專利名稱：：吡咯并六元n雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物的制備方法及其在醫(yī)藥上的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一類新的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物，特別是結(jié)構(gòu)新穎的2(2-氧代吲哚啉-3-亞基)甲基-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-6,7-二氫-lH-吡咯[3，2-c]吡啶-4(5H)-酮衍生物，其制備方法及含有該衍生物的藥物組合物以及其作為治療劑特別是作為蛋白激酶抑制劑的用途。
背景技術(shù)：
：細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)是一種基礎(chǔ)的作用機(jī)制，在信號(hào)傳導(dǎo)過程中，來自細(xì)胞外的刺激被傳遞到細(xì)胞內(nèi)部，進(jìn)而調(diào)節(jié)不同細(xì)胞的進(jìn)程。這些信號(hào)可調(diào)節(jié)多種生理響應(yīng)，包括細(xì)胞增殖、分化、調(diào)亡和運(yùn)動(dòng)等，它們以不同種類溶解因子形式存在，包括以旁分泌因子、自分泌因子和內(nèi)分泌因子為主的生長因子。通過與特定跨膜受體結(jié)合，生長因子配體將細(xì)胞外信號(hào)傳遞到細(xì)胞內(nèi)信號(hào)途徑，從而引起個(gè)體細(xì)胞對(duì)細(xì)胞外信號(hào)的反應(yīng)。很多信號(hào)傳遞過程是利用蛋白磷酸化的可逆過程，涉及到特定蛋白激酶和磷?；?。蛋白激酶(Proteinkinases,PKs)在信號(hào)傳導(dǎo)過程中具有非常重要的作用。它能將ATP的Y-磷酸基轉(zhuǎn)移到功能蛋白的特定氨基酸殘基上，引發(fā)一系列生物反應(yīng)。按照在磷酸化過程中作為底物的氨基酸類別，蛋白^:酶可分為絲氨酸-蘇氨酸激酶(STKs)和酪氨酸激酶(PTKs)。酪氨酸磷酸化機(jī)理普遍存在于信號(hào)傳導(dǎo)過程中，調(diào)控著諸如有絲分裂、細(xì)胞周期進(jìn)程和分化等多種細(xì)胞功能(HanksandHunter,1995，F(xiàn)ASEBJ.9:576-596;CadenaandGill,1992，F(xiàn)ASEBJ.6:2332-2337;SchlessingerandUllrich,1992，Neuron9:383-391;Vandergeer"a丄，1994,Annu.Rev.CellBiol.10:251-337)。當(dāng)?shù)鞍桌野彼峒っ冈谧儺悺⑹Э氐那闆r下表達(dá)，或在不正常的高水平下表達(dá)時(shí)，可以將正常細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)槟[瘤顯型(neoplasticphenotype)(Chiaoeta丄，1994，CancerMetast.Rev.9:63—80;Hunter,1991，Cell64:249—270)。血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)是主要作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長因子，具有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、增加微血管通透性、誘導(dǎo)血管生成等多種功能(HanksandHunter,1995，F(xiàn)ASEBJ.9:576-596)。VEGF是目前所知最有效的、直接作用的血管生成素蛋白(angiogenicprotein),是一種可擴(kuò)散的內(nèi)皮細(xì)胞特異性有絲分裂素和血管生長因子(FerraraNetal.,EndocrRev,1997，18，4-25;TofimuraTetal.,HumPharthol,1998,29，986-991)。目前所知VEGF家族包括6個(gè)成員VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E和胎盤生成因子(PDF)，均為二聚體糖蛋白形式，且均含有規(guī)則的8個(gè)胱氨酸殘基的空間構(gòu)型，具特異性，被認(rèn)為是"胱氨酸結(jié)"(cysteineknot)。李凌等(李凌等.生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào)，2002，34(1)，21-27)發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤細(xì)胞高水平表達(dá)VEGF，并且還發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞也高水平表達(dá)Flk-1，提示腫瘤局部存在VEGF自分泌與旁分泌通路。VEGF的表達(dá)與一些實(shí)體瘤的微血管密度具有相關(guān)性，并且組織中VEGF的濃度與某些實(shí)體瘤的預(yù)后有關(guān)，如乳腺癌、肺癌、前列腺癌和結(jié)腸癌。已知缺氧是刺激VEGF產(chǎn)生的重要因素，在腫瘤細(xì)胞中缺氧誘導(dǎo)VEGF基因表達(dá)不光是基因轉(zhuǎn)錄率的提高，還有VEGFmRNA穩(wěn)定性的增強(qiáng)。VEGFR家族已明確有VEGFR-1/Fit-1、VEGFR-2/Flk-1/KDR和VEGFR-4/Fit-43種，VEGFR-1和VEGFR-2為細(xì)胞表面酪氨酸激酶受體，主要位于腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞表面。血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)及血管內(nèi)皮生長因子受體(vascularendothelialgrowthfactorrec印tor，VEGFR)在腫瘤新生血管形成過程中起著重要作用成為抗腫瘤生物治療的一個(gè)重要靶點(diǎn)。目前以VEGF和VEGFR為耙點(diǎn)的腫瘤治療主要有以下五種1.基因治療(EllisLM.etal.JBiolChem1998，273，1052-1057):VEGF和VEGFR對(duì)于腫瘤血管新生起正調(diào)節(jié)作用。通過基因治療，使VEGF和VEGFR表達(dá)減少，或阻斷其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而抑制二者發(fā)揮生物學(xué)活性。2.抗VEGF/VEGFR單克隆抗體(GordonMetal.ProcAmSocCUrvOneol，1998，17，2IIa):應(yīng)用VEGF及VEGFR的單克隆抗體，可封閉已分泌的VEGF及VEGFR，阻止VEGF誘發(fā)的內(nèi)皮信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，抑制血管的形成。3.小分子抑制物由sugen公司開發(fā)研制的su系列化合物。4.可溶性VEGFR:可溶VEGFR僅具有與VEGF結(jié)合能力，卻無信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能。5.導(dǎo)向治療VEGF的兩個(gè)主要受體Fit一l和Flk—l/KDR在腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞中過度表達(dá)，而VEGFR在相鄰正常組織血管內(nèi)皮中幾乎不能檢出。因此，VEGF和VEGFR為腫瘤的導(dǎo)向治療提供了特異性較高的耙點(diǎn)，VEGF可與其他抗腫瘤藥物、毒素、放射性核素等聯(lián)用，用于腫瘤的導(dǎo)向治療。本發(fā)明的目的在于在酪氨酸激酶抑制劑SU-14813以及具有抗腫瘤效果的吡咯并六元N雜環(huán)A衍生物的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)了具有通式(I)所示的類似物。本發(fā)明的化合物同現(xiàn)有技術(shù)中具體公開的化合物具有較大的結(jié)構(gòu)差異，且表現(xiàn)出優(yōu)良的使用效果和作用。SU-1481
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供通式(I)的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物，即新型酪氨酸激酶抑制劑2(2-氧代吲哚啉-3-亞基)甲基-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-6,7-二氫-lH-吡咯[3,2-c]吡啶-4(5H)-酮類化合物以及它們的互變異構(gòu)體、對(duì)映體、生理上可以接受的鹽、代謝產(chǎn)物和代謝前體或者前藥，以及它們調(diào)節(jié)蛋白激酶的活性。(I)其中RbR2、R3、R4分別選自氫原子、鹵素、垸基、芳基、雜芳基、-OR5、-0[CH2CH20]rR7、-NR5Re、-COR5或-NR5COR^，其中芳基、雜芳基、可以進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)垸基、烷氧基或者鹵素所取代；R5和R6各自分別選自氫原子或垸基，其中烷基可以進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自芳基、雜芳基、鹵代芳基、羥基、垸氧基、芳氧基、羧酸或者羧酸酯的取代基所取代；R7是氫原子或者烷基;r是16。本發(fā)明典型化合物包括但不限于:<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>或其藥學(xué)上可接受的鹽。其中，所述的鹽為上述通式化合物與選自以下的酸形成的鹽蘋果酸、乳酸、馬來酸、鹽酸、甲磺酸、硫酸、磷酸、檸檬酸、酒石酸、乙酸或三氟乙酸，優(yōu)選為蘋果酸或馬來酸。在本發(fā)明的另一4^方面，是一種藥物組合物，含有通式(I)的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽、載體或賦形劑。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，涉及的是蛋白激酶催化活性的調(diào)節(jié)方法，包括使蛋白激酶與通式(I)的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽、載體或賦形劑接觸。此蛋白激酶選自受體酪氨酸激酶、非受體酪氨酸激酶和絲氨酸-蘇氨酸激酶。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，是含有通式(I)的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物在治療與蛋白質(zhì)激酶有關(guān)的疾病的藥物中的用途。其中所述疾病選自與VEGFR-2,EGFR,HER-2，HER-3,HER-4,PDGFR,c-Kit，c-Met,FGFR或Flt3相關(guān)的疾病。在本發(fā)明的另一個(gè)方面是通式(I)的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物或鹽的制備方法，包括以下步驟氮?dú)獗Ｗo(hù)下，旋光化合物嗎啡啉氨基雙取代異丙醇(Ia)在1-羥基苯并三唑和N-乙基-N，-(二甲氨基丙基)-碳二亞胺作用下與5-羧甲基-3-甲基-lH-吡咯-2,4-二羥酸2-叔丁酯4-乙酯在乙腈中加熱得到手性的吡咯酰胺二羧酸二酯(lb);<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>氬氣氛下，手性吡咯酰胺二羧酸二酯(Ib)在乙醇中與鹽酸加熱回流得到旋光吡咯酰胺乙酯(IC);<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>進(jìn)一步，旋光吡咯酰胺乙酯(Ic)在無水四氫呋喃中和硼烷加熱回流選擇性還原得到手性取代吡咯乙酯Ud);<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>接下來，在氬氣氛下，手性取代吡咯乙酯(Id)在乙二醇中和一水合氫氧化鋰加熱回流，得到環(huán)合產(chǎn)物旋光吡咯并六元N雜環(huán)(Ie);O<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>室溫下，旋光吡咯并六元N雜環(huán)(Ie)在無水二氯甲烷中與三氯氧磷和N，N-二甲基甲酰胺發(fā)生甲?；磻?yīng)，生成旋光吡咯并六元N雜環(huán)甲醛(If);<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>最后，旋光吡咯并六元N雜環(huán)甲醛(If)在堿(如三乙胺，哌啶)存在下與不同的吲哚酮加熱212小時(shí)即得到通式(I)所示的目標(biāo)化合物手性的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉衍生物；<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>其中R,、R2、R3和R4的定義同上。發(fā)明的詳細(xì)說明除非有相反陳述，下列用在說明書和權(quán)利要求書中的術(shù)語具有下述含義。"烷基"指飽和的脂族烴基團(tuán)，包括1至20個(gè)碳原子的直鏈和支鏈基團(tuán)。優(yōu)選含有1至10個(gè)碳原子的中等大小垸基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基等。更優(yōu)選的是含有1至4個(gè)碳原子的低級(jí)烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、異丁基或叔丁基等。垸基可以是取代的或未取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基可以為鹵素、羥基、垸氧基、芳基、雜芳基、鹵代芳基、芳氧基、羧酸、羧酸酯、-0R5、-0[CH2CH20]rR7、-NR5R6、-COR5或-NR5COR6。"芳基"指具有至少一個(gè)芳環(huán)結(jié)構(gòu)的基團(tuán)，即具有共軛的兀電子體系的芳環(huán)，包括碳環(huán)芳基、雜芳基和聯(lián)芳基。芳基可以是被取代的或未被取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基可以為鹵素、烷氧基、垸基、羥基、芳氧基、羧酸、羧酸酯、-0R5、-0[CH2CH20]rR7、-NR5R6、-COR5或-NRsC0R6。"雜芳基"指具有1至3個(gè)雜原子作為環(huán)原子，其余的環(huán)原子為碳的芳基，雜原子包括氧、硫和氮。所述環(huán)可以是5元或6元環(huán)。雜環(huán)芳基基團(tuán)的實(shí)例包括呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基等。雜芳基可以是被取代的或未被取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基可以為鹵素、烷氧基、烷基、羥基、芳氧基、羧酸、羧酸酯、-0R5、-0[CH2CH20]rR7、-NR5R6、-COR5或-NRsC0R6。"羥基"指-OH基團(tuán)。"垸氧基"指-O-(烷基)和-O-(未取代的環(huán)烷基)。代表性實(shí)例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、環(huán)丙氧基、環(huán)丁氧基、環(huán)戊氧基、環(huán)己氧基等。垸氧基可以取代的或未取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基可以為卣素、羥基、烷氧基、芳基、雜芳基、鹵代芳基、芳氧基、羧酸、羧酸酯、-OR5、-0[CH2CH20]fR7、-NR5R6、-(30115或-順5(:0116。"芳氧基"指-o-芳基和-o-雜芳基，芳基和雜芳基定義同上。代表性實(shí)例包括但不限于苯氧基、吡啶氧基、呋喃氧基、噻吩氧基、嘧啶氧基、吡嗪氧基等及其衍生物。芳氧基可以取代的或未取代的，當(dāng)被取代時(shí)，取代基可以為齒素、烷氧基、烷基、羥基、芳氧基、羧酸、羧酸酯、-OR5、-0[CH2CH20]rR7、-NR5R6、-COR5或-NR5COR6。"鹵素"指氟、氯、溴或碘，優(yōu)選氟或氯。"鹵代烷氧基"指-O-(鹵代烷基)。代表性實(shí)例包括但不限于三氟甲氧基、三溴甲氧基等。"羧酸"指(烷基)C(-O)OH。"羧酸酯"指(烷基)C(O)O(垸基)。"可選"或"可選地"意味著隨后所描述地事件或環(huán)境可以但不必發(fā)生，該說明包括該事件或環(huán)境發(fā)生或不發(fā)生的場(chǎng)合。例如，"可選被烷基取代的芳基"意味著烷基可以但不必存在，該說明包括芳基被烷基取代的情形和芳基不被烷基取代的情形。"藥物組合物"表示一種或多種本文所述化合物或其生理學(xué)上/藥學(xué)上可接受的鹽或前體藥物與其他化學(xué)組分的混合物，其他組分例如生理學(xué)/藥學(xué)上可接受的載體和賦形劑。藥物組合物的目的是促進(jìn)化合物對(duì)生物體的給藥。本發(fā)明化合物的合成方法為了完成本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案本發(fā)明通式(I)所述的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物或其鹽的制備方法，包括以下步驟:以旋光化合物嗎啡啉氨基雙取代異丙醇(Ia)(根據(jù)專利US20040209937制備所得)為起始原料，氮?dú)夥障?，旋光化合物嗎啡啉氨基雙取代異丙醇(Ia)在1-羥基苯并三唑和N-乙基-N'-(二甲氨基丙基)-碳二亞胺作用下與5-羧甲基-3-甲基-lH-吡咯-2,4-二羥酸2-叔丁酯4-乙酯在乙腈中加熱回流得到手性的吡咯酰胺二羧酸二酯(Ib);氬氣氛下，手性吡咯酰胺二羧酸二酯(Ib)在乙醇中與鹽酸加熱回流得到旋光吡咯酰胺乙酯(Ic);進(jìn)一步，旋光吡咯酰胺乙酯(Ic)在無水四氫呋喃中和硼烷加熱回流選擇性還原得到手性取代吡咯乙酯(Id);接下來，在氬氣氛下，手性取代吡咯乙酯(Id)在乙二醇中和一水合氫氧化鋰加熱回流，得到環(huán)合產(chǎn)物旋光吡咯并六元N雜環(huán)(Ie);室溫下，旋光吡咯并六元N雜環(huán)(Ie)在無水二氯甲垸中與三氯氧磷和N，N-二甲基甲酰胺發(fā)生甲酰化反應(yīng)，生成旋光吡咯并六元N雜環(huán)甲醛(If);最后，旋光吡咯并六元N雜環(huán)甲醛(If)在堿(如三乙胺，哌啶)存在下與不同的U引哚酮加熱212小時(shí)即得到通式(I)所示的目標(biāo)化合物手性的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉衍生物。其中的關(guān)鍵技術(shù)是硼烷的選擇性還原底物(Ic)以及堿性催化劑一水合氫氧化鋰的催化環(huán)合底物(Id)，特別是后者，無相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道此類吡咯并六元內(nèi)酰胺結(jié)構(gòu)的構(gòu)建方法。本發(fā)明還涉及一種藥物組合物，其包括藥物有效量的如本發(fā)明通式(I)所述的化合物或其鹽和藥學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明進(jìn)一步涉及本發(fā)明通式(I)所示化合物或其鹽在制備蛋白激酶抑制劑中的用途。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一歩描述，但這些實(shí)施例并不限制著本發(fā)明的范圍。在以下的實(shí)施例中，化合物的結(jié)構(gòu)是通過核磁共振(NMR)或質(zhì)譜(MS)來確定的。NMR位移(S)以百萬分之一(ppm)的單位給出。NMR的測(cè)定是用BrukerAVANCE-400核磁儀，測(cè)定溶劑為氘代氯仿(CDCl3)、氘代二甲基亞砜(DMS0-D6)，內(nèi)標(biāo)為四甲基硅垸(TMS)，化學(xué)位移是以1(^(ppm)作為單位給出。MS的測(cè)定用FINNIGANLCQAd(ESI)質(zhì)譜儀。薄層硅膠使用煙臺(tái)黃海HSGF254或青島GF254硅膠板。柱層析一般使用煙臺(tái)黃海硅膠200300目硅膠為載體。DMSO-D6:氖代二甲基亞砜；CDC13:氘代氯仿；制備實(shí)施例(R,Z)-2-(5-氟-2-氧代-l,2-二氫-U引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5，6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮實(shí)施例1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>第一步5-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲?；?-甲基]-3-甲基-lH-吡咯-2,4-二羥酸(S)-2-叔丁酯4-乙酯室溫下，將(S)-l-氨基-3-嗎啡啉-4-基-異丙醇la(15.125g，94.5mmol)，5-羧甲基一3-甲基-lH-吡咯-2，4-二羥酸2-叔丁酯4-乙酯(32.34g，104mmol)，1-羥基苯并三唑(25.5g，189.06mmol)，N-乙基-N，-(二甲氨基丙基)-碳二亞胺(36.2g，189.06mmol)攪拌下溶解于450ml乙腈中，再于5(TC油浴反應(yīng)3小時(shí)。薄層色譜監(jiān)測(cè)反應(yīng)至原料基本消失，停止反應(yīng)。反應(yīng)液減壓下蒸除溶劑，加入150ml飽和氯化鈉溶液，用乙酸乙酯和四氫呋喃的混和溶劑(V:V-4:l)萃取(200mlx5)，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌(100mlxl)，無水硫酸鎂千燥，抽濾除去干燥劑，濾液濃縮得到75g油狀物。油狀物柱層析得到標(biāo)題產(chǎn)物5-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲?；?-甲基]-3..甲基-111-吡咯-2,4-二羥酸(S)-2-叔丁酯4-乙酯lb(30g，淺褐色固體)，產(chǎn)率70%。MSm/z(ESI):454.4(M+l)。第二步(S)-2-[(2-羥基-3-嗎啡啉^-基-丙基氨基甲酰基)-甲基]-4-甲基-lH-吡咯-3-羧酸乙酯氬氣保護(hù)下，將5-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲?；?-甲基]-3-甲基-111-吡咯-2,4-二羥酸(S)-2-叔丁酯4-乙酯lb(25.7g，56.7mmol)攪拌下溶解于70ml無水乙醇中，邊用冰浴冷卻邊滴加71ml鹽酸(12N)。加畢，撤去冰浴，反應(yīng)體系于60'C油浴中反應(yīng)約1.5小時(shí)。薄層色譜監(jiān)測(cè)反應(yīng)至原料基本消失，停止反應(yīng)。反應(yīng)體系于干冰-丙酮浴中用10N的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7左右，有大量固體析出。混合物過濾，濾餅用乙醇洗滌。濾液減壓下蒸除溶劑，用10N的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至10左右，二氯甲垸萃取(150mlx3)，合并有機(jī)相，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌(IOOmlxl)，無水硫酸鎂干燥，抽濾除去千燥劑，濾液濃縮得到標(biāo)題產(chǎn)物(S)-2-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲酰基)-甲基]-4-甲基-lH-吡咯-3-羧酸乙酯lc(16.9g，深綠色油狀物)，產(chǎn)率84%。MSm/z(ESI):354.3(M+l)。第三步(S)-2-[2-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基)-乙基]-4-甲基-lH-吡咯-3-羧酸乙酯氬氣保護(hù)下，將(S)-2-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲酰基)-甲基]-4-甲基-111-吡咯-3-羧酸乙酯1(:(16.98，47.9mmol)溶解于143.6ml干燥的四氫呋喃中，冰浴冷卻，加入硼烷的四氫呋喃溶液(143.6ml，1mol/L,143.6mmol)。加畢撤去冰浴，反應(yīng)體系溫度自然升至室溫，于95'C油浴中回流約1小時(shí)。薄層色譜監(jiān)測(cè)反應(yīng)至原料基本消失，停止反應(yīng)。反應(yīng)液減壓下蒸除溶劑，加入150ml鹽酸(2N)攪拌0.5小時(shí)，加入50ml冰水，用ION的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至10左右，乙酸乙酯萃取(200mlx2)，合并有機(jī)相，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌(IOOmlxl)，無水硫酸鎂干燥，抽濾除去干燥劑，濾液濃縮得到標(biāo)題產(chǎn)物(3)-2-[2-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基)-乙基]-4-甲基-lH-吡咯-3-羧酸乙酯ld(15.6g，黃褐色油狀物)，產(chǎn)率96%。MSm/z(ESI):340.3(M+l)。第四步(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5,6，7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮?dú)鍤獗Ｗo(hù)下，將(S)-2-[2-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基)-乙基]-4-甲基-lH-吡咯-3-羧酸乙酯ld(16.2g，47.9mmo1)，一水合氫氧化鋰(8g,190.6mmol)攪拌下溶解于50ml乙二醇中，反應(yīng)體系于135'C油浴中反應(yīng)50min。薄層色譜監(jiān)測(cè)反應(yīng)至原料基本消失，停止反應(yīng)。反應(yīng)液減壓下蒸除溶劑，加入150ml飽和氯化鈉溶液，用二氯甲垸萃取(150ml"),合并有機(jī)相，有機(jī)相用飽和氯化鈉洗滌(150mlxl)，無水硫酸鎂干燥，抽濾除去干燥劑，濾液濃縮得到12.3g油狀物。油狀物柱層析得到標(biāo)題產(chǎn)物(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5，6,7-四氫-吡咯并[3，2-c]吡啶-4-酮le(7.9g，白色固體)，產(chǎn)率60.6%。MSm/z(ESI):294.2(M+l)。第五步(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5,6,7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛室溫下，將三氯氧磷(674u1，4.04mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(963u1，12.32mmol)攪拌下溶解于21.18ml二氯甲烷中，用冰浴控制溫度在-10'C左右，攪拌15min。將(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5,6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮le(790mg，2.7mmol)攪拌下溶解于10ml二氯甲烷中，滴加到上述反應(yīng)體系中。加畢，撤去冰浴，反應(yīng)體系溫度自然升至室溫，繼續(xù)攪拌2小時(shí)。薄層色譜監(jiān)測(cè)反應(yīng)至原料基本消失，反應(yīng)體系中加入冰水淬滅反應(yīng)，攪拌15min。用10N的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至12左右，用二氯甲烷和甲醇的混和溶劑(V:V-20:1)萃取(100mlx8)，合并有機(jī)相，有機(jī)相用飽和氯化鈉洗滌(150mlxl)，無水硫酸鎂干燥，抽濾除去干燥劑，濾液濃縮得到800mg粗品。粗品柱層析得到標(biāo)題產(chǎn)物(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6，7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛lf(650mg，白色固體)，產(chǎn)率75%MSm/z(ESI):322.6(M+l)。第六步(R,Z)-2-(5-氟-2-氧代-l，2-二氫-H引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5,6，7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮室溫下，將(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5,6,7-四氫-111-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛lf(200mg，0.623mmol)，5-氟-1,3-二氫』引哚-2-酮(84.67mg，0.56mmol)和六氫吡啶(30.8ul，0.31mmol)攪拌下溶解于1.09ml乙醇中，反應(yīng)體系于8(TC油浴中避光攪拌2小時(shí)。薄層色譜監(jiān)測(cè)反應(yīng)至原料基本消失，停止反應(yīng)。撤去油浴，反應(yīng)體系溫度自然降至室溫，有大量固體析出，抽濾得到標(biāo)題產(chǎn)物(R,Z)-2-(5-氟-2-氧代-l,2-二氫-吲哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3隱甲基陽l，5，6,7-四氫-卩比咯并[3,2-c]吡啶-4-酮1(256mg，黃色固體)，產(chǎn)率90%。MSm/z(ESI):455.2(M+)。'HNMR(400MHz，DMSO-d6)13.674(s,1H,批咯環(huán)隱NH)，10,945(s，1H,B引哚-NH)，7.771~7.800(m，1H，-ArH)，7.762(s,1H，-CH=C)，6.927~6.978(dd，1H，-ArH)，6.842~6.874(d，1H，-ArH)，4.707~4.719(d，1H，-OH),3.900~3.915(m,1H，-CHO)，3.704~3.748(dd，2H,六環(huán)內(nèi)接酰胺氮-CH2-)，3.6163.695(dd,1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.5633.585(t，4H,嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.1053.158(dd，1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.433(t,2H，六環(huán)接吡咯環(huán)-CH2-)，2.545(s，3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.420~2.431(m，2H,-CH2N，嗎啡啉環(huán)內(nèi)-CH2N)，2.420~2.431(m，2H，-CH2N,嗎啡啉環(huán)外-CH2N)，2.3042.330(t,2H,嗎啡啉環(huán)內(nèi)-CH2N)。實(shí)施例2(R，Z)-2-(5-氯-2-氧代-l，2-二氫』引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5,6,7-四氫-吡咯并[3，2-c〗卩比啶-4-酮重復(fù)本發(fā)明實(shí)施例1第六步反應(yīng)，不同的是使用實(shí)施例1第五步中所得到的化合物(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5，6，7-四氫-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛lf和5-氯-l，3-二氫-d引哚-2-酮作原料，得到標(biāo)題產(chǎn)物(11，2)-2-(5-氯-2-氧代-l，2-二氫-卩引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5,6,7國四氫-卩比咯并[3，2-c]吡啶-4-酮2(42mg，黃色固體)，產(chǎn)率64%。MSm/z(ESI):471翠+l)。'HNMR(400MHz,DMSO-d6)13.727(s，1H,吡咯環(huán)-NH)，11.039(s,1H，吲哚誦NH)，8.003(m，1H,-ArH)，7.814(s,1H,-CH-C)，7.1667.141(dd,1H,-ArH)，6.890~6.869(d，lH，-ArH)，4.713~4.700(d,1H,-0H)，3.907~3.892(m，1H,-CH0)，3.6263.567(t，4H，嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.1523.099(dd，1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.027~2.994(t,2H,六環(huán)接吡咯環(huán)-CH;r)，2.547(s,3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.3282.290(t，2H,嗎啡啉環(huán)內(nèi)-CH2N)。實(shí)施例32-[(Z)-4-(2，3-二氟-苯基)-2-氧代-l，2-二氫-B引哚-3-次甲基]-5-[(R)-2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基]-3-甲基-1，5，6,7-四氫-吡咯并[3，2-c]吡啶4-酮3a3b3c3d第一步4-(4，4，5，5-四甲基-[l，3，2]二氧雜硼烷-2-基)-lH-吲哚氬氣氛下，將4-溴-lH-吲哚3a(29.4g，150mmol)攪拌下溶解于600ml二甲基亞砜中，加入頻哪醇乙硼垸(41.9g，165mmo1)，醋酸鉀(44.1g，450mmol)和l,l，-雙(二苯膦基)二茂鐵二氯化鈀(3.6g，4.8mmo1)，加畢，反應(yīng)液于80'C油浴中攪拌22小時(shí)，薄層色譜表明原料反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。反應(yīng)液中加入2L水，用乙酸乙酯萃取(2LX3)，合并有機(jī)相，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌(2LX5)，無水硫酸鈉干燥，抽濾除去干燥劑，濾液減壓濃縮。所得固體柱層析后重結(jié)晶得到標(biāo)題產(chǎn)物4-(4,4,5,5-四甲基-[l，3,2]二氧雜硼烷-2-基)-lH-吲哚3b(20g，白色固體)，產(chǎn)率60%。MSm/z(ESI):243.9(M+l)。第二步4-(2，3-二氟-苯基)-lH-吲哚氬氣氛下，將4-(4,4，5，5-四甲基-[l,3,2]二氧雜硼垸-2-基)-lH-吲哚3b(1.22g，5mmol)攪拌下溶解于20ml四氫呋喃中，加入1-溴-2，3-二氟-苯(0.97g，5mmol)，四(三苯基膦)鈀(0.17g，0.15mmol)和7ml氫氧化鈉溶液(2M)。加畢，反應(yīng)體系在75'C油浴中攪拌過夜，薄層色譜表明原料反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。反應(yīng)液自然冷卻至室溫，用乙酸乙酯萃取(20mlX3)，合并有機(jī)相，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌(10mlX1)，無水硫酸鈉干燥，抽濾除去干燥劑，濾液減壓濃縮。所得固體柱層析得到標(biāo)題產(chǎn)物4-(2,3-二氟-苯基)-lH-吲哚3c(800mg，白色固體)，產(chǎn)率70%。MSm/z(ESI):228.4(M-l)。第三步4-(2,3-二氟-苯基)-l,3-二氫-H引哚-2-酮室溫下，將4-(2，3-二氟-苯基)-lH-吲哚3c(744mg，3.25mmol)攪拌下溶解于12ml乙醇中，依次加入21ml叔丁醇，6.4ml冰醋酸和三溴化吡啶鎗(3.12g，9.7mmol)，加畢攪拌3小時(shí)。再加入16ml冰醋酸和鋅粉(l.lg，16.25mmol)，繼續(xù)攪拌1小時(shí)。反應(yīng)液抽濾除去殘?jiān)?，濾液減壓濃縮后加入30ml乙酸乙酯，依次用10ml水，10ml飽和碳酸氫鈉和10ml飽和氯化鈉洗滌，用無水硫酸鈉干燥，抽濾除去干燥劑，濾液減壓濃縮。所得固體為標(biāo)題產(chǎn)物4-(2，3-二氟-苯基)-l,3-二氫-吲哚-2-酮3d(780mg，白色固體)，產(chǎn)率97%。MSm/z(ESI):246.6(M+l)。第四步2-[(Z)-4-(2,3-二氟-苯基)-2-氧代-l，2-二氫』引哚-3-次甲基]-5-[(R)-2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基]-3-甲基-1，5,6,7-四氫-吡咯并[3,2<|吡啶-4-酮室溫下，將(11)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫-11"1-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛lf(50mg，0.156mmol)，4-(2，3-二氟-苯基)-l，3-二氫』引哚-2-酮3d(34.3mg，0.14mmol)和六氫吡啶(7.7u1，0.078mmol)攪拌下溶解于0.3ml乙醇中，反應(yīng)體系于80'C油浴中避光攪拌2小時(shí)。薄層色譜監(jiān)測(cè)反應(yīng)至原料基本消失，停止反應(yīng)。撤去油浴，反應(yīng)體系溫度自然降至室溫，有大量固體析出，抽濾得到標(biāo)題產(chǎn)物2-[(2)-4-(2,3-二氟-苯基)-2-氧代-1,2-二氫』引哚-3-次甲基]-5-[(11)-2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基]-3-甲基-l,5，6,7-四氫-B比咯并[3,2-c]吡啶-4-酮3(56mg，黃色固體)，產(chǎn)率73%。MSm/z(ESI):549.3(M+1)。'HNMR(400MHz,DMSO-d6)13.583(s，1H，吡咯環(huán)-NH),11.164(s,1H,H引哚-NH),7.6477劍(m，1H,-ArH)，7.462~7.411(m,1H,-ArH),7.342~7.308(m，1H,-ArH)，7.277~7.239(m，1H，-ArH)，7.017~6.997(d,1H,-ArH)，6.898~6.879(d,1H，-ArH)，6.716(s，1H，-CH=C)，4.671(s,IH,-OH)，3.854(m，IH,-CHO)，3.673~3.540(m,7H，六環(huán)內(nèi)-CH2N，六環(huán)外接酰胺氮-CH2，嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.124~3.077(q,1H:六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，2.986~2.954(t，2H,六環(huán)內(nèi)-12)，2.402-2.392(m,4H,嗎啡啉環(huán)-CH2N，接嗎啡啉-CH2N),2.2792.265(d,2H，嗎啡啉環(huán)-CH2N)，1.884(s,3H，吡咯環(huán)-CH》。實(shí)施例4(R，Z)-2-(5-溴-2-氧代-l，2-二氫』引噪-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5,6,7-四氫-吡咯并[3，2-c]吡啶-4-酮重復(fù)本發(fā)明實(shí)施例1第六步反應(yīng)，不同的是使用實(shí)施例1第五步中所得到的化合物(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛lf和5-溴-l，3-二氫-吲哚-2-酮作原料，得到標(biāo)題產(chǎn)物(1^)-2-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫』引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5,6,7-四氫-吡咯并[3，2-c]吡啶-4-酮4(24mg，黃色固體)，產(chǎn)率50%。MSm/z(ESI):517.6(M+l)。JHNMR(400MHz,DMSO-d6)13.723(s,1H,吡咯環(huán)-NH)，11.047(s，1H,B引哚隱NH)，8.131(s，1H，-ArH)，7.820(s,1H,-CH=C)，7.292~7.271(dd,1H,-ArH)，6.847~6.827(d，1H,-ArH),4.713~4.702(d，1H,隱OH)，3.897(m,IH,-CHO)，3.6263.569(t,4H,嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.1533.101(dd,1H，六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.029~2.995(t,2H,六環(huán)接吡咯環(huán)-CH2-)，2.549(s,3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.308(t,2H,嗎啡啉環(huán)內(nèi)-CH2N)。實(shí)施例5(S,Z)-2-(5-氟-2-氧代-l，2-二氫-噴哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5，6，7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮第一步5-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲?；?-甲基]-3-甲基-lH-吡咯-2，4-二羥酸(R)-2-叔丁酯4-乙酯室溫下，將(R)-l-氨基-3-嗎啡啉-4-基-異丙醇5a(15.125g，94.5mmol)，5-羧甲基-3-甲基-lH-吡咯-2,4-二羥酸2-叔丁酯4-乙酯(32.34g，104mmol)，1-羥基苯并三唑(25.5g，189.06mmol)，N-乙基-N，-(二甲氨基丙基)-碳二亞胺(36.2g，189.06mmol)攪拌下溶解于450ml乙腈中，再于5(TC油浴反應(yīng)3小時(shí)。薄層色譜監(jiān)測(cè)反應(yīng)至原料基本消失，停止反應(yīng)。反應(yīng)液減壓下蒸除溶劑，加入150ml飽和氯化鈉溶液，用乙酸乙酯和四氫呋喃的混和溶劑C^^4:l)萃取(200mlx5)，合并有機(jī)相，有機(jī)相用飽和氯化鈉洗滌(100mlxl)，無水硫酸鎂干燥，抽濾除去干燥劑，濾液濃縮得到75g油狀物。油狀物柱層析得到標(biāo)題產(chǎn)物5-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲?；?-甲基]-3-甲基-lH-吡咯-2，4-二羥酸(R)-2-叔丁酯4-乙酯5b(30g，淺褐色固體)，產(chǎn)率70%。MSm/z(ESI):454単+1)。第二步(R)-2-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲酰基)-甲萄-4-甲基-lH-吡咯-3-羧酸乙酯氬氣氛下，將5-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲?；?-甲基]-3-甲基-111-吡咯-2，4-二羥酸(R)-2-叔丁酯4-乙酯5b(23g，50.77mmol)攪拌下溶解于60ml無水乙醇中，邊用冰浴冷卻邊滴加63.5ml鹽酸(12N)。加畢，撤去冰浴，反應(yīng)體系于6(TC油浴中反應(yīng)約1.5小時(shí)。薄層色譜監(jiān)測(cè)反應(yīng)至原料基本消失，停止反應(yīng)。反應(yīng)體系于干冰-丙酮浴中用10N的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7左右，有大量固體析出。混合物過濾，濾餅用乙醇洗滌。濾液減壓下蒸除溶劑，用10N的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至10左右，二氯甲烷萃取(150mlx3)，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌(100mlxl)，無水硫酸鎂干燥，抽濾除去干燥劑，濾液濃縮得到標(biāo)題產(chǎn)物(11)-2-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲?；?-甲基]-4-甲基-lH-吡咯-3-羧酸乙酯5c(14.6g，黃綠色油狀物)，產(chǎn)率81.6%。MSm/z(ESI):354舉+1)。第三步(R)-2-[2-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基)-乙基〗-4-甲基-lH-吡咯-3-羧酸乙酯氬氣氛下，將(11)-2-[(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基甲?；?-甲基]-4-甲基-111-吡咯-3-羧酸乙酯5c(2.332g，6.6mmol)溶解于23ml干燥的四氫呋喃中，冰浴冷卻，加入硼垸的四氫呋喃溶液(23.12ml,1mol/L,23.12mmol)。加畢撤去冰浴，反應(yīng)體系溫度自然升至室溫，于95'C油浴中回流約1小時(shí)。薄層色譜監(jiān)測(cè)反應(yīng)至原料基本消失，停止反應(yīng)。反應(yīng)液減壓下蒸除溶劑，加入5ml的鹽酸(2N)攪拌0.5小時(shí)，加入5ml冰水，用10N的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至IO左右，乙酸乙酯萃取(IOOmlx2)，合并有機(jī)相，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液洗滌(50mlxl)，無水硫酸鎂干燥，抽濾除去干燥劑，濾液濃縮得到標(biāo)題產(chǎn)物(R)-2-[2-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基)-乙基]-4-甲基-lH-吡咯-3-羧酸乙酯5d(2.1g，白色固體)，產(chǎn)率93.75%。MSm/z(ESI):340.9(M+1)。第四步(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5,6,7-四氫-吡咯并[3，2-c]吡啶-4-酮?dú)鍤夥障拢瑢?R)-2-[2-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基氨基)-乙基]-4-甲基-lH-吡咯-3-羧酸乙酯5(1(2.1g，6.2mmo1)，一水合氫氧化鋰(1.56g，37mmol)攪拌下溶解于25ml乙二醇中，反應(yīng)體系于140'C油浴中反應(yīng)50min。薄層色譜監(jiān)測(cè)反應(yīng)至原料基本消失，停止反應(yīng)。反應(yīng)液減壓下蒸除溶劑，加入50ml飽和氯化鈉，用二氯甲烷萃取(80mlx3)，有機(jī)相用飽和氯化鈉洗滌(80mlxl)，無水硫酸鎂干燥，抽濾除去干燥劑，濾液濃縮后柱層析得到標(biāo)題產(chǎn)物(3)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5,6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮5e(610mg，白色固體)，產(chǎn)率33.9。％。MSm/z卿)294翠+1)。第五步(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6，7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡徒-2-甲醛室溫下，將三氯氧磷(500141，3mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(704"I，9mmol)攪拌下溶解于15ml無水二氯甲烷中，用冰浴控制溫度在-l(TC左右，攪拌15min。將(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5，6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮5e(586mg，2mmol)攪拌下溶解于8ml二氯甲烷中，滴加到上述反應(yīng)體系中。加畢，撤去冰浴，反應(yīng)體系溫度自然升至室溫，繼續(xù)攪拌2小時(shí)。薄層色譜監(jiān)測(cè)反應(yīng)至原料基本消失，反應(yīng)體系中加入冰水淬滅反應(yīng)，攪拌15min。用10N的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至12左右，用二氯甲垸和甲醇的混和溶劑(V:V-20:1譯取(100mlx5)，合并有機(jī)相，有機(jī)相用飽和氯化鈉洗滌(IOOmlxl)，無水硫酸鎂干燥，抽濾除去干燥劑，濾液濃縮后柱層析得到標(biāo)題產(chǎn)物(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉斗基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛5f(490mg，白色固體)，產(chǎn)率78.8%。MSm/z(ESI):322単+1)。第六步(S,Z)-2-(5-氟-2-氧代-l,2-二氫-tl引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-I，5，6,7-四氫-吡咯并[3，2-c]吡啶-4-酮室溫下，將(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛5f(490mg，1.53mmol)，5-氟-1，3-二氫』引哚-2-酮(219mg，1.45mmol)和六氫吡啶(100u1，1.0mmol)攪拌下溶解于5ml乙醇中，反應(yīng)體系于80'C油浴中避光攪拌2小時(shí)。薄層色譜監(jiān)測(cè)反應(yīng)至原料基本消失，停止反應(yīng)。撤去油浴，反應(yīng)體系溫度自然降至室溫，有大量固體析出，抽濾得到標(biāo)題產(chǎn)物(S，Z)-2-(5-氟-2-氧代-l，2-二氫-B引噪-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5,6，7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶4-酮5(460mg,黃色固體)，產(chǎn)率69.9%。MSm/z(ESI):455.2(M+l)。NMR(400MHz,DMS0-d6)13.674(s，1H,吡咯環(huán)-NH)，10.945(s,1H,B引哚-NH)，7.771~7.800(m,1H,-ArH)，7.762(s,1H,-CH=C)，6.927~6.978(dd,1H，-ArH)，6.842~6.874(d,1H,-ArH)，4.707~4.719(d,1H,-OH),3.900~3.915(m,1H,-CHO)，3.704~3.748(dd,2H,六環(huán)內(nèi)接酰胺氮-CH;r)，3.6163.695(dd,1H，六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.5633.585(t，4H,嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.1053.I58(dd,1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.433(t，2H,六環(huán)接吡咯環(huán)-CH2-)，2.545(s，3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.420~2.431(m，2H,-CH2N,嗎啡啉環(huán)內(nèi)-CH2N)，2.420-2.431(m,2H,-CH2N,嗎啡啉環(huán)外-CH2N)，2.3042.330(t,2H，嗎啡啉環(huán)內(nèi)-CH2N)。實(shí)施例6(S，Z)-2-(5-氯-2-氧代-l,2-二氫-卩引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5,6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮重復(fù)本發(fā)明實(shí)施例5第六步反應(yīng)，不同的是使用實(shí)施例5第五步中所得到的化合物(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛5f和5-氯-l，3-二氫-噴哚-2-酮作原料，得到標(biāo)題產(chǎn)物(8，2)-2-(5-氯-2-氧代-1,2-二氫』引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5,6,7-四氫-批咯并[3,2-c]吡啶-4-酮6(87mg，黃色固體)，產(chǎn)率85%。MSm/z(ESI):471舉+l)。'HNMR(400MHz，DMSO-d6)13.727(s,1H,吡咯環(huán)隱NH)，11.038(s，1H，卩引哚-NH)，8駕8篇(m,1H,陽ArH)，7.813(s,1H,-CH=C)，7.166~7.140(dd，1H,-ArH)，6.889~6,869(d,1H，-ArH)，4.712~4.700(d,1H,-OH)，3.893(m,1H,-CHO)，3.723~3.689(dd,2H，六環(huán)內(nèi)接酰胺氮-012-)，3.6573.641(dd,1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.5783.556(t,4H,嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.1523.099(dd，1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.026~2.993(t,2H,六環(huán)接吡咯環(huán)-CH2-)，2.547(s,3H,吡咯環(huán)-CH3),2.424~2.412(m,4H,-CH2N，嗎啡啉環(huán)內(nèi)-CH2N,嗎啡啉環(huán)外-CH2N)，2.3112.290(t，2H,嗎啡啉環(huán)內(nèi)-CH2N)。實(shí)施例72_(2;)_[4-(2,3-二氟-苯基)-2-氧代-1，2-二氫-卩引哚-3-次甲基]-5-((3)-2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5,6，7-四氫-妣咯并[3,2-c]吡啶-4-酮重復(fù)本發(fā)明實(shí)施例5第六步反應(yīng)，不同的是使用實(shí)施例5第五步中所得到的化合物(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6,7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛5f和4-(2，3-二氟-苯基)-l，3-二氫-噴哚-2-酮3d作原料，得到標(biāo)題產(chǎn)物2-(Z)-[4-(2，3-二氟-苯基)-2-氧代-l，2-二氫』引噪-3-次甲基]-5-((S)-2-羥基-3-嗎啡啉誦4-基-丙基)-3-甲基-l,5,6，7-四氫-卩比咯并[3，2-c]吡啶-4-酮7(49mg，紅色固體)，產(chǎn)率73%。MSm/z(ESI):549.2(M+l)。^NMR(400畫z，DMSO-d6)13.583(s,1H,吡咯環(huán)-NH)，11.164(s,1H，卩引哚-NH)，7.604~7.647(m,1H,-ArH)，7.411~7.464(m，1H，-ArH)，7.308~7.342(m，1H,-ArH)，7.239~7.277(m,1H,-ArH)，6.997~7.017(d,1H,-ArH)，6.879~6.898(d，1H,陽ArH)，6.716(s，1H,-CH=C)，4.671(s,1H，-OH)，3.854(m,1H,隱CHO)，3.540~3.673(m,7H,六環(huán)內(nèi)-CH2N,六環(huán)外接酰胺氮-CH2，嗎啡啉環(huán)2x-CH2O)，3.0953.124(q,1H:六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，2.954~2.986(t,2H,六環(huán)內(nèi)-CH;O，2.392-2.402(m，4H,嗎啡啉環(huán)-CH2N，接嗎啡啉-CH2N)，2,2652.279(d,2H，嗎啡啉環(huán)-CH2N),1.884(s,3H,吡咯環(huán)-CH3)。實(shí)施例8(S，Z)-2-(5-溴-2-氧代-l,2-二氫-B引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5,6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮重復(fù)本發(fā)明實(shí)施例5第六步反應(yīng)，不同的是使用實(shí)施例5第五步中所得到的化合物(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛5f和5-溴-l,3-二氫』引哚-2-酮作原料，得到標(biāo)題產(chǎn)物(S,Z)-2-(5-溴—2-氧代-l,2-二氫-卩引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1，5,6,7-四氫-吡咯并[3,2-c〗吡啶-4-酮8(49mg，黃色固體)，產(chǎn)率78%。MSm/z(ESI):515翠+1)。!HNMR(400MHz,DMSO-d6)13.720(s,1H,吡咯環(huán)-NH)，11.042(s,1H,吲哚陽NH)，8.127(s，1H,-ArH)，7.813(s，1H,-CH=C)，7.2卯7,265(dd,1H,-ArH)，6.844~6.823(d,1H,-ArH)，4.712~4.699(d,1H,-OH)，3.907(m,1H，-CHO)，3.5783.555(t,4H,嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.151~3.098(dd，1H，六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.025~2.992(t,2H,六環(huán)接吡咯環(huán)-CH2-)，2.547(s，3H，吡咯環(huán)-CH3)，2.306~2.290(t,2H，嗎啡啉環(huán)內(nèi)-CH2N)。實(shí)施例9(S,Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-^基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-亞甲基]-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-基卜2-羥基-乙酰胺第一步2，4-二硝基-5-氟-苯乙酸室溫下，將3-氟-苯乙酸9a(31.5g，0.204mol)加入到64ml硫酸(98。/。)中，控制溫度在35'C下滴加100ml硝酸(65。/。一68W)及硫酸(98。/。)的混合溶液(V:V^l:l)。加畢，控溫在35'C左右攪拌，薄層色譜跟蹤至原料消失。將冰加入反應(yīng)液中，待冰融化后過濾，得到標(biāo)題產(chǎn)物2，4-二硝基-5-氟-苯乙酸9b(49g,淺黃色油狀液體)。MSm/z(ESI):243.5(M陽l)。第二步2,4-二氨基-5-氟-苯乙酸室溫下，將2,4-二硝基-5-氟-苯乙酸9b(10g，38.7mmol)攪拌下溶解于150ml甲醇中，加入鈀/碳(5%，1.5g)，氫氣氛下，在壓強(qiáng)為0.3MPa下氫化。薄層色譜跟蹤至原料消失，過濾兩次，濾液減壓濃縮得到標(biāo)題產(chǎn)物2，4-二氨基-5-氟-苯乙酸9c(7.12g，棕色固體)，直接做下一步。第三步5-氟-6-氨基-2-吲哚酮室溫下，將2,4-二氨基-5-氟-苯乙酸9c(7.12g，38.7mmol)攪拌下溶解于100ml鹽酸(1M)，加熱回流l小時(shí)，薄層色譜跟蹤至原料消失，停止反應(yīng)。將反應(yīng)液冷卻至室溫，繼續(xù)用冰水浴冷卻，滴加100ml氫氧化鈉溶液(lM)中和反應(yīng)液。用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液(125mLX4)，合并有機(jī)相，有機(jī)相用飽和氯化鈉溶液(100mLXl)洗滌，乙酸乙酯層用無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-氟-6-氨基-l,3-二氫-2-吲哚酮9d(5.3g，黃色固體)，產(chǎn)率82.8%。MSm/z(ESI):165.3(M-l)。第四步乙酸(5-氟-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-氨基甲酰基)-甲酯室溫下，將5-氟-6-氨基-2-吲哚酮9d(500mg，3.0mmol)攪拌下溶解于10ml四氫呋喃中，加入0.4ml吡啶，攪拌均勻后用丙酮和干冰使反應(yīng)體系冷卻至-40'C左右。將乙酰氧基乙酰氯(420mg，3.0mmol)加入到10ml四氫呋喃中，溶解后滴加到已冷卻好的反應(yīng)體系中，加畢撤去干冰-丙酮浴，使反應(yīng)體系自然升溫至室溫，攪拌過液。薄層色譜跟蹤至原料消失，過濾，所得固體用水洗3次即得到標(biāo)題產(chǎn)物乙酸(5-氟-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-氨基甲酰萄-甲酯9e(562mg，灰色固體)，產(chǎn)率70.4%。MS:265.3(M-l)。第五步N-(5-氟-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-基)-2-羥基-乙酰胺室溫下，將乙酸(5-氟-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-氨基甲?；?-甲酯9e(58mg，0.22mmol)攪拌下溶解于1ml甲醇中，加入1ml水和氫氧化鈉(15mg，0.375mmol)，加畢，繼續(xù)攪拌1小時(shí)。薄層色譜跟蹤至原料消失，停止反應(yīng)。反應(yīng)液過濾，所得固體用水洗3次,干燥即得到標(biāo)題產(chǎn)物^(5-氟-2-氧代-2，3-二氫-111-吲哚-6-基)-2-羥基-乙酰胺9f(46mg,灰白色固體)，產(chǎn)率93.8%。MS:223.7(M-l)。第六步(S，Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5，6，7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-亞甲基]-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-基卜2-羥基-乙酰胺室溫下，將(3)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6，7-四氫-111-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛5f(40mg，0.125mmol)攪拌下溶解于2ml乙醇中，加入N-(5-氟-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-基)-2-羥基-乙酰胺9f(25.1mg，0.112mmol)，加畢攪拌至溶解。向反應(yīng)液中加入六氫吡啶(50ul，0.5mmo1)，加畢，反應(yīng)體系于80'C油浴中避光攪拌2小時(shí)。薄層色譜監(jiān)測(cè)反應(yīng)至原料基本消失，停止反應(yīng)。撤去油浴，反應(yīng)體系溫度自然降至室溫，有大量固體析出，抽濾得到標(biāo)題產(chǎn)物(S，Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-亞甲萄-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-基卜2-羥基-乙酰胺9(51mg，黃色固體)，產(chǎn)率80%。MSm/z(ESI):528.3(M+l)。實(shí)施例10(S,Z)-2-[5-氟-6-(4-氟-芐氨基)-2-氧代-l,2-二氫』引哚-3-次甲基]-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5，6,7-四氫-卩比咯并[3，2《]吡啶-4-酮<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula>第一步5-氟-6-(4-氟-節(jié)氨基)-l,3-二氫』引哚-2-酮室溫下，將5-氟-6-氨基-l，3-二氫-2-吲哚酮9d(2.26g，13.6mmol)攪拌下溶解于40ml乙醇中，用冰浴將上述溶液冷卻至0'C，加入4-氟-苯甲醛(1.5ml,13.6mmol)，加畢室溫?cái)嚢?小時(shí)。加入四氫硼酸鈉(1.08g，28.5mmol)，回流18小時(shí)，自然冷卻至室溫。加入冰水，有大量固體析出，抽濾，濾餅用水洗滌(50mlX3)后經(jīng)柱層析得到標(biāo)題產(chǎn)物5-氟-6-(4-氟-節(jié)氨基)-l,3-二氫』引哚-2-酮10a(1.67g，白色固體)，產(chǎn)率45%。MSm/z(ESI):275(M+l)。第二步(S，Z)-2-[5-氟-6-(4-氟-芐氨基)-2-氧代-l,2-二氫-卩引哚-3-次甲基]-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1，5，6，7-四氫-吡咯并[3,2《]吡啶-4-酮室溫下，將(3)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6,7-四氫-11^-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛5f(40mg，0.125mmol)攪拌下溶解于2ml乙醇中，加入5-氟-6-(4-氟-芐氨基)-l,3-二氫-卩引哚-2-酮10a(30.7mg，0.112mmo1)，加畢，攪拌至溶解。向反應(yīng)液中加入哌啶(0.05ml，0.5mmo1)，加畢反應(yīng)液于油浴中加熱回流2小時(shí)，薄層色譜表明原料反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。反應(yīng)液自然冷卻至室溫后減壓抽濾，所得固體即為標(biāo)題產(chǎn)物(5，。-2-[5-氟-6-(4-氟-芐氨基)-2-氧代-1,2-二氫』引哚-3-次甲基]-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5,6，7-四氫-吡咯并[3，2《]吡啶-4-酮10(18mg，灰色固體)，產(chǎn)率27.8%。MSm/z(ESI):578翠+1)。NMR(400MHz,DMS0-d6)13.503(s,1H,吡咯環(huán)-NH)，10.557(s，1H，卩引哚-NH)，7.584~7.614(d,1H,-ArH)，7.359~7.400(m,2H，-ArH)，7.359(s，1H,-CH=C)，7,140~7.184(t,2H,-ArH)，6.426(m,1H,-NH)，6.039~6.057(d，1H,-ArH),4.684~4.696(d,1H,-OH)，4.346~4.361(d，2H,-C=CCH2N)，3.893(m，1H，-CHO)，3.667~3.713(d,2H,六環(huán)內(nèi)-CH2N)，3.596~3,627(q,1H，六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.564(t,4H，嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.07~3.12(q,1H,六環(huán)外接酰胺氮-012-)，2.9282.961(t,2H,六環(huán)內(nèi)-CH2)，2.468(s，3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.417(m,4H,嗎啡啉環(huán)-CH2N,接嗎啡啉-CH2N)，2.297(m,2H,嗎啡啉環(huán)-CH2N)。實(shí)施例11(S，Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5,6，7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-亞甲基]:氧代-H二氫-lH-吲哚-6-基卜^羥基冬甲基-丙酰胺第一步乙酸l-(5-氟-2-氧代-2，3-二氫-m-吲哚-6-氨基甲?；?-l-甲基-乙酯室溫下，將5-氟-6-氨基-2-吲哚酮9d(410mg，2.47mmol)攪拌下溶解于10ml四氫呋喃中，用干冰-丙酮浴冷卻至-45'C，加入332ul吡啶。將2-乙酰氧基異丁酰氯(423mg，2.71mmol)攪拌下溶解于10ml四氫呋喃中，滴加到上述反應(yīng)液中，加畢撤去干冰-丙酮浴，讓反應(yīng)體系溫度自然升至室溫，攪拌過夜。薄層色譜監(jiān)測(cè)反應(yīng)至原料反應(yīng)完全，將反應(yīng)液過濾，濾餅用水洗滌，所得固體干燥后得到標(biāo)題產(chǎn)物乙酸l-(5-氟-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-氨基甲?；?-l-甲基-乙酯lla(792mg，白色固體)，直接進(jìn)行下步反應(yīng)。MSm/z(ESI):293.7(M-l)。第二步N-(5-氟-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-基)-2-羥基-2-甲基-丙酰胺室溫下，將乙酸l-(5-氟-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-氨基甲酰基)-l-甲基-乙酯lla(2.035g，6.9mmol)攪拌下溶解于20ml甲醇中，加入20ml氫氧化鈉溶液(0.7M)，攪拌4小時(shí)，薄層色譜監(jiān)測(cè)反應(yīng)至原料反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。反應(yīng)液用1M的鹽酸中和后，減壓蒸除溶劑，柱層析后干燥得到標(biāo)題產(chǎn)物]^-(5-氟-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-基)-2-羥基-2-甲基-丙酰胺Ub(900mg，白色固體)，產(chǎn)率59.2%。MSm/z(ESI):253舉+1)。第三步(S，Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5,6,7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-亞甲基]-2-氧代-2，3二氫-lH-吲哚-6-基卜2-羥基-2-甲基-丙酰胺室溫下，將(5)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫-1^1-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛5f(40mg，0.125mmol)，N-(5-氟-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-基)-2-羥基-2-甲基-丙酰胺llb(28.3mg，0.112mmol)和六氫吡咬(50u1,0.5mmol)攪拌下溶解于2ml乙醇中，反應(yīng)體系于80'C油浴中避光攪拌2小時(shí)。薄層色譜監(jiān)測(cè)反應(yīng)至原料基本消失，停止反應(yīng)。撤去油浴，反應(yīng)體系溫度自然降至室溫，有大量固體析出，抽濾得到標(biāo)題產(chǎn)物(8,2)^-{5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5,6，7-四氫-111-吡咯并[3，2-(:]吡啶-2-亞甲基]-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-基)-2-羥基-2-甲基-丙酰胺ll(46mg，黃色固體)，產(chǎn)率74%。MSm/z(ESI):556翠+1)。NMR(400MHz,DMSO-d6)13.656(s,1H,批咯環(huán)-NH)，10.951(s,1H,剛哚-NH)，9.282(s,1H，-NHCO)，7.873~7.901(d,1H,-ArH)，7.778~7.794(m,1H,-ArH)，7.670(s，1H,-CH=C),6.052(s,1H，-OHC(CH3)2)，4.698(d，1H,OH)，3.893(m，1H,-CHO)，3.667~3.713(d，2H,六環(huán)內(nèi)-CH2N)，3.596~3.627(q，1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.557~3.578(t,4H，嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.09~3.125(q,1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，2.961~3.012(t,2H,六環(huán)內(nèi)-CH;0，2.524(s，3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.4122.424(m,4H,嗎啡啉環(huán)-CH2N,接嗎啡啉-CH2N)，2.2972.308(m,2H,嗎啡啉環(huán)-CH2N)，1.376(s，6H，2x-CH3)。實(shí)施例12(S,Z)-2-(7-溴-5-氟-2-氧代-l，2-二氫-吲哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5，6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮第一步7-溴-5-氟-l,3-二氫-卩引哚-2-酮室溫下，將5-氟-l,3-二氫』引哚-2-酮12a(1.5g，0.01mol)攪拌下溶解于15ml乙腈，逐滴加入一溴代丁二酰亞胺(1.8g，0.01mol)，加畢過夜攪拌，有大量固體析出。薄層色譜表明原料反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。反應(yīng)液抽濾得到標(biāo)題產(chǎn)物7-溴-5-氟-l,3-二氫-卩引哚-2-酮12b(2g，灰白色固體)，產(chǎn)率87%。MSm/z(ESI):228.3(M-l)。第二步(S，Z)-2-(7-溴-5-氟-2-氧代-l，2-二氫』引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5,6，7-四氫-吡咯并[3，2-c]吡啶-4-酮室溫下，將(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5，6，7-四氫-111-吡咯并[3,2-(;]吡啶-2-甲醛5f(40mg，0.125mmol)攪拌下溶解于2ml乙醇中，加入7-溴-5-氟-l，3-二氫-卩引哚-2-酮12b(25.8mg，0.112mmol)，加畢，攪拌至溶解，再加入哌啶(0.05ml，0.5mmo1)，加畢反應(yīng)液于油浴中加熱回流2小時(shí)，薄層色譜表明原料反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。反應(yīng)液自然冷卻至室溫后減壓抽濾，所得固體即為標(biāo)題產(chǎn)物(S,Z)-2-(7-溴-5-氟-2-氧代-l，2-二氫-卩引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5，6,7-四氫-吡咯并[3,2《]吡啶-4-酮12(45mg，黃色固體)，產(chǎn)率75.4%。MSm/z(ESI):533.6(M+1)。JHNMR(400MHz,DMSO-d6)13.689(s,1H,吡咯環(huán)-NH)，11.196(s,1H，吲哚-NH)，7.860~7.866(d,1H，-ArH)，7.784(s，1H,-CH=C)，7.232~7.260(m,1H,-ArH)，4.703~4.716(d，1H，-OH)，3.896~2.909(m,1H,-CHO)，3.631~3.747(m，3H,六環(huán)內(nèi)-CH2N，六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.555~3.578(t,4H，嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.097~3.150(q,1H，六環(huán)外接酰胺氮-012-)，3.015~3.048(t，2H,六環(huán)內(nèi)-CH2),2.548(s,3H,吡咯環(huán)-CH3),2.4112.424(m,4H，嗎啡啉環(huán)-CH2N,接嗎啡啉-CH2N)，2.2912.307(m,2H,嗎啡啉環(huán)-CH2N)。實(shí)施例13(S,Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5，6，7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-亞甲基]-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-基H-甲氧基-乙酰胺第一步5-氟-6-甲氧乙酰胺基-2-吲哚酮室溫下，將5-氟-6-氨基-2-吲哚酮9d(2.028g，12.2mmol)攪拌下溶解于30ml四氫呋喃中，加入1.3ml吡啶，用干冰-乙醇浴使反應(yīng)體系冷卻至一50'C左右。將甲氧乙酰氯(1.35g，12.5mmol)攪拌下溶解于20ml四氫呋喃中，滴加到上述反應(yīng)體系中。加畢，撤去干冰-乙醇浴，使反應(yīng)體系溫度自然升至室溫，攪拌過夜。薄層色譜跟蹤至原料消失，過濾，所得固體用水洗滌(10mlX3)，用甲醇重結(jié)晶，即得到標(biāo)題產(chǎn)物5-氟-6-甲氧乙酰胺基-2-吲哚酮13a(1.18g，灰色固體)，產(chǎn)率40.6%。MSm/z(ESI):239.3(M+1)。第二步(S,Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5，6,7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-亞甲基]-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-基h2-甲氧基-乙酰胺室溫下，將(5)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫-111-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛5f(40mg，0.125mmol)攪拌下溶解于2ml乙醇中，加入5-氟-6-甲氧乙酰胺基-2-吲哚酮13a(26.7mg，0.112mmo1)，加畢，攪拌至溶解，再加入哌啶(0.05ml，0.5mmo1)，加畢反應(yīng)液于油浴中加熱回流2小時(shí)，薄層色譜表明原料反應(yīng)完全，停止反應(yīng)。反應(yīng)液自然冷卻至室溫后減壓抽濾，所得固體即為標(biāo)題產(chǎn)物(S，Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5，6，7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-亞甲基]-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-基卜2-甲氧基-乙酰胺13(52mg,黃色固體)，產(chǎn)率85.8%。MSm/z(ESI):542.2(M+l)。NMR(400MHz,DMS0-d6)13.666(s，1H,吡咯環(huán)-NH)，10.919(s,1H,U引哚-NH)，9.313(s，1H,-NHCO),7.841~7.869(d,1H,-ArH)，7.672(s,1H,-CH=C)，7.546~7.562(m,1H,-ArH)，4.703~4.716(d，1H,-OH)，4.062(s,2H,-CH20)，3.896~2.909(m,1H,-CHO)，3.652~3.720(m,3H，六環(huán)內(nèi)-CH2N,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.5563.578(t，4H,嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.404(s,3H,-CH30)，3.097~3.150(q,1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，2.982-3.015(t,2H，六環(huán)內(nèi)-012)，2.523(s,3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.4142.425(m，4H，嗎啡啉環(huán)-CH2N,接嗎啡啉-CH2N)，2.2912.307(m,2H,嗎啡啉環(huán)-CH2N)。實(shí)施例14(R，Z)-2-(7-溴-5-氟-2-氧代-l,2-二氫-吲哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5，6,7-四氫-卩比咯并[3,2-c]吡啶-4-酮<formula>formulaseeoriginaldocumentpage40</formula>重復(fù)本發(fā)明實(shí)施例1第六步反應(yīng)，不同的是使用實(shí)施例1第五歩中所得到的化合物(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛lf和7-溴-5-氟-l,3-二氫』引哚-2-酮12b作原料，得到標(biāo)題產(chǎn)物(R，Z)-2-(7-溴-5-氟-2-氧代-l，2-二氫-吲哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5,6，7-四氫-卩比咯并[3,2-c]吡啶-4-酮14(20mg，黃色固體)，產(chǎn)率40%。MSm/z(ESI):533.6(M+l)。HNMR(400MHz，DMSO-d6)13.691(s,1H,吡咯環(huán)-NH)，11.204(s，1H,H引哚-NH)，7.874-7.85l(d，1H，-ArH)，7.797(s，1H，-CH=C)，7.269~7.243(m,1H,陽ArH)，4.710~4.698(d,1H，-OH)，3"003.890(m，1H,-CHO)，3.759~3.611(m,3H,六環(huán)內(nèi)-CH2N,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.572~3.550(t，4H，嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.148~3.095(q，1H，六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.047~3.014(t,2H,六環(huán)內(nèi)-012)，2.548(s，3H，吡咯環(huán)-CH3)，2.4182.323(m,4H,嗎啡啉環(huán)-CH2N，接嗎啡啉-CH2N)，2.3022.285(m,2H，嗎啡啉環(huán)-CH2N)。實(shí)施例15(R,Z)-2-[5-氟-6-(4-氟-芐氨基)-2-氧代-I，2-二氫-D引哚-3-次甲基]-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5,6,7-四氫-吡咯并[3，2《]吡啶-4-酮<formula>formulaseeoriginaldocumentpage40</formula>重復(fù)本發(fā)明實(shí)施例1第六步反應(yīng)，不同的是使用實(shí)施例1第五步中所得到的化合物(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6，7-四氫-1H-批咯并吡啶-2-甲醛If和5-氟-6-(4-氟-芐氨基)-l,3-二氫』引哚-2-酮10a作原料，得到標(biāo)題產(chǎn)物(R，Z)-2-[5-氟-6-(4-氟-節(jié)氨基)-2-氧代-l，2-二氫』引哚-3-次甲基]-5-(2-羥基_3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5，6,7-四氫-批咯并[3，2《]吡啶-4-酮15(53mg，深紅色固體)，產(chǎn)率65.6%。MSm/z(ESI):57&7(M+1)。'HNMR(400MHz，DMSO-d6)13.504(s，1H，吡咯環(huán)-NH)，10.558(s,1H,d引哚隱NH)，7.614~7.585(d，1H，陽ArH)，7.400~7.379(m，2H，陽ArH)，7.359(s,1H，-CH=C)，7.140-7.191(t，2H，-ArH),6.43l(m，1H,-NH)，6扁6細(xì)(d,1H，-ArH)，4.698~4.686(d,1H,-OH)，4.346~4.361(d,2H，-C=CCH2N)，3.894(m,1H，-CHO)，3.731~3.668(d,2H，六環(huán)內(nèi)-CH2N)，3.644~3.612(q,1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，3.596~3.553(t，4H,嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.135~3.082(q，1H，六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，2.928~2.961(t,2H,六環(huán)內(nèi)-CH2)，2.468(s,3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.419-2.408(m，4H,嗎啡啉環(huán)-CH2N,接嗎啡啉-CH2N)，2.299~2.289(m，2H,嗎啡啉環(huán)-CH2N)。實(shí)施例16(R，Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5，6，7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-亞甲基]-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-基卜2-甲氧基-乙酰胺重復(fù)本發(fā)明實(shí)施例1第六步反應(yīng)，不同的是使用實(shí)施例1第五步中所得到的化合物(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛lf和5-氟-6-甲氧乙酰胺基-2-吲哚酮13a作原料，得到標(biāo)題產(chǎn)物(R,Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-亞甲基]-2-氧代-2,3-二氫-lH-吲哚-6-基卜2-甲氧基-乙酰胺16(60mg，黃色固體)，產(chǎn)率87%。MSm/z(ESI):543翠+1)。&NMR(400MHz，DMS0-d6)13.668(s，1H,吡咯環(huán)-NH)，10.923(s,1H,d引哚－NH)，9.320(s，1H，-NHCO)，7.875~7.847(d，1H，-ArH)，7.678(s,1H,-CH=C)，7.562~7.546(m，1H,-ArH)，4.71卜4.699(d，1H，-OH)，4.063(s，2H，-CH20)，3.729~3.653(m,3H，六環(huán)內(nèi)-CH2N,六環(huán)外接酰胺氮-012-)，3.579~3.556(t,4H，嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.404(s,3H,-CH3O)，2.9833.017(t，2H,六環(huán)內(nèi)-012)，2.525(s,3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.4122.424(m,4H，嗎啡啉環(huán)-CH2N，接嗎啡啉-CH2N)，2.2892.306(m,2H，嗎啡啉環(huán)-CH2N)。實(shí)施例17(R，Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5，6，7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶l亞甲基]-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-基卜l羥基冬甲基-丙酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>重復(fù)本發(fā)明實(shí)施例1第六步反應(yīng)，不同的是使用實(shí)施例l第五步中所得到的化合物(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5，6,7-四氫-lH-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛lf和N-(5-氟-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-基)-2-羥基-2-甲基-丙酰胺lib作原料，得到標(biāo)題產(chǎn)物(R,Z)-N-(5-氟-3-[5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6，7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-亞甲基]-2-氧代-2，3-二氫-lH-吲哚-6-基}-2-輕基-2-甲基-丙酰胺17(7111^，黃色固體)，產(chǎn)率82%。MSm/z(ESI》556.2(M+l)。NMR(400MHz，DMSO-d6)13.658(s，1H,吡咯環(huán)-NH)，10.954(s,1H,口引哚-NH)，9.289(s，1H,-NHCO)，7.875~7.903(d，1H,-ArH)，7.796~7.780(m,1H,-ArH)，7.672(s,1H,-CH=C)，6.055(s，1H,-OHC(CH3)2)，4.701(d,1H,OH)，3.722(m,1H，-CHO)，3.655~3.691(d,2H，六環(huán)內(nèi)-CH2N)，3.639(q，1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH;r)，3.559~3.580(t,4H，嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，2鄰63.019(t，2H,六環(huán)內(nèi)-CH;O，2.526(s,3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.4152.425(m,4H,嗎啡啉環(huán)-CH2N,接嗎啡啉-CH2N)，2.299~2.309(m，2H,嗎啡啉環(huán)-CH2N)，1.378(s,6H，2x-CH3)。實(shí)施例18(R，Z)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-2-(2-氧代-4-嘧啶-4-基-l，2-二氫』引哚-3-次甲基)-1，5，6,7-四氫-吡咯并[3,2《]吡啶-4-酮<formula>formulaseeoriginaldocumentpage43</formula>重復(fù)本發(fā)明實(shí)施例1第六步反應(yīng)，不同的是使用實(shí)施例1第五步中所得到的化合物(R)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉斗基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5,6,7-四氫-H-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛lf和4-嘧啶-4-基-l，3-二氫』引哚-2-酮作原料，得到標(biāo)題產(chǎn)物(R，Z)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-2-(2-氧代-4-嘧啶-4-基-l，2-二氫-H引哚-3-次甲基)-1,5,6,7-四氫-吡咯并[3，2-0|吡啶-4-酮18(58mg,黃色固體)，產(chǎn)率72.5%。MSm/z(ESI):514.2(M+l)。'H畫R(400MHz，DMSO-d6)13.573(s,1H,吡咯環(huán)-NH)，11.149(s，1H,B引哚-NH)，7.7427.770(d，2H,吡啶環(huán)N-CH-)，7.5007.513(d,2H，吡啶環(huán)-CH^，7.2267.265(t，lH,-ArH)，6.9766.995(t，lH，-ArH),6.8136,834(d,2H,-CH=C,-ArH)，4.6664.677(d，1H，-OH)，3.854(m,1H,-CHO)，3,5413.688(m,7H，六環(huán)內(nèi)-CH2N,六環(huán)外接酰胺氮-CH2，嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.0633.115(q，1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，2.9462.979(t,2H，六環(huán)內(nèi)-CH2)，2.394(m,4H,嗎啡啉環(huán)-CH2N，接嗎啡啉-CH2N)，2.2642.278(d,2H,嗎啡啉環(huán)-CH2N)，1.8101.822(s,3H,吡咯環(huán)-CH3)。實(shí)施例19(S,Z)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-2-(5-甲氧基-2-氧代-l,2-二氫』引哚-3-亞甲基)-3-甲基-l,5,6,7-四氫-吡咯并[3，2-c]吡啶-4-酮<formula>formulaseeoriginaldocumentpage44</formula>19重復(fù)本發(fā)明實(shí)施例5第六步反應(yīng)，不同的是使用實(shí)施例5第五步中所得到的化合物(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6,7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛5f和5-甲氧基-l，3-二氫』引哚-2-酮作原料，得到標(biāo)題產(chǎn)物(S,Z)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-2-(5-甲氧基-2-氧代-l,2-二氫』引哚-3-亞甲基)-3-甲基-l，5，6,7-四氫-吡咯并[3，2-c]吡啶-4-酮19(40mg，橙紅色固體)，產(chǎn)率76.6%。MSm/z(ESI):467.2(M+l)。畫R(400MHz，DMSO-d6)13.846(s,1H,吡咯環(huán)-NH)，10.742(s,1H，卩引哚-NH)，7.696(s，H,-CH=C)'7.490~7.495(m,1H,-ArH),6.728~6.792(m，2H,-ArH)，4.699~4.711(d,m,-OH)，3.896~3.909(m，1H，陽CHO)，3.783(s,3H,-CH30)，3.689~3.732(m,2H,六環(huán)內(nèi)-CH2N)，3.654(m,1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH;O，3.558~3.580(t,4H,嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.097-3.150(q,1H，六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，2.978-3.01l(t，2H,六環(huán)內(nèi)-CH2)，2.543(s,3H，吡咯環(huán)-CH3)，2.4142.425(m,4H，嗎啡啉環(huán)-CH2N，接嗎啡啉-CH2N)，2.299~2308(m,2H，嗎啡啉環(huán)-CH2N)。實(shí)施例20(8,2)-2-[4-(2,6-二氟-苯基)-2-氧代-1，2-二氫』引哚-3-亞甲基]-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5,6,7-四氫-吡咯并[3，2-cI吡啶-4-酮<formula>formulaseeoriginaldocumentpage44</formula>重復(fù)本發(fā)明實(shí)施例5第六步反應(yīng)，不同的是使用實(shí)施例5第五步中所得到的化合物(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5,6,7-四氫-lH-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛5f和4-(2，6-二氟-苯基)-l,3-二氫』引哚-2-酮作原料，得到標(biāo)題產(chǎn)物(S，Z)-2-[4-(2，6-二氟-苯基)-2-氧代-l,2-二氫』引哚-3-亞甲基]-5-(2-羥基-3-嗎啡啉4-基-丙基)-3-甲基-l，5,6，7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮20(52mg，黃色固體)，產(chǎn)率84.7%。MSm/z(ESI):549.3(M+l)。'HNMR(400MHz，DMSO-d6)13.604(s，1H，吡咯環(huán)-NH)，U.171(s,1H,吲哚-NH)，7.646~7.666(m,1H，-ArH)，7.338~7.380(m，2H，-ArH)，7.2447.282(m,1H,-ArH)，7.008~7.027(m,1H,-ArH)，6.900~6.919(m,1H，-ArH)，6.657(s,1H,-CH=C)，4.672~4.683(d，1H，-OH)，3.855~3.868(m，1H,-CHO)，3.541~3.673(m，7H,六環(huán)內(nèi)-CH2N,六環(huán)外接酰胺氮-CH2，嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.077~3.130(q,1H，六環(huán)外接酰胺氮-CH2-)，2.955~2.988(t，2H,六環(huán)內(nèi)-CH2)，2.394(m,4H，嗎啡啉環(huán)-CH2N,接嗎啡啉-CH2N)，2.2662.280(m，2H,嗎啡啉環(huán)-CH2N)，1.856(s,3H，吡咯環(huán)-CH3)。實(shí)施例21(3義)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-2-[5-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-1,2-二氫-噴哚-3-亞甲基]-3-甲基-1，5,6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮重復(fù)本發(fā)明實(shí)施例5第六步反應(yīng)，不同的是使用實(shí)施例5第五步中所得到的化合物(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氫-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-甲醛5f和5-(4-甲氧基-苯基)-l，3-二氫』引哚-2-酮作原料，得到標(biāo)題產(chǎn)物(S,Z)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-2-[5-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-l，2-二氫-H引哚-3-亞甲基]-3-甲基-1，5,6，7-四氫-吡咯并[3,2-0]吡啶-4-酮21(53mg，橙黃色固體)，產(chǎn)率87.2%。MSm/z(ESI):543.3(M+l)。雨R(400MHz,DMSO-d6)13.708(s,1H,吡咯環(huán)-NH)，11.004(s，1H，吲哚陽NH)，7.321~7.852(m,1H,-ArH)，7.673(s,1H,-CH=C)，7.582~7.604(m,2H,-ArH)，7.254~7.277(m,1H，-ArH)，7.070(m,1H，-ArH)，7.016~7.038(d,2H，-ArH)，4.704~4.716(d,1H,-OH)，3.855~3.868(m,1H,-CHO)，3扁(s，3H，-CH30)，3.659~3.728(m,3H,六環(huán)內(nèi)-CH2N，六環(huán)外接酰胺氮-CH2)，3.559~3.581(t，4H,嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.077~3.130(q，1H,六環(huán)外接酰胺氮-CH;r)，2.990~3.024(t,2H,六環(huán)內(nèi)-CH2)，2.539(s,3H,吡咯環(huán)-013)，2.415~2.427(m，4H,嗎啡啉環(huán)-CH2N，接嗎啡啉-CH2N)，2.2942.311(m,2H,嗎啡啉環(huán)-CH2N)。實(shí)施例22(S,Z)-2-(4-溴-2-氧代-l，2-二氫-卩引哚-3-亞甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l，5,6，7-四氫-吡咯并[3，2-c]吡啶-4-酮重復(fù)本發(fā)明實(shí)施例5第六步反應(yīng)，不同的是使用實(shí)施例5第五步中所得到的化合物(S)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-4-氧代-4，5，6,7-四氫-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-2-甲醛5f和4-溴-]，3-二氫』引哚-2-酮作原料，得到標(biāo)題產(chǎn)物(S,Z)-2-(4-溴-2-氧代-1，2-二氫』引哚-3-亞甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5,6，7-四氫-P比咯并[3，2-c]吡啶-4-酮22(43mg，橙黃色固體)，產(chǎn)率74.5%。MSm/z(ESI):515.2(M+l)。NMR(400MHz,DMSO誦d6)13.670(s,1H,吡咯環(huán)-NH),11.189(s，1H，吲哚-NH)'8.562(s，1H,-CH=C)，7.201~7.221(m，1H,-ArH)，7.042~7.081(m，1H,-ArH)，6.920~6.938(m,1H,-ArH)，4.709~4.721(d，1H，-OH)，3.902~3.915(m,1H,-CH0)，3.631~3.745(m,3H,六環(huán)內(nèi)-CH2N,六環(huán)外接酰胺氮-012)，3.558~3.580(t,4H,嗎啡啉環(huán)2x-CH20)，3.090~3.143(q,1H,六環(huán)外接酰胺氮-012-)，3.011~3.035(t,2H,六環(huán)內(nèi)-CH2)，2.479(s，3H,吡咯環(huán)-CH3)，2.413~2.426(m,4H,嗎啡啉環(huán)-CH2N,接嗎啡啉-CH2N)，2.2932.311(m，2H,嗎啡啉環(huán)-CH2N)。實(shí)施例23(R，Z)-2-(5-氟-2-氧代-l，2-二氫』引噪-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5,6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮馬來酸鹽室溫下，將(R,Z)-2-(5-氟-2-氧代-l，2-二氫』引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5，6，7-四氫-吡咯并[3,2《]吡啶-4-酮1(709mg，1.562mmol)和順丁烯二酸(217mg，1.874mmol)攪拌下溶解于150ml甲醇中，攪拌均勻后，混合液于4(TC油浴中加熱攪拌20分鐘。反應(yīng)液減壓抽濾，濾液減壓濃縮后加入50ml乙腈，加畢，加熱回流20分鐘。反應(yīng)混合物冷卻至室溫后減壓抽濾得到標(biāo)題產(chǎn)物(R，Z)-2-(5-氟-2-氧代-l,2-二氫-卩引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5,6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮馬來酸鹽23(811mg，黃色固體)，產(chǎn)率91.1%MSm/z(ESI):455翠+1)。實(shí)施例24(R,Z)-2-(5-氟-2-氧代-l，2-二氫-卩引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-l,5，6,7-四氫-吡咯并[3,2-c]吡啶-4-酮蘋果酸鹽室溫下，將2-羥基-丁二酸(231mg，1.72mmol)攪拌下溶解于100ml甲醇中，再分批加入(R，Z)-2-(5-氟-2-氧代-l,2-二氫』引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1，5,6,7-四氫-卩比咯并[3,2《]嘧啶-4-酮1(560mg，1.233mmol)，200ml甲醇和100ml水。加畢，反應(yīng)體系于50'C油浴中避光加熱攪拌至澄清，過濾，濾液減壓下蒸除溶劑得到黃色固體。向所得固體中加入100ml乙腈，避光加熱回流1.5小時(shí)，撤去油浴，反應(yīng)體系溫度自然冷卻至室溫，過濾得到標(biāo)題產(chǎn)物(11，2)-2-(5-氟-2-氧代-1，2-二氫』引哚-3-次甲基)-5-(2-羥基-3-嗎啡啉-4-基-丙基)-3-甲基-1,5，6,7-四氫-卩比咯并[3，2-c]嘧啶-4-酮蘋果酸鹽24(718mg，黃色固體)，產(chǎn)率99%。MSm/z(ESI):455.2(M+l)。測(cè)試?yán)飳W(xué)評(píng)價(jià)例l:抑制細(xì)胞增殖測(cè)試下面的體外試驗(yàn)是用來測(cè)定本發(fā)明化合物對(duì)于人類腫瘤細(xì)胞HUVECVEGFR高表達(dá)的細(xì)胞株抑制增殖活性。下面所述的體外細(xì)胞試驗(yàn)可確定受試化合物的對(duì)高表達(dá)VEGFR的腫瘤細(xì)胞的抗血管生成活性和抑制增殖活性，其活性可用IC50值來表示。此類試驗(yàn)的一般方案如下首先選擇高表達(dá)VEGFR的人類腫瘤細(xì)胞，以適宜細(xì)胞濃度下(exp5000個(gè)細(xì)胞/mlmedium)接種在96孔培養(yǎng)板上，然后將細(xì)胞在二氧化碳恒溫箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，當(dāng)它們生長至85%匯合，更換培養(yǎng)基為加有一系列濃度梯度(一般6到7個(gè)濃度)受試化合物溶液的培養(yǎng)基，將培養(yǎng)板重新放回培養(yǎng)箱，連續(xù)培養(yǎng)72個(gè)小時(shí)。72小時(shí)后，可用sulforhodamineB(SRB)方法進(jìn)行測(cè)試化合物對(duì)于抑制細(xì)胞增殖活性。ICso值可通過一系列不同濃度下，受試化合物對(duì)于細(xì)胞的抑制數(shù)值進(jìn)行計(jì)算。材料和方法a.二甲基亞砜(Sinophmachemicalreagentcompany,目錄T20050806號(hào))b.HUVEC細(xì)胞(購于Instituteofbiochemistryandcellbiology)c.Falcon100mm細(xì)胞培養(yǎng)板(BatonDickisonLabware,BatonDickisonandcompany,目錄18677號(hào))d.corning96孔培養(yǎng)板(CorningInco卬orated,目錄3599號(hào))e.Fisher移液管(Fisherscientific,目錄03-692-164號(hào))f.DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)基(Gibco,目錄12400-024號(hào))g.澳大利亞胎牛血清(Gibco，目錄10099-141號(hào))h.磷酸鹽緩沖鹽水(Gibco,目錄10010-072號(hào))i.0.25%胰島素-EDTA(Gibco，目錄25200-056號(hào))j.SulforhodamineB(Sigma,目錄3520-42-1號(hào))k.醋酸(Sinophmachemicalreagentcompany,目錄T20060508號(hào))L三氯醋酸(Sinophmachemicalreagentcompany,目錄T20060305號(hào))m.Tris堿(Amresco，目錄0826號(hào))n.II級(jí)A/B3型生物學(xué)安全工作櫥(ThermoForma目錄.HB0053-03號(hào))0.系列II水套式二氧化碳培養(yǎng)箱(ThermoForma模型3111)p.離心機(jī)(FisherScientificMarathon8k,目錄0027-02號(hào))q.Novastar板讀取器(BMGLabtech,目錄700-0081號(hào))r.定軌搖床(Qilinbeier，目錄TS-1號(hào))方案下面的方案用來測(cè)試本發(fā)明受試化合物對(duì)于HUVEC細(xì)胞的抑制細(xì)胞增殖ICs。值。1.將HUVEC細(xì)胞殖于100mmcorning培養(yǎng)板在生長基(以DMEM/F12+10。/。胎牛血清為培養(yǎng)液)中進(jìn)行培養(yǎng)(37°C,5%C02)，直至細(xì)胞充分匯合；2.在100mm培養(yǎng)板中用胎牛血清洗滌HUVEC細(xì)胞，以Tyrpsin消化細(xì)胞后，再將細(xì)胞接種在corning96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，濃度為50000cells/ml，每個(gè)板空6孔，作為對(duì)照孔.；3.在37'C,5。/。C02條件下，將細(xì)胞在96孔板中培養(yǎng)，直至達(dá)到約85%匯合；4.用DMSO溶解受試化合物，配置20mM母液，后用DMSO稀釋母液，得到一系列濃度的受試化合物的溶液，即2mM,1mM,0.2mM,20|iM，2^M,0.25.使用細(xì)胞培養(yǎng)基(DMEM/F12+10%胎牛血清為培養(yǎng)液)稀釋上面所配置的化合物溶液。每個(gè)DMSO系列濃度化合物溶液稀釋20倍，每次在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入5^1DMSO化合物溶液和95nl培養(yǎng)液，確保HUVEC細(xì)胞暴露在DMSO溶液中的濃度不超過0.5%，用渦旋混合，；6.當(dāng)HUVEC細(xì)胞貼壁，生長達(dá)到85。/。匯合后，將培養(yǎng)基換為加有DMEM/F12+10%胎牛血清培養(yǎng)液的新培養(yǎng)基，每孔中再加入180pl培養(yǎng)液和20)id在第五步中所制備的受試化合物溶液。陰性對(duì)照細(xì)胞組，加入含有0.5%DMSO的20pi培養(yǎng)液，這樣HUVEC細(xì)胞暴露在受試化合物溶液中的最終濃度為100105^M,1^M,0.1一，0.01nM，and0細(xì)一；7.將培養(yǎng)板放入恒溫箱內(nèi)，在37'C，5n/。C02條件下，連續(xù)培養(yǎng)72小時(shí)；8.72小時(shí)后，將培養(yǎng)板從恒溫箱中轉(zhuǎn)移到無菌工作室；9.將試藥級(jí)純水加入到TCA中制備固定劑(50%三氯醋酸-TCA)，將細(xì)胞慢慢地分層放在50^冷TCA溶液中；10.在4'C下，培養(yǎng)1小時(shí)，后用水洗滌數(shù)次以除去TCA、血清蛋白等。培養(yǎng)板在空氣中干燥，存儲(chǔ)待用。空白背景光學(xué)密度值的測(cè)定是在沒有細(xì)胞生長的培養(yǎng)基中溫育培養(yǎng)所得的數(shù)值。11.用10%醋酸溶液制備0.4%SulforhodamineB溶液，并向每孔中加入50plsulforhodamineB溶液；12.細(xì)胞著色30分鐘；13.制備10%醋酸洗漆溶液。當(dāng)著色將要完畢時(shí)，棄去著色劑，用10%的醋酸溶液快速?zèng)_洗細(xì)胞。重復(fù)上述的操作直至著色劑洗凈為止，盡量減少?zèng)_洗次數(shù)以減少與蛋白結(jié)合的著色劑的去吸附。沖洗完畢后，將培養(yǎng)板在空氣中干燥；14.混合的著色劑溶解在一定體積的SulforhodamineB中，增溶溶液(10mMTris)與培養(yǎng)基原體積相同，將培養(yǎng)板在室溫下放置5分鐘，用搖床緩慢攪拌加快與染料的混合；15.用分光光度測(cè)量，在波長565nm下讀取吸光度值。吸光度數(shù)值為565nm下吸光度減去690nm下96孔板背景吸光度所得的數(shù)值；16.使用如下方法計(jì)算抑制率比值-IR=lOOx(對(duì)照組吸光度值-用藥組吸光度值)/對(duì)照組吸光度值％.IC50值可通過不同濃度下化合物抑制率比值計(jì)算得到。本發(fā)明化合物的活性本發(fā)明化合物的生化學(xué)活性通過以上的試驗(yàn)進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得的IC50值見下表。<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>200.01例2:VEGF-R2激酶活性測(cè)定本試驗(yàn)采用酶聯(lián)吸附免疫測(cè)定法(ELISA)測(cè)定重組人類VEGF-R2蛋白體外激酶活性。材料與試劑a.洗滌緩沖液(PBS-T緩沖液)lxPBS(137mMNaCl、2.7mMKC1、4.3mMNa2HP04、1.4mMKH2P04，調(diào)pH至7.2)和0.05%Tween-20b.1X牛血清白蛋白(BSA，Calbiochem#136593)PBS-T緩沖液c.中止反應(yīng)緩沖液50mMEDTA,pH8.0d.DELFIA⑧銪標(biāo)記抗鼠IgG(PerkinElmerLifeSciences#AD0124)e.DELFIA⑧信號(hào)倍增液(PerkinElmerLifeSciences#1244-105)f.DELFIAStreptavidin包96孔黃板(PerkinElmerLifeSciences#AAAND-0005)g.重組人類VEGF-R2激酶(50mMTris-HCl(pH8.0)，100mMNaCl，5mMDTT,15mM谷?；装滨８拾彼岷?0。/。甘油(Cel1signalingtechnology#7787)h.10mMATP溶液(Cellsignalingtechnology#9804)i.Biotin-GastrinPrecursor(Tyr87)Peptide(Cellsignalingtechnology#1310)j.Phospho-TyrosineMousemAb(P-Tyr-100)(Cellsignalingtechnology#9411)k.HTScanTM酪氨酸激酶緩沖液(4x)lx激酶緩沖液60mMHEPES5mMMgCl25mMMnCl23nMNa3V04(Cellsignalingtechnology#9805)1.1.25MDTT(lOOOx)(Cellsignalingtechnology)方案使用如下方案進(jìn)行試驗(yàn).-1.用DMSO稀釋受試化合物至所需最終濃度，在每個(gè)試驗(yàn)中加入lpl待測(cè)化合物、一個(gè)陰性對(duì)照和空白對(duì)照(均不接受任何受試化合物)；2.用dH201:l稀釋6底物蛋白(Tyr87),并在每個(gè)測(cè)試中加入15pi;3.將VEGF-R2酶從-80。C直接轉(zhuǎn)移到冰上，酶解凍在冰上；4.取2.2ngVEGF-R2酶到每個(gè)測(cè)試中；5.加入10piDTT(1.25M)到2.5ml4xHTScan酪氨酸激酶緩沖液(240mMHEPESpH7.5,20mMMgCI2,20mMMnCI2,12pMNa3V04)中，制得DTT/激酶緩沖液；6.轉(zhuǎn)移0.75mlDTT/激酶緩沖液到每個(gè)每個(gè)測(cè)試中，制得4x反應(yīng)混合液，并在每個(gè)測(cè)試中加入7.5pl4x反應(yīng)液；7.加入2plATP(10mM)至498laldH20中，并在每個(gè)測(cè)試中加入7.530pl反應(yīng)最終測(cè)試條件為60mMHEPESpH7.55mMMgCl25mMMnCl23nMNa3V041.25mMDTT10一ATP1.5|iM多肽底物22ngVEGF-R2激酶8.在25。C下，將反應(yīng)管溫育30分鐘；9.每個(gè)測(cè)試中加入30W反應(yīng)中止緩沖液(50mMEDTA,pH8.0)中止反應(yīng)；10.在96孔streptavidin包被培養(yǎng)板每孔中加入25pi反應(yīng)液和75^dH20，在室溫下，振搖60分鐘；11.每孔用200plPBS-T緩沖液洗滌3次，在紙巾上輕拍以除去剩余的液體；12.用1%牛血清白蛋白PBS-T緩沖液1:1000稀釋主要抗體Phospho-酪氨酸mAb(P-Tyr-lOO)，并在每孔中加入100^稀釋的p-Tyr-100抗體；13.室溫下，振搖溫育60分鐘；14.按第11步所述方法進(jìn)行洗滌；15.用1%牛血清白蛋白PBS-T緩沖液1:500稀釋銪標(biāo)記的抗鼠IgG，并在每個(gè)孔中加入100nl稀釋的抗體；16.室溫下，振搖溫育30分鐘；17.每孔用PBS-T緩沖液200^d洗滌5次，在紙巾上輕拍以除去剩余的液體；18.每孔中加入100pDELFIA⑧信號(hào)倍增液；19.室溫下，振搖溫育5分鐘；20.在波長615nm下，用合適的時(shí)間分辨板讀取器讀取熒光強(qiáng)度。計(jì)算抑制率比值IR(%)=100-100*(X-B)/(N-B)X-受試化合物吸光度N-陽性對(duì)照B-空白IC50值通過受測(cè)化合物一系列濃度梯度下的IR值來計(jì)算。本發(fā)明化合物的活性本發(fā)明化合物的生化學(xué)活性通過以上的試驗(yàn)進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得的ICso值見下表。實(shí)施例編號(hào)<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>權(quán)利要求1.一種由通式(I)表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽其中R1、R2、R3、R4分別選自氫原子、鹵素、烷基、芳基、雜芳基、-OR5、-O[CH2CH2O]rR7、-NR5R6、-COR5或-NR5COR6，其中芳基、雜芳基進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自烷基、烷氧基或者鹵素的取代基所取代；R5和R6各自分別選自氫原子或烷基，其中烷基進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自芳基、雜芳基、鹵代芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、羧酸或者羧酸酯的取代基所取代；R7是氫原子或者烷基；r是1～6。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的吡咯并六元雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中包括3.—種藥物組合物，其包含藥物有效劑量的如權(quán)利要求1或2任何一項(xiàng)所述的批咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽，及藥學(xué)上可接受的載體。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中所述的藥學(xué)上可接受的鹽為化合物與選自以下的酸形成的鹽蘋果酸、乳酸、馬來酸、鹽酸、甲磺酸、硫酸、磷酸、梓檬酸、酒石酸、乙酸或三氟乙酸。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中所述的酸為蘋果酸或馬來酸。6.如權(quán)利要求1所述的吡咯并六元雜環(huán)輕基嗎啡啉化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的制備方法，該方法包括以下步驟氮?dú)夥障?，旋光化合物嗎啡啉氨基雙取代異丙醇(Ia)在1-羥基苯并三唑和N-乙基-N'-(二甲氨基丙基)-碳二亞胺作用下與5-羧甲基-3-甲基-lH-吡咯-2，4-二羥酸2-叔丁酯4-乙酯在乙腈中加熱得到手性的吡咯酰胺二羧酸二酯(Ib);<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(Ia)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(lb)氬氣氛下，手性吡咯酰胺二羧酸二酯(Ib)在乙醇中與鹽酸加熱回流得到旋光吡咯酰胺乙酯(IC);<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(lb)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(Ic)進(jìn)一步，旋光吡咯酰胺乙酯(Ic)在無水四氫呋喃中和硼垸加熱回流選擇性還原得到手性取代吡咯乙酯(Id);<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(Ic)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(Id)接下來，在氬氣氛下，手性取代吡咯乙酯(Id)在乙二醇中和一水合氫氧化鋰加熱回流，得到環(huán)合產(chǎn)物旋光吡咯并六元N雜環(huán)(Ie);<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(Id)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(Ie)室溫下，旋光吡咯并六元N雜環(huán)(Ie)在無水二氯甲烷中與三氯氧磷和N'N-二甲基甲酰胺發(fā)生甲?；磻?yīng)，生成旋光吡咯并六元N雜環(huán)甲醛(If);<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(Ie)v最后，旋光吡咯并六元N雜環(huán)甲醛(If)在堿(如三乙胺，哌啶)存在下與不同的吲哚酮加熱212小時(shí)即得到通式(I)所示的目標(biāo)化合物手性的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉衍生物；7.—種調(diào)節(jié)蛋白激酶催化活性的方法，該方法包括將所述的蛋白激酶與權(quán)利要求15中任何一項(xiàng)所述的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽接觸。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述蛋白激酶選自受體酪氨酸激酶、非受體酪氨酸激酶或絲氨酸-蘇氨酸激酶。9.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物在制備治療與蛋白質(zhì)激酶有關(guān)的疾病的藥物中的用途。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中所述與蛋白質(zhì)激酶有關(guān)的疾病選自與VEGFR-2，EGFR,HER-2，HER-3，HER陽4，PDGFR,c-Kit,c-Met,FGFR或Flt3相關(guān)的疾病。11.一種調(diào)節(jié)蛋白激酶催化活性的方法，其中包括將所述的蛋白激酶與權(quán)利要求3所述的組合物接觸。全文摘要本發(fā)明涉及一種通式(I)所示新的吡咯并六元N雜環(huán)羥基嗎啡啉類衍生物或其鹽、其制備方法及含有它們的藥物組合物和它們作為治療劑特別是作為蛋白激酶抑制劑的用途，其中通式(I)中的各取代基同說明書中的定義相同。文檔編號(hào)A61K31/5377GK101367801SQ20071014187公開日2009年2月18日申請(qǐng)日期2007年8月15日優(yōu)先權(quán)日2007年8月15日發(fā)明者楊家亮,蘇熠東,趙富強(qiáng),鄧炳初申請(qǐng)人:上海恒瑞醫(yī)藥有限公司