(xué) 上可接受的鹽 式I其中，Z 為 A-G ( = K) -X-Y 基團，A為烴基或不存在；G 選自 C、S 禾口 PRa ；K 選自 0 禾口 S ；X選自0、S和NRb或不存在；且Y選自氫、烴基、羥烴基、環(huán)烴基、芳基和聚亞烴基二醇部分，R1選自氫、烴基、環(huán)烴基或芳基；R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和Riq中的各者獨立地選自氫、烴基、羥烴基、三鹵代烴
基、環(huán)烴基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、雜脂環(huán)基、商素、羥基、烴氧基、芳氧基、巰基、烴硫基、 芳硫基、亞磺酰基、磺酰基、氰基、硝基、氨基和-NR15R16,或者，R2、R3、R4、R5和R6中的至少兩 者，和/或R7、R8、R9和Rki中的至少兩者形成五元或六元芳環(huán)、雜芳環(huán)、脂環(huán)或雜脂環(huán)，和Ra和Rb中的各者獨立地選自氫、烴基、環(huán)烴基和芳基，條件是R2、R3、R4、R5、R6、R7、 R8> R9和Riq中的至少一者為吸電子基團。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和Rltl中的至少兩者為吸電子 基團。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，R7、R8、R9和Rltl中的至少一者為吸電子基團。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，R7、R8，R9和Rki中的至少一者為吸電子基團，且R2、R3> R4> R5和R6中的至少一者為吸電子基團。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，R9為吸電子基團。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，R9和R7中的至少一者為吸電子基團。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，R9、R7和R4中的至少一者為吸電子基團。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，所述吸電子基團為硝基。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，具有通式I的化合物中的Y選自羥烴基和聚亞烴基二 醇部分。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，所述聚亞烴基二醇部分具有通式II [ (CH2) m-0]n-R17式II其中m和η中的各者獨立地為1_10的整數(shù)；且R17為氫、烴基、環(huán)烴基或芳基。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，G為C，K為0，R2、R3、R4、R5和R6中的各者獨立地選自 氫、烴基、鹵素和三鹵代烴基；且R7> R8> R9和Rki中的各者為氫。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，本文所述化合物選自ΝΗ24、ΝΗ25、ΝΗ28、ΝΗ29、ΝΗ30和NH31。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案的另一方面，提供了一種制備本文所述化合物的方法， 做法是，使具有通式I*的化合物與能以吸電子基團取代R2、R3> R4> R5> R6> R7> R8> R9和Rki中 的一者或多者的試劑反應(yīng)，以由此獲得具有通式I的化合物， 式 I*，其中，Z 為 A-G ( = K) -X-Y 基團；A為烴基或不存在；G 選自 C、S 禾口 PRa ；K 選自 0 禾口 S ；X選自NRb、S或不存在；且Y選自氫、烴基、羥烴基、環(huán)烴基、芳基和聚亞烴基二醇部分，R1選自氫、烴基、環(huán)烴基或芳基；R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和Riq中的各者獨立地選自氫、烴基、羥烴基、三鹵代烴
基、環(huán)烴基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、雜脂環(huán)基、商素、羥基、烴氧基、芳氧基、巰基、烴硫基、 芳硫基、亞磺酰基、磺?；⑶杌?、硝基、氨基和-NR15R16,或者，R2、R3、R4、R5和/或R6中的至 少兩者，R7> R8> R9和Rw中的至少兩者形成五元或六元芳環(huán)、雜芳環(huán)、脂環(huán)或雜脂環(huán)；和Ra和Rb中的各者獨立地選自氫、烴基、環(huán)烴基和芳基。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案的另一方面，提供了一種開放電壓依賴性鉀通道和/或 抑制皮層和/或外周神經(jīng)元活性的方法，做法是，給予有需要的受試者治療有效量的本發(fā) 明所述化合物，從而開放電壓依賴性鉀通道。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，所述化合物形成藥物組合物的一部分，所述組合物還 包括藥學(xué)上可接受的載體。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案的另一方面，提供了本文所述化合物在制備用于治療病 癥開放電壓依賴性鉀通道和/或抑制皮層和/或外周神經(jīng)元活性對其有利的病癥的藥物中 的用途。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案的另一方面，提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物 包括作為活性成分的本文所述化合物和藥學(xué)上可接受的載體。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，所述組合物包裝在包裝材料中并在所述包裝材料之中 或之上加以印刷標(biāo)識，用于開放電壓依賴性鉀通道和/或抑制皮層和/或外周神經(jīng)元活性。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，所述電壓依賴性鉀通道包括KCNQ2通道和/或KCNQ3 通道和/或KCNQ2/3通道。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，開放電壓依賴性鉀通道來治療的病癥或疾病選自癲癇、缺血性發(fā)作、偏頭痛、共濟失調(diào)、肌纖維顫搐、神經(jīng)源性疼痛、神經(jīng)病性疼痛、帕金森氏 病、雙相障礙、三叉神經(jīng)痛、痙攣狀態(tài)、情感障礙、精神障礙、精神分裂癥、腦瘤、聽力缺失和 視力缺失、焦慮和運動神經(jīng)元疾病。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，抑制皮層和/或外周神經(jīng)元活性來治療的疾病或病癥 選自癲癇、缺血性發(fā)作、偏頭痛、共濟失調(diào)、肌纖維顫搐、神經(jīng)源性疼痛、神經(jīng)病性疼痛、帕金 森氏病、雙相障礙、三叉神經(jīng)痛、痙攣狀態(tài)、情感障礙、精神障礙、精神分裂癥、腦瘤、聽力缺 失和視力缺失、焦慮和運動神經(jīng)元疾病。根據(jù)一些實施方案，本文所述化合物能阻滯TRPVl通道，且再根據(jù)一些實施方案， 這些化合物不調(diào)節(jié)TRPV6通道的活性。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案的另一方面，提供了一種阻滯電壓依賴性鉀通道和/或 增強皮層或外周神經(jīng)元活性的方法，做法是，給予有需要的受試者治療有效量的具有通式 III的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 式III其中，Z 為 A-G ( = K) -X-Y 基團，A為烴基或不存在；G 選自 C、S 和 PRa;K 選自 0 和 S ；X選自NRb、S或不存在；且Y選自烴基、芳基、環(huán)烴基、雜脂環(huán)基和帶正電荷的基團，條件是Y不含羥基；R1選自氫、烴基、環(huán)烴基或芳基；R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和Riq中的各者獨立地選自氫、烴基、羥烴基、三鹵代烴
基、環(huán)烴基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、雜脂環(huán)基、商素、羥基、烴氧基、芳氧基、巰基、烴硫基、 芳硫基、亞磺酰基、磺酰基、氰基、硝基、氨基和-NR15R16,或者，R2、R3、R4、R5和/或R6中的至 少兩者，R7> R8> R9和Rw中的至少兩者形成五元或六元芳環(huán)、雜芳環(huán)、脂環(huán)或雜脂環(huán)；和Ra和Rb中的各者獨立地選自氫、烴基、環(huán)烴基和芳基。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案的另一方面，提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物 包括作為活性成分的具有通式III的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 式III其中Z 為 A-G ( = K) -X-Y 基團，A為烴基或不存在；G 選自 C、S 禾口 PRa ；K 選自 0 禾口 S ；X選自NRb、S或不存在；和Y選自烴基、芳基、環(huán)烴基、雜脂環(huán)基和帶正電荷的基團，條件是Y不含羥基；R1選自氫、烴基、環(huán)烴基或芳基；R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和Riq中的各者獨立地選自氫、烴基、羥烴基、三鹵代烴
基、環(huán)烴基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、雜脂環(huán)基、商素、羥基、烴氧基、芳氧基、巰基、烴硫基、 芳硫基、亞磺?；?、磺?；?、氰基、硝基、氨基和-NR15R16,或者，R2、R3、R4、R5和/或R6中的至 少兩者，R7> R8> R9和Rw中的至少兩者形成五元或六元芳環(huán)、雜芳環(huán)、脂環(huán)或雜脂環(huán)；Ra和Rb中的各者獨立地選自氫、烴基、環(huán)烴基和芳基，且其中所述組合物包裝在包裝材料中并在包裝材料之中或之上加以印刷標(biāo)識，用 來阻滯電壓依賴性鉀通道。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案的另一方面，提供了本文所述具有通式III的化合物在 制備用于治療阻滯電壓依賴性鉀通道對其有利的病癥的藥物中的用途。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，具有通式111的化合物中的Y選自烴基、雜脂環(huán)基和帶 正電荷的基團。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，所述烴基為異丁基。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，所述雜脂環(huán)基為2，3-環(huán)氧基丙基。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，所述帶正電荷的基團為銨基。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，所述電壓依賴性鉀通道包括KCNQ2通道和/或KCNQ3 通道和/或KCNQ2/3通道。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，阻滯電壓依賴性鉀通道是為了治療認(rèn)知病癥或疾病。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，所述認(rèn)知病癥或疾病選自阿爾茨海默氏病、老年記憶 缺失、記憶缺失、腦損傷相關(guān)記憶缺失或中風(fēng)后遺癥和學(xué)習(xí)障礙。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案的一方面，提供了一種阻滯電壓依賴性鉀通道的方法， 做法是，給予有需要的受試者治療有效量的化合物，所述化合物能夠與鉀通道的電壓敏感 域內(nèi)的疏水結(jié)合袋相互作用，而不與電壓敏感域內(nèi)的至少一個親電結(jié)合位點相互作用。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，所述化合物能夠在電壓敏感域中S4螺旋和S1-S2螺旋 之間的界面形成的溝處與電壓敏感域的外部可及表面相互作用，并進一步能將電壓敏感域截于(trap)其內(nèi)向靜息構(gòu)象。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案的一方面，提供了一種開放電壓依賴性鉀通道的方法， 做法是，給予有需要的受試者治療有效量的化合物，所述化合物能夠與鉀通道電壓敏感域 內(nèi)的疏水結(jié)合袋并與至少兩個親電結(jié)合位點相互作用。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，所述化合物能夠在電壓敏感域中S4螺旋和S1-S2螺旋 之間的界面形成的溝處與電壓敏感域的外部可及表面相互作用，并進一步能將電壓敏感域 截于其外向活化構(gòu)象。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案的一方面，提供了一種阻滯有需要的受試者瞬時受體電 位香草酸受體1 (TRPVl)的方法，所述方法包含給予受試者治療有效量具有通式IV的化合 物 式IV其中Z 為 A-G ( = K)-X-Y 基團，且其中A為烴基或不存在；G 選自 C、S 禾口 PRa;K 選自 OfPS;X選自NRb、0、S或不存在；和Y選自氫、烴基、羥烴基、環(huán)烴基、雜脂環(huán)基、芳基和聚亞烴基二醇?xì)埢?，R1選自氫、烴基、環(huán)烴基或芳基；R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和Riq中的各者獨立地選自氫、烴基、羥烴基、三鹵代烴
基、環(huán)烴基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、雜脂環(huán)基、商素、羥基、烴氧基、芳氧基、巰基、烴硫基、 芳硫基、亞磺?；?、磺酰基、氰基、硝基、吸電子基團、氨基和-NR15R16,或者，R2、R3、R4、R5和R6 中的至少兩者，R7、R8、R9和Rltl中的至少兩者形成五元或六元芳環(huán)、雜芳環(huán)、脂環(huán)或雜脂環(huán)；R15和R16各自獨立地選自氫、烴基、環(huán)烴基、芳基、羰基和磺?；蛘?，R15和R16形 成五元或六元雜脂環(huán)；和Ra和Rb中的各者選自氫、烴基、環(huán)烴基和芳基。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案的一方面，提供了如本文所述具有通式IV的化合物在 制備用于阻滯有需要的受試者瞬時受體電位香草酸受體I(TRPVl)的藥物中的用途。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案的一方面，提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物包 含如本文所述具有通式IV的化合物和藥學(xué)上可接受的載體，所述組合物經(jīng)包裝并在包裝 材料之中或之上加以印刷標(biāo)識，用于阻滯瞬時受體電位香草酸受體1 (TRPVl)。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，Y選自羥烴基和聚亞烴基二醇部分。
根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，所述聚亞烴基二醇的部分具有如本文所述的通式II。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，G為C ;K為0 ；R2、R3、R4、R5和R6中的各者獨立地選自 氫、烴基、鹵素和三鹵代烴基；且R7> R8> R9和Rki中的各者為氫。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和Rltl中的至少一者為吸電子 基團，如本文所述。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，所述化合物為NH29。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，所述化合物不調(diào)節(jié)TRPV6。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，阻滯TRPVl用來治療的TRPVl相關(guān)病癥選自癲癇、疼痛 相關(guān)病癥(例如神經(jīng)源性疼痛、神經(jīng)病性疼痛、異常性疼痛、炎癥相關(guān)疼痛)、雙相障礙、情 感障礙、精神障礙、精神分裂癥、焦慮和運動神經(jīng)元疾病、膀胱過度活動癥和尿失禁。除非另有定義，本文所用所有科技術(shù)語具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理 解的含義。盡管類似或等價于本文所述的方法和材料可用于實施或測試本發(fā)明，下文描述 適宜的方法和材料。如果發(fā)生沖突，以本專利的申請文件(包括定義)為準(zhǔn)。此外，本文所 述材料、方法和實例僅作示意性用途，并不意在限制本發(fā)明的范圍。附圖簡述下面結(jié)合附圖以例舉的方式對本發(fā)明一些實施方案進行描述。現(xiàn)在詳細(xì)地具體參 照附圖，須強調(diào)，所示細(xì)節(jié)通過舉例示出并用于本發(fā)明實施方案的示意性討論目的。這樣， 結(jié)合附圖進行描述使本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚本發(fā)明的實施例如何實施。見附圖

圖1表示M-通道結(jié)合位點的藥效學(xué)特征的示意圖，所述藥效學(xué)特征從下文討論的 二苯胺衍生物的構(gòu)效關(guān)系(SAR)研究推斷而來，其顯示了與M-通道調(diào)節(jié)相關(guān)的基于二苯胺 的化合物的化學(xué)特征；圖2A-D示意了關(guān)于化合物NH17(根據(jù)本發(fā)明實施方案的一種示例性化合物)在 電壓依賴性鉀通道Kv7. 2/3抑制試驗中所得的結(jié)果，其表明NH17抑制了電流并加強了外周 DRG神經(jīng)元的興奮性，反映在在外部施加25 μ M NHl7之前((圖2Α，左邊)和之后(圖2Α， 右邊)從同一 CHO細(xì)胞記錄到的代表性波形(trace)，其中膜電位從-90mV鉗制電位躍至 +50mV，脈沖以IOmV步幅遞增，脈沖持續(xù)時間1. 5秒，然后復(fù)極化躍至_60mV ；不存在25 μ M 朋17(在圖28中標(biāo)為空心框)和存在25 4 11 ΝΗ17(在圖2Β中標(biāo)為實心框)時的電流密 度-電壓關(guān)系(η = 6)；大鼠DRG的代表性峰值放電，其在接觸1μΜΝΗ17之前(對照)和 接觸1、2和3分鐘之后(圖2C)通過方波去極化電脈沖(10pA，400msec)誘發(fā)；以及預(yù)先與 1 μ M NHl7接觸5分鐘(圖2D)的DRG神經(jīng)元的代表性自發(fā)性峰值放電波形；圖3A-F示意了關(guān)于化合物ΝΗ25(根據(jù)本發(fā)明實施方案的一種示例性 化合物)在 對CHO細(xì)胞中表達的電壓依賴性鉀通道Κν7. 2/3的抑制測定中所得到的結(jié)果，其表明了化 合物NH25的M-通道開放劑性質(zhì)，反映在在外部施加50 μ ΜΝΗ25之前(圖3Α，左邊)和 之后(圖3Α，右邊)從同一細(xì)胞記錄到的代表性波形，其中膜電位從_90mV鉗制電位躍至 +IOmV,脈沖以IOmV步幅遞增，脈沖持續(xù)時間1. 5秒，然后復(fù)極化躍至_60mV ；每30秒鐘將細(xì) 胞從-90mV躍至-50mV，脈沖脈沖持續(xù)時間1. 5秒，其中電流波形在不存在10 μ M ΝΗ25 (對 照)以及存在10 μ M ΝΗ25 (圖3Β)和50 μ M ΝΗ25 (圖3C)時從同一細(xì)胞記錄；電流百分比 在存在10 μ M ΝΗ25和50 μ M ΝΗ25和不存在ΝΗ25時于_50mV下顯示，后者為對照(100% )(圖3D，η = 10 ；*ρ < 0. 01)；對照(圖3Ε中用空心框標(biāo)識)、10 μ M ΝΗ25處理(圖3Ε中 標(biāo)識為實心框)和50 μ M ΝΗ25處理(標(biāo)識為菱形)下的標(biāo)準(zhǔn)化電導(dǎo)(G/Gmax)，其繪制為 經(jīng)過處理的細(xì)胞內(nèi)測得的測試電壓的函數(shù)，其中所述激活曲線用一個玻爾茲曼函數(shù)擬合(η =5)；左移程度(AV5tl)，其繪制為ΝΗ25濃度的函數(shù)并且用S型函數(shù)擬合(η = 5)，所得到 的EC5tl值(半數(shù)有效濃度)為22 士 1 μ M (圖3F)；圖4A-D示意了所得到的關(guān)于化合物ΝΗ25(根據(jù)本發(fā)明實施方案的示例性化合物) 的結(jié)果，其顯示了 ΝΗ25對Κν7. 2/3鉀通道激活和失活動力學(xué)的影響，反映在不存在或存在 25 μ M ΝΗ25時于_20mV下通過確定t1/2估算出的激活動力學(xué)曲線，所述t1/2為達到一半電流 幅度的時間值(圖4A，n = 4 ;*p < 0. 02)；在不存在或存在25 μ M ΝΗ25時電流激活的代表 性標(biāo)準(zhǔn)化波形(圖4Β)；電流失活的代表性波形，其在未加或施加25 μ M ΝΗ25時于-60mV下 測得(圖4C)；并且在_60mV下，用指數(shù)函數(shù)擬合失活動力學(xué)曲線，并在不存在或存在25μΜ ΝΗ25時測定時間常數(shù)(圖4D，η = 4 ;*ρ < 0. 02)；圖5Α-Ε示意了獲得的關(guān)于化合物ΝΗ25(根據(jù)本發(fā)明實施方案的示例性化合物)的結(jié)果，其表明ΝΗ25抑制海馬和外周DRG神經(jīng)元的激活，反映在代表性大鼠海馬峰值放 電，其在接觸25μΜ ΝΗ25之前(圖5Α標(biāo)注為“對照”)、接觸時和洗滌后(圖5Α中標(biāo)注為 “洗滌”)通過方波去極化電脈沖(ΙΟΟρΑ，400msec)誘發(fā)；在接觸25 μ M ΝΗ25之前(圖5Β中 標(biāo)注為“對照”)和接觸25 μ M ΝΗ25之后的DRG神經(jīng)元的靜息膜電位(η = 13 ；*ρ < 0. 01)； 在不存在(圖5C中標(biāo)注為“對照”)或存在25μΜ ΝΗ25時通過2ms方波去極化電脈沖 (100-1100pA, IOOpA步幅遞增)誘發(fā)的DRG神經(jīng)元的代表性單一峰值放電；在不存在或存 在25 μ M ΝΗ25時通過注入方波去極化電脈沖(75_200ρΑ，脈沖持續(xù)時間400ms)誘發(fā)的海馬 和DRG神經(jīng)元內(nèi)的峰值放電數(shù)目(圖5D，n = 8 ;*p < 0. 01)；當(dāng)不存在或存在25 μ M NH25 時須注入(2ms)DRG神經(jīng)元內(nèi)以誘發(fā)單一峰值放電的基電流(圖5E，η = 12 ；*ρ < 0. 01)；圖6A-G給出從化合物ΝΗ25 (根據(jù)本發(fā)明實施方案的示例性化合物)獲得的結(jié)果， 顯示了 ΝΗ25對谷氨酸與GABA自發(fā)性釋放和小鼠最大電休克癲癇發(fā)作模型的影響。反映 在在接觸25 μ M ΝΗ25之前(在圖6Α中標(biāo)注為“對照”)、期間和洗滌后(在圖6Α中標(biāo)注 為“洗滌”)于_70mV的鉗制電位下記錄到的自發(fā)性抑制性突觸后電流(IPSCs)的代表性波 形；在接觸25 μ M ΝΗ25之前、期間和洗滌后(圖6Β)的代表性試驗，其將sIPSCs頻率表示 為時間的函數(shù)；25 μ M ΝΗ25對sIPSCs的標(biāo)準(zhǔn)化電荷轉(zhuǎn)移、幅度和頻率的影響(圖6C，η = 7 ；*ρ < 0.01)；在接觸25 μ M ΝΗ25之前(圖6D中標(biāo)注為“洗滌”)、期間和洗滌之后(圖 6D中標(biāo)注為“洗滌”)于鉗制電位_70mV下記錄的自發(fā)性EPSCs的代表性波形；25 μ M ΝΗ25 對標(biāo)準(zhǔn)化放電持續(xù)時間、頻率和放電期內(nèi)及總計電荷轉(zhuǎn)移的影響(圖6Ε)和對sEPSCs電荷 轉(zhuǎn)移的影響(圖6F，η = 6 ;*p < 0. 01)；以及小鼠最大電休克(MES)普遍適用的癲癇模型 (0.2sec，50mA)，其表明NH25可通過半數(shù)有效量(ED5tl) 12mg/kg來預(yù)防誘發(fā)的癲癇發(fā)作(圖 6G)；圖7A-G給出了從化合物NH29 (根據(jù)本發(fā)明實施方案的示例性化合物)獲得的結(jié) 果，其表明NH29加強了 Kv7. 2/3電流并且抑制外周DRG神經(jīng)元激活，反映在同一 CHO細(xì)胞 在外部施加100 μ M ΝΗ29之前(圖7Α左邊)和之后(圖7Α右邊)記錄的代表性波形，其 中膜電位從_90mV(鉗制電位)躍至+40mV，脈沖以IOmV步幅遞增，脈沖持續(xù)時間1. 5秒， 然后復(fù)極化躍至_60mV ；對照(圖7B中標(biāo)識為空心框)、25 μ M (圖7B中標(biāo)識為實心框)和100 μ M(圖7B中標(biāo)識為空心圓)NH29處理的細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)化電導(dǎo)(G/Gmax)曲線繪制為測試 電壓的函數(shù)，其中所述激活曲線用一個玻爾茲曼函數(shù)擬合(η = 5) ；ΝΗ29的效力通過左移程 度(AV5tl)確定，其繪制為ΝΗ29濃度的函數(shù)(η = 5)，并且用S型函數(shù)擬合，所得到的EC5tl值 為14士2 μ M(圖7C，η = 5)；大鼠DRG代表性峰值放電，其在暴露于25 μ M ΝΗ29之前(圖 7D中標(biāo)注為“對照”)、期間和洗滌后(圖7D中標(biāo)注為“洗滌”)通過方波去極化電流脈沖 (IOOpA, 400msec)誘發(fā)；未加或施加25μΜ ΝΗ29時須注入(2ms) DRG神經(jīng)元以誘發(fā)單一峰 值放電的基電流(圖7E，n = 8 ;*p < 0. 01)；在不存在或不存在25 μ M ΝΗ29時通過向DRG 神經(jīng)元注入方波去極化電流脈沖(75-200pA，400ms)誘發(fā)的峰值放電數(shù)目(圖7F，n = 12 ； *p < 0. 01)；以及DRG神經(jīng)元在與25 μ M ΝΗ29接觸之前(圖7G中標(biāo)注為“對照”)和之后 的靜息膜電位(圖7G，η = 7 ;*ρ < 0. 01)；圖8給出了比較25 μ M化合物ΝΗ29對各種KCNQ亞基和突變型的增強效應(yīng)的條形 圖；其中開放劑效應(yīng)表示為不存在開放劑的對照電流的百分比。
圖9給出了計算機生成的KCNQ2通道(S-編號的螺旋涂成金色和紫色)內(nèi)的在通 道激活期間相互作用的兩個相鄰電壓感受域(VSD)結(jié)構(gòu)模型，并顯示了位于S4螺旋中的殘 基R207 (涂為橙紅色)，所述殘基在突變時將使通道對開放劑ΝΗ29大為不敏感，還示意了根 據(jù)本實施方案的示例性化合物，其可?？吭陔妷焊惺苡騼?nèi)S1、S2和S4螺旋之間的界面形成 的溝內(nèi)；圖10A-D給出了 NH29(根據(jù)本發(fā)明實施方案的示例性通道開放劑化合物)對野 生型KCNQ2(圖IOA和10B)和R207W突變型(圖IOA和10D)通道的增強效應(yīng)，如激活曲 線測定所示，可見NH29在野生型和突變型的情況下使激活曲線(AV5tl)分別左移-15. 5mV 和-5. 5mV,還可見NH29使野生型和突變型的電流分別增加約3. 4倍(于_40mV下)和1. 5 倍(于-20mV下)。圖IlA-F給出NH29(根據(jù)本發(fā)明實施方案的示例性通道開放劑化合物)和瑞替 加濱對KCNQ2突變型R207W以及W236L的增強效應(yīng)。顯示了轉(zhuǎn)染KCNQ2突變型R207W的 CHO細(xì)胞在外部施加25 μ M ΝΗ290、1、和4-4. 5分鐘之后記錄到的代表性波形，且其中膜電 位從-90mV鉗制電位躍至_20mV，脈沖持續(xù)時間1. 5秒(圖11A)，或外部施加25 μ M瑞替加 濱之后0、1和4分鐘的代表性波形，其中膜電位從_90mV鉗制電位躍至_40mV，脈沖持續(xù)時 間1. 5秒(圖11B)。圖IlC和IlD顯示了轉(zhuǎn)染KCNQ2突變型W236L的CHO細(xì)胞在外部施加 25 μ M ΝΗ29之后0、1和6分鐘(圖11C)或外部施加10 μ M瑞替加濱0和5分鐘之后(圖 11D)的代表性波形，且其中膜電位從_90mV鉗制電位躍至-40mV，脈沖持續(xù)時間1.5秒。圖 IlE給出了疊加波形，顯示了瑞替加濱(RTG)和NH29在_40mV下測得的對KCNQ2突變型 W236L通道活性的影響；圖IlF給出了比較NH29和瑞替加濱對野生型KCNQ2和KCNQ2突變 型增強效應(yīng)的條形圖，其中開放劑效應(yīng)表示為不存在開放劑的對照電流的百分比。結(jié)果顯 示了 W236L突變型僅消除了瑞替加濱依賴性的對KCNQ2的增強效應(yīng)而不是NH29依賴性的 對KCNQ2的增強效應(yīng)，而R207W突變型僅消除了 NH29依賴性的而不是瑞替加濱依賴性的對 KCNQ2電流的增強效應(yīng)。圖12A-F給出了 NH29 (根據(jù)本發(fā)明實施方案的示例性通道開放劑化合物)對選出 的KCNQ2突變型的增強效應(yīng)。顯示了比較NH29對天然KCNQ2和KCNQ2突變型的增強效應(yīng) 的條形圖，其中所述突變氨基酸位于S1-S2螺旋區(qū)(圖12A)或S4螺旋區(qū)(圖12D)，且其中所述開放劑效應(yīng)以不存在開放劑的對照電流的百分比表示。為作比較，觀察到的NH29對天 然KCNQ2的電流增加以綠色線條標(biāo)示。圖12B、12C、12E和12F給出了分別轉(zhuǎn)染了 KCNQ2突 變型S122A、S121A、L206C和R201A的CHO細(xì)胞在外部施加25 μ M ΝΗ29后記錄到的代表性 波形，其中所述膜電位從_90mV鉗制電位躍至-40mV，脈沖持續(xù)時間1. 5秒。結(jié)果顯示，大多 數(shù)消除了 NH29依賴性的對KCNQ2增強效應(yīng)的突變位于S4螺旋。 圖13A-C給出了 NH29 (根據(jù)本發(fā)明一些實施方案的示例性化合物)對TRPVl通道 的抑止效應(yīng)。圖13A中顯示了 CHO細(xì)胞內(nèi)的TRPVl通道電流的抑制百分比的示意圖，其為外 部施加的NH29濃度的函數(shù)，其中所述TRPVl通道用0. 5 μ M辣椒素(CAP)激活。還顯示了從 轉(zhuǎn)染TRPVl并被0. 5 μ M辣椒素激活的CHO細(xì)胞記錄到的代表性波形(圖13Β)，作為對比， 其中外部施加5ΡμΜΝΗ29的類似細(xì)胞的TRPVl電流以可逆方式幾乎完全抑制(圖13C)。圖14給出了 ΝΗ29(根據(jù)本發(fā)明一些實施方案的示意性化合物)對背根神經(jīng)節(jié) (DRG)中TRPVl通道的抑制效應(yīng)。顯示了從通過0.5 μ M辣椒素激活TRPVl通道并外部施加 5μΜΝΗ29的DRG神經(jīng)元記錄到的代表性波形，其以可逆方式幾乎完全抑制了 TRPVl電流。圖15A-C給出了 ΝΗ29 (根據(jù)本發(fā)明一些實施方案的示意性化合物)缺乏對TRPV6 通道的作用。圖15Α示意了重疊的代表性波形，其從轉(zhuǎn)染了 TRPV6的同一 CHO細(xì)胞在外部施 加25 μ M ΝΗ29之前(標(biāo)為“對照”)、期間(標(biāo)為165s)和洗滌后(標(biāo)為“洗滌”)記錄，且 其中所述膜電位從-80mV躍至IOOmV,脈沖持續(xù)時間40秒(方案標(biāo)于上部)。電流幅度在 峰值電流點測量(在-SOmV下標(biāo)為al，在+IOOmV下標(biāo)為a2)并繪制為記錄時間的函數(shù)(分 別見圖15B和15C)。結(jié)果顯示TRPV6電流在施加NH29之前、之時和洗滌之后是相似的，因 此暗示了 NH29缺乏對該通道的調(diào)節(jié)作用。優(yōu)選實施方案描述本發(fā)明涉及可用于調(diào)節(jié)鉀通道活性的化合物，更具體而言(但非排外地)，涉及在 結(jié)構(gòu)上基于二苯胺的羧酸類衍生物的化合物例如2-(苯基氨基)苯甲酸和2-(2-(苯基氨 基)苯基)乙酸，所述化合物包含二苯胺部分一個或兩個苯環(huán)上的一個或多個吸電子取代 基，及其作為電壓依賴性鉀通道開放劑的用途。本發(fā)明還涉及在結(jié)構(gòu)上基于二苯胺的羧酸 類衍生物的其他化合物，及其作為電壓依賴性鉀通道阻滯劑的用途。本發(fā)明還涉及二苯胺 的這些及其它衍生物在治療與電壓門控鉀通道開放或阻滯有關(guān)的醫(yī)學(xué)病癥和與瞬時受體 電位香草酸受體1 (TRPV1通道)阻滯有關(guān)的醫(yī)學(xué)病癥中的用途。參照實施例和相應(yīng)說明可更好地理解本發(fā)明的原理和用途。在詳細(xì)解釋本發(fā)明的 至少一個實施例前，應(yīng)當(dāng)理解，不必將本發(fā)明的應(yīng)用限于在以下描述中提到或?qū)嵤├e例 說明的細(xì)節(jié)。本發(fā)明能以其他實施方案進行，或能以各種方式實施或進行。而且，應(yīng)當(dāng)理解， 本文中采用的措辭和術(shù)語用于描述的目的不應(yīng)被視為限制性的。在探索鉀通道調(diào)節(jié)劑的結(jié)合決定因素時，采用了多種N-苯基鄰氨基苯甲酸衍生 物進行了構(gòu)效關(guān)系研究，所述N-苯基鄰氨基苯甲酸衍生物具有大量化學(xué)和結(jié)構(gòu)變體。N-苯 基鄰氨基苯甲酸是被羧酸取代的二苯胺化合物(見下述)。因此表述“N-苯基鄰氨基苯甲 酸衍生物”和“二苯胺衍生物”可在本文互換使用。為此，設(shè)計和合成了在一個或兩個苯環(huán) 上具有一個或多個吸電子取代基的N-苯基鄰氨基苯甲酸衍生物。 二苯胺N-苯基鄰氨基苯甲酸如隨后的實施例部分討論和說明，已發(fā)現(xiàn)，吸電子取代基例如硝基(NO2)增加二 苯胺衍生物(見上述)的通道開放劑活性。還發(fā)現(xiàn)，(兩個苯環(huán)之間)缺少仲胺橋聯(lián)部分 但具有另一個橋聯(lián)部分的化合物例如源自氟比洛芬、酮洛芬或非諾洛芬的化合物不激活 Kv7. 2/3通道。這些發(fā)現(xiàn)意味著橋聯(lián)仲胺官能團在M-通道疏水袋位點內(nèi)關(guān)鍵性地與親電體 相互作用或參與氫鍵，因此意味著芳環(huán)減活劑例如吸電子基團強烈地影響N-苯基鄰氨基 苯甲酸衍生物的通道開放活性。此外，還已設(shè)計和合成了具有與羧酸基團連接的各種部分(在以下式I中表示為Y 基團)的N-苯基鄰氨基苯甲酸衍生物。已發(fā)現(xiàn)，與N-苯基鄰氨基苯甲酸的羧酸基團連接 的部分的化學(xué)性質(zhì)影響所述化合物對鉀通道的開放/阻滯活性。因此，端羥基部分使所述 化合物成為有效的開放劑，而其他端基使所述化合物成為有效的阻滯劑。這些及其它發(fā)現(xiàn)有助于本發(fā)明人闡明電壓依賴性鉀M-通道的藥效結(jié)合位點。圖1 示出了 M-通道結(jié)合位點藥效學(xué)特征的示意圖，其表明了與M-通道調(diào)節(jié)有關(guān)的基于二苯胺 的化合物的化學(xué)和結(jié)構(gòu)特性。如圖1所見，存在兩個主要的“結(jié)合袋”疏水袋和親電袋，所 述化合物與之相互作用。不限于任何特定原理，本發(fā)明人假定疏水袋中的親電體與所述化 合物的橋聯(lián)仲胺相互作用，因此所述化合物的一個或兩個苯環(huán)上的一個或多個吸電子基團 可加強其活性并影響其結(jié)合。在所述化合物的另一側(cè)，端羥基官能團具有兩個活性共價鍵， 即一個C-O鍵和一個O-H鍵，所述共價鍵被極化使得氧原子成為富電原子，可與蛋白中的親 電官能團發(fā)生反應(yīng)，而氫原子可參與與其的氫鍵結(jié)合。現(xiàn)已表明，當(dāng)除去端羥基官能團時， 相應(yīng)的化合物無一表現(xiàn)出M-通道開放活性。因此，根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種化合物，所述化合物具有通式I 式I其中Z 為 A-G ( = K) -X-Y 基團；
A為烴基或不存在；G 選自 C、S 禾口 PRa;
K 選自 OiPS;X選自0、S和NRb或不存在；和Y選自氫、烴基、羥烴基、環(huán)烴基、芳基和聚亞烴基二醇部分，R1選自氫、烴基、環(huán)烴基或芳基；R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和Riq中的各者獨立地選自氫、烴基、羥烴基、三鹵代烴
基、環(huán)烴基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、雜脂環(huán)基、商素、羥基、烴氧基、芳氧基、巰基、烴硫基、 芳硫基、亞磺酰基、磺?；?、氰基、硝基、氨基和-NR15R16,或者，R2、R3、R4、R5和R6中的至少兩 者，和/或R7、R8、R9和Rki中的至少兩者形成五元或六元芳環(huán)、雜芳環(huán)、脂環(huán)或雜脂環(huán)；且Ra和Rb中的各者獨立地選自氫、烴基、環(huán)烴基和芳基，條件是R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和Riq中的至少一者為吸電子基團。本文所用術(shù)語“烴基(alkyl)”描述了包括直鏈和支鏈基團的脂肪族烴。所述烴 基通常具有1-20個碳原子，且優(yōu)選1-10個碳原子。本文陳述數(shù)字范圍例如“1-10”的任何 時候，意指所述基團(本例為烴基)可含1個碳原子、2個碳原子、3個碳原子等，至多且包 括10個碳原子。烴基可被取代或不取代。被取代時，取代基可為例如胺、烴基、烯基、炔基、 環(huán)烴基、芳基、雜芳基、商素、羥基、巰基、烴氧基、烴硫基和羥烴基，這些術(shù)語在下文定義。例 如，被羥基取代的烴基形成羥烴基、被一個或多個鹵素原子取代的烴基形成鹵代烴基。本文 中用到的術(shù)語“烴基”還涵蓋飽和或不飽和烴，因此該術(shù)語還涵蓋烯基和炔基。術(shù)語“烯基”描述了具有至少兩個碳原子和至少一個碳-碳雙鍵的如本文定義的 不飽和烴基。所述烯基可被一個或多個如上文所述的取代基取代或不取代。術(shù)語“炔基”，為具有至少兩個碳原子和至少一個碳_碳三鍵的如本文定義的不飽 和烴基。所述炔基可被一個或多個如上文所述的取代基取代或不取代。術(shù)語“脂環(huán)基”，與術(shù)語“環(huán)烴基(cycloalkyl) ”可互換使用，描述了一種全碳單環(huán) 或稠環(huán)(即環(huán)間共用相鄰碳原子對)基團，所述基團的一個或多個環(huán)不具有完全共軛π電 子體系。所述環(huán)烴基可被取代或不取代。取代的環(huán)烴基可具一個或多個取代基，其中各取代 基可獨立地為，例如，胺、烴基、烯基、炔基、環(huán)烴基、芳基、雜芳基、鹵素、羥基、巰基、烴氧基、 烴硫基和羥烴基，這些術(shù)語如本文所定義。術(shù)語“雜脂環(huán)基”描述了一種單環(huán)或稠環(huán)基團，其在環(huán)中具有一個或多個原子例如 氮原子、氧原子和硫原子。所述環(huán)還可具有一個或多個雙鍵。但所述環(huán)不具有完全共軛η 電子體系。所述雜脂環(huán)基可被取代或不取代。取代的雜脂環(huán)基可具有一個或多個取代基， 其中各取代基可獨立地為，例如，胺、烴基、烯基、炔基、環(huán)烴基、芳基、雜芳基、鹵素、羥基、巰 基、烴氧基、烴硫基和羥烴基，這些術(shù)語如本文所定義。術(shù)語“芳基”描述了全碳單環(huán)或稠環(huán)多環(huán)(即環(huán)間共用相鄰碳原子對)基團，其具 有完全共軛η電子體系。所述芳基可被一個或多個取代基取代或不取代，例如，胺、烴基、 烯基、炔基、環(huán)烴基、芳基、雜芳基、商素、羥基、巰基、烴氧基、烴硫基和羥烴基，這些術(shù)語如 本文定義。術(shù)語“雜芳基”描述了一種單環(huán)或稠環(huán)(即共用相鄰原子對的環(huán))基團，其在環(huán)中 具有一個或多個例如氮、氧、硫的原子，此外，還具有完全共軛η電子體系。雜芳基的實例包括(但不限于)吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、吡啶、嘧啶、喹啉、異喹啉和嘌呤。所述雜芳基可被一個或多個取代基取代或不取代，例如，胺、烴基、烯基、炔基、環(huán)烴基、 芳基、雜芳基、商素、羥基、巰基、烴氧基、烴硫基和羥烴基，這些術(shù)語如本文定義。。本文中用到的術(shù)語“鹵素”(本文也指“鹵離子”)，指氟、氯、溴或碘，本文也指氟代、 氯代、溴代或碘代，或指氟離子、氯離子、溴離子或碘離子。本文中用到的術(shù)語“羥基”指-OH基團。本文中用到的術(shù)語“巰基”指-SH基團。本文中用到的術(shù)語“胺”或“氨基”指-NRR'基團，其中R和R'各自獨立地為氫、 烴基、環(huán)烴基、雜脂環(huán)基、芳基或雜芳基，這些術(shù)語如本文定義。本文中用到的術(shù)語“烴氧基”指-O-R基團，其中R為烴基。本文中用到的術(shù)語“烴硫基”指-S-R基團，其中R如本文上面定義。本文中用到的術(shù)語“芳氧基”指-O-R基團，其中R為芳基。術(shù)語“亞磺基”或“亞砜”指-S ( = 0)-R'基團，其中R'如本文定義。術(shù)語“磺基”或“砜”指-S( = 0)2-R'基團，其中R'如本文定義。術(shù)語“磺酸酯”指-S( = 0)2-0-R'基團，其中R'如本文定義。術(shù)語“氰基”指-C ε N基團。術(shù)語“硝基”指-NO2基團。表述“羧基部分”在本文中用來統(tǒng)稱為本文所定義的羧酸酯的衍生物或類似物的 化學(xué)部分，包括例如酰胺、硫代羧酸酯、二硫代羧酸酯、硫代酰胺、亞氨酸酯(imide)或N-取 代亞氨酸酯、硫代亞氨酸酯(thioimide)和脒，這些術(shù)語如本文定義。本文中用到的術(shù)語“衍生物”指對分子及其一部分進行化學(xué)變更、修飾或改變所得 產(chǎn)物，因此其在至少一方面保持了原有的官能團。在式I中，當(dāng)G為C(碳)且K和X均為0(氧)時，所述A-G ( = K)-X-Y基團為羧 酸酯，如本文定義。本文中用到的術(shù)語“羧酸酯”指-C( = 0)-0-R'，其中R'如本文定義。當(dāng)G為C(碳)，K為0且X為NRb時，所述A-G ( = K) _X_Y基團為酰胺，如本文定 義。術(shù)語“酰胺”指-C ( = 0)-NR' R"，其中R'如本文定義且R"定義如R'。當(dāng)G為C、K為0且X為S (硫)時，或當(dāng)K為S且X為0時，所述A-G ( = K) -X-Y 基團為硫代羧酸酯，如本文定義。本文中用到的術(shù)語“硫代羧酸酯”指-C( = 0)-S-R'，其中R'如本文定義。當(dāng)R' 為烴基時，硫代羧酸酯指硫代羧酸-S-烴基酯，且當(dāng)所述基團為-c( = S)-O-R'時，硫代羧 酸酯指硫代羧酸-ο-烴基酯。當(dāng)G為C且K和X均為S時，所述A-G ( = K) -X-Y基團為二硫代羧酸酯，如本文定 義。本文中用到的術(shù)語術(shù)語“二硫代羧酸酯”指-C( = S)-S_R'，其中R'如本文定義。本文中用到的術(shù)語“亞氨酸酯(imide)”指C( = NR' ) _0_R 〃基團，其中R'和 R"如本文定義。本文中用到的術(shù)語“脒”指_C( = NR' )_NR" R' 〃基團，其中R'和R"如本文定義，且R'“定義如R'。術(shù)語“硫代酰胺”指-C( = S)-NR' R〃基團，其中R'如本文定義且R"定義如 R'。術(shù)語“硫代亞氨酸酯(thioimide) ”指_C( = NR' )_S R"基團，其中R'和R"如 本文定義。當(dāng)G為PRa，所述A_G( = K)-X-Y基團可為膦(-PRaR'基團)、次亞磷酸酯 (phosphinite) (-PRa-R'基團)、或次磷酸酯(phosphinate) (-PRa( = 0)-R'基團)。如隨后實施例部分中所說明，發(fā)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明實施方案的其中A_G( = K)-X-Y基 團為羧酸酯的化合物(即Y通過酯鍵連接到N-苯基鄰氨基苯甲酸部分)表現(xiàn)出抗-COX活 性。在一些實施方案中，這樣的抗-COX活性為組織選擇性抗-COX活性，其容許使用這些化 合物而不會影響胃和腎中的COX活性，并因此避免了與抑制這些組織中COX活性相關(guān)的負(fù) 作用。發(fā)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明實施方案的其中A_G( = K)-X-Y基團為酰胺的化合物(即Y通過酰胺鍵連接到N-苯基鄰氨基苯甲酸部分)缺乏抗-COX活性。聚亞烴基二醇為一種統(tǒng)稱，其指一族具以下通式的聚醚聚合物H0-[ (CH2)m-O-] n-CH20H，其中m代表各單體單元中存在的亞甲基的數(shù)目，而η代表重復(fù)單體單元數(shù)目，因此 代表聚合物的大小。例如，當(dāng)m= 2時，所述聚合物指聚乙二醇，而當(dāng)m= 3時，所述聚合物
指聚丙二醇。本文中用到的術(shù)語“部分”指某種化學(xué)實體的一部分，且通常是主要部分，例如分 子或基團，其經(jīng)過化學(xué)反應(yīng)且現(xiàn)共價連接到另一個分子實體。表述“聚亞烴基二醇部分”為一種取代基的通稱，所述取代基為連接到另一個分子
的聚亞烴基二醇，且其末端通常為羥基。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，所述聚亞烴基二醇部分具有通式II [ (CH2) m-0]n-R17式II其中!11和η各自獨立地為1-10的整數(shù)；且R17為CH2OH基團、氫、烴基、環(huán)烴基或芳 基，這些術(shù)語如上文所定義。在本發(fā)明一些實施方案中，本發(fā)明此方面和其他方面中所述的各個化合物中，具 有上式II的聚亞烴基二醇部分，不包括抗氧化劑部分或-ONO2基團。示例性聚亞烴基二醇部分，如本文定義，包括乙二醇部分例如乙醇-2-基、2-乙氧 基乙醇、2-(2-(2-乙氧基)乙氧基)乙醇和2-(2-(2-乙氧基乙氧基)乙氧基)乙醇。本文中用到的表述“吸電子基團”指分子里的某種化學(xué)基團，其可從該分子的鄰 近部分吸電子。吸電子基團發(fā)揮其作用的距離，即吸電子效應(yīng)涵蓋的鍵數(shù)，被共軛η電子 體系如芳香體系擴展。吸電子基團的非限制性實例包括，從吸電能力較強到較弱依次為 硝基、銨基(帶正電荷氨基陽離子)、磺酸酯(sulfonate)、氰基、三鹵代烴基(例如三氟甲 基)、酰鹵(C( = 0)X基團，其中X為鹵素)、各種羧基部分(例如羧酸酯、酰胺)、羰基或醛 (C( = 0)-R'基團，其中R'如上文定義)和鹵素。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，所述吸電子基團為硝基。芳香體系(例如苯環(huán))上存在的吸電子基團的數(shù)目影響吸電子效應(yīng)的程度。因此，根據(jù)一些實施方案，式I中R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和Rltl中的至少兩者為吸電子基團。因 此，在一些實施方案中，式I中R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和Rltl中的2、3甚至4者為吸電子基團。如本文以上討論，吸電子基團通過共軛π電子體系(例如芳香體系)發(fā)揮其吸電 子作用。因此，根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，式I的二苯胺部分的一個或兩個苯環(huán)上的取代基 中的至少一者為吸電子基團，即，R2> R3> R4> R5> R6> R7> R8> R9和Rki中的至少一者為吸電子基 團。根據(jù)特定的實施方案，R7、R8、R9和Rki中的至少一者為吸電子基團。 吸電子基團在芳香體系(例如苯環(huán))上的相對位置，即，間_、鄰-或?qū)?位，也可 影響吸電子效應(yīng)的程度。因此，吸電子基團相對于式I的二苯胺部分的苯環(huán)上的其他取代 基的相對位置對其展示出的效應(yīng)意義重大。因此，根據(jù)一些特定的實施方案，R9，其位于式I中橋聯(lián)胺的對位，為吸電子基團。 根據(jù)其他實施例，R9和R7，后者位于橋聯(lián)胺的鄰位，中的至少一者為吸電子基團。再根據(jù)其 他實施方案，R9> R7和R4，后者位于所述化合物橋聯(lián)胺的對位，中的至少一者為吸電子基團。如后續(xù)實施例部分所說明，發(fā)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明實施方案制備并在位置R9具有至少一 個吸電子基團的化合物高度有效。這樣的示例性化合物包括下文稱作NH24、NH25和NH30 的化合物。根據(jù)本發(fā)明的其他實施方案，所述化合物在位置R7、R8、R9或Rw具有至少一個吸電 子基團，且在位置R2、R3、R4、R5或R6具有至少一個另外的吸電子基團，例如為下文稱作NH28 的示例性化合物的情況，其在R4和R9位置各具一個硝基；又如示例性化合物NH29和NH31 的情況，二者均在R9、R7和R4位置各具一個吸電子基團。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種制備上文所述化合物的方法。具體而言，制備上文所述并用式I表示的化合物的方法的做法是，使具有通式I*的化合物與能以吸電子基團取代R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和Rki中 的一者或多者的試劑反應(yīng)，以由此獲得具有通式I的化合物，
R^Z R9-f)-NR1v /R2
R5式I*，其中，Z 為 A-G ( = K) -X-Y 基團；A為烴基或不存在；G 選自 C、S 禾口 PRa;K 選自 0 禾口 S ；X選自NRb、S或不存在；且Y選自氫、烴基、羥烴基、環(huán)烴基、芳基和聚亞烴基二醇部分，R1選自氫、烴基、環(huán)烴基或芳基；
R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和Riq中的各者獨立地選自氫、烴基、羥烴基、三鹵代烴
基、環(huán)烴基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、雜脂環(huán)基、商素、羥基、烴氧基、芳氧基、巰基、烴硫基、芳硫基、亞磺?；⒒酋；?、氰基、硝基、氨基和-NR15R16,或者，R2、R3、R4、R5和/或R6中的至 少兩者，R7> R8> R9和Rw中的至少兩者形成五元或六元芳環(huán)、雜芳環(huán)、脂環(huán)或雜脂環(huán)；和Ra和Rb中的各者獨立地選自氫、烴基、環(huán)烴基和芳基。本發(fā)明實施方案的上下文中用到的表述“能取代……的試劑”指某種化學(xué)反應(yīng)劑， 其能有效地置換式I*所示化合物苯環(huán)中一個或多個位置上的氫或其他化學(xué)基團，即，能置 換R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和Rki取代基中一個或多個。因此，表述“與能以吸電子基團取 代取代基”指這樣的試劑，其能以吸電子基團置換一個或多個取代基。根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，本文所述化合物中的吸電子基團為硝基，且所述能以 吸電子基團取代二苯胺部分的一個或多個苯環(huán)上的一個或多個位置的試劑為硝化劑。在本發(fā)明實施方案的上下文中，表述“硝化劑”指某種作用劑，其能以具有一個或 多個硝基的基團來用另一基團代替氫原子或另一可取代基團。硝化劑的一種非限制性實例為硝化硅膠(HN03/Si02)。其他示例性硝化劑包括有機 硝酸酯例如硝化甘油、異山梨醇二硝酸酯、異山梨醇5-單硝酸酯、硝酸異丁酯和硝酸異戊 酯、硝鐺鹽和其他無機硝酸鹽例如四氟硼酸硝鐺鹽、四氧化二氮、堿金屬硝酸鹽例如硝酸鈉 與硝酸鉀、各種濃度的硝酸例如發(fā)煙硝酸和濃硝酸以及其他常規(guī)硝化混合物例如硝酸/硫 酸、硝酸鉀/硫酸、和硝酸/硫酸/乙酸酐。本發(fā)明實施方案還涵蓋本文所述化合物的任意的對映異構(gòu)體、前藥、溶劑合物、水 合物、代謝物和/或藥學(xué)上可接受的鹽。根據(jù)本發(fā)明實施方案的某些化合物可具有不對稱碳原子(光學(xué)中心)或雙鍵；夕卜 消旋物、非對映異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體和單個異構(gòu)體也涵蓋于本發(fā)明范圍內(nèi)。本文中用到的術(shù)語“對映異構(gòu)體”指化合物的立體異構(gòu)體，其只能通過全反轉(zhuǎn)/互 為映像(鏡像)與其對應(yīng)物重合。據(jù)信，對映異構(gòu)體具有手性，因為它們象左手和右手一樣 對應(yīng)。對映異構(gòu)體具有相同的物化性質(zhì)，除非當(dāng)存在于其自身具有手性的環(huán)境如全生命體 系中時。術(shù)語“前藥”指一種作用劑，其可在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成活性化合物(活性母體藥物)。前藥 通常用于使母體藥物給藥便利。它們可例如通過口服給藥被生物利用，但其母體藥物卻不 能。在藥物組合物中，與母體藥物相比較，前藥還可具有改善的溶解性。前藥還常用于達到 所述活性化合物在活體內(nèi)持續(xù)釋放的目的。前藥的一個實例(但不限于)可為以酯(“前 藥”)的方式給藥的具有一個或多個羧酸部分的本發(fā)明化合物。這樣的前藥在體內(nèi)水解因 此提供了游離化合物(母體藥物)。所選酯可影響前藥的溶解性和水解速率二者。此外，前藥可在離體環(huán)境中通過化學(xué)或生化方法轉(zhuǎn)化為根據(jù)本發(fā)明實施方案的化 合物。例如，當(dāng)前藥與適合的酶或化學(xué)試劑置于經(jīng)皮貼劑儲庫時，前藥可緩慢地轉(zhuǎn)化為本發(fā) 明的化合物。本發(fā)明的某些化合物可以非溶劑化形式或溶劑化形式(包括水合物形式)存在。 通常，所述溶劑化形式與非溶劑化形式等價，并涵蓋于本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明的某些化合 物可以多晶或非晶形式存在。總而言之，所有物理形式對于本發(fā)明預(yù)期的用途都是等價的 且均在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
術(shù)語“溶劑化物”指可變化學(xué)計量(例如二 _、三_、四_、五_、六-等)的復(fù)合物， 所述復(fù)合物通過溶質(zhì)(本發(fā)明的化合物)和溶劑形成，其中溶劑不影響所述溶質(zhì)的生物活 性。適宜的溶劑包括例如乙醇、乙酸等等。術(shù)語“水合物”指溶劑為水的如本文以上定義的溶劑化物。本文中用到的術(shù)語“代謝物”描述通常與一個或多個代謝過程(發(fā)生在活細(xì)胞內(nèi) 的各系列化學(xué)反應(yīng))有關(guān)的物質(zhì)，其中所述代謝過程在所述化合物給藥后于體內(nèi)發(fā)生，即， 通過代謝過程產(chǎn)生、為代謝過程所需和/或參與代謝過程的物質(zhì)。表述“藥學(xué)上可接受的鹽”指母體化合物和其反荷離子的帶電物種，其通常用于改 變母體化合物的溶解特性和/或減少母體化合物對生物體的任何嚴(yán)重刺激，同時又不消除 給藥的化合物的生物活性和特性?；衔锏闹行孕问絻?yōu)選通過使鹽與堿或酸接觸病以常規(guī) 方式分離母體化合物而 再生。所述化合物的母體形式在某些物理特性上與其各種鹽形式不 同，例如在極性溶劑中的溶解性，但在別的方面，鹽形式對于用于本發(fā)明目而言與所述化合 物的母體形式是等價的。表述“藥學(xué)上可接受的鹽”意為涵蓋所述活性化合物的鹽，其根據(jù)本文所述化合物 上的特定取代基通過相對無毒的酸或堿制備。當(dāng)根據(jù)本發(fā)明實施方案的化合物含相對酸性 的官能團時，可通過在無溶劑或適宜的惰性溶劑中使這些化合物的中性(即非離子化)形 式與足量所需堿接觸而獲得堿加成鹽。藥學(xué)上可接受的堿加成鹽的實例包括鈉鹽、鉀鹽、 鈣鹽、銨鹽、有機胺鹽或鎂鹽，或類似的鹽。當(dāng)根據(jù)本發(fā)明實施方案的化合物含相對堿性的 官能團時，可通過在無溶劑或適宜的惰性溶劑中使這些化合物的中性形式與足量所需酸接 觸而獲得酸加成鹽。藥學(xué)上可接受的酸加成鹽的實例包括那些衍生自無機酸的鹽，例如鹽 酸鹽、氫溴酸鹽、硝酸鹽、碳酸鹽、碳酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸氫鹽、磷酸二氫鹽、硫酸鹽、硫酸氫 鹽、氫碘酸鹽或亞磷酸鹽等，和衍生自相對無毒的有機酸的鹽例如乙酸鹽、丙酸鹽、異丁酸 鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、苯甲酸鹽、丁二酸、辛二酸鹽、反丁烯二酸鹽、乳酸鹽、扁桃酸 鹽、鄰苯二甲酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽等。還包括氨基 酸鹽例如精氨酸鹽等和有機酸鹽例如葡糖醛酸或半乳糖醛酸鹽等(見，例如Berge 等.， “藥用鹽”Journal of PharmaceuticalScience，1977，66，1-19)。本發(fā)明的某些特定化合物 既包含堿性官能團也包含酸性官能團從而使該化合物可轉(zhuǎn)化成堿加成鹽或酸加成鹽。根據(jù)本發(fā)明實施方案的化合物也可在構(gòu)成該化合物的一個或多個原子中包含非 自然比例的原子同位素。例如，所述化合物可用放射性同位素進行放射性標(biāo)記，例如氚 (3H),碘-125 (125I)或碳-H(14C)。本文所述化合物的所有同位素變體，無論其是否具有放 射活性，都意在包含于本發(fā)明的范圍內(nèi)。根據(jù)本發(fā)明實施方案，本文所述化合物對某些電壓依賴性鉀通道具有親和性，例 如KCNQ2通道和/或KCNQ3通道和/或KCNQ2/3通道。如后續(xù)實施例部分所說明，已對本文所述化合物進行開放(激活)電壓依賴性鉀 通道和/或抑制皮層和/或外周神經(jīng)元活性的試驗，且顯示了具有這些能力。在這些實驗 中，已發(fā)現(xiàn)本文所述化合物表現(xiàn)出兩個主要效應(yīng)使KCNQ2/3通道激活的電壓依賴性移向 更超極化的電位和使通道失活減慢。不限于任何特定原理，這些數(shù)據(jù)表明本文所述化合物 要么使已關(guān)閉通道構(gòu)象失去穩(wěn)定性，要么使KCNQ2/3通道截于開放狀態(tài)。此外，使通道與本文所述的一些化合物接觸也可導(dǎo)致失活減慢，這導(dǎo)致將KCNQ2/3通道截于開放狀態(tài)。不限于任何特定原理，假定這些化合物通過使電壓感受器S4的電壓依 賴性向超極化方向移動而調(diào)節(jié)通道門控。從功能的角度來看，本文所述化合物引起的電壓依賴性左移和失活減慢導(dǎo)致實質(zhì) 性的M-電流在正常的靜息電位和閾下電位下激活。此外，因為M-電流(KCNQ2/3)是非失活 性的，所以，這些化合物引起的顯著激活導(dǎo)致鉀電導(dǎo)在閾下和閾電位下處于明顯穩(wěn)定狀態(tài)， 起到神經(jīng)元激活制動器的作用。事實上，還已表明這些化合物抑制皮層神經(jīng)元的激活活性 和自發(fā)性活性。
從功能的角度來看，本發(fā)明化合物引起的激活曲線左移和失活減慢將導(dǎo)致實質(zhì)性 的M-電流在正常的靜息電位和閾下電位下激活。此外，因為M-電流(KCNQ2/3)是非失活 性的，所以通過這些化合物激活預(yù)期導(dǎo)致鉀電導(dǎo)在閾下和閾電位下處于穩(wěn)定狀態(tài)，起到神 經(jīng)元激活制動器的作用。以上所述的活性使這些化合物非常適合于用作治療活性作用劑來治療開放電壓 依賴性鉀通道和/或抑制皮層和/或外周神經(jīng)元活性對其有益的病癥。因此，根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種開放電壓依賴性鉀通道和/或抑制皮 層和/或外周神經(jīng)元活性的方法，做法是，給予有需要的受試者治療有效量的如本文所述 具有通式I的化合物。本文中用到的術(shù)語“方法”指用于完成給定任務(wù)的方式、方法、技術(shù)和流程，其包 括，但不限于，化學(xué)、藥學(xué)、生物學(xué)、生化和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的實施人員已知的那些方式、方法、技術(shù) 和流程，或化學(xué)、藥學(xué)、生物學(xué)、生化和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的實施人員從已知的方式、方法、技術(shù)和流 程便利地發(fā)展而來的那些方式、方法、技術(shù)和流程。因此，提供了有效量的具有通式I的化合物在制備用于治療受試者病癥中的用 途，在所述病癥中開放電壓依賴性鉀通道和/或抑制皮層和/或外周神經(jīng)元活性是有益的。本文中用到的術(shù)語“開放”或例如“激活”可互換使用，指離子通道例如KCNQ通道 和其他鉀通道被化合物部分或完全激活，所述部分或完全激活導(dǎo)致進入或流出發(fā)現(xiàn)離子通 道的細(xì)胞的離子流增加。這樣的化合物也被稱作鉀通道的激動劑。本文中用到的表述“治療有效量”指達到所需結(jié)果需要給予的化合物(活性成分) 的量，其通常將在一定程度上緩解所治療的病癥的一個或多個癥狀。確定治療有效量在本 領(lǐng)域技術(shù)人員能力范圍內(nèi)，特別是根據(jù)本文中的詳細(xì)描述。本文中用到的術(shù)語“治療”包括消除、基本抑制、減慢或逆轉(zhuǎn)病程、基本改善病癥的 臨床或表觀(aesthetical)癥狀或基本預(yù)防病癥的臨床或表觀癥狀出現(xiàn)。因為在所有的動物種類中均發(fā)現(xiàn)了電壓依賴性鉀通道，所以當(dāng)給予為所有動物種 類成員的受試者時，本發(fā)明的化合物是藥物學(xué)有效的，所述動物包括人、猴、狗、貓、小鼠、大 鼠、農(nóng)場動物、牲口、魚而最主要是包括人類。有很多病患、病癥和障礙與鉀通道功能缺陷相關(guān)。正如其他鉀通道開放化合物一 樣，本文所述化合物用于治療與鉀通道功能缺陷有關(guān)的病患、病癥和障礙，以治療、改善、預(yù) 防、抑制或限制包括人類的動物病癥和病患的影響?？赏ㄟ^本文所述鉀通道開放劑有益地治療的示例性醫(yī)學(xué)病癥包括，但不限于，中 樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)障礙，例如，缺血性發(fā)作、偏頭痛、共濟失調(diào)、帕金森氏病、雙相障礙、三叉 神經(jīng)痛、痙攣狀態(tài)、情感障礙、腦瘤、精神障礙、精神分裂癥、肌纖維顫搐、神經(jīng)源性疼痛、神經(jīng)病性疼痛、癲癇發(fā)作、癲癇、聽力缺失和視力缺失、焦慮和運動神經(jīng)元疾病。本文所述化合 物還可有益地用作神經(jīng)保護劑(例如預(yù)防中風(fēng)等)。本文所述化合物也可用于治療例如胃 食管反流病和胃腸道功能紊亂等病癥。顯而易見，本發(fā)明實施方案的化合物激活KCNQ2/3通道的電壓范圍使這些化合物 特別適用于治療癲癇，包括驚厥狀態(tài)(例如癲癇大發(fā)作、癲癇小發(fā)作、精神運動型癲癇或病 灶性癲癇之后的驚厥狀態(tài))、缺血性發(fā)作和神經(jīng)病性疼痛。這些化合物也可用作治療各種醫(yī)學(xué)病癥的潛在候選藥物，在所述各種病癥中抑制 皮層和/或外周神經(jīng)元活性是有益的，例如，癲癇、缺血性發(fā)作、偏頭痛、共濟失調(diào)、肌纖維 顫搐、神經(jīng)源性疼痛、神經(jīng)病性疼痛、帕金森氏病、雙相障礙、三叉神經(jīng)痛、痙攣狀態(tài)、情感障 礙、精神障礙、精神分裂癥、腦瘤、聽力缺失和視力缺失、焦慮和運動神經(jīng)元疾病。 根據(jù)本發(fā)明這方面的實施方案，利用可激活(開放)鉀通道的化合物來治療的其 他病患或病癥列于例如美國專利6，348，486 ；6, 117，900 ；6, 589，986和6，593，349與美國 專利申請 10/022, 579 ；10/075，703 ；10/075，522 ；10/114，148 ；10/160, 582 和 10/312，123， 所述文獻通過全文弓I用結(jié)合到本文。還如后續(xù)實施例部分中說明，已測試了 NH29(根據(jù)本發(fā)明實施方案的示例性化合 物)抑制TRPVl電流的能力，結(jié)果確實表明了其表現(xiàn)出這種活性。因此，還鑒定出上文所述通式I化合物和下文詳述的其他N-苯基鄰氨基苯甲酸衍 生物能夠阻止TRPVl。瞬時受體電位香草酸受體1 (TRPVl)屬于瞬時受體電位通道家族，且為可被種類 繁多的外源性和內(nèi)源性刺激激活的非選擇性配體門控陽離子通道，所述刺激包括通常高于 430C的熱刺激，低pH(通常低于6)、花生四烯酸乙醇胺、N-花生四烯?；?多巴胺和辣椒 素。已發(fā)現(xiàn)，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周神經(jīng)系統(tǒng)存在TRPVl受體，且發(fā)現(xiàn)其尤其是參與痛覺傳 輸與調(diào)節(jié)和各種疼痛刺激的整合。業(yè)已發(fā)現(xiàn)TRPVl參與體溫調(diào)節(jié)、焦慮和海馬長時程抑制(LTD)的緩解。TRPVl通道 還位于支配膀胱的感覺傳入神經(jīng)。已表明，抑制TRPVl可緩解尿失禁癥狀。本文所述化合物(見通式I)對TRPVl的抑制作用使這些化合物更適合于治療病 癥例如疼痛和某些中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)障礙，且還使這些化合物適于治療其他TRPVl相關(guān) 病癥，如下文詳述。如后續(xù)實施例部分中進一步說明，還測試了本文所述化合物對TRPV6的調(diào)節(jié)，發(fā) 現(xiàn)其不影響該通道。TRPV6為膜蛋白瞬時受體電位家族的另一成員，其在腸道鈣吸收的第一步中起作 用。如后續(xù)實施例部分中說明，發(fā)現(xiàn)本文所述通式I化合物特異性地抑制TRPVl而不抑制 TRPV6。這個特性表明利用這些化合物不會帶來與TRPV6相關(guān)的各種不良效應(yīng)。根據(jù)本發(fā)明這些實施方案的化合物可以本文所述的任何方法應(yīng)用，其要么單獨使 用，要么作為藥物組合物的一部分使用，所述藥物組合物還包括藥學(xué)上可接受的載體。因此，根據(jù)本發(fā)明又一方面，提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物包括作為活 性成分的通式I化合物和藥學(xué)上可接受的載體。在一些實施方案中，所述組合物包裝在包裝材料中并在所述包裝材料之中或之上 加以印刷標(biāo)識，用于治療開放電壓依賴性鉀通道和/或抑制皮層和/或外周神經(jīng)元活性對其有益的病癥。在本文所述SAR研究中，本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)衍生自二苯胺的化合物的一些特定化學(xué)和結(jié)構(gòu)決定因素使所述化合物對鉀通道的效應(yīng)具有阻滯特性，即所述化合物具鉀通道 阻滯劑的化學(xué)性質(zhì)(見圖1)。值得注意的是，具有鉀通道阻滯活性的化合物在專利W02004/035037和美國專利 申請20050250833中均沒有公開和討論。本文中用到的術(shù)語例如“阻滯”、“關(guān)閉”、“抑制，，或“減活，，可交換使用，是指離子 通道例如KCNQ通道和其他鉀通道被化合物部分或完全去活，所述部分或完全去活導(dǎo)致進 入或流出發(fā)現(xiàn)離子通道的細(xì)胞的離子流減少。這樣的化合物也稱作鉀通道拮抗劑。本文所述阻滯活性可用于治療多種已知與神經(jīng)元活性加強有關(guān)的認(rèn)知病癥或疾 病。在神經(jīng)水平加強認(rèn)知能力可用于治療(例如但不限于)記憶缺陷和帕金森氏病。因此，根據(jù)本發(fā)明另一方面，提供了一種阻滯電壓依賴性鉀通道的方法，做法是， 給予有需要的受試者治療有效量的具有通式III的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、前藥或 代謝物 式III其中Z 為 A-G ( = K) -X-Y 基團，A為烴基或不存在；G 選自 C、S 禾口 PRa ；K 選自 0 禾口 S ；X選自NRb，S或不存在；且Y選自烴基、芳基、環(huán)烴基、雜脂環(huán)基和帶正電荷的基團，條件是Y不含羥基；R1選自氫、烴基、環(huán)烴基或芳基；R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和Riq中的各者獨立地選自氫、烴基、羥烴基、三鹵代烴
基、環(huán)烴基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、雜脂環(huán)基、商素、羥基、烴氧基、芳氧基、巰基、烴硫基、 芳硫基、亞磺?；?、磺?；⑶杌?、硝基、氨基和-NR15R16,或者，R2、R3、R4、R5和/或R6中的至 少兩者，R7> R8、R9和Rw中的至少兩者形成五元或六元芳環(huán)、雜芳環(huán)、脂環(huán)或雜脂環(huán)；且Ra和Rb各自獨立地選自氫、烴基、環(huán)烴基和芳基。根據(jù)一些實施方案，Y為帶正電荷的基團。當(dāng)穩(wěn)定于生理學(xué)PH中時，這個化學(xué)性 質(zhì)將使此阻滯劑特別是在標(biāo)靶為外周神經(jīng)系統(tǒng)而非中樞神經(jīng)系統(tǒng)的情況下增添一個好處， 例如在治療神經(jīng)病性疼痛時，因為帶電化合物不通過血腦屏障。本文中用到的表述“帶正電荷的基團”指形成有機分子一部分的原子或原子團，其 特征為帶正電荷。具一個或多個帶正電荷的基團的化合物為分子離子，有時被稱作分子陽離子。原子的帶正電荷的基團的電子數(shù)目至少比這些原子中的質(zhì)子數(shù)少一個。帶正電荷的 基團的非限制性實例包括銨基和锍基。在生理學(xué)pH下保持其電荷的帶正電荷的基團為不能在體內(nèi)生理環(huán)境通常所具有 的PH范圍下參與質(zhì)子交換作用的基團，在所述pH下所述化合物具有活性。通常，生理學(xué)pH 約為7. 4;因此，在生理學(xué)pH下保持電荷的帶正電荷的基團指在pH 5-8范圍內(nèi)保持電離狀 態(tài)的基團。值得注意的是，即使在生理學(xué)PH值極低的胃腸道(GI)內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選實施 方案的帶正電荷的基團仍保持正電荷，因此設(shè)計為口服的根據(jù)本發(fā)明的化合物不會受胃腸 道PH水平的負(fù)面影響。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選實施方案的帶正電荷的基團為銨基，其選自伯銨基(-N+氏基團)、 仲銨基(-N+H2R基團，其中R如上文定義)、叔銨基(-N+HRR'基團，其中R和R'如上文定 義)和季銨基(-N+RR' R"基團，其中R和R'如上文定義，且R"定義如r和R)?，F(xiàn)已知 季銨基在任何PH范圍(包括生理學(xué)pH范圍)下均帶正電。
锍基也已知在生理學(xué)pH下帶正電荷。本文中用到的術(shù)語“锍”指S+RR'，其中R 和R'如上文定義。根據(jù)其他實施方案，Y為雜脂環(huán)基，且優(yōu)選雜脂環(huán)基為環(huán)氧化物(只含三個環(huán)原子 的環(huán)醚，其結(jié)構(gòu)類似等邊三角形)，例如2，3-環(huán)氧基丙基或甲基環(huán)氧乙烷。根據(jù)本發(fā)明實施方案，所述阻滯電壓依賴性鉀通道的方法可用于治療認(rèn)知病癥或 疾病。示例性病癥或疾病包括但不限于阿爾茨海默氏病、老年記憶缺失、記憶缺失、腦損傷 相關(guān)記憶缺失或中風(fēng)后遺癥和學(xué)習(xí)障礙。根據(jù)本發(fā)明另一方面，提供了一種藥物組合物，其包含作為活性成分的如上文定 義的通式III化合物。根據(jù)本發(fā)明此方面的實施方案的組合物被包裝在包裝材料中并在所 述包裝材料之中或之上加以印刷標(biāo)識，用于阻滯電壓依賴性鉀通道。因此，提供了通式III化合物在制備用于治療阻滯電壓依賴性鉀通道和/或增強 皮層和/或外周神經(jīng)元活性對其有益的病癥的藥物中的用途。在本文描述的任何方法、用途和藥物組合物的上下文中，電壓依賴性鉀通道包括 KCNQ2通道和/或KCNQ3通道和/或KCNQ2/3通道。如本文使用的“藥物組合物”指一種或多種本發(fā)明所述化合物(作為活性成分)或 其生理學(xué)上可接受的鹽或前藥與其他化學(xué)成分的制劑，所述其他成分包括但不限于生理學(xué) 上適宜的載體、賦形劑、潤滑劑、緩沖劑、抗菌劑、填充劑(例如甘露醇)、抗氧化劑(例如抗 壞血酸或亞硫酸氫鈉)、消炎劑、抗病毒劑、化療劑、抗組胺藥等。藥物組合物的目地是方便 對受試者給予所述化合物。術(shù)語“活性成分”指具有生物學(xué)效應(yīng)的化合物。術(shù)語“生理學(xué)上可接受的載體”和“藥學(xué)上可接受的載體”可互換使用，指代不會 嚴(yán)重刺激有機體也不會消除所給予化合物生物學(xué)活性和性質(zhì)的載體或稀釋劑。本文中術(shù)語“賦形劑”指添加于藥物組合物以便更便利給藥的惰性物質(zhì)。賦形劑 的實例包括但不限于碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖和各類型淀粉、纖維素衍生物、明膠、植物油和 聚乙二醇。藥物的配制和給藥技術(shù)可在“Remington，s PharmaceuticalSciences (雷氏藥學(xué) 大全)”，Mack Publishing Co.，Easton，PA最新版中找到，其通過引用結(jié)合到本文。因此用于本發(fā)明的藥物組合物可用一種或多種藥學(xué)上可接受的載體以常規(guī)方式配制，所述藥學(xué)上可接受載體包括賦形劑和輔料，賦形劑和輔料便于將所述化合物加工為 藥學(xué)上可用的制劑。適當(dāng)?shù)闹苿╇S選擇的給藥途徑而定。劑量可隨采用的劑型和所用給 藥途徑而變化。確切的制劑、給藥途徑和劑量可由各個醫(yī)生根據(jù)病人的病情選擇(見例 如 Fingl 等· ，1975，"The Pharmacological Basis of Therapeutics (治療學(xué)的藥物學(xué)基 礎(chǔ))”，第一章，第一頁)?？蓪⑺幬锝M合物配 制成用于以一種或多種途徑給予，給藥途徑取決于所選擇的是 局部治療或局部給藥還是全身治療或全身給藥，且隨待治療的區(qū)域而定。給藥可通過口服、 吸入或腸道外(例如通過靜脈滴注)或腹膜內(nèi)、皮下、肌內(nèi)或靜脈注射或局部給藥(包括 目艮、陰道、直腸、鼻內(nèi))。局部給藥的劑型可包括但不局限于洗液、軟膏劑、凝膠劑、乳膏、栓劑、滴劑、液體 齊U、噴霧劑和粉劑。常規(guī)的藥物載體、水基、粉基或油基、增稠劑等可為必須的或期望的。用于口服給藥的組合物包括粉劑、顆粒劑、懸浮液、水溶液或非水介質(zhì)、小藥囊、丸 齊 、囊片、膠囊或片劑。增稠劑、稀釋劑、矯味劑、分散助劑、乳化劑或粘合劑是希望有的。非腸道給藥的制劑可包括但不限于無菌溶液，所述無菌溶液也可含緩沖劑、稀釋 劑和其他適宜的添加劑。緩釋組合物可設(shè)想用于治療。待給藥組合物的量當(dāng)然取決于接受治療的受試者、病痛的嚴(yán)重性、給藥的方式、開 處方醫(yī)生的判斷等。如果適宜，本發(fā)明的組合物可置于包裝內(nèi)或分配器裝置內(nèi)，例如FDA(美國食品與 藥物管理局)核準(zhǔn)的藥盒，其可含有一個或多個包含活性成分的單位劑型。所述包裝可例 如包含金屬或塑料箔，例如但不限于泡罩包裝或加壓容器(用于吸入)。所述包裝或分配器 裝置可附有給藥說明。包裝或分配器也可在容器上隨附提示，提示采用管理醫(yī)藥品生產(chǎn)、應(yīng) 用或銷售的政府機構(gòu)規(guī)定的形式，該提示表明所述機構(gòu)已核準(zhǔn)組合物的該形式用于人類或 獸用給藥。這樣的提示例如可標(biāo)識為已被美國食品醫(yī)藥管理局核準(zhǔn)為處方藥或標(biāo)識為核準(zhǔn) 產(chǎn)品。還可在相容藥物載體中配制包含本發(fā)明的SRI的組合物、置于適當(dāng)?shù)娜萜髦胁?biāo)識 以用于治療特定的如上文詳述的病癥、疾病或障礙。所述藥物組合物還可包含附加的有藥學(xué)活性或無藥學(xué)活性的作用劑例如，但不限 于，抗菌劑、抗氧化劑、緩沖劑、填充劑、表面活性劑、消炎劑、抗病毒劑、化療劑和抗組胺藥。如本文討論，本發(fā)明人已從本文進行的廣泛的SAR分析中得出一些見解，這些見 解與新的鉀通道效應(yīng)劑和調(diào)節(jié)劑的設(shè)計和開發(fā)有關(guān)。不限于任何特定的原理，這些研究提 升了一些主要結(jié)合袋的重要性，所述結(jié)合袋構(gòu)成鉀通道的配體結(jié)合位點，如表1所示。這些 結(jié)合袋包括疏水結(jié)合袋和至少兩個親電結(jié)合袋。本發(fā)明人假定，有效的調(diào)節(jié)劑化合物應(yīng)當(dāng) 至少顯示出一些化學(xué)性質(zhì)，所述化學(xué)性質(zhì)會影響所述化合物與鉀通道中電壓敏感域內(nèi)的疏 水結(jié)合袋和至少兩個親電結(jié)合位點之間的相互作用。還假定，通過增加所述化合物與疏水 袋之間的相互作用同時又不與所述域內(nèi)至少一個親電結(jié)合位點相互作用將會獲得有效的 阻滯劑。類似地，假定通過增加所述化合物與疏水結(jié)合袋和與所述域內(nèi)至少兩個親電結(jié)合 位點之間的相互作用將獲得有效的開放劑。因此，根據(jù)本發(fā)明的又一方面，提供了一種阻滯電壓依賴性鉀通道的方法。該方法 通過給予有需要的受試者治療有效量的化合物而實施，所述化合物能與鉀通道電壓敏感域 內(nèi)的疏水結(jié)合袋相互作用，同時又不與電壓敏感域中的至少一個親電結(jié)合位點相互作用。
如后續(xù)實施例中所說明，使用從誘變研究推出的實驗約束，進行了開放劑 NH29(根據(jù)本發(fā)明的示例性化合物)對Kv7.2通道位點的?？繉嶒?。結(jié)果表明，本發(fā)明的 Kv7. 2通道調(diào)節(jié)劑起到了門控調(diào)節(jié)劑的作用，其可在S4螺旋和S1-S2螺旋之間的界面形成 的溝處與電壓敏感域的外部可及表面相互作用，因此這些門控調(diào)節(jié)劑可將電壓敏感域截于 其內(nèi)向靜息構(gòu)象(阻滯劑)或外向激活構(gòu)象(開放劑)。因此，根據(jù)本發(fā)明另外的特征，所述化合物能在電壓敏感域中的S4螺旋和S1-S2 螺旋之間的界面形成的溝處與所述電壓敏感域的外部可及表面相互作用，且進一步將電壓 敏感域截于其內(nèi)向靜息構(gòu)象。 因此，提供了一種開放電壓依賴性鉀通道的方法，做法是，給予有需要的受試者治 療有效量的能與鉀通道電壓敏感域中的疏水結(jié)合袋并與至少兩個親電結(jié)合部位相互作用 的化合物。此外，根據(jù)本發(fā)明的其他實施方案，所述化合物能在所述電壓敏感域中的S4螺 旋和S1-S2螺旋之間的界面形成的溝處與所述電壓敏感域的外部可及表面相互作用，且進 一步將所述電壓敏感域截于其外向激活構(gòu)象。如上文討論，對本文所述一些化合物進行測試并發(fā)現(xiàn)其表現(xiàn)出阻滯瞬時受體電位 香草酸受體1 (TRPVl)的作用。這些化合物為N-苯基鄰氨基苯甲酸衍生物，其衍生自專利 W02004/035037和美國專利申請20050250833中所述的N-苯基鄰氨基苯甲酸。因此，根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了 一種調(diào)節(jié)瞬時受體電位香草酸受體 1 (TRPVl)的方法，做法是，給予有需要的受試者治療有效量的具有通式IV的化合物 式IV其中Z 為 A-G ( = K)-X-Y 基團，且其中A為烴基或不存在；G 選自 C、S 禾口 PRa ；K 選自 0 禾口 S ；X選自NRb、0、S或不存在；且Y選自氫、烴基、羥烴基、環(huán)烴基、雜脂環(huán)基、芳基和聚亞烴基二醇部分；R1選自氫、烴基、環(huán)烴基或芳基；R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和Riq中的各者獨立地選自氫、烴基、羥烴基、三鹵代烴
基、環(huán)烴基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、雜脂環(huán)基、商素、羥基、烴氧基、芳氧基、巰基、烴硫基、 芳硫基、亞磺酰基、磺酰基、氰基、硝基、氨基和-NR15R16,或者，R2、R3、R4、R5和R6中的至少兩 者，R7、R8、R9和Rw中的至少兩者形成五元或六元芳環(huán)、雜芳環(huán)、脂環(huán)或雜脂環(huán)；R15和R16各自獨立地選自氫、烴基、環(huán)烴基、芳基、羰基和磺?；?，或者R15和R16形成五元或六元雜脂環(huán)；且所述Ra和Rb中的各者選自氫、烴基、環(huán)烴基和芳基。根據(jù)本發(fā)明的又一方面，提供了一種藥物組合物，其包括作為活性成分的通式IV 化合物和藥學(xué)上可接受的載體。在一些實施方案中，所述組合物包裝在包裝材料中并在所 述包裝材料之中或之上加以印刷標(biāo)識，用于治療調(diào)節(jié)TRPVl通道對其有益的病癥。因此，根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，提供了通式IV化合物在制備用于治療調(diào)節(jié) TRPVl通道對其有益的病癥的藥物中的用途。根據(jù)本發(fā)明實施方案中這些方面來應(yīng)用的所述化合物的另外特性如專利 W02004/035037和美國專利申請20050250833中所述，所述文獻通過全文引用結(jié)合到本文。 在一些實施方案中，本發(fā)明這些方面中應(yīng)用的所述化合物包含一個或多個吸電子 取代基，如本文對具有通式I的化合物所述。如本文進一步描述和W02004/035037與美國專利申請20050250833進一步描述， 為N-苯基鄰氨基苯甲酸衍生物的酯衍生物的一些具有通式IV的化合物表現(xiàn)出抗COX活 性，而為N-苯基鄰氨基苯甲酸的酰胺衍生物的其他化合物則缺乏COX抑制活性。如后續(xù)實施例部分說明，NH29(根據(jù)本發(fā)明實施方案制備的活性化合物)顯示出 阻滯TRPVl。因此，根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，所述阻滯有需要的受試者TRPVl的方法包括給 予受試者治療有效量的NH29。如上文討論，本發(fā)明的化合物缺乏TRPV6調(diào)節(jié)作用確保了將本發(fā)明的化合物給予 有需要的受試者不會伴有TRPV6相關(guān)的負(fù)面效應(yīng)。因此，根據(jù)本發(fā)明一些實施方案，本文所述化合物不調(diào)節(jié)TRPV6。在一些實施方案中，調(diào)節(jié)TRPVl活性包括阻滯TRPVl活性，如本文定義。有許多病患、病癥和障礙與TRPVl通道功能相關(guān)。可通過本文所述TRPVl阻滯劑(通式IV化合物)有益地治療的示例性病癥包括但 不限于癲癇、疼痛相關(guān)病癥例如神經(jīng)源性疼痛、神經(jīng)病性疼痛、異常性疼痛、炎癥相關(guān)疼痛、 雙相障礙、情感障礙、精神障礙、精神分裂癥、焦慮和運動神經(jīng)元疾病、膀胱過度活動癥和尿 失禁。本文中用到的術(shù)語“約”指士 10%術(shù)語“包含”、“含”、“包括”、“包括有”、“具有”及其變體意為“包括但不限于”。這 些術(shù)語涵蓋表述“由……組成(consisting of)”和“主要由……組成”。表述“主要由……組成”意為所述組合物或方法可包括額外的成分和/或步驟，但 僅限于額外成分和/或步驟不從本質(zhì)上改變要求保護的組合物或方法的基本性質(zhì)和新特 性的情況下。本文中用到的單數(shù)形式包括復(fù)數(shù)指代，除非上下文另有明確規(guī)定。例如，術(shù)語“化 合物”或“至少一種化合物”可指多種化合物，包括其混合物。在本申請中，本發(fā)明各種實施方案可以范圍形式描述。應(yīng)當(dāng)理解，以范圍形式作的 描述僅為了方便簡潔，并不應(yīng)解釋為對本發(fā)明范圍的硬性限制。因此，對范圍的描述應(yīng)視為 其具體公開了所有可能的子范圍和該范圍內(nèi)的各個數(shù)值。所描述的范圍例如1-6應(yīng)視為具 有具體公開的子范圍例如1-3、1-4、1-5、2-4、2-6、3-6等和該范圍內(nèi)的各個數(shù)值例如1、2、3、4、5和6。無論該范圍的寬度為多少，此用法均適用。在本文表述數(shù)值范圍的任何時候，應(yīng)當(dāng)理解，其意在包括表述范圍內(nèi)的任意數(shù)字 (分?jǐn)?shù)或整數(shù))。表述“第一給定數(shù)和第二給定數(shù)之間的范圍”與“從第一給定數(shù)到第二給 定數(shù)的范圍”可在本文中互換使用，意指包括第一給定數(shù)和第二給定數(shù)和其間的所有小數(shù) 和整數(shù)。應(yīng)當(dāng)理解，為了清楚起見，在分別的實施方案上下文中作了描述的本發(fā)明的某些 特征也可在單個實施方案中組合提供。相反，為了簡要起見，在單個實施方案的上下文中描 述的本發(fā)明的各種特征也可獨立地提供或以任意適宜的子組合提供或視情況在本發(fā)明任 意的已述實施方案中提供。各種實施例上下文中描述的某些特征不應(yīng)視為那些實施方案的 基本特征，除非所述實施方案沒有那些元素就無法實施。如上文所述和如權(quán)利要求部分要求保護的本發(fā)明的各種實施方案和方面在下面 實施例中找到實驗支持。下面實施例將使本領(lǐng)域普通技術(shù)人員明白本發(fā)明的額外的目標(biāo)、優(yōu)點和新特征，但并不意在限制本發(fā)明的范圍。此外，如上文所述和如權(quán)利要求部分要求保護的本發(fā)明的 各種實施方案和方面中的每一者在下面實施例中找到實驗支持。
實施例現(xiàn)參考以下實施例并結(jié)合上文描述以非限制性方式說明本發(fā)明。材料和方法縮略語NHS =N-羥基琥珀酰亞胺；t_Boc 叔丁氧基羰基；DCM 二氯甲烷；DMAP 二 甲氨基吡啶；DMF 二甲基甲酰胺；DCC 二環(huán)己基碳二亞胺；EtOAc 乙酸乙酯；He 己烷；和 TFA:三氟乙酸。所有需要無水條件的反應(yīng)均在烘干的玻璃器皿中于氬氣或N2氣氛下進行?；瘜W(xué)品和溶劑或為分析純(A. R.)或通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)純化。薄層色譜(TLC)用來自Merck的硅膠60F254板或硅膠制備板(Analtech，1000微 米)進行，化合物通過用UV光照射觀察和/或通過用25克磷鉬酸、10克Ce (SO4)2 · H2O, 60ml濃H2SO4和940ml H2O的溶液處理、然后通過加熱和/或通過用12克2，4- 二硝基苯胼 在60ml &H2S04、80ml H2O和200ml 95% EtOH中的溶液染色、然后通過加熱和/或浸入碘 浴(30克I2和2克KI在400ml 1 1的Et0H/H20中)并加溫目視觀察?？焖偕V(FC)用來自Merck的硅膠Merck60 (粒徑0. 040-0. 063mm)進行，洗脫劑 在括號中給出。1H匪R用Bruker AMX 200或400進行。化學(xué)位移以相對于TMS ( δ = Oppm)的δ 表示，耦合常數(shù)J的單位為Hz。譜圖在以⑶Cl3或CD3OD作溶劑和室溫下記錄，另有指出除 外。HR-MS液態(tài)二次離子質(zhì)譜(LSI-MS)用VG ZAB-ZSE和3_硝基芐醇基質(zhì)進行。甲氧芬那酸和二氯芬酸有市售并從Sigma-Aldrich(St. Louis, MO, USA)購得?；ㄉ南┧岷瓦胚崦佬磷許igma購得。所有試劑，包括鹽和溶劑，均購自Aldrich (Milwaukee，MN)，另有指出除外?；瘜W(xué)合成
二氯芬酸酯的制備_通用程序這里給出得到NH6的二氯芬酸的酯化程序，該程序在美國專利申請20050250833
中有述。 將二氯芬酸(50mg，0. 17mmol)溶解在干燥的DCM中。加入催化量的DMAP和二甘 醇(0. 08ml，0.85mmol)，攪拌混合物并冷卻至0°C。其后將DCC (52. 6mg，0. 255mmol)溶解在 DCM中并逐滴加入反應(yīng)混合物中。懸浮液然后于0°C攪拌30分鐘并通過TLC(EtC)Ac He, 1 1)監(jiān)測。過濾除去沉淀固體并用DCM洗滌。減壓濃縮濾液并通過快速色譜在硅膠上純 化得到純酯NH6 (43mg,產(chǎn)率66% )。NH6 =1H-WR (200MHz，CDCl3) δ = 7. 35ppm(2H, d, J = 8) ；7. 19-7. 06 (2H, m)； 6. 99 (1H, d, J = 8) ；6. 96 (1H, d, J = 8.) ；6. 56 (1H, d, J = 8) ；4. 35 (2H, m) ；3. 8(2H, s)； 3. 65-3. 75 (4H, m) ；3. 53-3. 57 (2H, m)。MS (FAB) [C18H19Cl2NO4] 383. 0。其他二氯芬酸酯的制備用上面的通用程序，如下面的流程1中所示制備其他二氯芬酸酯(參見美國專利 申請20050250833)，其產(chǎn)率和表征在下面列出。流程1 NH8 產(chǎn)率 75%o 1HNMR (200MHz, CDCl3) δ = 7. 34ppm(d，2H，J = 8. 2) ；7. 24 (1H, dd, J = 7. 4，J = 1.6) ；7. 08-7. 16 (1H, dt, J = 7. 6，J = 1.6) ；6. 91-7. 02 (3H, m)； 6. 54 (1H, d, J = 8) ；4. 3 (2H, m) ；3. 84 (2H, s) ；3. 55-3. 74 (14H, m) ；3. 37 (3H, s)。MS (FAB) [C23H29Cl2NO6] 485. 1。NH9 產(chǎn)率 80%。1HNMR(200MHz, CDCl3) δ = 7. 33ppm(2H, d, J = 8) ；7. 22 (1H, dd, J = 7. 4，J = 1. 6) ；7. 12 (1H, dt, J = 7. 6，J = 1. 6) ；6. 92-6. 98 (3H, m) ；6. 55 (1H, d,J = 8) ；3. 93 (2H, d, J = 6. 8) ；3. 82 (2H, s) ；2. O (1H, m) ；0. 91 (6H, d，J = 6. 8)。MS (FAB) [C18H19Cl2NO2] 351. 1。NHl3 產(chǎn)率 53 %。1HnmrOOOMHz, CDCl3) δ = 7. 35ppm(2H, d, J = 8)； 7. 19-7. 06 (2H, m) ；6. 99 (1H, d, J = 8) ；6. 96 (1H, d, J = 8. ) ；6. 56 (1H, d, J = 8)； 4. 34-4. 29 (2H, m) ；3. 85 (2H, s) ；3. 75-3. 70 (2H, m) ；3. 61-3. 59 (2H, m) ；3. 58-3. 50 (2H, m)。 MS (FAB) [C19H21Cl2NO4] 397. 0。二氯芬酸N-羥基琥珀酰亞胺和酰胺衍生物的制備_通用程序這里給出獲得NH5和NH14的二氯芬酸衍生物酰胺化程序，該程序在下面的流程2 中示出并在美國專利申請20050250833中有進一步描述。向溶解在IOml 二氯甲烷中的相應(yīng)二氯芬酸衍生物(0.506mmol)的溶液中 加入N-羥基琥珀酰亞胺(0. 76mmol)和DCC (0. 76mmol)。混合物攪拌1小時并通過 TLC(EtOAc He,l 1)監(jiān)測。當(dāng)檢測到反應(yīng)完成時，過濾混合物并減壓蒸發(fā)溶劑。粗產(chǎn)物 經(jīng)柱色譜純化得到純的二氯芬酸酰胺衍生物。流程2 將相應(yīng)酸的N-羥基琥珀酰亞胺衍生物溶解在Iml DMF中。加入二甘醇胺(1當(dāng) 量)，混合物攪拌30分鐘，同時通過TLC(Et0Ac，100%)監(jiān)測。反應(yīng)完成后，減壓除去溶劑， 產(chǎn)物經(jīng)柱色譜純化得到相應(yīng)的酰胺衍生物。其他二氯芬酸N-羥基琥珀酰亞胺和酰胺衍生物的制備用上面的通用程序，如下面的流程3中所示制備其他二氯芬酸N-羥基琥珀酰亞胺 和酰胺衍生物(如美國專利申請20050250833中所述)，其產(chǎn)率和表征在下面列出。流程3 NH15a, R3 = R2 = CH3NHl5, R3 = R2 = CH3NH16a, R3 = CF3, R2 = H NH16, R3 = CF3, R2 = HNH18a, R3 = Cl, R2 = CH3 NH18, R3 = Cl, R2 = CH3
NH5a 產(chǎn)率 90 %。1HnmrOOOMHz, CDCl3) δ = 7. 35ppm(3H, d, J = 8)； 7. 18-7. 26 (1H, m) ；6. 93-7. 07 (2H, m) ；6. 6-6. 63 (1H, d, J = 7. 9) ；6. 2 (1H, s) ；4. 13 (2H, s)； 2. 84 (4H, s)。NH5 產(chǎn)率 63 %。1HNMR (200MHz，CDCl3) δ = 7. 35ppm(2H, d, J = 8)； 7. 19-7. 06 (2H, m) ；6. 99 (1H, d, J = 8) ；6. 96 (1H, d, J = 8) ；6. 56 (1H, d, J = 8) ；3. 78-3. 74 (2H, m) ；3. 64-3. 57 (2H, m) ；3. 23 (2H, s) ；2. 95 (3H, s)。MS(FAB) [C17H19Cl2N2O2] 353. 1。
NHl4 產(chǎn)率 78 %。1HnmrOOOMHz, CDCl3) δ = 7. 35ppm(2H, d, J = 8)； 7. 19-7. 06 (2H, m) ；6. 99 (1H, d, J = 8) ；6. 96 (1H, d, J = 8) ；6. 56 (1H, d, J = 8) ；3. 69 (2H, s) ；3. 55-3. 49 (4H, m) · MS (FAB) [C18H20N203C12+H] 383. 1。NH15a:產(chǎn)率 99%。1HNMR(200MHz, CDCl3) δ = 8. 6ppm(lH, s) ；8. 12 (1H，dd，J = 1. 53, J = 7. 4) ；7. 32 (1H, m) ；7. 06-7. 13 (m, 3H) ；6. 66-6. 74 (2H, m) ；2. 9 (4H, s) ；2. 32 (3H, s) ；2. 14 (3H, s)。NH15 產(chǎn)率 88%。1HnmrooomHzADCI3) δ = 9. 19ppm(lH，s) ；7. 41-7. 45 (1H，dd， J = 1. 53，J = 7. 4) ；7. 14-7. 21 (2H, m) ；7. 02-7. 10 (1H, t，J = 7. 7) ；6. 93-6. 96 (2H, m)； 6. 65-6. 69 (2H, m) ；3. 6-3. 8 (8H, m) ；2. 32 (3H, s) ；2. 20 (3H, s) · MS (FAB) [C19H24N2O3] 328. 2。NH16a:產(chǎn)率 90%。1HNMR(200MHz, CDCl3) δ = 8. 91ppm(lH, s) ；8. 10-8. 15 (1H, dd，J = 1. 6，J = 8. 18) ；7. 33-7. 48 (5H, m) ；7. 24 (1H, d, J = 7. 8) ；6. 80-6. 88 (1H, dt, J = 1. 06，J = 7. 1) ；2. 9(4H，s)。NH16 產(chǎn)率 79%。1HnmrooomHzADCI3) δ = 9. 44ppm(lH，s) ；7. 46-7. 50 (1H，dd， J = 0. 6，J = 8) ；7. 4 (2H, d, J = 9) ；7. 16-7. 32 (5H, m) ；7. 09 (1H, bs) ；6. 79-6. 84 (1H, dt, J = 1. 8，J = 6. 5) ；3. 54-3. 73 (8H, m) · MS (FAB) [C18H19N203F3+H] 369. 1。NH18a 產(chǎn)率 92%。1HNMR(200MHz, CDCl3) δ = 8. 69ppm(lH, s) ；8. 09-8. 14(1H， dd, J = 1. 7，J = 8.6) ；7. 32-7. 37 (1H, dt, J= 1. 8，J = 8. 5) ；7. 14-7. 28 (3H, m)； 6. 72-6. 80 (2H, m) ；2. 9 (4H, s) ；2. 29 (3H, s)。NH18 產(chǎn)率 86%。1HnmrooomHzADCI3) δ = 9. 31ppm(lH，s) ；7. 45-7. 50 (1H，dd， J = 0· 6，J = 8) ；6. 99-7. 22(5H，m) ；6. 67-6. 94(lH，dt，J = 1. 8, J = 6. 5) ；3. 54-3. 74 (8H, m) ；2. 33 (3H, s). MS (FAB) [C18H21N203C1+H] 349. 1。NHl7 的制備化合物NH17，一種根據(jù)本發(fā)明的實施方案的示例性電壓依賴性鉀通道阻滯劑，自 化合物1按下面的流程4中所示制備。流程4 將二氯芬酸(100mg，0. 338mmol)溶解在DCM中。其后加入N-叔丁氧羰基-二甘 醇胺(70mg，0. 34mmol) [Kim, Y. S. ；Kim, K. Μ. ；Song, R. ;Jun, Μ. J. ；Sohn, Y. S.，J. Inorg. Biochem. 2001，87 (3)，157-163]和 DMAP (4mg，0. 034mmol)。向該混合物中逐滴加入 DCC(139mg，0. 68mmol)DCM。反應(yīng)混合物于室溫下攪拌1小時，同時通過TLC(EtOAc He， 1 1)監(jiān)測。反應(yīng)完成后，過濾混合物并減壓除去溶劑。粗產(chǎn)物通過柱色譜在硅膠 (EtOAc He,l 3)上純化，得到呈無色油狀的化合物1 (148mg，90% )?；衔? =1HNMR (200MHz，CDCl3) 6=7.34ppm (d, J = 8Hz，2H) ；7. 28 (dd, J = 7. 4，1. 5Hz, 1H) ；7. 14 (dt, J = 7. 4，1. 5Hz, 1H) ；7. 02-6. 93 (m, 2H) ；6. 87 (s, 1H) ；6. 57 (d, J =7. 9Ηζ，1Η) ；4. 31-4. 26(m，2H) ；3. 84 (s，2H) 3. 68-3. 63 (m，2H) ；3.47 (t，J = 5. 0Hz，2H)； 3. 27 (q, J = 5. 0Hz,2H) ;1.43(s，9H)。將化合物l(127mg，0. 26mmol)溶解在10ml DCM中，并向其中加入3ml HCl(IM)在 乙醚中的溶液?；旌衔镉谑覝叵聰嚢柽^夜并通過TLC(EtC)Ac MeOH,9 1)監(jiān)測。反應(yīng) 完成后，減壓除去溶劑，得到呈白色粉狀的NH17 (29mg,產(chǎn)率27% )，其不經(jīng)進一步純化即使用。NHl7 =1HNMR (200MHz, CDCl3) :6=7.32ppm (d, J = 8. 0Hz，2H) ；7. 26-7. 22 (m, 1H)； 7. 12 (t, J = 8. 0Hz, 1H) ；7. 0-6. 92 (m, 2H) ；6. 81 (s, 1H) ；6. 51 (d, J = 7. 6Hz, 1H) ；4. 30 (bs, 2H) ；3.84 (s，2H) ；3. 76(bs,4H) ；3. 25 (bs，2H)。NH21 的制備化合物NH21，一種根據(jù)本發(fā)明的實施方案的示例性電壓依賴性鉀通道阻滯劑，按 下面的流程5中所示制備。流程5 將二氯芬酸(200mg，0.67mmol)溶解在DCM中，并向其中加入縮水甘油(60mg， 0. 81mmol)和DMAP (8mg, 0. 07mmol)。其后向反應(yīng)混合物中逐滴加入溶解在DCM中的 DCC (276mg，1. 34mmol)，混合物于室溫下攪拌過夜并通過TLC (EtOAc He, 1 3)監(jiān)測。反應(yīng)完成后，過濾混合物并減壓除去溶劑。粗產(chǎn)物通過柱色譜在硅膠(EtOAc He，l 3)上純化，得到呈白色粉狀的NH21 (138mg，產(chǎn)率60% )。NH21 1HnmrOOOMHz, CDCl3) :8=7.34ppm (d, J = 8. 0Hz，2H) ；7. 28(dd, J = 7. 4， 1·5Ηζ，1Η) ；7.14 (dt，J = 7. 4，1. 5Hz，1H) ；7. 02-6. 93 (m，2H) ；6. 87 (s, 1H) ；6.57 (d，J = 7. 9Ηζ，1Η) ；4. 49 (dd, J = 12. 0，3. 0Hz，1H) ；4. 01 (dd, J = 12. 0，6. 0Hz，1H) ；3. 88(s，2H)； 3. 21 (m, 1H) ；2. 82 (t, J = 4. 8Hz, 1H) ；2. 62 (dd, J = 4· 8，2. 6Hz, 1Η)。ΝΗ25 的制備化合物NH25，一種根據(jù)本發(fā)明的實施方案的示例性電壓依賴性鉀通道開放劑，自 化合物2按下面的流程6中所示制備。流程6 將二氯芬酸(300mg，lmmol)溶解在DCM中，并向其中加入乙二醇(300mg，5mmol) 和DMAP (8mg, 0. 07mmol)。其后向反應(yīng)混合物中逐滴加入溶解在DCM中的DCC (240mg, 1.2mm0l)，混合物于室溫下攪拌10分鐘并通過TLC(EtC)Ac Hex, 1 1)監(jiān)測。反應(yīng)完成 后，過濾混合物并減壓除去溶劑。粗產(chǎn)物通過柱色譜在硅膠(EtOAc He,l 3)上純化， 得到呈白色粉狀的化合物2(270mg，產(chǎn)率80% )。化合物2 =1HNMR (200MHz, CD3OD) δ=7.37 (d, J = 8. 5Hz，2H) ；7. 19 (dd, J = 9. 0， 2. 5Hz, 1H) ；7. 09-7. 00 (m, 2H) ；6. 86 (t, J = 8. OHz, 1H) ；6. 37 (d, J = 9. OHz, 1H) ；4. 18 (t, J =5. 0Hz, 2H) ；3. 82 (s, 2H) ；3. 72 (t, J = 5. OHz, 2H)。將化合物2(150mg，0. 45mmol)溶解在DCM中，并向其中加入硝化硅膠(375mg， 1 當(dāng)量)[Fleming, S. Α. ；Ridges, Μ. D. ；Jensen, Α. W, J. Label. Compd. Radiopharm. , 1996, 38 (1)，13-18]。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌10分鐘并通過TLC (EtOAc He, 1 1)監(jiān)測。反 應(yīng)完成后，過濾二氧化硅并減壓除去溶劑。粗產(chǎn)物通過柱色譜在硅膠(EtOAc He,2 3) 上純化，得到呈橙色粉狀的化合物NH25 (IOOmg,產(chǎn)率60% )。NH25 =1HNMR(200MHz,CD3OD) δ=8.13 (d, J = 2. 5Hz, 1H) ；7. 93(dd, J = 9. 0,2. 5Hz, 1H) ；7. 49 (d, J = 8. 5Hz,2H) ；7. 27 (t, J = 8. 5Hz, 1H) ；6. 23 (d, J = 9. OHz, 1Η) ；4. 21 (t, J =5. 0Ηζ，2Η) ；3. 89(s，2H) ；3. 74 (t, J = 5. 0Hz，2H)。NH27 的制備化合物NH27，一種根據(jù)本發(fā)明的實施方案的示例性電壓依賴性鉀通道開放劑，按 下面的流程7中所示制備。流程7 將二氯芬酸(600mg，2mmol)溶解在DCM中，并向其中加入NHS (260mg，2. 2mmol) 和DMAP (16mg，0. 14mmo 1)。其后向反應(yīng)混合物中逐滴加入溶解在DCM中的DCC (500mg，
2.4mmol)，混合物于室溫下攪拌10分鐘并通過TLC(EtOAc He,3 1)監(jiān)測。反應(yīng)完成后， 過濾反應(yīng)混合物并減壓除去溶劑。將殘余物溶解在DMF中，并向其中加入乙醇胺(135mg，2. 2mmol)?；旌衔镉谑覝叵?攪拌10分鐘并通過TLC(EtOAc He, 3 1)監(jiān)測。反應(yīng)完成后，用EtOAc稀釋混合物并用 氯化銨的飽和溶液洗滌。有機層用硫酸鎂干燥并減壓除去溶劑。粗產(chǎn)物通過柱色譜在硅膠 (EtOAc He, 3 2)上純化，得到呈白色粉狀的NH27 (570mg，產(chǎn)率84% )。NH27 1HnmrGOOMHz, CD3OD) 6=7.37 (d, J = 8. 5Hz，2H) ；7. 19(dd, J = 9. 0,2. 5Hz, 1H) ；7. 05-6. 99 (m, 2H) ；6.86 (t，J = 8·0Ηζ，1Η) ；6.37 (d，J = 8. OHz, 1Η) ；3.67(s，2H)；
3.57 (t, J = 5. 0Hz，2H) ；3. 29 (t, J = 5. 0Hz，2H)。NH28、NH29 和 NH30 的制備化合物NH28、NH29和NH30，根據(jù)本發(fā)明的實施方案的示例性電壓依賴性鉀通道開 放劑，自化合物NH27按下面的流程8中所示制備。流程8 NH28自NH27按如下制備將如上文所述制備的NH27 (200mg，0. 59mmol)溶解 在DCM中，并向其中加入硝化硅膠(900mg，2當(dāng)量)。反應(yīng)于室溫下攪拌2小時并通過 TLC(EtOAc He, 7 3)監(jiān)測。反應(yīng)完成后，過濾二氧化硅并減壓除去溶劑。粗產(chǎn)物通過柱 色譜在硅膠(EtOAc He, 7 3)上純化，得到呈黃色粉狀的NH28 (50mg，產(chǎn)率20% )。
NH28 1HNMR (400MHz, CD3OD) δ=8.39 (s，2H) ；8. 24 (d, J = 2. 5Hz, 1H) ；8. 06 (dd, J =9. 0,2. 5Hz, 1H) ；6. 71 (d，J = 9. OHz, 1Η) ；3. 82(s，2H) ；3. 63 (t，J = 5. 0Hz，2H) ；3. 35 (t, J = 5. 0Hz，2H)。NH29自NH27如下制備將NH27 (200mg，0. 59mmol)溶解在DCM中，并向其中加入 硝化硅膠(1.35g，3當(dāng)量)。反應(yīng)于室溫下攪拌2小時并通過TLC(EtC)Ac He, 7 3)監(jiān) 測。反應(yīng)完成后，過濾二氧化硅并減壓除去溶劑。粗產(chǎn)物通過柱色譜在硅膠(EtOAc He, 7 3)上純化，得到呈黃色粉狀的NH29(80mg，產(chǎn)率30% )。NH29 =1HNMR(200MHz, CD3OD) 6=8.59 (d, J = 2. 5Hz, 1H) ；8. 44 (d, J = 2. 5Hz, 1H)； 8. 22 (s，2H) ；3. 86 (s, 2H) ；· 3. 56 (t, J = 5. OHz, 2H) ；3. 27 (t, J = 5. OHz, 2H)。NH30自NH27如下制備將如上文所述制備的NH27 (lOOmg，0. 30mmol)溶解在 DCM中并向其中加入硝化硅膠(250mg，1當(dāng)量)。反應(yīng)混合物于室溫下攪拌2小時并通過 TLC(EtOAc He,7 3)監(jiān)測。反應(yīng)完成后，過濾二氧化硅并減壓除去溶劑。粗產(chǎn)物通過柱 色譜在硅膠(EtOAc He，7 3)上純化，得到呈黃色粉狀的NH30 (30mg，產(chǎn)率25% )。NH30 1HNMR(200MHz，CD3OD) δ=8.15 (d，J = 2. 5Hz, 1H) ；7. 94(dd,J = 9. 0,2. 5Hz, 1H) ；7. 49 (d, J = 8. 5Hz,2H) ；7. 23 (t, J = 8. 5Hz, 1H) ；6. 30 (d, J = 9. OHz, 1H) ；3. 72 (s, 2H) ；· 3. 59 (t, J = 5. 0Hz, 2H) ；3. 30 (t, J = 5. OHz, 2H)。表1示出了制備和試驗的一些示例性化合物，其中的一些是根據(jù)本發(fā)明的實施方案的。表 1 活性測定CHO中Κν7· 2/3、TRPVl和TRPV6通道的重組表達細(xì)胞1.中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞生長于附加2mM谷氨酰胺、10%胎牛血清和抗生素的 達爾伯克氏改良Eagle' s培養(yǎng)基(DMEM)。簡單地說，將40，000細(xì)胞接種于涂有聚-D-賴 氨酸的蓋玻片(直徑13mm)放入24孔板，然后用pIRES-⑶8 (0. 5 μ g)(作為轉(zhuǎn)染標(biāo)記)和 用 Kv7. 3(0. 5 μ g)和 Kv7. 3 (0. 5 μ g)或 TRPVl (Ig)或 TRPV6 (Ig)進行轉(zhuǎn)染。為了電生理學(xué)實驗，在轉(zhuǎn)染約40小時后通過anti-⑶8抗體包被珠對轉(zhuǎn)染細(xì)胞進 行可視化。轉(zhuǎn)染根據(jù)生產(chǎn)商的方案使用Fugene6 (Roche，Indianapolis IN, USA)進行。背根神經(jīng)節(jié)和海馬神經(jīng)原代培養(yǎng)最近研究表明，M-電流在控制背根神經(jīng)節(jié)(DRG)感覺神經(jīng)元興奮性中扮演關(guān)鍵角 色，因而代表疼痛的治療靶點[4]。因此，考慮到其在痛覺信號傳導(dǎo)途徑中的潛在影響，測試 新型M-通道調(diào)節(jié)劑對DRG神經(jīng)元興奮性的影響具有重要價值。為了培養(yǎng)背根神經(jīng)節(jié)(DRG)神經(jīng)元，從去頭處死的2-5日齡Sprague-Dawley大鼠 切下神經(jīng)節(jié)。DRGs置于Hank’ s平衡鹽溶液中(HBSS)，并通過酶解離制備。簡單地說，神 經(jīng)節(jié)于附加 5mg/ml 分散酶、2mg/ml 膠原酶 IA 型和 0. lmg/ml DNA 酶(Invitrogen/Gibco，Carlsbad, CA)的無Ca2+和Mg2+HBSS溶液中溫育30分鐘，然后用火琢巴氏(Pasteur)吸管 研碎。隨后神經(jīng)節(jié)在80xg下離心5分鐘后再懸浮于附加2mM L-谷氨酰胺、16. 5mM NaHC03> 6g/l葡萄糖、5ml青霉素/鏈霉素和10%胎牛血清的DMEM。為了進行電生理記錄，解離的神經(jīng)元涂板于13mm蓋玻片，蓋玻片用聚_D_賴氨酸 (lmg/ml)和層粘連蛋白(lOyg/ml)進行預(yù)包被，培養(yǎng)1_2天后使用。為了海馬神經(jīng)元培養(yǎng)，剖腹取出Sprague-Dawley大鼠胚胎(E18)并切下海馬。組 織用木瓜蛋白酶消化20分鐘，研碎至單細(xì)胞懸浮液，以40，000細(xì)胞/ml密度涂于24孔板的 13mm直徑蓋玻片上的牛膠原蛋白IV型和lOOy g/ml聚-L-賴氨酸底物上。培養(yǎng)基由含5% 馬血清(Biological Industries, Beit HaEmek, Israel)、B_27 神經(jīng)元補充物(Invitrogen, Carlsbad, CA) UOOU/ml青霉素、100 y g/ml鏈霉素和2mM谷氨酰胺的改良Eagle' s培養(yǎng) 基組成。D-葡萄糖補充至終濃度6g/l。5天后加入胞嘧啶-1-D-阿拉伯呋喃糖苷(5yM) 以抑制膠質(zhì)細(xì)胞增殖。海馬神經(jīng)元在培養(yǎng)的10-14天用于電生理記錄。所有的培養(yǎng)均維持在37°C含5% C02的濕潤空氣中。最大電休克癲癇發(fā)作測試如前所述[1]通過ICR小鼠最大電休克癲癇發(fā)作模型(MES)來測試抗痙攣作用。 實驗程序和動物管理已被特拉維夫大學(xué)動物研究道德委員會批準(zhǔn)并遵從實驗動物管理和 使用規(guī)范(1996，NationalAcademy of Sciences,Washington DC)。簡要地說，使用嚙齒動 物電擊器(Hugo Sachs Electronik，221型)通過兩個角膜電極通交流電(50mA,60Hz)0. 2 秒誘發(fā)成年小鼠最大電休克。表明這將導(dǎo)致100%的受試動物強直痙攣。所述化合物溶于 0. 9%鹽水，在進行電休克前30分鐘通過腹膜內(nèi)給藥。未能產(chǎn)生后肢強直痙攣的動物評分 為受到藥物保護，以百分比表示。電生理學(xué)采用全細(xì)胞構(gòu)型膜片鉗技術(shù)進行CH0細(xì)胞內(nèi)的電壓鉗制記錄。采用Axopatch 200B 膜片鉗信號放大器(MolecularDevices，Sunnyvale, CA)進行信號放大，在 2kHz下采樣并通過4孔貝塞爾低通濾波器在800Hz下濾波。采用pClamp 9. 2軟件 (MolecularDevices)和配備DigiData 1322A界面的IBM兼容奔騰4計算機獲取數(shù)據(jù)。膜 片吸管用硼硅酸鹽玻璃(Warner Instrument Corp, USA)拉制，阻抗為2-5MQ。記錄CH0細(xì) 胞內(nèi)K+電流時，胞內(nèi)吸管溶液包含(以mM計):130KCl，lMgCl2，5K2ATP，5EGTA，10HEPES，用 K0H調(diào) pH 至 7. 4 (290m0sm)。胞外溶液包含(以 mM 計):140NaCl,4KCl, 1. 8CaCl2,1. 2MgCl2, 11 葡萄糖，5. 5HEPES，用 NaOH 調(diào) pH 至 7. 4 (310m0sm)。補償(75-90% )串聯(lián)阻抗(3-13M) 并定時監(jiān)測。為了在原代培養(yǎng)神經(jīng)元內(nèi)的電流鉗制記錄，膜片吸管內(nèi)注入(以mM計)135KC1， 1K2ATP, lMgATP，2EGTA，1. lCaCl2，5 葡萄糖，10HEPES，用 K0H 調(diào) pH 至 7. 4(315m0sm)。胞外 溶液含(以 mM 計):150NaCl,2. 5KC1, 2CaCl2, 2MgCl2,15 葡萄糖，10HEPES，用 NaOH 調(diào) pH 至 7.4(325m0sm)。在5kHz下采樣記錄并通過4孔貝塞爾低通濾波器在2KHz下濾波。測得胞 內(nèi)和鹽溶液之間的液體接界電位(liquidjunction potential)約為-15. 6mV并在線校正。為了誘發(fā)峰值放電，將75_200pA的方波去極化電脈沖注入神經(jīng)元內(nèi)，持續(xù)400ms。 為了測定基電流，將100-1100pA的方波去極化電脈沖注入神經(jīng)元，持續(xù)2ms。
如前所述[5]，通過全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)的電壓鉗制模式在鉗制電位_70mV下記錄 自發(fā)性興奮性突觸后電流(EPSCs)；胞外溶液含(以mM計)160NaCl，2. 5KC1，10HEPES, 10葡 萄糖，2CaCl2 ；pH7. 3(325m0sm)，并在其中添加30yM印防己毒素和10 y M甲碘荷包牡丹堿。 胞內(nèi)溶液由以下物質(zhì)組成(以mM計)130K-葡萄糖酸鹽，10KC1，1. 1EGTA，10HEPES，lMgCl2， 2Na2ATP，0. lCaCl2 和 5QX314Br 以便阻滯 Na+ 電流；pH7. 2 (315m0sm)。在鉗制電位-70mV下記錄自發(fā)性抑制性突觸后電流(IPSCs)；胞外溶液含(以mM 計)160NaCl，2. 5KC1,10HEPES, 10 葡萄糖，2CaCl2 ；pH7. 3 (325m0sm)，并在其中添加 10 u M NBQX 禾口 10iiMAP-5。胞內(nèi)溶液由以下物質(zhì)組成(以 mM 計):144CsCl，10HEPES，1. 1EGTA， 0. lCaCl2，5MgCl2，2Na2ATP，5QX314Br ；pH 7. 3(315m0sm)。如前面所述[1]在蟾蜍(Xenopus)卵母細(xì)胞內(nèi)進行了電壓鉗測定。細(xì)胞培養(yǎng)中的環(huán)氧合酶抑制測定使小鼠結(jié)腸癌CT26和小鼠路易士肺癌D122細(xì)胞在DMEM(D122)或RPMI (CT26)中 生長，其中添加有10%胎牛血清，4%谷氨酰胺，青霉素-鏈霉素-制霉菌素和3%非必 需氨基酸(D122)，并置于含5%C0237°C的濕潤培養(yǎng)箱。為了 C0X活性測定，細(xì)胞植于24孔 板。在測定之前，用無血清培養(yǎng)基漂洗細(xì)胞；然后將測試化合物加入培養(yǎng)基并在37°C 下溫育30分鐘，此后加入30 u M花生四烯酸，繼續(xù)溫育20分鐘。溫育結(jié)束時加入10 y M吲哚 美辛以終止反應(yīng)，然后將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)至另一塊24孔培養(yǎng)板以便根據(jù)生產(chǎn)商方案通過輻射免 疫分析(DuPont-NEN ；Boston MA)來測定PGE2產(chǎn)量。刮片細(xì)胞蛋白含量分析采用Bradford 方法(1976) [Bradford M. M. 1976. Anal. Biochem. 72 :248_254]，并以牛血清蛋白(BSA)為 標(biāo)準(zhǔn)，用于標(biāo)準(zhǔn)化PGE2的產(chǎn)量。數(shù)據(jù)分析 用 Clampfit 程 序(pClamp9. 2， Molecular Devices)、 MicrosoftExcel (Microsoft)和 Prism4. 0 (GraphPad)進行數(shù)據(jù)分析。流弦電導(dǎo) (Chordconductance) (G)用以下方程計算G = I/(V-Vrev)其中I對應(yīng)脈沖結(jié)束測得的電流幅度，而Vrev對應(yīng)著計算出的反轉(zhuǎn)電位。G在不 同的測試電壓V下估算，然后標(biāo)準(zhǔn)化為最大電導(dǎo)值，Gmax。激活曲線用一個玻爾茲曼分布函 數(shù)擬合G/Gmax = 1/ {1+exp [ (V50-V) /s]}其中V5(l為電流的半數(shù)激活電壓，s為斜率因子。所有數(shù)據(jù)表示為平均值士標(biāo)準(zhǔn) 誤差。通過Student's t-檢驗進行統(tǒng)計學(xué)顯著性差異分析。對sEPSCs和sIPSCs的分析 采用Clampfit程序(pClamp 9. 2,Molecular Devices)，其中包括單個事件、事件平均幅度 和各事件的整合(總電荷轉(zhuǎn)移)的評估。通道調(diào)節(jié)活性測定結(jié)果與分析構(gòu)效關(guān)系(SAR)研究探討M-通道調(diào)節(jié)活性時，可從構(gòu)效關(guān)系(SAR)研究推斷出幾個重要的特征來。研 究結(jié)果已在下表2中概述且在圖1中描述。
表2給出了對根據(jù)本發(fā)明實施方案的示例性化合物所作的構(gòu)效關(guān)系的研究結(jié)果 匯總，其顯示了各化合物的多個結(jié)構(gòu)特征在M-通道調(diào)節(jié)活性中的作用。在這些研究中，所 述化合物對M-通道活性的影響通過CH0細(xì)胞中Kv7. 2和Kv7. 3亞基的異源共表達來測定。 EC5Q值(以PM計)代表開放劑效力的平均值，其由在半數(shù)激活電位AV5Q(mV)中的濃度依 賴性曲線左移來確定，并用S型函數(shù)(n = 3-5)擬合。表2 如表2可見，活性M-通道開放劑可包含羧酸(caroxylate)、酯和酰胺官能團。如 表2還可見，活性開放劑化合物帶有羧酸(見例如NH24、雙氯芬酸和甲氧芬那酸鹽)、酯基 (見例如NH6、NH7或NH25)和酰胺官能團(見例如NH14、NH29、NH30或NH15)。具有醚或 烴基鏈的衍生物也表現(xiàn)出開放劑活性(見例如NH14、NH7、NH6、NH27、NH28、NH29和NH30)。因為所述各種化合物的主要開放劑效應(yīng)是導(dǎo)致Kv7. 2/3通道的激活曲線向超極 化方向移動，因此曲線左移程度(AV5tl)被認(rèn)為的確是開放劑效力的來源量度。如表2還可 見，本構(gòu)效關(guān)系研究表明，用強吸電子基團例如硝基(NO2)取代芳香環(huán)顯著增加激活曲線左 移程度。在酯系列中，化合物ΝΗ7是比具有一個硝基的化合物NH25(AV5C1 = -31.0mV)弱得 多的開放劑(Δ V5tl = -4. ImV)。類似地，在酰胺系列中，具有三個硝基的化合物ΝΗ29是比 僅有一個硝基的化合物NH30(AV50 = -12. 2mV)強的開放劑(AV50 = -31. 3mV)。二苯胺部分自身似乎對激活M-通道很重要。已發(fā)現(xiàn)，缺乏此基團但具有羧酸酯官 能團的NSAID化合物例如布洛芬、氟比洛芬、酮洛芬、非諾洛芬或萘普生不能激活Kv7. 2/3 通道，而那些具有兩個官能團(二苯胺和羧酸酯)的化合物例如N-苯基鄰氨基苯甲酸藥物 (甲滅酸酯、托滅酸酯或氟滅酸酯)均為強效M-通道開放劑。本文所示結(jié)果還表明，醚或烴基鏈中的末端羥基對作為M-通道開放劑的所述化 合物的活性具有顯著影響。例如，NH8、NH13、NH10和NH11，其末端羥基官能團被甲基或異 丁基置換，對Kv7. 2/3通道完全無作用。引人注目的是，當(dāng)NH9、NH17和NH21的末端羥基分 別被異丁基、乙胺和2，3-環(huán)氧基丙基置換時得到了強效的M-通道阻滯劑。從上表2所示結(jié)果所得到的另一個見解是，變量Y中的正電基團或可質(zhì)子化基團 具有顯著作用。該位置為銨基則形成阻滯劑，其比同一位置具環(huán)氧化物的阻滯劑的效應(yīng)強 約10倍，且比具異丁基的阻滯劑強5倍。還進一步觀察到，當(dāng)式III標(biāo)注為A處的基團為亞甲基或不存在時，所得化合物無 活性，如NHlO和NHll中所見，這與活性阻滯劑NH9正好相反，這些化合物在Y變量處具有 相同的異丁基部分(見上表2)。M-通道阻滯劑抑制CHO細(xì)胞內(nèi)Kv 7. 2/7. 3電流和使DRG神經(jīng)元過度興奮圖2給出了從化合物NH17所得的結(jié)果。NH17已在對電壓依賴性鉀通道Kv7. 2/3 的抑制試驗中作了研究，結(jié)果表明NH17抑制電流并增強外周DRG神經(jīng)元的興奮性，見在從同一 CHO細(xì)胞在外部施加25 μ M NHl7之前(圖2Α左邊)和之后(圖2Α右邊)記錄到 的代表性波形，其中膜電位從_90mV鉗制電位躍至+10mV，脈沖以IOmV步幅遞增，脈沖持續(xù) 1. 5秒，然后復(fù)極化至_60mV。還在不存在(圖2B中標(biāo)識為空心框)和存在25 μ M NHl7時 (圖2Β中標(biāo)識為實心框)對ΝΗ17進一步進行了電流密度-電壓關(guān)系分析(η = 6)。
如圖2Α和圖2Β中可見，測試于CHO細(xì)胞內(nèi)異源表達的重組Κν7. 2/3通道時，NH17 強烈地和劑量依賴性地產(chǎn)生了對K+電流的阻滯(IC5tl = 11 μ M)。在25 μ M濃度下，ΝΗ17在 很寬的膜電位范圍內(nèi)(從-60至+50mV)抑制了超過90%的Kv7. 2/3電流。如上文討論，M-電流可代表治療疼痛的治療學(xué)靶點[4]。因此，在電流鉗模式下測 試了示例性化合物對培養(yǎng)的大鼠DRG神經(jīng)元的峰值活性的影響。圖2C和圖2D給出了對NH17進行的這些研究結(jié)果，其在代表性的大鼠DRG峰值放 電中測試，峰值放電通過在接觸1 μ M NHl7之前(對照)和接觸1、2和3分鐘時(圖2C)注 入方波去極化電脈沖(10pA，400msec)來誘發(fā)，其還在與1 μ M NHl7預(yù)先接觸5分鐘的DRG 神經(jīng)元的自發(fā)峰值放電的代表性波形(圖2D)中測試。如圖2C和圖2D所見，通過注入最小去極化電流脈沖(約ΙΟρΑ，400ms)誘發(fā)了單 一峰值放電模式。2分鐘內(nèi)，外部施加ΙμΜ ΝΗ17使DRG膜電位(Δν =+7 士 ImV)去極化 并有效地增加了誘發(fā)的峰值放電數(shù)目(約10-20pA，持續(xù)400ms，從1 士0到12士2 ；η = 5，ρ <0.01)(圖20。朋17(14 11)使峰值放電過度興奮特性反映在于其使產(chǎn)生單一峰值放電所 需的基電流降低約 300ρΑ (注入 2ms，從 650士71ρΑ 到 347士44ρΑ，η = 6 ;ρ < 0. 01)。M-通 道阻滯劑ΝΗ17導(dǎo)致的過度興奮放電模式如此強烈以至于在一些情況下可導(dǎo)致DRG神經(jīng)元 不需注入去極化電流就自發(fā)性興奮(圖2D)。這些結(jié)果表明ΝΗ17為強效的M-通道阻滯劑 并導(dǎo)致神經(jīng)元過度興奮。含硝基的N-苯基鄰氨基苯甲酸衍生物增強CHO細(xì)胞內(nèi)的Kv 7. 2/7. 3電流并使海 馬和DRG神經(jīng)元過度興奮圖3給出了從ΝΗ25獲得的結(jié)果，ΝΗ25為根據(jù)本發(fā)明實施方案的示例性酯衍生物， 其在含酯苯環(huán)的R9位置具有一個吸電子硝基并在式I標(biāo)記為Y的酯部分末端具有羥基。圖3Α左邊示出了用ΝΗ25測試時在CHO細(xì)胞中表達的Κν7. 2/3通道的代表性波形， 圖3A右邊表明外部施加NH25可在幾乎所有電壓下增強Kv7. 2/3電流。類似本文所述其他表現(xiàn)開放劑活性的化合物，NH25的作用也具有電壓依賴性。當(dāng) 測試電位越正(-IOmV以上)時，NH25對電流幅度的影響就越弱。如圖3B和圖2D可見，當(dāng) 膜電位每30秒從-90mV躍至-50mV時，施加10 μ M和50 μ M ΝΗ25分別引起電流幅度增加 3. 2倍和9. 1倍(η = 10)。經(jīng)歷一分鐘ΝΗ25超融(superfusion)處理的通道的調(diào)節(jié)劑行為 具有快速起動性質(zhì)，電流顯著增強。如圖3E和圖3F可見，電導(dǎo)/電壓關(guān)系分析清楚表明NH25 的激活效應(yīng)主要源于Kv7. 2/3激活曲線左移。例如，10 μ M、50 μ M和200 μ M ΝΗ25相對于對照分 別左移-llmV，-2ImV和_31mV，玻爾茲曼斜率不變(分別為V5(1 = -32. 1 士8. 9mV，η = 19 ；V5tl =-43. 6士9. OmV ，η = 5 ；V50 = -53. 5士9. 3mV, η = 5 禾口 V50 = -63. 1 士2. OmV, η = 5。)。圖4A-D給出了表征ΝΗ25開放劑活性具有濃度依賴性的其他測試結(jié)果，其通過左移 程度定量分析(Δ VJ，測得EC5tl值為22 μ Μ。如圖4Α和圖4Β可見，ΝΗ25 (50 μ Μ)還可通過 加快激活動力學(xué)而影響Κν7. 2/3的門控(從t1/2 = 296士63ms到t1/2 = 171 士29ms，η = 6 ;p < 0. 05)。如圖4C和圖4D中可見，-60mV處尾電流的比較揭示了 NH25顯著減慢Kv7. 2/3通道失活動力學(xué)(從 τ 失法(Tdeact)= 129±22mst 到Trdeact^=284土43ms; η = 5，p< 0. 01)。圖5給出了對示例性化合物NH25進行實驗的結(jié)果，其通過在大鼠原代培養(yǎng)的 海馬和DRG神經(jīng)元中應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)的電流鉗制模式就其NH25對中樞和外周神 經(jīng)的作用進行了表征。如圖5A和圖5D可見，注入去極化電流誘發(fā)了重復(fù)峰值放電。外 部施加25 μ MNH25均大幅且可逆地減少了在海馬和DRG神經(jīng)元中誘發(fā)的動作電位數(shù)目 (分另Ij 從 9. 6士 1. 0 到 2. 1 士0. 5，η = 8 和從 10. 4士0. 8 到 0. 8士0. 3，η = 8 ；75_200ρΑ， 400ms ；ρ < 0. 01)。如圖5B進一步可見，與25 μ ΜΝΗ25接觸使DRG神經(jīng)元靜息膜電位超極 化-8. 3士0. 2mV(從-60. 6士0. 3mV 至-69. 0士0. 3mV, η = 13 ;p < 0. 01)。海馬神經(jīng)元與 NH25接觸后也得到了類似的超極化(-8. 5mV)。如圖5C和圖5E可見，其反映了 NH25對峰 值放電產(chǎn)生的抑制作用，需注入DRG神經(jīng)元來產(chǎn)生單一峰值放電的基電流在與藥物接觸后 增高(2ms 注入，從 400士41pA 至 577士 38pA，n = 12 ;p < 0.01)。因其慢激活和無失活，M-通道可在重復(fù)峰值放電中調(diào)節(jié)神經(jīng)元活性和調(diào)節(jié)神經(jīng)遞 質(zhì)釋放。圖6示出了 NH25對突觸傳遞和遞質(zhì)釋放的影響。高密度培養(yǎng)的原代海馬神經(jīng)元 的自發(fā)性興奮性突觸后電流和自發(fā)性抑制性突觸后電流(sEPSCs和sIPSCs)采用全細(xì)胞 膜片鉗的電壓鉗制模式來記錄。sIpSCs在-70mV鉗制電位下記錄并通過阻斷NMDA受體與 AMPA受體介導(dǎo)的興奮性突觸后電流來進行藥理學(xué)分離(施加10 μ M ΑΡ-5*10μΜ NBQX)； sIpSCs排外地通過GABAa Cl_通道激活來介導(dǎo)，原因是其可通過30 μ M印防己毒素和10 μ M 荷包牡丹堿完全阻滯(數(shù)據(jù)未顯示)。因此，sIPSCs可反映突觸釋放的GABA。如圖6A-C可見，ΝΗ25 (25 μ Μ)主要通過降低自發(fā)放電頻率而強烈和可逆地抑制 sIPSCs (大于98%抑制)。ΝΗ25不會顯著影響sIPSC的幅度和動力學(xué)。自發(fā)性EPSCs在_70mV 下記錄，并通過阻滯GABAa受體介導(dǎo)的抑制性突觸后電流來進行藥理學(xué)分離(施加10 μ M荷 包牡丹堿和30 μ M印防己毒素)。sEPSCs僅為AMPA受體激活介導(dǎo)并在較弱程度上為NMDA 受體激活介導(dǎo)，原因是其通過10 μ MNBQX(ΑΜΡΑ受體拮抗劑)和10 μ M ΑΡ-5 (選擇性NMDA 受體拮抗劑)阻滯。因此，sEPSCs反映了谷氨酸鹽的突觸釋放。在對照條件下，sEPSCs表 現(xiàn)為重復(fù)放電，其頻率變化從0. 3到2Hz到并隨海馬培養(yǎng)物密度而增加。如圖6D-F可見， 施加NH25顯著縮短了 sEPSCs放電持續(xù)時間而不顯著影響其幅度。結(jié)果，如圖6D-F進一步 可見，NH25使總電荷轉(zhuǎn)移和放電期電荷轉(zhuǎn)移減少大約50%。令人感興趣的是，通過NH25激 活M-通道不會影響微EPSCs和IPSCs的幅度和動力學(xué)(數(shù)據(jù)未列出)。假定NH25有抑制神經(jīng)元峰值放電的作用，在小鼠最大電休克癲癇發(fā)作(MES)模型 中對NH25可能有的抗痙攣作用進行了測試。這種測試通常被認(rèn)為是人類全身性強直_陣 攣發(fā)作模型[6]。MES引起所有接受腹腔內(nèi)注射溶媒溶液的小鼠后肢伸展。如圖6G可見，電休克前30分鐘腹腔內(nèi)注射NH25可劑量依賴性地(l-40mg/kg)保護動 物免受MES引起的強直性痙攣，ED50為12mg/kg。相比之下，電休克前30分鐘腹腔內(nèi)注射苯妥 英和2-丙基戊酸鈉可完全防止后肢痙攣，劑量分別為20mg/kg和500mg/kg (數(shù)據(jù)未顯示)。圖7示出了從化合物NH29獲得的結(jié)果，NH29為根據(jù)本發(fā)明實施方案的示例性酰 胺衍生物，其在R4、R7和R9位置具有三個吸電子硝基且在式I標(biāo)為Y處的酰胺部分的末端 具有一個羥基。示例性酰胺NH29對CHO細(xì)胞表達的重組Kv7. 2/3通道的通道調(diào)節(jié)活性和 其對原代培養(yǎng)的神經(jīng)元的作用特性已作了測試。NH29超融合(superfusion)在所有電壓下都增強Kv7. 2/3電流。如圖7A可見，像NH25 一樣，NH29的激活效應(yīng)在膜電位躍至更具正電性電位時變?nèi)?。在_50mV(—種生理學(xué) 相關(guān)閾下電位)下，25 μ ΜΝΗ29使Κν7. 2/3電流幅度增加9. 4士 1. 2倍(η = 5)。ΝΗ29的激 活效應(yīng)主要源自Κν7. 2/3激活曲線的左移。例如，如圖7B和圖7C中可見，10 μ M和100 μ M ΝΗ29與對照相比分別產(chǎn)生_13mV和-31mV左移。圖7C中可見，NH29劑量依賴性地激活 Kv7. 2/3通道，此特性通過濃度依賴性左移(Δ V50)來量化，所得EC5tl為14 μ Μ。圖7D和圖7F中可見，25μΜ ΝΗ29超融合大幅和可逆地減少了 DRG神經(jīng)元 中誘發(fā)的動作電位數(shù)目(從8. 7 士 0. 8至0. 9 士 0. 1，η = 12 ；75_250ρΑ，持續(xù)400ms ； P < 0. 001)。圖7G中可見，與25 μ M ΝΗ29接觸使DRG神經(jīng)元靜息膜電位超極 化-9. 0士 1. 9mV(從-56. 0士2. 2mV至-65. 0士3. 4mV,n = 7 ；ρ < 0. 01)。圖 7Ε 中可見，與ΝΗ29 接觸后須注入DRG神經(jīng)元以產(chǎn)生單一峰值放電的基電流增高了(2ms注射，從178 士 36pA至 300 士 55ρΑ，η = 8 ;p < 0. 005)。還就NH29對其他表達于蟾蜍卵母細(xì)胞中的相關(guān)Kv通道的選擇性進行了研究，且 結(jié)果在下表3中總結(jié)。25 μ M和50 μ M ΝΗ29對各種Kv通道的特異性已在蟾蜍卵母細(xì)胞中 進行了測試，Kvl. 2除外，其在轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞中測試。各種Kv通道的電流幅度在指定電 壓下測試，且藥物的效應(yīng)表示為相同條件未加藥物的對照幅度的倍數(shù)。表3中數(shù)據(jù)表示5-7 次獨立實驗的平均值士標(biāo)準(zhǔn)誤差。表3 * 顯著性 ρ <0.01從表3可見，除了對Kvl. 2和Kv7. 1電流有中度抑制作用外(分別為34%和 23% ),50μΜ ΝΗ29 對 Kvll. 1 (Herg)、Kv2. 1 和 Kv4. 3 沒有影響。在 Kv7 通道家族中，NH29 似乎表現(xiàn)為Kv7. 2的開放劑但不是Kv7. 1和Kv7. 4的開放劑。在Kv7. 3突變型A315T中測試 時，NH29也可激活Kv7.3。值得注意的是，NH29 (25 μ Μ)不影響培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元的微興奮 性突觸后電流和微抑制性突觸后電流(mEPSCs和mIPSCs)幅度，這意味著NH29不與AMPA/ NMDA和GABAa通道發(fā)生作用(數(shù)據(jù)未顯示)。NH29對M-通道而不是對其他Kv通道具有明 顯的選擇性開放劑活性，所述其他Kv通道包括心肌Kvll. I(Herg)與Iks和其他神經(jīng)元K+電 流，因此NH29大有前途，且考慮到NH29對Kv7. 2/3通道具有選擇性而不激活Kv7. 4時更是 前景廣闊，與眾所周知的通道開放劑瑞替加濱相比，這是NH29的一個獨特的特性[8]。
應(yīng)用含硝基的N-苯基鄰氨基苯甲酸酰胺衍生物對CHO內(nèi)TRPVl電流進行調(diào)節(jié)示例性化合物NH29調(diào)節(jié)瞬時受體電位香草酸亞型1 (TRPVl)活性的能力也進行了 測試。TRPVl為非選擇性配體門控陽離子通道，其可被多種外源性和內(nèi)源性刺激激活，所述 刺激包括熱(高于43°C )，pH(低于6)，以及與花生四烯酸乙醇胺、N-花生四烯?；?多巴 胺或辣椒素的化學(xué)作用。TRPVl為膜蛋白的瞬時受體電位家族的成員，且發(fā)現(xiàn)其存在于中樞 神經(jīng)系統(tǒng)和外周神經(jīng)系統(tǒng)。TRPVl通道特別是參與痛覺傳輸和調(diào)節(jié)以及各種疼痛刺激的整 通過與毒蜘蛛毒素(VaTxl)相互類比，所述毒蜘蛛毒素的靶點似乎是電壓感受域 (VSD)，且其為Kv2. 1鉀通道的阻滯劑和TRPVl通道的開放劑，假定Kv7. 2開放劑諸如示例 性開放劑化合物NH29會通過阻滯它們的活性而調(diào)節(jié)TRPVl通道活性。因此，測試了 NH29對TRPVl通道的結(jié)合。用TRPVl通道轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，且用0. 5μ M 辣椒素(CAP)激活通道，隨后外部施加5-50M濃度范圍內(nèi)的NH29。結(jié)果示于圖13A，且表明 NH29強烈地抑制了 TRPVl通道。類似抑制也在DRG感覺神經(jīng)元中觀察到(見圖14)。通道 抑制是可逆的，這可從洗去NH29化合物后恢復(fù)的通道活性推斷出來(圖13B)。算出的NH29 抑制 TRPVl 的 IC50 為 4. 2M。NH29對TRPVl活性的抑制特異性已通過比較TRPVl和TRPV6 (后者為膜蛋白的瞬 時受體電位家族的另一成員)得到的數(shù)據(jù)進行了測試。如圖13A和13B可見，發(fā)現(xiàn)NH29特異性抑制TRPV1，因為沒有觀察到對TRPV6的類 似抑制(圖15A-C)。TRPV6為膜鈣通道，其在腸道內(nèi)鈣吸收的第一步中起作用。因此，NH29 缺乏對TRPV6的調(diào)節(jié)確保了用NH29治療的患者腸道中通過這個通道的正常鈣吸收總之，所得數(shù)據(jù)表明本文所述化合物表現(xiàn)了對TRPVl通道的抑制(阻滯)。TRPVl 參與疼痛信號轉(zhuǎn)導(dǎo)已為人們熟知，因此抑制這些通道隨后導(dǎo)致疼痛減輕。 細(xì)胞培養(yǎng)中NH25、NH29和NH30的抗-COX活性在小鼠結(jié)腸癌CT26和小鼠路易士肺癌D122細(xì)胞系中檢驗NH25、NH29和NH30的 抗-COX活性。細(xì)胞與被測試的化合物中的各者溫育，且COX依賴性PGE2合成水平通過輻 射免疫分析技術(shù)定量分析。結(jié)果示于表4，表明酰胺衍生物NH29和NH30不抑制抗-COX活 性，而酯衍生物NH25表現(xiàn)出相當(dāng)于雙氯芬酸的抗-COX活性。表 4 圖示(MAPPING)通道藥效團試圖推斷出通道藥效團的更多復(fù)雜細(xì)節(jié)，本發(fā)明人已測試了更強效的通道開放劑 中的一個(化合物NH29)對各種KCNQ亞基和突變型的活性。圖8示出了 25μΜ化合物NH29對各種KCNQ亞基和突變型增強效應(yīng)的對比條形圖， 其中所述開放劑效應(yīng)表示為不存在開放劑的對照電流的百分比。如圖8中可見，示例性開放劑化合物ΝΗ29特異性地作 用于KCNQ2亞基且不作用于 同聚(homomeric)KCNQl和KCNQ4通道，且未測到對同聚KCNQ3通道的開放活性。然而，未 檢測到效果可能是因為流經(jīng)同源多聚體KCNQ3的電流非常小。然而，本文所述通道激活化 合物對異聚KCNQ2/KCNQ3通道的開放活性非常明顯。在構(gòu)成電壓感受域(VSD)的四個跨膜區(qū)段中，電壓門控離子通道內(nèi)帶電S4螺旋在 序列中相對地比其他區(qū)段S1-S3和它們的連接接頭更保守，所述連接接頭具有相當(dāng)大的多 樣性。預(yù)計小配體與VSD的相互作用通過?？勘砻婧汀稗D(zhuǎn)運位點”產(chǎn)生。假定?？课稽c應(yīng)當(dāng)包含相對保守的帶電S4螺旋，而“轉(zhuǎn)運位點”應(yīng)當(dāng)包含VSD的 更具多樣性的區(qū)域諸如外側(cè)的S1-S2接頭和S3-S4接頭，轉(zhuǎn)運位點賦予VSD-配體界面特異 性并為通道構(gòu)象變化所必需。圖9給出了計算機生成的KCNQ2通道中兩個相鄰電壓感受域 (VSD)的結(jié)構(gòu)模型(S-編號的螺旋染成金色和紫色)，所述兩個相鄰電壓感受域在通道激活 時相互作用，還示出了 S4螺旋中的殘基R207 (橙紅色)，其在突變時使通道對開放劑NH29 大為不敏感。NH29是根據(jù)本發(fā)明實施方案的示例性化合物(見圖10)，其可?？坑赩SD中 的Si、S2和S4螺旋之間界面形成的溝內(nèi)。圖10A-D給出了 NH29對野生型KCNQ2 (圖IOA和10B)和R207W突變型(圖IOC 和10D)通道的作用，如測定的激活曲線所示，表明了 NH29左移野生型KCNQ2激活曲線以及 增強野生型KCNQ2電流幅度的程度相比于突變型明顯更大，因此暗示了 R207位于NH29結(jié) 合位點。本文所述Kv7. 2通道調(diào)節(jié)劑為門控調(diào)節(jié)劑，其可在S4螺旋和S1-S2螺旋之間界面 形成的溝處與電壓感受域的外部可及表面相互作用，因此使VSD穩(wěn)定于激活的構(gòu)象。因此， 像蝎毒素作用于電壓門控Na+通道或毒蜘蛛毒素作用于電壓門控K+通道一樣，這些配體可 通過使VSD截于內(nèi)向靜息構(gòu)象(阻滯劑)或外向激活構(gòu)象(開放劑)而發(fā)揮作用。最近研究(Schenzer等.2005 ；Wuttke等.2005)表明瑞替加濱結(jié)合至通道開放時 在S5和S6胞質(zhì)部分之間形成的疏水袋(見圖9)。目前結(jié)果表明本文所述的各種開放劑不 與所述瑞替加濱的結(jié)合位點相互作用。圖IlA-E示出了代表性波形，其顯示了瑞替加濱(RTG)和NH29對KCNQ2突變型 W236L和R207W的通道活性的作用。如圖11可見，S4內(nèi)的點突變R207W完全消除了 25 μ MNH29的開放劑效應(yīng)(圖11Α) 但不消除25μΜ瑞替加濱的效應(yīng)(RTG，圖11Β)。相反，S5內(nèi)的點突變W236L完全消除了 10 μ M瑞替加濱(RTG)的開放劑效應(yīng)但不消除10 μ M或25 μ M ΝΗ29的開放劑效應(yīng)(分別見 圖IlD和11Ε)。所述結(jié)果在圖IlF中匯總，且表明了 ΝΗ29的結(jié)合位點與瑞替加濱不同。因此，本文給出的結(jié)果表明，本文所述開放劑化合物的結(jié)合位點圖示了位于S1-S2 和S4 α螺旋界面的殘基處的KCNQ2亞基的電壓感受域(VSD)(見圖9)。當(dāng)進一步探索所述化合物在VSD上的結(jié)合域時，突變研究的另外結(jié)果(見圖12A-F)表明是位于S4螺旋(圖12D-12F)而非位于S1-S2螺旋(圖12A-C)的氨基酸突 變導(dǎo)致NH29失去活性。值得注意的是，已發(fā)現(xiàn)，與野生型Kv7. 2通道相比，S4突變型殘基L197G、R198A、 R201A、R207W、I209L和R214W(程度較低)明顯對開放劑NH29的激活作用更不敏感。25M NH29增強野生型Kv7. 2電流3. 5倍，而其增強L197G、R198A、R201A、R207W電流僅分別為 1. 5、1. 6、1. 2和1. 5倍(ρ < 0. 01 ；圖12D和)。從轉(zhuǎn)染了僅有的三個S4突變之一的CHO細(xì) 胞記錄的波形實例示于圖12E，其中所述S4突變中NH29保持著活性(L206C)，而從轉(zhuǎn)染了 S4突變的CHO細(xì)胞記錄的波形實例示于圖12F，其中所述突變消 除了 NH29活性(R201A)相比之下，所有這些S4突變型對作用于通道門控的瑞替加濱(RTG)的開放劑作 用仍然非常敏感。例如，RTG增加突變體R207W電流幅度超過6倍(圖11B)并增加突變型 R198A電流幅度4. 4倍。此外，最近表征的Kv7開放劑巰氧吡啶鋅也顯示能非常強烈地激活 S4突變型R207W。為作比較，圖12A給出了表示NH29對KCNQ2S 1_S2突變型的激活作用的條形圖。 在幾乎所有的S1-S2突變型中都保持著NH29活性。令人感興趣的是，唯一降低了觀察到的 NH29活性的S1-S2突變型是S121A。與野生型Kv7. 2通道相比，S121A明顯更少被NH29激 活(2倍)(ρ < 0. 01 ；圖12A和12C)，而其被RTG強烈激活(增加超過5倍)。還示出了從 轉(zhuǎn)染了 S 1-S2突變的CHO細(xì)胞記錄到的波形實例，其中NH29活性被保持(圖12B)和從轉(zhuǎn) 染了 S1-S2S121A突變型的CHO細(xì)胞記錄到的波形，在這個例子中NH29活性顯著降低。圖lla-d給出了 NH29(根據(jù)本發(fā)明實施方案的示例性通道開放劑化合物)對野 生型KCNQ2(圖Ila和lib)和R207W突變型(圖Ilc和lid)通道的增強效應(yīng)，如激活曲 線測量所示，其顯示NH29使野生型和突變型情況下的激活曲線分別左移(AV5tl)-15. 5mV 和-5. 5mV，還顯示NH29使野生型和突變型電流分別增強約3. 4倍(_40mV下)和1. 5倍 (-20mV 下)。如圖11可見，盡管25μΜ ΝΗ29激活野生型3. 4倍時，但是其分別增強突變體 R207W和Y118S電流1. 5倍和2. 1倍(也見圖8)。據(jù)假定，靜電力和氫鍵網(wǎng)絡(luò)在配體停靠于VSD中扮演了關(guān)鍵角色，所述停靠通過 連接到分子的苯環(huán)的親核體/氫鍵受體(見圖1)(例如示例性化合物ΝΗ29的硝基官能團) 與來自S4螺旋精氨酸殘基的鈪基/氫鍵供體之間的相互作用而進行。此外，分子的末端鏈官能團(圖1)可與位于S1-S2或S3-S4接頭的“轉(zhuǎn)運位點”相 互作用，因此提供了所述藥物作用的特異性。此外，末端鏈羥基官能團可參與和S1-S2接頭 中絲氨酸殘基S121間的氫鍵(見圖1)。應(yīng)用從誘變研究推斷出的實驗約束，進行了根據(jù)本發(fā)明實施方案的開放劑ΝΗ29 ?？康狡洇?. 2通道位點的實驗。結(jié)果表明，像蝎毒素作用于電壓門控Na+通道或毒蜘蛛毒素作用于電壓門控K+通 道一樣，本發(fā)明的Kv7. 2通道調(diào)節(jié)劑起到了門控調(diào)節(jié)劑的作用，其可在S4螺旋和S1-S2螺 旋之間的界面形成的溝處與電壓感受域的外部可及表面相互作用。因此，這些門控調(diào)節(jié)劑 可將電壓感受域截于其內(nèi)向靜息構(gòu)象(阻滯劑)或外向激活構(gòu)象(開放劑)。盡管本發(fā)明已結(jié)合其具體實施方案作了描述，但顯然，很多備選、改進和變體對于 本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，本文意在包含所有落入隨附權(quán)利要求的精神和范圍內(nèi)的備選、改進和變體。本申請文件中提及的所有出版物、專利和專利申請通過整體引用結(jié)合至本申請文件，其引用程度與各單獨的出版物、專利和專利申請具體地和單獨地通過引用結(jié)合到本文 相同。此外，該申請中任何參考文獻的引用或確定不應(yīng)視為承認(rèn)這些參考文獻可作為本發(fā) 明的現(xiàn)有技術(shù)獲得。關(guān)于各章節(jié)所用標(biāo)題的程度，不應(yīng)當(dāng)將其視為必然的限制。參考文獻(其他參考文獻引用于正文中)1. 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權(quán)利要求
一種具有通式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽式I其中Z為A-G(＝K)-X-Y基團，A為烴基或不存在；G選自C、S和PRa；K選自O(shè)和S；X選自O(shè)、S和NRb或不存在；和Y選自氫、烴基、羥烴基、環(huán)烴基、芳基和聚亞烴基二醇部分，R1選自氫、烴基、環(huán)烴基或芳基；R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10中的各者獨立地選自氫、烴基、羥烴基、三鹵代烴基、環(huán)烴基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、雜脂環(huán)基、鹵素、羥基、烴氧基、芳氧基、巰基、烴硫基、芳硫基、亞磺酰基、磺酰基、氰基、硝基、氨基和-NR15R16，或者，R2、R3、R4、R5和R6中的至少兩者，和/或R7、R8、R9和R10中的至少兩者形成五元或六元芳環(huán)、雜芳環(huán)、脂環(huán)或雜脂環(huán)；和Ra和Rb中的各者獨立地選自氫、烴基、環(huán)烴基和芳基，條件是R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10中的至少一者為吸電子基團。FPA00001140927000011.tif
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10中的至少兩者為所述吸 電子基團。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中R7、R8、R9和R"1中的至少一者為所述吸電子基團。
4.權(quán)利要求2的化合物，其中R7、R8、R9和儼中的至少一者為吸電子基團且R2、R3、R4、 R5和R6中的至少一者為吸電子基團。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中R9為所述吸電子基團。
6.權(quán)利要求1的化合物，其中R9和R7中的至少一者為所述吸電子基團。
7.權(quán)利要求1的化合物，其中R9、R7和R4中的至少一者為所述吸電子基團。
8.權(quán)利要求1-7中任一項的化合物，其中所述吸電子基團為硝基。
9.權(quán)利要求2的化合物，其中Y選自羥烴基和聚亞烴基二醇部分。
10.權(quán)利要求9的化合物，其中所述聚亞烴基二醇部分具有通式II [(CH2)m-0]n-R17式II 其中m和n中的各者獨立地為1-10的整數(shù)；和 R17為氫、烴基、環(huán)烴基或芳基。
11.權(quán)利要求2的化合物，其中G為C; K為0;R2、R3、R4、R5和R6中的各者獨立地選自氫、烴基、鹵素和三鹵代烴基；且 R7、R8、R9和R1Q中的各者為氫。
12.權(quán)利要求1的化合物，其選自NH24、NH25、NH28、NH29、NH30和NH31。
13.一種制備權(quán)利要求1-12中任一項的化合物的方法，所述方法包括使具有通式I*的化合物與能以吸電子基團取代R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和儼中的 一者或多者的試劑反應(yīng)，以由此獲得具有通式I的化合物，式I* 其中 Z 為 A-G( = K)-X-Y 基團； A為烴基或不存在； G選自C、S禾口 PRa ； K選自 禾口 S ； X選自NRb、S或不存在；和Y選自氫、烴基、羥烴基、環(huán)烴基、芳基和聚亞烴基二醇部分， R1選自氫、烴基、環(huán)烴基或芳基；R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R1Q中的各者獨立地選自氫、烴基、羥烴基、三鹵代烴基、環(huán)烴 基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、雜脂環(huán)基、商素、羥基、烴氧基、芳氧基、巰基、烴硫基、芳硫基、 亞磺?；?、磺酰基、氰基、硝基、氨基和-NR15R16，或者，R2、R3、R4、R5和/或R6中的至少兩者， R7、R8、R9和中的至少兩者形成五元或六元芳環(huán)、雜芳環(huán)、脂環(huán)或雜脂環(huán)；和 Ra和Rb中的各者獨立地選自氫、烴基、環(huán)烴基和芳基。
14.一種開放電壓依賴性鉀通道和/或抑制皮層和/或外周神經(jīng)元活性的方法，所述方 法包括給予有需要的受試者治療有效量的權(quán)利要求1-12中的任一項的化合物，從而開放 電壓依賴性鉀通道。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所述化合物形成藥物組合物的一部分，所述藥物組合物 還包括藥學(xué)上可接受的載體。
16.權(quán)利要求1-12中任一項的化合物在制備用于治療開放電壓依賴性鉀通道和/或抑 制皮層和/或外周神經(jīng)元活性對其有益的病癥的藥物中的用途。
17.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含作為活性成分的權(quán)利要求1-12中任一項的 化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
18.權(quán)利要求17的組合物，其包裝在包裝材料中并在所述包裝材料之中或之上加以印 刷標(biāo)識，用于開放電壓依賴性鉀通道和/或抑制皮層和/或外周神經(jīng)元活性。
19.權(quán)利要求14、16和18中任一項的方法、用途或組合物，其中所述電壓依賴性鉀通道 包括KCNQ2通道和/或KCNQ3通道和/或KCNQ2/3通道。
20.權(quán)利要求14-18中任一項的方法、用途或組合物，其中所述化合物能夠阻滯TRPV1通道。
21.權(quán)利要求20的方法、用途或組合物，其中所述化合物不調(diào)節(jié)TRPV6通道的活性。
22.權(quán)利要求14、16和18中任一項的方法、用途或組合物，其中所述開放所述電壓依賴 性鉀通道是為了治療選自以下的病癥或疾病癲癇、缺血性發(fā)作、偏頭痛、共濟失調(diào)、肌纖維 顫搐、神經(jīng)源性疼痛、神經(jīng)病性疼痛、帕金森氏病、雙相障礙、三叉神經(jīng)痛、痙攣狀態(tài)、情感障 礙、精神障礙、精神分裂癥、腦瘤、聽力缺失和視力缺失、焦慮和運動神經(jīng)元疾病。
23.權(quán)利要求14、16和18中任一項的方法、用途或組合物，其中所述抑制所述皮層和/ 或外周神經(jīng)元活性是為了治療選自以下的病癥或疾病癲癇、缺血性發(fā)作、偏頭痛、共濟失 調(diào)、肌纖維顫搐、神經(jīng)源性疼痛、神經(jīng)病性疼痛、帕金森氏病、雙相障礙、三叉神經(jīng)痛、痙攣狀 態(tài)、情感障礙、精神障礙、精神分裂癥、腦瘤、聽力缺失和視力缺失、焦慮和運動神經(jīng)元疾病。
24.一種阻滯電壓依賴性鉀通道和/或增強皮層和/或外周神經(jīng)元活性的方法，所述方 法包括給予有需要的受試者治療有效量的具有通式III的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 式III 其中Z 為 A-G( = K)-X-Y 基團， A為烴基或不存在； G選自C、S禾口 PRa ； K選自 禾口 S ； X選自NRb、S或不存在；且Y選自烴基、芳基、環(huán)烴基、雜脂環(huán)基和帶正電荷的基團，條件是Y不含羥基； R1選自氫、烴基、環(huán)烴基或芳基；R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R1Q中的各者獨立地選自氫、烴基、羥烴基、三鹵代烴基、環(huán)烴 基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、雜脂環(huán)基、商素、羥基、烴氧基、芳氧基、巰基、烴硫基、芳硫基、 亞磺?；?、磺?；?、氰基、硝基、氨基和-NR15R16，或者，R2、R3、R4、R5和/或R6中的至少兩者， R7、R8、R9和中的至少兩者形成五元或六元芳環(huán)、雜芳環(huán)、脂環(huán)或雜脂環(huán)；和 Ra和Rb中的各者獨立地選自氫、烴基、環(huán)烴基和芳基。
25. 一種藥物組合物，所述藥物組合物包含作為活性成分的具有通式III的化合物或 其藥學(xué)上可接受的鹽 式III 其中Z 為 A-G( = K)-X-Y 基團， A為烴基或不存在； G選自C、S禾口 PRa ； K選自 禾口 S ； X選自NRb、S或不存在；和Y選自烴基、芳基、環(huán)烴基、雜脂環(huán)基和帶正電荷的基團，條件是Y不含羥基； R1選自氫、烴基、環(huán)烴基或芳基；R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R1Q中的各者獨立地選自氫、烴基、羥烴基、三鹵代烴基、環(huán)烴 基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、雜脂環(huán)基、商素、羥基、烴氧基、芳氧基、巰基、烴硫基、芳硫基、 亞磺?；?、磺?；?、氰基、硝基、氨基和-NR15R16，或者，R2、R3、R4、R5和/或R6中的至少兩者， R7、R8、R9和中的至少兩者形成五元或六元芳環(huán)、雜芳環(huán)、脂環(huán)或雜脂環(huán)；和 Ra和Rb中的各者獨立地選自氫、烴基、環(huán)烴基和芳基，所述組合物被包裝在包裝材料中并在所述包裝材料之中或之上加以印刷標(biāo)識，用于阻 滯電壓依賴性鉀通道。
26.權(quán)利要求1-12中任一項的化合物在制備用于治療阻滯電壓依賴性鉀通道對其有 益的病癥的藥物中的用途。
27.權(quán)利要求24、25和26中任一項的方法、用途或組合物，其中Y選自烴基、雜脂環(huán)基 和帶正電荷的基團。
28.權(quán)利要求27的方法、用途或組合物，其中所述烴基為異丁基。
29.權(quán)利要求27的方法、用途或組合物，其中所述雜脂環(huán)基為2，3-環(huán)氧基丙基。
30.權(quán)利要求27的方法、用途或組合物，其中所述帶正電荷的基團為銨基。
31.權(quán)利要求24-30中任一項的方法、用途或組合物，其中所述電壓依賴性鉀通道包括 KCNQ2通道和/或KCNQ3通道和/或KCNQ2/3通道。
32.權(quán)利要求24-30中任一項的方法、用途或組合物，其中所述阻滯所述電壓依賴性鉀 通道是為了治療認(rèn)知病癥或疾病。
33.權(quán)利要求32的方法、用途或組合物，其中所述認(rèn)知病癥或疾病選自阿爾茨海默氏 病、老年記憶缺失、記憶缺失、腦損傷相關(guān)記憶缺失或中風(fēng)后遺癥和學(xué)習(xí)障礙。
34.一種阻滯電壓依賴性鉀通道的方法，所述方法包括給予有需要的受試者治療有效 量的化合物，所述化合物能夠與所述鉀通道的電壓敏感域內(nèi)的疏水結(jié)合袋相互作用，而不 與所述電壓敏感域內(nèi)的至少一個親電結(jié)合位點相互作用。
35.權(quán)利要求34的方法，其中所述化合物能夠在所述電壓敏感域中S4螺旋和S1-S2螺旋之間的界面形成的溝處與所述電壓敏感域的外部可及表面相互作用，并進一步能將所述 電壓敏感域截于其內(nèi)向靜息構(gòu)象。
36.一種開放電壓依賴性鉀通道的方法，所述方法包括給予有需要的受試者治療有效 量的化合物，所述化合物能夠與所述鉀通道電壓敏感域內(nèi)的疏水結(jié)合袋并與至少兩個親電 結(jié)合位點相互作用。
37.權(quán)利要求36的方法，其中所述化合物能夠在所述電壓敏感域中S4螺旋和S1-S2螺 旋之間的界面形成的溝處與所述電壓敏感域的外部可及表面相互作用，并進一步能將所述 電壓敏感域截于其外向活化構(gòu)象。
38.一種阻滯有需要的受試者瞬時受體電位香草酸受體I(TRPVl)的方法，所述方法包 含給予受試者治療有效量的具有通式IV的化合物 式IV 其中Z 為 A-G( = κ)-χ-γ 基團， 且其中A為烴基或不存在； G選自C、S和 PRa ； K選自 和S ；X選自NRb、O、S或不存在；和Y選自氫、烴基、羥烴基、環(huán)烴基、雜脂環(huán)基、芳基和聚亞烴基二醇?xì)埢?R1選自氫、烴基、環(huán)烴基或芳基；R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和Rltl中的各者獨立地選自氫、烴基、羥烴基、三鹵代烴基、環(huán)烴 基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、雜脂環(huán)基、商素、羥基、烴氧基、芳氧基、巰基、烴硫基、芳硫基、 亞磺?；?、磺?；?、氰基、硝基、吸電子基團、氨基和-NR15R16,或者，R2、R3、R4、R5和R6中的至 少兩者，R7> R8> R9和Rw中的至少兩者形成五元或六元芳環(huán)、雜芳環(huán)、脂環(huán)或雜脂環(huán)；R15和R16各自獨立地選自氫、烴基、環(huán)烴基、芳基、羰基和磺酰基，或者R15和R16形成五 元或六元雜脂環(huán)；和所述Ra和Rb中的各者選自氫、烴基、環(huán)烴基和芳基。
39.具有通式IV的化合物在制備用于阻滯有需要的受試者瞬時受體電位香草酸受體 1 (TRPVl)的藥物中的用途， 式IV 其中Z 為 A-G( = K)-X-Y 基團， 且其中A為烴基或不存在； G選自C、S禾口 PRa ； K選自 禾口 S ；X選自NRb、0、S或不存在；和Y選自氫、烴基、羥烴基、環(huán)烴基、芳基和聚亞烴基二醇?xì)埢?R1選自氫、烴基、環(huán)烴基或芳基；R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R1Q中的各者獨立地選自氫、烴基、羥烴基、三鹵代烴基、環(huán)烴 基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、雜脂環(huán)基、商素、羥基、烴氧基、芳氧基、巰基、烴硫基、芳硫基、 亞磺?；?、磺?；?、氰基、硝基、吸電子基團、氨基和-NR15R16，或者，R2、R3、R4、R5和R6中的至 少兩者，R7、R8、R9和中的至少兩者形成五元或六元芳環(huán)、雜芳環(huán)、脂環(huán)或雜脂環(huán)；R15和R16各自獨立地選自氫、烴基、環(huán)烴基、芳基、羰基和磺?；?，或者R15和R16形成五 元或六元雜脂環(huán)；和所述Ra和Rb中的各者選自氫、烴基、環(huán)烴基和芳基。
40. 一種藥物組合物，所述藥物組合物包含具有通式IV的化合物和藥學(xué)上可接受的載體， 式IV 其中Z 為 A-G( = K)-X-Y 基團， 且其中A為烴基或不存在； G選自C、S禾口 PRa ； K選自 禾口 S ；X選自NRb、0、S或不存在；且Y選自氫、烴基、羥烴基、環(huán)烴基、芳基和聚亞烴基二醇?xì)埢?，R1選自氫、烴基、環(huán)烴基或芳基；R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和Rltl中的各者獨立地選自氫、烴基、羥烴基、三鹵代烴基、環(huán)烴 基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、雜脂環(huán)基、商素、羥基、烴氧基、芳氧基、巰基、烴硫基、芳硫基、 亞磺?；?、磺?；?、氰基、硝基、吸電子基團、氨基和-NR15R16,或者，R2、R3、R4、R5和R6中的至 少兩者，R7> R8> R9和Rw中的至少兩者形成五元或六元芳環(huán)、雜芳環(huán)、脂環(huán)或雜脂環(huán)；R15和R16各自獨立地選自氫、烴基、環(huán)烴基、芳基、羰基和磺酰基，或者R15和R16形成五 元或六元雜脂環(huán)；和所述Ra和Rb中的各者選自氫、烴基、環(huán)烴基和芳基，所述組合物被包裝并在所述包裝材料之中或之上加以印刷標(biāo)識，用于阻滯瞬時受體電 位香草酸受體1 (TRPVl)。
41.權(quán)利要求38-40中任一項的方法、用途或組合物，其中Y選自羥烴基和聚亞烴基二 醇部分。
42.權(quán)利要求41的方法、用途或組合物，其中所述聚亞烴基二醇部分具有通式II [(CH2) m-0]n-R17式II 其中m和η中的各者獨立地為1-10的整數(shù)；和R17為氫、烴基、環(huán)烴基或芳基。
43.權(quán)利要求38-42中任一項的方法、用途或組合物，其中 G為C;K為0;R2> R3> R4> R5和R6中的各者獨立地選自氫、烴基、鹵素和三鹵代烴基；和 R7、R8、R9和Rltl中的各者為氫。
44.權(quán)利要求38-43中任一項的方法、用途或組合物，其中所述妒、1 3、1 4、1 5、1 6、1 7、1 8、 R9和Rw中的至少一者為吸電子基團。
45.權(quán)利要求44的方法、用途或組合物，其中R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和Rki中的至少 兩者為所述吸電子基團。
46.權(quán)利要求44的方法、用途或組合物，其中R7、R8、R9和Rki中的至少一者為所述吸電 子基團。
47.權(quán)利要求45的方法、用途或組合物，其中R7、R8、R9和Rltl中的至少一者為吸電子基 團且R2、R3、R4、R5和R6中的至少一者為吸電子基團。
48.權(quán)利要求44的方法、用途或組合物，其中R9為所述吸電子基團。
49.權(quán)利要求44的方法、用途或組合物，其中R9和R7中的至少一者為所述吸電子基團。
50.權(quán)利要求44的方法、用途或組合物，其中R9、R7和R4中的至少一者為所述吸電子基團。
51.權(quán)利要求44-50中任一項的方法、用途或組合物，其中所述吸電子基團為硝基。
52.權(quán)利要求38-51中任一項的方法、用途或組合物，其中所述化合物為NH29。
53.權(quán)利要求38-52中任一項的方法、用途或組合物，其中所述化合物不調(diào)節(jié)TRPV6。
54.權(quán)利要求38-53中任一項的方法、用途或組合物，其中阻滯所述TRPVl是為了治療選自以下的TRPVl相關(guān)病癥癲癇；疼痛相關(guān)病癥例如神經(jīng)源性疼痛、神經(jīng)病性疼痛、異常 性疼痛、炎癥相關(guān)疼痛；雙相障礙；情感障礙；精神障礙；精神分裂癥；焦慮和運動 神經(jīng)元疾 ??；膀胱過度活動癥和小便失禁。
全文摘要
本發(fā)明提供了可用作電壓依賴性鉀通道開放劑或阻滯劑的化合物，所述化合物通過調(diào)節(jié)通過電壓依賴性鉀通道的鉀離子流和/或抑制或增強皮層和/或外周神經(jīng)元活性用來治療病癥，所述病癥例如中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)障礙，并公開了包含所述化合物的組合物成分和使用該化合物的方法。本發(fā)明還公開了電壓依賴性鉀通道的調(diào)節(jié)劑，所述調(diào)節(jié)劑表現(xiàn)出TRPV1通道的阻滯作用，因此可用于治療TRPV1相關(guān)病癥。
文檔編號A61P25/28GK101868443SQ200880117585
公開日2010年10月20日 申請日期2008年9月18日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月20日
發(fā)明者A·佩雷茨, B·阿塔利 申請人:特拉維夫大學(xué)拉莫特有限公司