專利名稱：吡唑或三唑化合物及其用于制備治療體細(xì)胞突變相關(guān)疾病的藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過給藥本發(fā)明的化合物或組合物來治療或預(yù)防與mRNA中的無義突變相關(guān)的疾病的方法、化合物和組合物。更具體地，本發(fā)明涉及用于抑制與mRNA中的無義突變相關(guān)的翻譯提前終止的方法、化合物和組合物。
背景技術(shù)：
細(xì)胞內(nèi)的基因表達(dá)取決于依次進(jìn)行的轉(zhuǎn)錄和翻譯過程。這些過程一起從其相應(yīng)基因的核苷酸序列產(chǎn)生蛋白。
轉(zhuǎn)錄包括通過RNA聚合酶由DNA合成mRNA。轉(zhuǎn)錄從基因的啟動子區(qū)開始并繼續(xù)進(jìn)行直到誘導(dǎo)終止，例如通過在初生態(tài)RNA中形成莖-環(huán)(stem-loop)結(jié)構(gòu)或者結(jié)合ρ基因產(chǎn)物。
然后，蛋白是由mRNA在tRNA、tRNA合成酶及多種其他種類蛋白和RNA的幫助下在核糖體上進(jìn)行翻譯過程而產(chǎn)生的。翻譯包括三個(gè)階段起始、延長和終止。翻譯是通過形成起始復(fù)合物而起始的，所述起始復(fù)合物由識別mRNA上的指示翻譯機(jī)器開始在mRNA上進(jìn)行翻譯的信號的蛋白因子、mRNA、tRNA、輔助因子和核糖體亞單位組成。一旦形成起始復(fù)合物，通過由核糖體以及tRNA和tRNA合成酶的肽基轉(zhuǎn)移酶活性來重復(fù)增加氨基酸，發(fā)生多肽鏈增長。核糖體A位點(diǎn)的三個(gè)終止密碼子(UAA、UAG、UGA)之一的存在發(fā)出信號使多肽鏈釋放因子(RFs)結(jié)合并識別終止信號。然后，位于核糖體P位點(diǎn)的tRNA的3′核苷酸與初生多肽鏈之間的酯鍵水解，釋放出完成的多肽鏈，且所述核糖體亞單位循環(huán)用于又一輪翻譯。
其中堿基數(shù)目發(fā)生改變的DNA序列的突變歸類為插入或缺失突變(例如，移碼突變)并且使大部分基因組破裂。將一個(gè)堿基變?yōu)榱硪粋€(gè)堿基并導(dǎo)致氨基酸替代的DNA突變標(biāo)記為錯義突變。堿基替代細(xì)分為轉(zhuǎn)換類(一個(gè)嘌呤轉(zhuǎn)換為另一嘌呤，或者一個(gè)嘧啶轉(zhuǎn)換為另一嘧啶)和顛換類(嘌呤顛換為嘧啶，或者嘧啶顛換為嘌呤)。
轉(zhuǎn)換突變和顛換突變可以導(dǎo)致無義突變，將氨基酸密碼子變?yōu)槿N終止密碼子之一。這些提前終止密碼子可以使翻譯提前終止從而在細(xì)胞中產(chǎn)生異常的蛋白。必需基因中的無義突變是致命的并且還可以導(dǎo)致許多人類疾病如癌癥、溶酶體貯積癥、肌營養(yǎng)不良、囊性纖維化病和血友病等。
在人類癌癥中，人類p53基因是最常見的突變基因(Zambetti，G.P.和Levine，A.，F(xiàn)ASEB 7855-865(1993))。在遺傳性癌癥和自發(fā)性癌癥中均發(fā)現(xiàn)，超過50種不同的人類癌癥含有p53突變且在全部人類癌癥的50-55％發(fā)生該基因的突變(Hollstein，M.等人，Nucleic Acids Res.223551-55(1994)；International Agency for Research on Cancer(IARC)database)。大約70％的結(jié)腸直腸癌、50％的肺癌和40％的乳腺癌含有突變型p53(Koshland，D.，Science 2621953(1993))。異常型p53與預(yù)后不良、更加迅速蔓延的腫瘤、轉(zhuǎn)移以及低于5年的存活率有關(guān)(Id.)。人們認(rèn)為p53在誘導(dǎo)細(xì)胞生長停滯和/或DNA損傷后的細(xì)胞凋亡的作用對于破壞將要另外獲得生長優(yōu)勢的變異細(xì)胞是必要的。此外，p53使快速分裂的細(xì)胞對調(diào)亡信號敏感。在報(bào)導(dǎo)的超過15000種p53基因突變中，大約7％為無義突變。因此，對于p53無義突變需要安全有效的治療。
在具有無義突變的細(xì)菌株和真核菌株中，tRNA分子之一中的突變以致突變體tRNA能識別無義密碼子、參與翻譯過程的蛋白的突變、核糖體(核糖體RNA或核糖體蛋白)突變或者添加公知的改變翻譯過程的化合物(例如環(huán)己酰亞胺或者氨基糖苷類抗生素)，可導(dǎo)致發(fā)生無義突變的抑制。結(jié)果是氨基酸將在無義突變位點(diǎn)結(jié)合到多肽鏈中，并且翻譯將不在無義密碼子處提前終止。插入的氨基酸不一定與野生型蛋白的原始氨基酸相同，但是許多氨基酸替換對蛋白結(jié)構(gòu)或功能沒有顯著的作用。因此，通過抑制無義突變而得到的蛋白將可能具有與野生型蛋白接近的活性。該方案提供了通過抑制無義突變而避免翻譯提前終止以治療與無義突變有關(guān)的疾病的機(jī)會。
氨基糖類苷抗生素的促進(jìn)通讀真核生物終止密碼子的能力已經(jīng)在作為由無義突變引起的人類疾病的可能的治療劑的這些藥物中引起關(guān)注。這樣的治療策略或許可行的一種疾病為晚嬰兒型神經(jīng)元蠟樣質(zhì)脂褐素沉積病(late infantile neuronal ceroid lipofuscinosis，LINCL)，這是一種目前還未有效治療的致命性幼年神經(jīng)變性疾病。編碼溶酶體三肽基-肽酶1(TPP-I)的基因CLN2中的提前終止密碼子突變與在用LINCL診斷的大約一半的兒童中的疾病有關(guān)。已經(jīng)考察了氨基糖苷慶大霉素在LINCL細(xì)胞系中恢復(fù)TPP-I活性的能力。在一種來自患者的常見無義突變(Arg208Stop)和不同的罕見無義突變的雙重雜合子的細(xì)胞系中，用慶大霉素治療最大程度地恢復(fù)大約7％的TPP-I正常水平。這些結(jié)果表明通過氨基糖苷或功能類似的醫(yī)藥品來藥理學(xué)抑制無義突變可能在LINCL中具有治療潛力(Sleat等人，Eur.J.Ped.Neurol.5Suppl A 57-62(2001))。
在囊性纖維化病跨膜電導(dǎo)調(diào)節(jié)(Cystic Fibrosis TransmembraneConductance Regulator，CFTR)基因的具有提前停止密碼子的培養(yǎng)細(xì)胞中，用氨基糖苷類治療導(dǎo)致生成全長CFTR(Bedwell等人，Nat.Med.31280-1284(1997)；Howard等人Nat.Med.2467-469(1996))。在用于迪謝納肌肉營養(yǎng)不良的小鼠模型中，觀察到慶大霉素硫酸鹽在導(dǎo)致全長抗肌萎縮蛋白(dystrophin)的提前停止密碼子處抑制翻譯終止(Barton-Davis等人，J.Clin.Invest.104375-381(1999))。全長抗肌萎縮蛋白的少量增加提供了對mdx小鼠收縮誘導(dǎo)損傷的保護(hù)。在這些研究中沒有確定插在無義密碼子位點(diǎn)的氨基酸。
因此，通過調(diào)解無義密碼子誤讀而抑制翻譯提前終止的小分子療法或預(yù)防法將用于治療許多疾病。小分子藥物，特別是口服可生物利用的藥物的發(fā)現(xiàn)，其可為公眾引入可抵抗由無義突變引起的疾病的廣譜選擇性療法或預(yù)防法的發(fā)現(xiàn)才剛開始。
Clitocine(6-氨基-5-硝基-4-(β-D-核-呋喃氨基)嘧啶)為首先從蘑菇卷邊杯傘(Clitocybe inversa)中分離的天然產(chǎn)生的外環(huán)氨基核苷(Kubo等人，Tet.Lett.274277(1986))。還報(bào)導(dǎo)了clitocine的全合成(Moss等人，J.Med.Chem.31786-790(1988)和Kamikawa等人，J.Chem.Soc.Chem.Commun.195(1988))。已經(jīng)報(bào)導(dǎo)clitocine具有殺蟲活性和抵抗白血病細(xì)胞系的細(xì)胞抑制活性(Kubo等人，Tet.Lett.274277(1986)和Moss等人，J.Med.Chem.31786-790(1988))。但是至今還沒有公開clitocine作為用作與無義突變有關(guān)的疾病的治療劑的用途。也沒有報(bào)導(dǎo)開發(fā)出具有作為用于與無義突變有關(guān)的癌癥或疾病的治療劑的功效的clitocine類似物或衍生物。
因此，為了開發(fā)用于治療或預(yù)防與mRNA無義突變有關(guān)的疾病的新穎的藥物，仍需要開發(fā)特性且最優(yōu)化的先導(dǎo)分子。因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供這樣的化合物。
在此提及的所有文獻(xiàn)都引入本申請作為參考，如同它們完全在此闡明一樣。
發(fā)明概述根據(jù)本發(fā)明，鑒定了抑制與mRNA中無義突變相關(guān)的翻譯提前終止的化合物并提供了它們的使用方法。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了式1的化合物或者所述式1的化合物的藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物、外消旋物、立體異構(gòu)體或多晶型物，該化合物可用于抑制與mRNA中無義突變相關(guān)的翻譯提前終止，并且可用于治療與mRNA中無義突變相關(guān)的疾病 其中A1為C、CH或N；V和X獨(dú)立地選自N或C；W選自N、C或CH；其中至少V、W或X之一為N，且其中如果W為N，則至少V或X之一也為N；Y和Z獨(dú)立地選自N、C、C-Rc、C＝O、C＝S，其中Rc為H、CH3或NH2；條件是當(dāng)Y或Z之一為C＝O或C＝S時(shí)，則另一個(gè)也可選自NH、S或O；R1為羧基、氰基或任選地被C1-C4烷氧基取代的羰基；R2不存在或者為硝基；
Ar1為任選地被R基取代的C1-C4烷基；任選地被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)獨(dú)立選擇的基取代的C6至C10芳基；任選地被獨(dú)立選擇的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)獨(dú)立選擇的R基取代的5至10元雜環(huán)；與Ar2和跟Ar1及Ar2相連的雜環(huán)共同形成選自Ar1-2的環(huán)結(jié)構(gòu)；或與Ar3和跟Ar1及Ar3相連的雜環(huán)共同形成選自Ar1-3的環(huán)結(jié)構(gòu)；Ar2不存在或者與Ar1和跟Ar1及Ar2相連的雜環(huán)共同形成選自Ar1-2的環(huán)結(jié)構(gòu)；Ar3不存在或者與Ar1和跟Ar1及Ar3相連的雜環(huán)共同形成選自Ar1-3的環(huán)結(jié)構(gòu)；Ar4不存在；或者為其中任意一種與A1共同形成4至7元碳環(huán)或雜環(huán)的C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4硫代烷基(thioalkyl)；R為氫；-Ra基、或兩個(gè)R基，其中R也可包括氧基，與跟其相連的苯基或雜環(huán)共同形成選自RR的環(huán)結(jié)構(gòu)；其中Ar1-2和Ar1-3選自任選地被一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)取代的11至14元雜三環(huán)的環(huán)結(jié)構(gòu)鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、任選地被鹵素或C1-C4烷氧基取代的C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基或者任選地被用C1-C4烷基取代的羰基取代的氨基；RR為任選地被一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)取代的9至10元雙環(huán)結(jié)構(gòu)鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、氧代基團(tuán)或C1-C4鹵代烷氧基；Ra選自羥基；鹵素；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的鹵素或羥基取代的C1-C4烷基；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的鹵素或苯基取代的C1-C4烷氧基；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的C1-C4烷基取代的C4-C8環(huán)烷基；-Rb基；-O-Rb基；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的C1-C4烷基、氧代或-Rb基取代的4至6元雜環(huán)；具有兩個(gè)環(huán)結(jié)構(gòu)的9至10元雜環(huán)；任選地被羥基、C1-C4烷基或C1-C4烷氧基取代的羰基；任選地被一個(gè)或兩個(gè)C1-C4烷基取代的氨基甲?；幌趸?；氰基；任選地被羥基、C1-C4烷基或-Rb基取代的硫代；任選地被羥基、C1-C4烷基或-Rb基取代的磺酰基；或任選地被一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立選擇的C1-C4烷基、磺酰基或羰基取代的氨基，其中氨基磺?；芜x地被羥基、C1-C4烷基或-Rb基取代且其中氨基羰基任選地被任選地用-Rb基取代的C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、苯甲酰氧基或氨基取代；其中-Rb為任選地被下列基團(tuán)中的一種或多種取代的C6-C8芳基羥基、鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、或者任選地被一個(gè)或多個(gè)C1-C4烷基取代的氨基。
本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了用于抑制與無義突變相關(guān)的翻譯提前終止的方法，以及用于預(yù)防或治療與mRNA無義突變相關(guān)的疾病的方法。這樣的疾病包括但不限于由與無義突變相關(guān)的翻譯提前終止引起的遺傳疾病如CNS疾病、炎癥性疾病、神經(jīng)變性疾病、自身免疫性疾病、心血管疾病或肺部疾?。凰黾膊「鼉?yōu)選為癌癥(或其他增殖疾病)、淀粉樣變、阿爾茨海默病、動脈粥樣硬化、巨人癥、侏儒癥、甲狀腺機(jī)能減退、甲狀腺功能亢進(jìn)、囊性纖維化病、衰老、肥胖癥、帕金森癥、尼-皮病、家族高膽甾醇血、視網(wǎng)膜色素變性、馬方綜合征、溶酶體貯積癥、肌營養(yǎng)不良、囊性纖維化病、血友病、或典型的晚期嬰兒神經(jīng)元蠟樣色素脂褐質(zhì)病(LINCL)。
在一實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及用于抑制與mRNA無義突變相關(guān)的翻譯提前終止的方法，所述方法包括向需要其的受治療者給藥無義抑制量的至少一種本發(fā)明的化合物。
在另一實(shí)施方式中，提供了用于治療癌癥、溶酶體貯積癥、肌營養(yǎng)不良、囊性纖維化病、血友病或典型的晚期嬰兒神經(jīng)元蠟樣色素脂褐質(zhì)病的方法，所述方法包括向需要其的受治療者給藥治療有效量的至少一種本發(fā)明的化合物。
參照下面的優(yōu)選實(shí)施方式和詳細(xì)描述，本發(fā)明的這些和其他方面將更容易被理解。
某些實(shí)施方式1、一種治療或預(yù)防由體細(xì)胞突變引起的疾病的方法，所述方法包括向需要其的病人給藥有效量的式1的化合物或者所述式1的化合物的藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物、外消旋物、立體異構(gòu)體或多晶型物 其中A1為C、CH或N；V和X獨(dú)立地選自N或C；W選自N、C或CH；其中至少V、W或X之一為N，且之中如果W為N，則至少V或X只有也為N；Y和Z獨(dú)立地選自N、C、C-Rc、C＝O、C＝S，其中Rc為H、CH3或NH2；條件是當(dāng)Y或Z之一為C＝O或C＝S時(shí)，則另一個(gè)也可選自NH、S或O；R1為羧基、氰基或者任選地被C1-C4烷氧基取代的羰基；R2不存在或者為硝基；Ar1為任選地被R基取代的C1-C4烷基；任選地被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)獨(dú)立選擇的R基取代的C6至C10芳基；任選地被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)獨(dú)立選擇的R基取代的5至10元雜環(huán)；與Ar2和跟Ar1及Ar2相連的雜環(huán)共同形成選自Ar1-2的環(huán)結(jié)構(gòu)；或與Ar3和跟Ar1及Ar3相連的雜環(huán)共同形成選自Ar1-3的環(huán)結(jié)構(gòu)；
Ar2不存在或者與Ar1和跟Ar1及Ar2相連的雜環(huán)共同形成選自Ar1-2的環(huán)結(jié)構(gòu)；Ar3不存在或者與Ar1和跟Ar1及Ar3相連的雜環(huán)共同形成選自Ar1-3的環(huán)結(jié)構(gòu)；Ar4不存在；或者為其中任意一種與A1共同形成4至7元碳環(huán)或雜環(huán)的C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4硫代烷基；R為氫；-Ra基或兩個(gè)R基，其中R也還可包括氧基，與跟其相連的苯基或雜環(huán)共同形成選自RR的環(huán)結(jié)構(gòu)；其中Ar1-2和Ar1-3選自任選地被一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)取代的7-14元雜三環(huán)結(jié)構(gòu)鹵素，、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、任選地被鹵素或C1-C4烷氧基取代的C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基或者任選地被用C1-C4烷基取代的羰基取代的氨基；RR為任選地被一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)取代的9至10元雙環(huán)的環(huán)結(jié)構(gòu)鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、氧代基團(tuán)或C1-C4鹵代烷氧基；Ra選自羥基；鹵素；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的鹵素或羥基取代的C1-C4烷基；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的鹵素或苯基取代的C1-C4烷氧基；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的C1-C4烷基取代的C4-C8環(huán)烷基；-Rb基；-O-Rb基；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的C1-C4烷基、氧代或-Rb基取代的4至6元雜環(huán)；具有兩個(gè)環(huán)結(jié)構(gòu)的9至10元雜環(huán)；任選地被羥基、C1-C4烷基或C1-C4烷氧基取代的羰基；任選地被一個(gè)或兩個(gè)C1-C4烷基取代的氨基甲酰基；硝基；氰基；任選地被羥基、C1-C4烷基或-Rb基取代的硫代；任選地被羥基、C1-C4烷基或-Rb基取代的磺?；?；或任選地被一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立選擇的C1-C4烷基、磺酰基或羰基取代的氨基，其中氨基磺酰基任選地被羥基、C1-C4烷基或-Rb基取代且其中氨基羰基任選地被任選地用-Rb基取代的C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、苯甲酰氧基或氨基取代；
其中-Rb為任選地被下列基團(tuán)中的一種或多種取代的C6-C8芳基羥基、鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基或者任選地被一個(gè)或多個(gè)C1-C4烷基取代的氨基。
2、根據(jù)實(shí)施方式1所述的方法，其中所述化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合多晶型物、外消旋物、立體異構(gòu)體或多晶型物以含有所述化合物和藥學(xué)可接受的載體或稀釋劑的組合物給藥。
3、根據(jù)實(shí)施方式1所述的方法，其中所述給藥是靜脈內(nèi)的。
4、根據(jù)實(shí)施方式1所述的方法，其中Ar1-2選自以下基團(tuán) 其中*表示Ar1-2與式1的6元環(huán)連接的鍵；Ar1-3選自以下基團(tuán) 其中*表示Ar1-3與式1的6元環(huán)連接的鍵；
RR選自以下基團(tuán)喹啉基、萘基、苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯基、苯并[1，4]間二氧雜環(huán)戊烯基、吲哚基或喹喔啉基，
其中*表示RR與式1的5元環(huán)連接的鍵。
5、根據(jù)實(shí)施方式1所述的方法，其中，式1的化合物為式1-A的化合物 其中A1、A2、A3、A4和A5獨(dú)立地選自N、C和CH；Ar3不存在或者為氫且n為0、1或2。
6、根據(jù)實(shí)施方式5所述的方法，其中R2不存在且A1、A2、A3、A4和A5獨(dú)立地選自C和CH。
7、根據(jù)實(shí)施方式5所述的方法，其中R1為羧基。
8、根據(jù)實(shí)施方式1所述的方法，其中所述式1的化合物為式1-B的化合物 9、根據(jù)實(shí)施方式8所述的方法，其中R1為羧基。
10、根據(jù)實(shí)施方式1所述的方法，其中所述式1的化合物為式1-C的化合物 11、根據(jù)實(shí)施方式10所述的方法，其中Ar1為噻吩基。
12、根據(jù)實(shí)施方式10所述的方法，其中R1為羧基。
13、根據(jù)實(shí)施方式1所述的方法，其中所述式1的化合物為式1-D的化合物
14、根據(jù)實(shí)施方式13所述的方法，其中Ar2不存在。
15、根據(jù)實(shí)施方式13所述的方法，其中Ar3為氫。
16、根據(jù)實(shí)施方式13所述的方法，其中R1為羧基。
17、根據(jù)實(shí)施方式1所述的方法，其中所述式1的化合物為式1-E的化合物 18、根據(jù)實(shí)施方式17所述的方法，其中Ar1為任選地被一個(gè)或兩個(gè)R基取代的苯基。
19、根據(jù)實(shí)施方式18所述的方法，其中所述一個(gè)或兩個(gè)R基獨(dú)立地選自C1-C4烷基和鹵素。
20、根據(jù)實(shí)施方式17所述的方法，其中R1為羧基。
21、根據(jù)實(shí)施方式1所述的方法，其中所述式1的化合物為式1-F的化合物 22、根據(jù)實(shí)施方式21所述的方法，其中Ar1為任選地被一個(gè)或兩個(gè)R基取代的苯基。
23、根據(jù)實(shí)施方式22所述的方法，其中所述一個(gè)或兩個(gè)R基獨(dú)立地選自C1-C4烷基、鹵素、C1-C4鹵代烷基和甲磺?；?，或者兩個(gè)R基共同形成喹啉基。
24、根據(jù)實(shí)施方式21所述的方法，其中R1為羧基。
25、根據(jù)實(shí)施方式1所述的方法，其中所述式1的化合物為式1-G的化合物 26、根據(jù)實(shí)施方式25所述的方法，其中Ar1為任選地被一個(gè)或兩個(gè)R基取代的苯基。
27、根據(jù)實(shí)施方式26所述的方法，其中所述一個(gè)或兩個(gè)R基獨(dú)立地選自C1-C4烷基和氰基。
28、根據(jù)實(shí)施方式25所述的方法，其中R1為羧基。
29、根據(jù)實(shí)施方式1所述的方法，其中所述式1的化合物為式1-H的化合物 30、根據(jù)實(shí)施方式29所述的方法，其中Ar1為任選地被一個(gè)或兩個(gè)R基取代的苯基。
31、根據(jù)實(shí)施方式30所述的方法，其中所述一個(gè)或兩個(gè)R基為C1-C4烷基。
32、根據(jù)實(shí)施方式29所述的方法，其中R1為羧基。
33、根據(jù)實(shí)施方式1所述的方法，其中所述式1的化合物為式1-I的化合物 34、根據(jù)實(shí)施方式33所述的方法，其中Ar1為任選地被一個(gè)或兩個(gè)R基取代的苯基。
35、根據(jù)實(shí)施方式34所述的方法，其中所述一個(gè)或兩個(gè)R基為C1-C4烷基。
36、根據(jù)實(shí)施方式33所述的方法，其中R1為羧基。
37、根據(jù)實(shí)施方式1所述的方法，其中所述式1的化合物為式1-J的化合物 38、根據(jù)實(shí)施方式37所述的方法，其中Ar1為任選地被一個(gè)或兩個(gè)R基取代的苯基。
39、根據(jù)實(shí)施方式38所述的方法，其中所述一個(gè)或兩個(gè)R基為C1-C4烷基。
40、根據(jù)實(shí)施方式37所述的方法，其中R1為羧基。
41、一種治療或預(yù)防自身免疫性疾病、血液病、膠原病、糖尿病、神經(jīng)變性疾病、心血管疾病、肺部疾病、炎癥性疾病或中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的方法，所述方法包括向需要其的病人給藥有效量的式1的化合物、或其藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物、外消旋物、立體異構(gòu)體或多晶型物。
42、根據(jù)實(shí)施方式41所述的方法，其中所述給藥是靜脈內(nèi)的。
43、根據(jù)實(shí)施方式41所述的方法，其中所述自身免疫性疾病為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或移植物抗宿主病。
44、根據(jù)實(shí)施方式41所述的方法，其中所述炎癥性疾病為關(guān)節(jié)炎。
45、根據(jù)實(shí)施方式41所述的方法，其中所述中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病為多發(fā)性硬化、肌營養(yǎng)不良、迪謝納肌營養(yǎng)不良、阿爾茨海默病、神經(jīng)變性疾病或帕金森癥。
46、根據(jù)實(shí)施方式41所述的方法，其中，所述血液病為血友病、馮·維勒布蘭德病或β地中海貧血癥。
47、根據(jù)實(shí)施方式41所述的方法，其中，所述膠原病為成骨不全或硬化。
48、一種治療或預(yù)防家族性紅細(xì)胞增多癥、免疫缺陷、腎疾病、囊性纖維化病、家族性高膽固醇血癥、視網(wǎng)膜色素變性、淀粉樣變、血友病、阿爾茨海默病、泰-薩病、尼-皮病、帕金森癥、動脈粥樣硬化、巨人癥、侏儒癥、甲狀腺功能亢進(jìn)、衰老、肥胖癥、迪謝納肌營養(yǎng)不良或馬方綜合征的方法，該方法包括對需要的病人給藥有效量的式1的化合物、或者式1的化合物的藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物、外消旋物、立體異構(gòu)體或多晶型物。
49、根據(jù)實(shí)施方式48所述的方法，其中所述給藥是靜脈內(nèi)的。
50、一種治療或預(yù)防人類癌癥的方法，所述方法包括向需要其的人給藥有效量的式1的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物、外消旋物、立體異構(gòu)體或多晶型物。
51、根據(jù)實(shí)施方式50所述的方法，其中所述給藥是靜脈內(nèi)的。
52、根據(jù)實(shí)施方式50所述的方法，其中所述癌癥為頭與頸、眼、皮膚、口、咽、食道、胸、骨、血、肺、結(jié)腸、乙狀結(jié)腸、直腸、胃、前列腺、乳房、卵巢、腎、肝、胰腺、腦、腸、心臟或腎上腺的癌癥。
53、根據(jù)實(shí)施方式50所述的方法，其中所述化合物、或者其藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物或立體異構(gòu)體或多晶型物包含藥學(xué)可接受的載體或稀釋劑。
54、根據(jù)實(shí)施方式50所述的方法，其中所述癌癥為實(shí)體瘤。
55、根據(jù)實(shí)施方式50所述的方法，其中所述癌癥為肉瘤、癌、纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、軟骨肉瘤、骨源性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內(nèi)皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因肉瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、胰癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細(xì)胞癌、肝癌、膽管癌、絨毛膜癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌、維爾姆斯瘤、子宮頸癌、睪丸瘤、肺癌、小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、卡波西肉瘤、松果體瘤、成血管細(xì)胞瘤、聽神經(jīng)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦膜瘤、黑素瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、血液產(chǎn)生的腫瘤或多發(fā)性骨髓瘤。
56、根據(jù)實(shí)施方式50所述的方法，其中所述癌癥為急性成淋巴細(xì)胞性白血病、B細(xì)胞型急性淋巴細(xì)胞白血病、T細(xì)胞型急性淋巴細(xì)胞白血病、急性粒細(xì)胞白血病、急性早幼粒細(xì)胞白血病、急性成單核細(xì)胞性白血病、急性紅白血病、急性成巨核細(xì)胞白血病、急性粒單核細(xì)胞白血病、急性非淋巴細(xì)胞白血病、急性未分化細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、多毛細(xì)胞白血病或多發(fā)性骨髓瘤。
57、一種治療或預(yù)防與p53基因突變相關(guān)的疾病的方法，所述方法包括對需要的病人給藥有效量的式1的化合物、或者式1的化合物的藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物、外消旋物、立體異構(gòu)體或多晶型物。
58、根據(jù)實(shí)施方式57所述的方法，其中所述給藥是靜脈內(nèi)的。
59、根據(jù)實(shí)施方式57所述的方法，其中所述疾病為肉瘤、癌、纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、軟骨肉瘤、骨源性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內(nèi)皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因肉瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、胰癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細(xì)胞癌、肝癌、膽管癌、絨毛膜癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌、維爾姆斯瘤、子宮頸癌、睪丸瘤、肺癌、小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、卡波西肉瘤、松果體瘤、成血管細(xì)胞瘤、聽神經(jīng)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦膜瘤、黑素瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤。
60、一種抑制癌細(xì)胞生長的方法，所述方法包括使癌細(xì)胞與有效量的式1的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物、外消旋物、立體異構(gòu)體或多晶型物接觸。
61、一種在哺乳動物中選擇性地產(chǎn)生制備蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括在所述哺乳動物中轉(zhuǎn)錄含有無義突變的基因；并將有效量的本發(fā)明的化合物提供給所述哺乳動物，其中所述蛋白質(zhì)通過所述含有無義突變的基因產(chǎn)生。
附圖簡述

圖1提供了用于評價(jià)無義突變抑制的基于熒光素酶分析用構(gòu)建體的圖示。
圖2提供了為使熒光素酶蛋白的N-末端帶有一個(gè)或多個(gè)表位標(biāo)簽而設(shè)計(jì)的熒光素酶構(gòu)建體的圖示。
圖3提供了用于評價(jià)通讀效率(readthrough efficiency)的基于熒光素酶分析用構(gòu)建體的圖示。
發(fā)明詳述翻譯提前終止會產(chǎn)生異常蛋白，所述異常蛋白可能是致命的或能夠引起多種疾病，所述疾病包括但不限于癌癥、溶酶體貯積癥、肌肉萎縮、囊性纖維化病和血友病。根據(jù)本發(fā)明，已經(jīng)鑒定了抑制無義突變的化合物并提供了它們的使用方法。
A、本發(fā)明的化合物本發(fā)明一方面提供了本發(fā)明的化合物，所述化合物可用于抑制無義突變。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物特別抑制無義突變，而在其他實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物在抑制無義突變的同時(shí)還治療疾病，所述疾病包括但不限于癌癥、溶酶體貯積癥、肌營養(yǎng)不良、囊性纖維化病和血友病。
本發(fā)明的用于抑制無義突變的優(yōu)選化合物包括下式(1)所示的那些或者式1的化合物的藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物、外消旋物、立體異構(gòu)體或多晶型物 其中A1為C、CH或N；V和X獨(dú)立地選自N或C；W選自N、C或CH；其中至少V、W或X之一為N，且其中如果W為N，則至少V或X之一也為N；Y和Z獨(dú)立地選自N、C、C-Rc、C＝O、C＝S，其中Rc為H、CH3或NH2；條件是當(dāng)Y或Z之一為C＝O或C＝S時(shí)，則另一個(gè)也可選自NH、S或O；R1為羧基、氰基、或者任選地被C1-C4烷氧基取代的羰基；R2不存在或者為硝基；Ar1為任選地被R基取代的C1-C4烷基；任選地被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)獨(dú)立選擇的R基取代的C6至C10芳基；任選地被獨(dú)立選擇的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)獨(dú)立選擇R基取代的5至10元雜環(huán)；與Ar2和跟Ar1及Ar2相連的雜環(huán)共同形成選自Ar1-2的環(huán)結(jié)構(gòu)；或與Ar3和跟Ar1及Ar3相連的雜環(huán)共同形成選自Ar1-3的環(huán)結(jié)構(gòu)；Ar2不存在或者與Ar1和跟Ar1及Ar2相連的雜環(huán)共同形成選自Ar1-2的環(huán)結(jié)構(gòu)；Ar3不存在或者與Ar1和跟Ar1及Ar3相連的雜環(huán)共同形成選自Ar1-3的環(huán)結(jié)構(gòu)；Ar4不存在；或者為其中任意一種與A共同形成4至7元碳環(huán)或雜環(huán)的C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4硫代烷基；R為氫；-Ra基或兩個(gè)R基，其中R也可包括氧基，與跟其相連的苯基或雜環(huán)共同形成選自RR的環(huán)結(jié)構(gòu)；其中Ar1-2和Ar1-3選自任選地被一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)取代的7-14元雜三環(huán)結(jié)構(gòu)鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、任選地被鹵素或C1-C4烷氧基取代的C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基或者任選地被用C1-C4烷基取代的羰基取代的氨基；RR為任選地被一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)取代的9至10元雙環(huán)結(jié)構(gòu)鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基氧代基團(tuán)或C1-C4鹵代烷氧基；Ra選自由以下基團(tuán)所組成的組中羥基；鹵素；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的鹵素或羥基取代的C1-C4烷基；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的鹵素或苯基取代的C1-C4烷氧基；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的C1-C4烷基取代的C4-C8環(huán)烷基；-Rb基；-O-Rb基；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的C1-C4烷基、氧代或-Rb基取代的4至6元雜環(huán)；具有兩個(gè)環(huán)結(jié)構(gòu)的9至10元雜環(huán)；任選地被羥基、C1-C4烷基或C1-C4烷氧基取代的羰基；任選地被一個(gè)或兩個(gè)C1-C4烷基取代的氨基甲?；幌趸?；氰基；任選地被羥基、C1-C4烷基或-Rb基取代的硫代；任選地被羥基、C1-C4烷基或-Rb基取代的磺?；换蛉芜x地被一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立選擇的C1-C4烷基、磺?；螋驶〈陌被渲邪被酋；芜x地被羥基、C1-C4烷基或-Rb基取代并且其中氨基羰基任選地被任選地用-Rb基取代的C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、苯甲酰氧基或氨基取代；其中-Rb為任選地被如下基團(tuán)中的一種或多種取代的C6-C8芳基羥基、鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、或者任選地被一個(gè)或多個(gè)C1-C4烷基取代的氨基。
在式1的優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1-2選自以下基團(tuán)并且如式1中任選地取代 其中*表示Ar1-2與式1的6元環(huán)連接的鍵。
在式1的另一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1-3選自以下基團(tuán)并且如式1中任選地取代
其中*表示Ar1-3與式1的6元環(huán)連接的鍵。
在式1的另一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar4-A1可以與A1和跟Ar4-A1相連的含環(huán)的V/W/X/Y/Z共同形成3、4或5元稠環(huán)結(jié)構(gòu)。在式1的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar4-A1與跟Ar4-A1相連的含環(huán)的A1和V/W/X/Y/Z共同形成雜三環(huán)，所述雜三環(huán)可以任選地如在此所述地取代。在式1的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar4-A1與跟Ar4-A1相連的含環(huán)的A1和V/W/X/Y/Z共同形成的雜三環(huán)可以選自 其中*表示在式1的Ar4-A1、含環(huán)的A1和含環(huán)的V/W/X/Y/Z之間形成的三環(huán)的與Ar1連接的鍵。
在式1的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，RR選自以下基團(tuán)喹啉基、萘基、苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯基、苯并[1，4]間二氧雜環(huán)戊烯基、吲哚基、或喹喔啉基；
其中*表示RR與式1的五元環(huán)連接的鍵。
在式1的再一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1-2可以選自

其中*表示Ar1-2與式1的6元環(huán)連接的鍵。
在式1的再一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1-3可以選自
其中*表示Ar1-3與式1的6元環(huán)連接的鍵。
在式1的再一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar4-A1與跟Ar4-A1相連的含環(huán)的A1和V/W/X/Y/Z共同形成的雜三環(huán)可以選自 其中*表示在式1的Ar4-A1、含環(huán)的A1和含環(huán)的V/W/X/Y/Z之間形成的三環(huán)的與Ar1連接的鍵。
在式1的再一優(yōu)選實(shí)施方式中，RR可選自
在式1的其他優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1可以選自



其中，*表示Ar1與式1的5元環(huán)連接的鍵。
如本領(lǐng)域技術(shù)人員所公認(rèn)的，本發(fā)明的一些化合物可包括至少一個(gè)手性中心，并且可作為外消旋混合物或?qū)τ臣兊慕M合物存在。如本文所用的，“對映純的”是指基本上由單一異構(gòu)體組成的組合物，優(yōu)選由90％、92％、95％、98％、99％或100％的單一異構(gòu)體組成。
如本文所用的術(shù)語“烷基”一般是指直鏈、支鏈或環(huán)狀構(gòu)型的飽和烴基，包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基、環(huán)己基、正庚基、辛基、正辛基等。在一些實(shí)施方式中，烷基取代基可以為C1至C8、C3至C8、C1至C6或C1至C4烷基。在一些實(shí)施方式中，所述烷基可以任選地被一個(gè)或多個(gè)鹵素或烷氧基取代。例如所述烷基可包括一個(gè)或多個(gè)鹵素取代基以形成鹵代烷基，包括單鹵代烷基、二鹵代烷基和三鹵代烷基。
如本文所用的“烯基”一般是指具有一個(gè)或多個(gè)碳碳雙鍵的線形的、支鏈或環(huán)狀烯基，例如包括3-丙烯基的C2至C6烯基。
如本文所用的“芳基”是指碳環(huán)芳環(huán)結(jié)構(gòu)。芳基的范圍包括具有5-20個(gè)碳原子的芳環(huán)。芳環(huán)結(jié)構(gòu)包括具有一個(gè)或多個(gè)環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物，如單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)化合物。芳基環(huán)結(jié)構(gòu)的例子包括苯基、甲苯基、蒽基(anthracenyl)、芴基、茚基、甘菊環(huán)基(azulenyl)、苯蒽基(即菲)和萘基(即萘)環(huán)結(jié)構(gòu)。在一些實(shí)施方式中，所述芳基可被任選地取代。
如本文所用的“雜環(huán)”是指環(huán)中的有一個(gè)或多個(gè)原子，其中雜原子為碳以外的其他元素的環(huán)結(jié)構(gòu)。雜原子一般為O、S或N原子。雜環(huán)范圍內(nèi)可獨(dú)立選擇的為O、N和S雜環(huán)結(jié)構(gòu)。所述環(huán)結(jié)構(gòu)可包括具有一個(gè)或多個(gè)環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物，如單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)化合物，且可為芳族的，即所述環(huán)結(jié)構(gòu)為雜芳基。雜環(huán)基的例子包括嗎啉基、吡咯烷酮基(pyrrolidinonyl)、吡咯烷基、哌啶基(piperidinyl)、哌嗪基、乙內(nèi)酰脲基(hydantoinyl)、戊內(nèi)酰胺基、環(huán)氧乙烷基(oxiranyl)、氧雜環(huán)丁烷基(oxetanyl)、四氫呋喃基、四氫吡喃基、四氫吡啶基、四氫嘧啶基、四氫苯硫基或四氫硫代吡喃基等。在一些實(shí)施方式中，所述雜環(huán)可以任選地取代。如本文所用的“雜芳基”是指環(huán)中有一個(gè)或多個(gè)原子，所述雜原子為碳以外的其他元素的芳環(huán)結(jié)構(gòu)。雜原子一般為O、S或N原子。雜芳基范圍內(nèi)可獨(dú)立選擇的為O、N和S雜芳基環(huán)結(jié)構(gòu)。所述環(huán)結(jié)構(gòu)可包括具有一個(gè)或多個(gè)環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物，如單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)化合物。在一些實(shí)施方式中，所述雜芳基可選自含有兩個(gè)或更多個(gè)雜原子、三個(gè)或更多個(gè)雜原子或者四個(gè)或更多個(gè)雜原子的雜芳基。雜芳基環(huán)結(jié)構(gòu)可以選自含有五個(gè)或更多個(gè)雜原子、六個(gè)或更多個(gè)雜原子或者八個(gè)或更多個(gè)雜原子的雜芳基環(huán)結(jié)構(gòu)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，雜芳基包括5至10個(gè)碳原子。雜芳基環(huán)結(jié)構(gòu)的例子包括吖啶、苯并咪唑、苯并噁唑、苯并間二氧雜環(huán)戊烯、苯并呋喃、1，3-二嗪、1，2-二嗪、1，2-二唑、1，4-二氮雜萘、呋喃、呋咱、咪唑、吲哚、異噁唑、異喹啉、異噻唑、噁唑、嘌呤、噠嗪、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、吡咯、喹啉、喹喔啉、噻唑、噻吩、1，3，5-三嗪、1，2，4-三嗪、1，2，3-三嗪、四唑和喹唑啉。
如本文所用的“烷氧基”一般是指具有-O-R結(jié)構(gòu)的基團(tuán)。在一些實(shí)施方式中，R可為烷基，如C1至C8、C1至C6烷基或C1至C4烷基。在一些實(shí)施方式中，烷氧基的R基可以任選地被至少一個(gè)鹵素取代。烷氧基的R基可以為鹵代烷基，即鹵代烷氧基。
鹵素取代基可以獨(dú)立地選自鹵素，如氟、氯、溴、碘和砹。
為了本發(fā)明的目的，當(dāng)將一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)或取代基結(jié)合到包括優(yōu)選實(shí)施方式在內(nèi)的本發(fā)明的化合物中時(shí)，出現(xiàn)在所公開的化合物的任意位置的各官能團(tuán)或取代基可被獨(dú)立地選擇并如果合適，被獨(dú)立地取代。此外，當(dāng)將一個(gè)或多個(gè)普通取代基放在本發(fā)明分子中的任意位置時(shí)，可以理解所述普通取代基可被替換為特定的取代基，并且得到的分子在本發(fā)明分子的范圍內(nèi)。
參考式1，在一實(shí)施方式中，R優(yōu)選在間位或?qū)ξ?，并且?yōu)選為鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基，任選地被，一個(gè)或多個(gè)C1-C4烷基、-Rb基、吡咯基、咪唑基取代的氨基，或者兩個(gè)R基與跟他們相連的苯基共同形成苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯或2，3-二氫苯并[1，4]二氧芑基。特別優(yōu)選的R基包括上表所示的基團(tuán)。
在一優(yōu)選實(shí)施方式中，式1的化合物為式1-A的化合物
對于式1-A，A1、A2、A3、A4和A5獨(dú)立地選自N、C和CH，n為0、1或2。在一優(yōu)選實(shí)施方式中，R2不存在，A1、A2、A3、A4和A5獨(dú)立地選自C和CH。R1優(yōu)選為羧基，并優(yōu)選位于間位或?qū)ξ?。在?-A的另一實(shí)施方式中，R可以獨(dú)立地選自氫；羥基；C1-C4烷基；鹵素；C1-C4鹵代烷基；C1-C4烷氧基；C1-C4鹵代烷氧基；苯氧基；芐氧基；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的鹵素、C1-C4烷基和/或C1-C4烷氧基取代的C6-C8芳基；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的C1-C4烷基取代的氨基；氰基；-C(O)-Rd基，其中Rd為羥基或C1-C4烷氧基；甲磺?；?；硝基；苯并呋喃基；吡咯烷基；吡咯烷酮基；吖啶酮基(azetidinonyl)；嗎啉基；或者兩個(gè)R基與跟它們相連的苯基或雜環(huán)共同形成選自RR的環(huán)結(jié)構(gòu)。
在式1-A的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，V、W，和Y各自為N，同時(shí)X為C、，Z為C-Rc。Rc優(yōu)選為氫或甲基。在一特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，式1-A的化合物包括如下式1-A-1的化合物 參考式1-A-1，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。在一實(shí)施方式中，R2優(yōu)選不存在。在另一實(shí)施方式中，Rc優(yōu)選為氫或甲基。在另一實(shí)施方式中，R優(yōu)選獨(dú)立地選自鹵素；C1-C4烷基；C1-C4鹵代烷基；C1-C4烷氧基；任選地被一個(gè)或多個(gè)鹵素取代的C1-C4烷氧基；任選地被一個(gè)或多個(gè)C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基或C1-C4烷氧基取代的C6-C8芳基；苯并呋喃基；吡咯烷基；吡咯烷酮基和/或吖啶啶酮基。此外，n優(yōu)選為0、1或2，R基優(yōu)選位于間位和/或?qū)ξ弧?br> 在式1-A的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，W、X和Z各自為N，同時(shí)V為C且Y為C-Rc。Rc優(yōu)選為氫或甲基。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，式1-A的化合物包括如下式1-A-2的化合物 參考式1-A-2，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。在一實(shí)施方式中，R2優(yōu)選不存在。在另一實(shí)施方式中，R優(yōu)選獨(dú)立地選自羥基；鹵素；C1-C4烷基和/或芐氧基。在1-A-2的進(jìn)一步實(shí)施方式中，n優(yōu)選為0或1，R基優(yōu)選位于間位和/或?qū)ξ弧?br> 在式1-A的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，X、Y和Z各自為N，同時(shí)V為C且W為CH。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，式1-A的化合物包括如下式1-A-3的化合物 參考式1-A-3，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。在一實(shí)施方式中，R2優(yōu)選不存在。在式1-A-3的另一實(shí)施方式中，R優(yōu)選獨(dú)立地選自鹵素；C1-C4烷基；C1-C4鹵代烷基；任選地被一個(gè)或多個(gè)鹵素取代的C1-C4烷氧基；或者兩個(gè)R基與跟它們相連的六元芳基共同形成萘基，所述萘基任選地被一個(gè)或多個(gè)C1-C4烷氧基取代。在進(jìn)一步實(shí)施方式中，n優(yōu)選為0、1或2，R基優(yōu)選位于間位和/或?qū)ξ弧?br> 在式1-A的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，X和Z均為N，同時(shí)V為C、W為CH，Y為C-Rc。Rc優(yōu)選為氫或氨基。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，式1-A的化合物包括如下式1-A-4的化合物 參考式1-A-4，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。在一實(shí)施方式中，R2優(yōu)選不存在。在1-A-4的另一實(shí)施方式中，Rc優(yōu)選為氫或氨基。在另一實(shí)施方式中，R優(yōu)選獨(dú)立地選自C1-C4烷基。在1-A-4的又一實(shí)施方式中，n優(yōu)選為0或1，R基優(yōu)選位于間位和/或?qū)ξ弧?br> 在式1-A的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，V和W均為N，同時(shí)X為C，Y和Z均為C-Rc。Rc優(yōu)選為氫。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，式1-A的化合物包括如下式1-A-5的化合物 參考式1-A-5，R1優(yōu)選為羧基或氰基并優(yōu)選位于間位和對位。在式1-A-5的另一實(shí)施方式中，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。在實(shí)施方式中，R2優(yōu)選不存在。在式1-A-5的另一實(shí)施方式中，R優(yōu)選獨(dú)立地選自鹵素；C1-C4烷基；C1-C4鹵代烷基；任選地被一個(gè)或多個(gè)鹵素取代的C1-C4烷氧基；芐氧基；硝基；任選地被一個(gè)或兩個(gè)C1-C4烷基取代的氨基和/或兩個(gè)R基與跟它們相連的六元芳基共同形成苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯或吲哚基。在另一實(shí)施方式中，n優(yōu)選為0、1或2，R基優(yōu)選位于間位和/或?qū)ξ弧?br> 在式1-A的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，V和Y均為N，同時(shí)X為C，W為CH，且Z為C-Rc。在一實(shí)施方式中，Rc優(yōu)選為氫。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，式1-A的化合物包括如下式1-A-6的化合物 參考式1-A-6，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。在另一實(shí)施方式中，R2優(yōu)選不存在。在1-A-6的實(shí)施方式中，R優(yōu)選獨(dú)立地選自C1-C4烷基。在另一實(shí)施方式中，n優(yōu)選為0或1，R基優(yōu)選位于間位和/或?qū)ξ弧?br> 在式1-A的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，V和Z均為N，同時(shí)X為C，W為CH，且Y為C-Rc。Rc優(yōu)選為氫。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，式1-A的化合物包括如下式1-A-7的化合物 參考式1-A-7，R1優(yōu)選為羧基或氰基并優(yōu)選位于間位和對位。在另一實(shí)施方式中，R2優(yōu)選不存在或?yàn)橄趸?。?dāng)R2不存在時(shí)，它優(yōu)選位于鄰位。在式1-A-7的實(shí)施方式中，R優(yōu)選獨(dú)立地選自羥基；鹵素；C1-C4烷基；C1-C4鹵代烷基；任選地被一個(gè)或多個(gè)鹵素取代的C1-C4烷氧基；-C(O)-OCH3基和/或兩個(gè)R基與跟它們相連的六元芳基共同形成苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯。在式1-A-7的又一實(shí)施方式中，n優(yōu)選為0、1或2，R基優(yōu)選位于間位和/或?qū)ξ弧?br> 在式1-A的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，W和X均為N，同時(shí)V為C，Y和Z均為C-Rc。Rc優(yōu)選為氫。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，式1-A的化合物包括如下式1-A-8的化合物 參考式1-A-8，R1優(yōu)選為羧基或-C(O)-OCH3基并優(yōu)選位于間位和對位。在另一實(shí)施方式中，R2優(yōu)選不存在。在另一實(shí)施方式中，R優(yōu)選獨(dú)立地選自羥基；鹵素；C1-C4烷基；C1-C4鹵代烷基；任選地被一個(gè)或多個(gè)鹵素取代的C1-C4烷氧基；硝基和/或嗎啉基。在式1-A-8的進(jìn)一步實(shí)施方式中，n優(yōu)選為0、1或2，R基優(yōu)選位于間位和/或?qū)ξ弧?br> 在式1-A的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，X和Y均為N，同時(shí)V為C，W為CH、Z為C-Rc。Rc優(yōu)選為氫。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，式1-A的化合物包括如下式1-A-9的化合物
參考式1-A-9，R1優(yōu)選為羧基或氰基并優(yōu)選位于間位和對位。在另一實(shí)施方式中，R2優(yōu)選不存在。在式1-A-7的進(jìn)一步實(shí)施方式中，R優(yōu)選獨(dú)立地選自羥基；鹵素；C1-C4烷基；C1-C4鹵代烷基；任選地被一個(gè)或多個(gè)鹵素取代的C1-C4烷氧基；苯氧基；硝基；任選地被一個(gè)或兩個(gè)C1-C4烷基取代的氨基和/或兩個(gè)R基與跟它們相連的六元芳基共同形成苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯、喹啉基或喹喔基。此外，n優(yōu)選為0、1或2，R基優(yōu)選位于間位和/或?qū)ξ弧?br> 在式1-A的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，V為N，同時(shí)X為C，W為CH，且Y和Z均為C-Rc。Rc優(yōu)選為氫。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，式1-A的化合物包括如下式1-A-10的化合物 參考式1-A-10，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。R2優(yōu)選不存在。R優(yōu)選獨(dú)立地選自鹵素；C1-C4烷基；C1-C4鹵代烷基；任選地被一個(gè)或多個(gè)鹵素取代的C1-C4烷氧基；苯氧基和/或兩個(gè)R基與跟它們相連的六元芳基共同形成苯并[1，4]間二氧雜環(huán)戊烯。此外，n優(yōu)選為0、1或2，R基優(yōu)選位于間位和/或?qū)ξ弧?br> 在式1-A的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，X為N，同時(shí)V為C，W為CH，且Y和Z均為C-Rc。Rc優(yōu)選為氫。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，式1-A的化合物包括如下式1-A-11的化合物 參考式1-A-11，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。R2優(yōu)選不存在。R優(yōu)選獨(dú)立地選自C1-C4烷基。此外，n優(yōu)選為0或1，R基優(yōu)選位于間位和/或?qū)ξ弧?br> 在式1-A的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，W為N，同時(shí)X和V均為C且Y和Z均為C-Rc。Rc優(yōu)選為氫。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，式1-A的化合物包括如下式1-A-12的化合物 參考式1-A-12，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。R2優(yōu)選不存在。R優(yōu)選獨(dú)立地選自C1-C4烷基。此外，n優(yōu)選為0或1，R基優(yōu)選位于間位和/或?qū)ξ弧?br> 在式1-A的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，Z為N，同時(shí)V和X均為C，W為CH，且Y為C-Rc。Rc優(yōu)選為氫。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，式1-A的化合物包括如下式1-A-13的化合物
參考式1-A-13，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。R2優(yōu)選不存在。R優(yōu)選獨(dú)立地選自C1-C4烷基。此外，n優(yōu)選為0或1，R基優(yōu)選位于間位和/或?qū)ξ弧?br> 在式1的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，V、W和Y各自為N，X和Z均為C。此外，Ar1和Ar2與跟它們相連的雜環(huán)共同形成如下的13元雜三環(huán)結(jié)構(gòu)(式1-B) 參考式1-B，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。
在式1的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，V和W均為N，X為C，Y和Z各自為CH(式1-C) 參考式1-C，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。此外，Ar1優(yōu)選為噻吩基。
在式1的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，X和Y均為N，V為C，W和Z獨(dú)立地為C或CH(式1-D) 對于式1-D，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。此外，Ar2和/或Ar3優(yōu)選不存在。在另一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1優(yōu)選為苯并噁唑(benzooxasole)。在式1-D的另一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar3不存在，Ar1和Ar2與跟它們相連的五元環(huán)共同形成Ar1-2環(huán)結(jié)構(gòu)。在式1-D的優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1-2選自以下基團(tuán)，如式1中被任選地取代 其中，*表示Ar1-2與式1的6元環(huán)連接的鍵。在式1-D的再一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1-2可以選自
在式1-D的另一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar2不存在，Ar1和Ar3與跟它們相連的五元環(huán)共同形成Ar1-3環(huán)結(jié)構(gòu)。在式1-D的優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1-3選自以下基團(tuán)并如式1中被任選地取代 其中，*表示Ar1-3與式1的6元環(huán)連接的鍵。在式1-D的再一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1-3可選自 其中，*表示Ar1-3與式1的6元環(huán)連接的鍵。
在式1的再一優(yōu)選實(shí)施方式，V和W各自為N，X為C，Y為NH，Z為C＝O(式1-E) 參考式1-E，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。此外，Ar2和/或Ar3優(yōu)選不存在。在另一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1優(yōu)選為任選地被一個(gè)或兩個(gè)R基取代的苯基。此外，所述一個(gè)或兩個(gè)R基優(yōu)選獨(dú)立地選自C1-C4烷基和鹵素。
在式1的再一優(yōu)選實(shí)施方式中，V和W各自為N，X為C，Y為O，且Z為C＝O(式1-F)
參考式1-F，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。此外，Ar2和/或Ar3優(yōu)選不存在。在另一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1優(yōu)選為任選地被一個(gè)或兩個(gè)R基取代的苯基。此外，所述一個(gè)或兩個(gè)R基優(yōu)選獨(dú)立地選自C1-C4烷基、鹵素、C1-C4鹵代烷基、和甲基磺?；蛘邇蓚€(gè)R基共同形成喹啉基。
在式1的再一優(yōu)選實(shí)施方式中，V為C，W和X各自為N，Y為C＝O，且Z為O(式1-G) 參考式1-G，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。此外，Ar2和/或Ar3優(yōu)選不存在。在另一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1優(yōu)選為任選地被一個(gè)或兩個(gè)R基取代的苯基。此外，所述一個(gè)或兩個(gè)R基優(yōu)選獨(dú)立地選自C1-C4烷基、和氰基。
在式1的再一優(yōu)選實(shí)施方式中，V為C，W和X各自為N，Y為C＝O且Z為S(式1-H)
參考式1-H，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。此外，Ar2和/或Ar3優(yōu)選不存在。在另一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1優(yōu)選為任選地被一個(gè)或兩個(gè)R基取代的苯基。此外，所述一個(gè)或兩個(gè)R基優(yōu)選獨(dú)立地選自C1-C4烷基。
在式1的再一優(yōu)選實(shí)施方式中，V為C，W和X各自為N，Y為C＝S，且Z為S(式1-I) 參考式1-I，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。此外，Ar2和/或Ar3優(yōu)選不存在。在另一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1優(yōu)選為任選地被一個(gè)或兩個(gè)R基取代的苯基。此外，所述一個(gè)或兩個(gè)R基優(yōu)選獨(dú)立地選自C1-C4烷基。
在式1的再一優(yōu)選實(shí)施方式中，V為C，W和X各自為N，Y為C＝S，且Z為O(式1-J) 參考式1-J，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。此外，Ar2和/或Ar3優(yōu)選不存在。在另一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1優(yōu)選為任選地被一個(gè)或兩個(gè)R基取代的苯基。此外，所述一個(gè)或兩個(gè)R基優(yōu)選獨(dú)立地選自C1-C4烷基。
在式1的再一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar4不存在(式1-K) 在式1-K的實(shí)施方式中，可以優(yōu)選式1-A至1-J中說明的的任何取代基模式。
在式1的實(shí)施方式中，Ar4為與A1共同形成4至7元碳環(huán)或雜環(huán)的C1-C4烷基(式1-L)。
在式1-L的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar4為與A1共同形成4至7元碳環(huán)的C1-C4烷基。在式1-L的一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar4為與A1共同形成5-6元碳環(huán)的C1-C4烷基。在式1-L的一實(shí)施方式中，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。在一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar4為亞甲基。在式1-L的另一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar2和Ar3優(yōu)選不存在。在另一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1優(yōu)選為任選地被一個(gè)或兩個(gè)R基取代的苯基。在一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1為任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的鹵素、C1-C4烷基或C1-C4鹵代烷氧基取代的苯基。在又一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1為由一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的鹵素、C1-C4烷基或C1-C4鹵代烷氧基取代的苯基。在又一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1為由鹵素和C1-C4烷基取代的苯基。在又一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1為由氟和甲基取代的苯基。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，Ar1為任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的鹵素、C1-C4烷基或C1-C4鹵代烷氧基取代的苯基。在又一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1為由三氟甲氧基取代的苯基。
在式1的一實(shí)施方式中，Ar4為與A1連接而形成4至7元碳環(huán)或雜環(huán)的C1-C4烷氧基(式1-M)。
在式1-M的一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar4為與A1連接以形成5至6元雜環(huán)的C1-C4烷氧基。在式1-M的一實(shí)施方式中，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。在式1-M的一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar4為甲氧基。在式1-M的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar2和Ar3優(yōu)選不存在。在式1-M的另一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1不存在。在式1-M的另一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1優(yōu)選為任選地被一個(gè)或兩個(gè)R基取代的苯基。
在式1-M的又一優(yōu)選的實(shí)施方式中，Ar1優(yōu)選為任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的鹵素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4鹵代烷基取代的苯基。在式1-M的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1優(yōu)選為由一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)多個(gè)獨(dú)立選擇的鹵素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4鹵代烷基取代的苯基。在式1-M的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1優(yōu)選為由一個(gè)鹵素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷基取代的苯基。在式1-M的一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1優(yōu)選為由一個(gè)氟、氯、甲基、甲氧基或三氟甲氧基取代的苯基。在式1-M的另一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1優(yōu)選為由三個(gè)C1-C4烷氧基取代的苯基。在式1-M的進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式中，Ar1優(yōu)選為由三個(gè)甲氧基取代的苯基。
在式1的實(shí)施方式中，Ar4為與A1連接而形成4至7元雜環(huán)的C1-C4硫代烷基(式1-N)。
在式1-N的一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar4為與A1連接而形成5至6元雜環(huán)的C1-C4硫代烷基。在式1-N的一實(shí)施方式中，R1優(yōu)選為羧基并優(yōu)選位于間位和對位。在式1-N的一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar4為硫代甲基。在式1-N的進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式中，Ar2和Ar3優(yōu)選不存在。
在式1-N的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1優(yōu)選為任選地被一個(gè)或多個(gè)R基取代的苯基。在式1-N的又一優(yōu)選實(shí)施方式中，Ar1為由C1-C4烷基取代的苯基。在式1-N的進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式中，Ar1為由甲基取代的苯基。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物包括下表X中的化合物



























































如表X所示如本文所用的，化合物12的結(jié)構(gòu)與化合物292相同。如本文所用的，化合物13的結(jié)構(gòu)與化合物293相同。如本文所用的，化合物14的結(jié)構(gòu)與化合物294相同。如本文所用的，化合物15的結(jié)構(gòu)與化合物295相同。如本文所用的，化合物16的結(jié)構(gòu)與化合物296相同。如本文所用的，化合物17的結(jié)構(gòu)與化合物297相同。如本文所用的，化合物18的結(jié)構(gòu)與化合物298相同。如本文所用的，化合物19的結(jié)構(gòu)與化合物299相同。如本文所用的，化合物20的結(jié)構(gòu)與化合物300相同。如本文所用的，化合物21的結(jié)構(gòu)與化合物301相同。如本文所用的，化合物22的結(jié)構(gòu)與化合物302相同。如本文所用的，化合物23的結(jié)構(gòu)與化合物303相同。如本文所用的，化合物24的結(jié)構(gòu)與化合物304相同。如本文所用的，化合物25的結(jié)構(gòu)與化合物305相同。如本文所用的，化合物26的結(jié)構(gòu)與化合物306相同。如本文所用的，化合物27的結(jié)構(gòu)與化合物307相同。如本文所用的，化合物28的結(jié)構(gòu)與化合物308相同。如本文所用的，化合物29的結(jié)構(gòu)與化合物309相同。如本文所用的，化合物30的結(jié)構(gòu)與化合物310相同。如本文所用的，化合物31的結(jié)構(gòu)與化合物311相同。如本文所用的，化合物32的結(jié)構(gòu)與化合物312相同。如本文所用的，化合物33的結(jié)構(gòu)與化合物313相同。如本文所用的，化合物34的結(jié)構(gòu)與化合物314相同。如本文所用的，化合物35的結(jié)構(gòu)與化合物315相同。如本文所用的，化合物36的結(jié)構(gòu)與化合物36相同。如本文所用的，化合物37的結(jié)構(gòu)與化合物317相同。如本文所用的，化合物38的結(jié)構(gòu)與化合物318相同。如本文所用的，化合物39的結(jié)構(gòu)與化合物319相同。如本文所用的，化合物40的結(jié)構(gòu)與化合物320相同。如本文所用的，化合物41的結(jié)構(gòu)與化合物321相同。如本文所用的，化合物42的結(jié)構(gòu)與化合物322相同。如本文所用的，化合物43的結(jié)構(gòu)與化合物323相同。如本文所用的，化合物44的結(jié)構(gòu)與化合物324相同。如本文所用的，化合物45的結(jié)構(gòu)與化合物325相同。如本文所用的，化合物46的結(jié)構(gòu)與化合物326相同。
特別優(yōu)選的化合物的為編號為47、48、66、76、81、87、105、106、109、110、133、138、139、140、146、148、154、157、167、174、177、186、196、204的化合物。列出以上化合物僅僅是為了提供一些可用于本發(fā)明方法的例子?；诒竟_內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員將意識到本發(fā)明要求保護(hù)的范圍內(nèi)的其他化合物能夠用于本文所述的方法。
B、本發(fā)明化合物的制備本發(fā)明的化合物可以按本領(lǐng)域公知的任何方式制備。舉例來說，本發(fā)明的化合物可以根據(jù)下述關(guān)于單個(gè)吖嗪環(huán)中心結(jié)構(gòu)的一般方法進(jìn)行制備。例如，式1的其中V為N的化合物可以按照下述圖示A所示的方法制備 圖示A根據(jù)圖示A，化合物A1的唑環(huán)上的未取代氮原子可以在交叉耦合反應(yīng)中進(jìn)行取代。這種類型的反應(yīng)可以通過使用底物來完成，如Ar1-X(其中X為鹵素如溴或碘，或者類鹵化物如磺酸甲酯)或Ar1-M(其中M為基團(tuán)，例如硼酸或三烷氧基硅烷)。用于該反應(yīng)的催化劑可以包括銅鹽(例如銅(II)氧化物、銅(II)醋酸鹽等)、鈀鹽(例如鈀(II)醋酸鹽、四(三苯基膦)鈀等)、以及其他具有催化性能的催化劑過渡金屬鹽。交叉耦合反應(yīng)的一個(gè)具體例子來自Buchwald等人，J.Am.Chem.Soc.2001，123，7727的報(bào)導(dǎo)，包括在具有二胺配體的二碘化銅和合適的堿如磷酸鉀或碳酸鉀的催化下，芳基溴化物或碘化物與唑在高沸點(diǎn)溶劑如1，4-二噁烷、二甲氧基乙烷、甲苯等中反應(yīng)。唑交叉耦合反應(yīng)的另一具體例子為Lam，等人，Tetrahedron Lett.2001，42，3415的方法。該方法包括在銅(II)醋酸鹽、胺試劑(如吡啶、三乙胺等)和分子篩存在下，唑化合物如A1與芳基硼酸試劑反應(yīng)。可用于合成本發(fā)明的化合物的交叉耦合反應(yīng)不限于這兩個(gè)具體的例子。
某些官能團(tuán)在本發(fā)明所述的合成中可以按保護(hù)的形式攜帶，然后在之后的步驟中釋出。保護(hù)基策略已為有機(jī)合成領(lǐng)域的技術(shù)人員所公知，并且在教科書如Greene，Protective Groups in Organic Synthesis，JohnWiley and Sons，New York中有所描述。例如羧酸可以通過羧酸酯化合物的各種有機(jī)合成而攜帶，然后在始于羧酸的點(diǎn)被裂解。裂解反應(yīng)可以包括用氫氧化物(氫氧化鈉、氫氧化鋰等)在合適的溶劑中(水、乙醇、四氫呋喃、或者它們的混合物)在室溫至溶劑的回流點(diǎn)的溫度下的反應(yīng)。或者，一些酯基可以用親核試劑(碘化鋰、苯硫基鋰等)在溶劑如吡啶、二甲亞砜或二甲替甲酰胺中進(jìn)行裂解。羧酸酯基的便利的掩蔽形式的其他基團(tuán)為氰基。芳基腈化合物可以在酸性條件(例如濃硫酸或干燥的氯化氫氣體，接著醇解/水解)或堿性條件(氫氧化鈉)下水解。
常規(guī)的雜環(huán)合成可以用于式1的各種實(shí)施方式。例如對于含有中心吡咯環(huán)的化合物，可以將上述芳基化方法用于式B1的吡咯化合物(圖示B)。
圖示B根據(jù)圖示B，化合物B1可以通過兩種途徑之一而制得。第一種包括式B2化合物的交叉耦合，其中X表示鹵素或類鹵化物基團(tuán)，Z表示氫原子或保護(hù)基。合適的保護(hù)基包括但不限于叔丁氧羰基、三苯甲基、三異丙基甲硅烷基等。其他交叉耦合組分包括試劑Ar-M，其中M表示金屬或其他能夠進(jìn)行交叉耦合的原子，并且可以選自Mg、Zn、B或Si，在此所列的原子還結(jié)合于與所選的M原子化合價(jià)相配合的其他基團(tuán)。交叉耦合反應(yīng)還可以在催化劑存在下進(jìn)行。合適的催化劑包括各種含Pd、Cu或Ni的化合物。耦合反應(yīng)后，芳基化產(chǎn)物可以通過去除Z基而去保護(hù)，從而形成B1。去保護(hù)條件取決于所選的Z基并且已為有機(jī)合成領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知。第一種途徑的變形起始于具有M基的吡咯(B3)，并且用式Ar-X的試劑如上所述進(jìn)行交叉耦合。使用該途徑的一種方法具有作為M基的B(OH)2和作為X的Br或I；用于該反應(yīng)的催化劑為Pd(0)化合物(如Pd(PPh3)4)或Pd(II)化合物(如Pd(PPh3)2Cl2或Pd(OAc)2)，并且存在堿如Na2CO3或CsF。式B1的化合物的第三種合成起始于式B4的烯烴化合物。在堿性條件下用試劑甲苯磺?；谆愲?TosMIC)處理。得到的產(chǎn)物為化合物B1，其中R和R均為氫原子。然后，按照圖示A所述對化合物B1進(jìn)行芳基化。
對于含有中心吡唑環(huán)的式1的化合物，可以將如上所述的芳基化方法用于式C1的吡唑化合物(圖示C)。
圖示C對于圖示C，化合物Cl可以源自式C2的插烯物酰胺化合物或式C4的二羰基化合物。任意底物可以用肼水合物在質(zhì)子溶劑如乙醇或乙酸種進(jìn)行處理，任選地存在酸催化劑如鹽酸。反應(yīng)一般在高溫下進(jìn)行。式C2的插烯物酰胺化合物可以通過式C3的酮化合物與酰胺的縮醛進(jìn)行縮合而制得。該反應(yīng)一般用純的一當(dāng)量或大于一當(dāng)量的縮醛試劑進(jìn)行或者在合適的溶劑中在溶劑的回流溫度下進(jìn)行。式C4的二酮試劑可以通過式C5的芳?；ヅc式C6的酮進(jìn)行縮合而制得。該縮合反應(yīng)一般在堿性條件下(例如氫氧化鈉)在各種溶劑中進(jìn)行，或者首先在強(qiáng)堿性條件下(例如鋰二異丙基酰胺，低溫，疏質(zhì)子溶劑)生成C6的烯醇化物陰離子并隨后加成酯C5。
對于其中吡唑環(huán)的4-位上連接有芳基之一的吡唑類化合物的變形，可以將上述的芳基化方法用于式D1的化合物(圖示D)。
圖示D根據(jù)如上的圖示D，N-未取代的吡唑可以通過肼與式D2的二羰基化合物或式D4的插烯物酰胺化合物的環(huán)縮合反應(yīng)而形成。這些試劑依次分別地按照與上述類似的方法從酮D3和D5獲得。對于R＝R＝H的情況，可以使用Coppola et ah，J.Het.Chem.1974，11，51-56的方法。該方法包括用氯氧化磷和二甲基甲酰胺的預(yù)制混合物對式D6的芳基乙酸試劑進(jìn)行處理。然后堿處理得到甲酸基烯胺產(chǎn)物D4。
其中吡唑環(huán)的4-位上連接有芳基之一的式1的化合物的替代性合成如圖示E所示。
圖示E根據(jù)圖示E，之前所述的化合物D2和D4可以用式E2的芳基肼化合物直接縮合，反應(yīng)條件與使用未取代的肼本身的反應(yīng)條件類似。當(dāng)R≠R時(shí)，區(qū)域選擇性可以由R基的大小來控制，并且必須使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的色譜法來分離產(chǎn)物。
對于含有中心咪唑環(huán)的式1的化合物，可以將上述的芳基化方法用于式F1的咪唑化合物(圖示F)。
圖示F根據(jù)圖示F，其中以表示鹵素、胺或羥基的式F2化合物可以通過環(huán)縮合反應(yīng)而轉(zhuǎn)化成化合物F1。當(dāng)R＝H時(shí)，α-溴代酮(F2，Y＝Br)可以用甲酰胺在高溫下(＞150℃)進(jìn)行處理，以得到咪唑產(chǎn)物。如果芳基和R的大小不同，則可以進(jìn)行咪唑F1的交叉耦合反應(yīng)而得到良好的區(qū)域選擇性；否則可能得到兩種異構(gòu)體，所述兩種異構(gòu)體可以通過色譜法分離。本發(fā)明的咪唑還可以通過芳氨基酮底物(F3)與試劑如腈或亞胺酯(imidate)的環(huán)縮合反應(yīng)而制得。對于具有2-氨基取代的化合物，化合物F3還可以用氰酰胺處理以得到2-氨基咪唑。然后可以根據(jù)選擇將伯氨基官能化。
對于含有中心1，2，4-三唑環(huán)的式1的化合物，可以將上述的方法用于式G1的化合物(圖示G)。
圖示G根據(jù)圖示G，另一途徑起始于腈試劑G2，所述腈試劑首先用干燥酸(氣態(tài)HCl或由酸性氯化物原位生成的HCl)在醇溶劑中進(jìn)行處理。中間體亞胺酯鹽然后用芳基肼試劑進(jìn)行處理，以得到化合物G3。該化合物然后與式R-C(OR′)3的原酸酯試劑進(jìn)行環(huán)縮合反應(yīng)，以得到產(chǎn)物G4，或者與試劑如羰基二咪唑進(jìn)行環(huán)縮合反應(yīng)，以得到G5。當(dāng)化合物G5的Ar1基具有可與1，2，4-三唑氧原子反應(yīng)的官能度時(shí)(例如CH2-Br基位于Ar1環(huán)的鄰位)，則可以通過烷基化反應(yīng)形成又一個(gè)環(huán)?？梢允褂脡A性試劑和/或堿性條件如二甲基甲酰胺中的氫氧化鈉或碳酸鉀在室溫至100℃的溫度下進(jìn)行內(nèi)烷基化，以得到式G6的化合物?？梢酝ㄟ^自由基溴化作用將CH3基轉(zhuǎn)變成CH2Br而在Ar1環(huán)上得到鄰位-CH2Br基。該反應(yīng)可以使用試劑如N-溴琥珀酰亞胺在具有溶劑如四氯化碳或氯仿的回流溶液中進(jìn)行。催化量的自由基引發(fā)劑如2，2′氮雜二(2-甲基丙腈)的存在可以有助于該反應(yīng)。
對于含有中心1，2，3-三唑環(huán)的式1的化合物，可以將上述的方法用于式H1的化合物(圖示H)。
圖示H根據(jù)圖示H，三唑可以通過式H2的疊氮化物試劑與式H3的炔試劑的環(huán)加成反應(yīng)而制得。該環(huán)加成反應(yīng)可以在合適的疏質(zhì)子溶劑中在高溫下(如果需要，在密封容器中)進(jìn)行。任選地，根據(jù)Sharpless等人，Angew.Chem.，Int.Ed.Engl.2002，412596-2599的方法，該反應(yīng)可以在催化劑存在下進(jìn)行，如五水硫酸銅-抗壞血酸。這些條件使產(chǎn)物產(chǎn)物更高、區(qū)域選擇性更好。疊氮化合物可以通過使用試劑如亞硝酸鈉/亞硝酸或烷基亞硝酸酯試劑首先將式H4的苯胺化合物轉(zhuǎn)變成重氮鹽(H5)而制得。所述重氮鹽然后用疊氮鹽如疊氮化鈉處理，以得到疊氮化合物H2。這種轉(zhuǎn)化的例子見于Carnazzi等人，J.Med.Chem.1994，37，1841的著作。炔化合物H3可以通過式和H6的芳基鹵化物試劑與式H7的末端乙炔試劑的鈀催化交叉耦合反應(yīng)而制得。含有Pd(0)或Pd(II)的催化劑如二(三苯基膦)二氯化鈀可用于該反應(yīng)。該耦合反應(yīng)一般在由銅(I)催化劑和作為銅配體的單烷基胺、二烷基胺或三烷基胺調(diào)解，一般作為極性溶劑如二甲基甲酰胺的助溶劑。該反應(yīng)還可以在適當(dāng)?shù)母邷叵逻M(jìn)行。
含有中心氧雜二氮酮環(huán)的式1的化合物可以通過圖示J和K(如下)所示的策略來制備。
圖示J 圖示K根據(jù)圖示J和K，兩種變體使用相似的條件，原料使最終產(chǎn)物在一側(cè)或另一側(cè)具有羧基取代。芳基肼試劑(J1或K1)用羧酸試劑(J2或K2)?；?，以得到酰肼J3或K3。還可以使用適當(dāng)取代的芳?；然镌噭S河有機(jī)或無機(jī)堿來進(jìn)行該縮合。使用類似羰基二咪唑的試劑在環(huán)縮合反應(yīng)中形成環(huán)，得到的酯化合物(J4或K4)水解，以得到羧酸?？梢詫⑵渌姆怯H核酯裂解條件用于該轉(zhuǎn)化。所述方法還可以通過將中間體連接至固體支撐體然后快速分離中間體并釋放純的終產(chǎn)物而進(jìn)行。
具有硫代二氮酮核心環(huán)的式1的化合物可以使用圖示L所示的方法制備。
圖示L根據(jù)圖示L，如上圖示J和K中所述的酰肼中間體可以用勞氏試劑(Lawesson′s reagent)處理，以得到中間體含磷雜環(huán)產(chǎn)物(L2)?？梢杂脷溲趸锾幚韥沓チ谆?，得到的硫代酰肼L3按照與氧雜二氮酮類似的方法進(jìn)行環(huán)縮合，以得到硫代二氮酮L4。然后用上述方法釋放游離的羧基。
在一些優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物可以拆分為對映純的化合物，或者使用本領(lǐng)域公知的方法合成為對映純的化合物。舉例說明，本發(fā)明的化合物可以通過如下方法進(jìn)行拆分直接將對映異構(gòu)體混合物結(jié)晶，形成對映異構(gòu)體的非對映異構(gòu)體鹽，形成并分離非對映異構(gòu)體，或者對外消旋混合物進(jìn)行酶拆分。
如本領(lǐng)域技術(shù)人員所認(rèn)識到的一樣，這些和其他反應(yīng)方法可以用于制備本發(fā)明的化合物。對上述反應(yīng)式和方法的各種修飾對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是很顯然的，本發(fā)明并不限于通過特定方法制備本發(fā)明的化合物。
C、本發(fā)明的方法本發(fā)明的另一方面提供了用于抑制與無義突變相關(guān)的翻譯提前終止的的方法，以及用于預(yù)防或治療疾病的方法。在優(yōu)選實(shí)施方式中，所述疾病與mRNA突變特別是無義突變相關(guān)。典型的疾病包括但不限于癌癥、溶酶體貯積癥、肌營養(yǎng)不良、囊性纖維化病、血友病、大皰性表皮松解癥(epidermolysis bullosa)以及典型的晚嬰兒型神經(jīng)元蠟樣質(zhì)脂褐素沉積病。在該實(shí)施方式中，提供了用于治療癌癥、溶酶體貯積癥、肌營養(yǎng)不良、囊性纖維化病、血友病、或典型的晚嬰兒型神經(jīng)元蠟樣質(zhì)脂褐素沉積病的方法，該方法包括對需要的病人給予治療有效量的至少一種本發(fā)明的化合物。
在一實(shí)施方式中，本發(fā)明是關(guān)于用于增加一種或多種特異性、功能性蛋白表達(dá)的方法。本發(fā)明的任何化合物能用于特別增加功能性蛋白的表達(dá)。在另一種實(shí)施方式中，當(dāng)翻譯提前終止通過對需要的病人給予治療有效量的至少一種本發(fā)明的化合物而被抑制時(shí)，發(fā)生了功能蛋白表達(dá)的特異性增加。在優(yōu)選實(shí)施方式中翻譯提前終止與mRNA中的無義突變相關(guān)。在另一實(shí)施方式中，當(dāng)mRNA衰變在病人中減少時(shí)，發(fā)生了功能性蛋白表達(dá)的特異性增加。在優(yōu)選實(shí)施方式中，病人異常由突變介導(dǎo)的mRNA衰變引起。在特別優(yōu)選實(shí)施方式中，突變介導(dǎo)的mRNA衰變?yōu)闊o義突變的結(jié)果。本發(fā)明的方法不限于任何特殊的理論。
本發(fā)明包括通過抑制病人體內(nèi)翻譯提前終止、無義密碼子介導(dǎo)的mRNA衰變，或翻譯提前終止和無義密碼子介導(dǎo)的mRNA衰變而治療和預(yù)防疾病或改善紊亂的方法，所述方法包括給予需要這類治療或預(yù)防的病人治療有效量的本發(fā)明化合物。
在一實(shí)施方式中，本發(fā)明包括與呈現(xiàn)翻譯提前終止、無義密碼子介導(dǎo)的mRNA衰變或翻譯提前終止和無義密碼子介導(dǎo)的mRNA衰變的基因相關(guān)的任何疾病。在一實(shí)施方式中，所述疾病部分地歸因于由提前終止密碼子引起的基因表達(dá)的缺乏或降低。可能呈現(xiàn)翻譯提前終止和/或無義密碼子介導(dǎo)的mRNA衰變基因以及與翻譯提前終止和/或無義密碼子介導(dǎo)的mRNA衰變相關(guān)的疾病的特別實(shí)例出自于2001年6月21日提交的美國臨時(shí)專利申請60/390747，題目為“Methods For Identifying SmallMolecules That Modulate Premature Translation Termination And NonsenseMediated mRNA Decay”；以及于2003年6月23日提交的國際申請PCT/US03/19760。這兩篇一并完整引入作為參考。
通過抑制翻譯提前終止、無義密碼子介導(dǎo)的mRNA衰變，或翻譯提前終止和無義密碼子介導(dǎo)的mRNA衰變而改善的疾病包括但不限于遺傳疾病、軀體疾病(somatic diseases)、癌癥、自身免疫性疾病、血液病、膠原病、糖尿病、神經(jīng)變性疾病、增殖疾病(proliferative diseases)、心血管疾病、肺部疾病、炎癥性疾病或中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。
在一實(shí)施方式中，通過對需要的病人給予治療有效量的本發(fā)明的化合物得以治療或預(yù)防的疾病包括但不限于淀粉樣變、血友病、阿爾茨海默病、泰-薩病、尼-皮病、動脈粥樣硬化、巨人癥、侏儒癥、甲狀腺機(jī)能減退、甲狀腺功能亢進(jìn)、衰老、肥胖癥、帕金森癥、囊性纖維化病、肌營養(yǎng)不良、心臟病、腎結(jié)石、共濟(jì)失調(diào)性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥、家族性高膽固醇血癥、視網(wǎng)膜色素變性、迪謝納肌營養(yǎng)不良、大皰性表皮松解癥和馬方綜合征。在一種實(shí)施方式中，所述疾病與無義突變相關(guān)。
在一實(shí)施方式中，本發(fā)明所述化合物用于治療或預(yù)防自身免疫疾病。在一實(shí)施方式中，所述自身免疫疾病與無義突變相關(guān)。在優(yōu)選實(shí)施方式中，所述自身免疫性疾病為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或移植物抗宿主病。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明所述化合物用于治療或預(yù)防血液病。在一實(shí)施方式中，所述血液病與無義突變相關(guān)。在優(yōu)選實(shí)施方式中，所述血液病為血友病、馮·維勒布蘭德病、共濟(jì)失調(diào)性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥、β地中海貧血癥或腎結(jié)石。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明所述化合物用于治療或預(yù)防膠原病。在一實(shí)施方式中，所述膠原病與無義突變相關(guān)。在優(yōu)選實(shí)施方式中，所述膠原病為成骨不全或硬化。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明所述化合物用于治療或預(yù)防糖尿病。在一實(shí)施方式中，所述糖尿病與無義突變相關(guān)。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明所述化合物用于治療或預(yù)防炎癥性疾病。在一實(shí)施方式中，所述炎癥性疾病與無義突變相關(guān)。在優(yōu)選實(shí)施方式中，所述炎癥性疾病為關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明所述化合物用于治療或預(yù)防中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。在一實(shí)施方式中，所述中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病與無義突變相關(guān)。在優(yōu)選實(shí)施方式中，所述中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病為多發(fā)性硬化、肌營養(yǎng)不良、迪謝納肌營養(yǎng)不良、阿爾茨海默病、泰-薩病、尼-皮病、晚嬰兒型神經(jīng)元蠟樣質(zhì)脂褐素沉積病(LINCL)或帕金森癥。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明所述化合物用于治療或預(yù)防癌癥，特別是人類癌癥。在一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述癌癥為頭與頸、眼、皮膚、口、咽、食道、胸、骨、血、肺、結(jié)腸、乙狀結(jié)腸、直腸、胃、前列腺、乳房、卵巢、腎、肝、胰腺、腦、腸、心臟或腎上腺的癌癥。在另一實(shí)施方式中，所述癌癥為實(shí)體瘤。在一實(shí)施方式中，所述癌癥與無義突變相關(guān)。在另一實(shí)施方式中，所述癌癥與遺傳的無義突變相關(guān)。在另一實(shí)施方式中，所述癌癥與體細(xì)胞突變相關(guān)。不受任何理論的限制，本發(fā)明的化合物的抗癌用途可能與其抗p53基因突變的作用有關(guān)。
在一實(shí)施方式中，所述癌癥不是血液癌。在另一種實(shí)施方式中，所述癌癥不是白血病。在另一種實(shí)施方式中，所述癌癥不是多發(fā)性骨髓瘤。在另一實(shí)施方式中，所述癌癥不是白血病。在另一種實(shí)施方式中，所述癌癥不是前列腺癌。
在另一優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明所述化合物用于治療或預(yù)防與腫瘤抑制基因變異有關(guān)的癌癥。所述基因包括但不限于PTEN、BRCAl、BRCA2、Rb和p53基因。在一實(shí)施方式中，所述突變?yōu)檫z傳突變。在另一實(shí)施方式中，所述突變?yōu)轶w細(xì)胞突變。本發(fā)明的方法特別用于治療或預(yù)防與腫瘤抑制基因中的無義突變相關(guān)的癌癥。在優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法特別用于治療或預(yù)防與p53基因相關(guān)歸因于p53在細(xì)胞凋亡中的作用的癌癥。不受任何理論的限制，認(rèn)為通過用有效量的本發(fā)明化合物接觸細(xì)胞，導(dǎo)致無義突變的抑制，從而依次允許全長p53的產(chǎn)生，能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。無義突變已經(jīng)在p53基因中鑒定，并且已經(jīng)在癌癥中相關(guān)。p53基因中的幾個(gè)無義突變已經(jīng)被鑒定出來(參見例如Masuda等人，2000，Tokai J Exp Clin Med.25(2)69-77；Oh等人，2000，MoI Cells10(3)275-80；Li等人，2000，Lab Invest.80(4)493-9；Yang等人，1999，Zhonghua Zhong Liu Za Zhi 21(2)114-8；Finkelstein等人，1998，MoIDiagn.3(1)37-41；Kajiyama等人，1998，Dis Esophagus.11(4)279-83；Kawamura等人，1999，Leuk Res.23(2)115-26；Radig等人，1998，HumPathol.29(11)1310-6；Schuyer等人，1998，Int J Cancer 76(3)299-303；Wang-Gohrke等人，1998，Oncol Rep.5(1)65-8；Fulop等人，1998，J ReprodMed.43(2)119-27；Ninomiya等人，1997，J Dermatol Sci.14(3)173-8；Hsieh等人，1996，Cancer Lett.100(1-2)107-13；Rail等人，1996，Pancreas.12(1)10-7；Fukutomi等人，1995，Nippon Rinsho.53(11)2764-8；Frebourg等人，1995，Am J Hum Genet.56(3)608-15；Dove等人，1995，Cancer Surv.25335-55；Adamson等人，1995，Br J Haematol.89(1)61-6；Grayson等人，1994，Am J Pediatr Hematol Oncol.16(4)341-7；Lepelley等人，1994，Leukemia.8(8)1342-9；Mclntyre等人，1994，J Clin Oncol.12(5)925-30；Horio等人，1994，Oncogene.9(4)1231-5；Nakamura等人，1992，Jpn JCancer Res.83(12)1293-8；Davidoff等人，1992，Oncogene.7(1)127-33以及Ishioka等人，1991，Biochem Biophys Res Commun.177(3)901-6；thedisclosures of which are hereby incorporated by reference herein in theirentireties)。與p53基因編碼翻譯提前密碼子相關(guān)的任何疾病，包括但不限于上述引用參考文獻(xiàn)中所述的無義突變，能通過本發(fā)明化合物得到治療或預(yù)防。
在其他的實(shí)施方式中，通過對需要的病人給予治療有效量的本發(fā)明的化合物得以治療或預(yù)防的疾病包括但不限于實(shí)體瘤諸如肉瘤、癌、纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、軟骨肉瘤、骨源性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內(nèi)皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因肉瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、胰癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細(xì)胞癌、肝癌、膽管癌、絨毛膜癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌、維爾姆斯瘤、子宮頸癌、睪丸瘤、肺癌、小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、卡波西肉瘤、松果體瘤、成血管細(xì)胞瘤、聽神經(jīng)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦膜瘤、黑素瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、血液產(chǎn)生的腫瘤或多發(fā)性骨髓瘤。
在另一實(shí)施方式中，通過對需要的病人給予治療有效量的本發(fā)明的化合物得以治療或預(yù)防的疾病包括但不限于急性成淋巴細(xì)胞性白血病、B細(xì)胞型急性淋巴細(xì)胞白血病、T細(xì)胞型急性淋巴細(xì)胞白血病、急性粒細(xì)胞白血病、急性早幼粒細(xì)胞白血病、急性成單核細(xì)胞性白血病、急性紅白血病、急性成巨核細(xì)胞白血病、急性粒單核細(xì)胞白血病、急性非淋巴細(xì)胞白血病、急性未分化細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、多毛細(xì)胞白血病或多發(fā)性骨髓瘤。參見例如Harrison′s Principles of Internal Medicine，Eugene Braunwald等人編輯，pp.491-762(第15版，2001)。
在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明包括對折磨人類的實(shí)體瘤和血液腫瘤的治療。
在優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明包括一種治療或預(yù)防疾病的方法，該方法通過調(diào)節(jié)翻譯提前終止、無義密碼子介導(dǎo)的mRNA衰變，或翻譯提前終止和無義密碼子介導(dǎo)的mRNA衰變而改善疾病或改善一種或幾種與之相關(guān)的癥狀，所述方法包括使細(xì)胞與治療有效量的本發(fā)明化合物接觸。包括在本發(fā)明方法中的細(xì)胞包括動物細(xì)胞、哺乳動物細(xì)胞、細(xì)菌細(xì)胞以及病毒感染的細(xì)胞。在一種實(shí)施方式中，所述無義密碼子突變?yōu)檫z傳突變(即在祖先DNA(progenitor DNA)中存在無義密碼子)。在另一中實(shí)施方式中，所述無義密碼突變?yōu)轶w細(xì)胞突變(即所述無義密碼子自發(fā)或通過誘變產(chǎn)生)。
在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明化合物作為對抗與翻譯提前終止、無義介導(dǎo)的mRNA衰變或翻譯提前終止和無義密碼子介導(dǎo)的mRNA衰變相關(guān)的疾病的預(yù)防措施，給藥的受治對象包括但不限于植物、爬行動物、鳥類、兩棲動物或優(yōu)選哺乳動物更優(yōu)選人類。
在優(yōu)選的實(shí)施方式中，首先確定病人患有與翻譯提前終止和/或無義密碼子介導(dǎo)的mRNA衰變相關(guān)疾病。在另一種實(shí)施方式中，病人經(jīng)過篩選過程以確定存在無義密碼子突變，所述篩選過程包括通過可接受無義突變密碼子篩選測定，篩選受治對象或篩選從受治對象中提取的細(xì)胞的步驟。在優(yōu)選實(shí)施方式中，所述病人的DNA能通過測定其序列或進(jìn)行DNA印跡(Southern Blot)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、應(yīng)用短串聯(lián)重復(fù)(STR)或限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)分析，確定是否在病人的DNA中存在無義突變。在一實(shí)施方式中，通過與祖(progenitor)DNA比對確定所述無義突變是遺傳突變還是體細(xì)胞突變。任選地，能通過蛋白質(zhì)印跡或其他免疫測定法，測定病人表達(dá)的無義突變蛋白水平是否變化來確定所述無義突變是遺傳突變還是體細(xì)胞突變。在另一種實(shí)施方式中，所述病人為在子宮中接受無義突變存在篩選的未出生的孩子。本發(fā)明的化合物既可以在出生前也可以在出生后給藥。在相關(guān)的實(shí)施方式中，所述治療個(gè)人化，其中篩選病人進(jìn)行無義突變篩選測定，并通過給予本發(fā)明化合物治療；特別地，可以用特別適于例如依照疾病類型、細(xì)胞類型以及有問題的基因而定的有問題突變的化合物治療所述病人。所述方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知。
在另一實(shí)施方式中，用例如如上所述的方法(即細(xì)胞的DNA能通過測定其序列或進(jìn)行DNA印跡、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、應(yīng)用短串聯(lián)重復(fù)或限制性片段長度多態(tài)性分析，確定是否在病人的DNA中存在無義突變；細(xì)胞的RNA可以通過定量實(shí)時(shí)PCR測定轉(zhuǎn)錄豐度)篩選出翻譯提前終止和/或無義密碼子介導(dǎo)的mRNA衰變的細(xì)胞(例如動物細(xì)胞、哺乳動物細(xì)胞、細(xì)菌細(xì)胞、植物細(xì)胞以及病毒感染的細(xì)胞)。
本發(fā)明的具體方法還包括給予另外的治療試劑(即不同于本發(fā)明化合物的治療試劑)。在本發(fā)明的特定實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物可以與至少一種其他治療試劑結(jié)合使用。治療試劑包括但不限于非阿片樣鎮(zhèn)痛藥、非甾體抗炎藥、類固醇、鎮(zhèn)吐劑、β-腎上腺素阻滯劑、抗驚厥劑、抗抑郁藥、Ca2+通道阻滯劑、抗癌劑和抗生素以及它們的混合物。
在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物可以結(jié)合抗癌劑給藥或配制。合適的抗癌試劑包括但不限于烷化劑、氮芥、葉酸拮抗劑、嘌呤拮抗劑、嘧啶拮抗劑、紡錘體抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑、血管生成抑制劑、鬼臼毒素、亞硝基脲、順鉑、碳鉑、干擾素、，天冬酰胺酶(asparginase)、三苯氧胺、亮丙瑞林、氟他米特、甲地孕酮、絲裂霉素C、，爭光霉素、阿霉素、依立替康和紫杉酚。
在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物可以結(jié)合抗生素給藥或配制。在一些實(shí)施方式中，所述抗生素為氨基糖甙(例如妥布霉素)、頭孢菌素(例如先鋒霉素IV、頭孢霉定、頭孢呋新、頭孢羅齊、頭孢克洛、頭孢克肟或頭孢羥氨芐)、克拉霉素(例如克拉霉素)、大環(huán)內(nèi)酯(例如乙基琥珀酸紅霉素酯)、青霉素(例如青霉素V)或喹諾酮(例如氧氟沙星、環(huán)丙沙星或氟哌酸)。在一優(yōu)選實(shí)施方式中，所述抗生素有效抗綠膿假單胞菌活性。
不為受理論限制，認(rèn)為本發(fā)明的方法通過抑制無義突變的機(jī)制綜合起作用。在優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明所述方法包括給予治療有效量的至少一種本發(fā)明的化合物例如式1所示的化合物。本發(fā)明化合物的相對活性可以通過本領(lǐng)域公知的任何方法測定，包括本文實(shí)施例2描述的測定。
本發(fā)明的化合物可以用體外熒光素酶無義突變抑制測定表征。熒光素酶測定包括在本發(fā)明的方法中。熒光素酶可以用作功能報(bào)告基因測定(只有蛋白有功能才產(chǎn)生光)，并且熒光素酶非常靈敏(光密度在nM范圍與熒光素酶濃度成比例)。在一實(shí)施方式中，本發(fā)明的測定為基于細(xì)胞的熒光素酶報(bào)告測定。在優(yōu)選基于細(xì)胞的熒光素酶報(bào)告測定中，含有提前終止密碼子(UGA、UAA或UAG)的熒光素酶報(bào)告構(gòu)建體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染入293人胚腎細(xì)胞中。
在本發(fā)明的另一測定中，優(yōu)選的測定為包括兔網(wǎng)織紅細(xì)胞溶胞產(chǎn)物和含有無義密碼子的熒光素酶報(bào)告子mRNA的生物化學(xué)測定。在本發(fā)明的另一個(gè)測定中，所述測定包括制備并優(yōu)化的細(xì)胞提取物的生物化學(xué)測定(Lie & Macdonald，1999，Development 126(22)4989-4996和Lie &Macdonald，2000，Biochem.Biophys.Res.Commun.270(2)473-481)。在生物化學(xué)測定中，含有提前終止密碼子(UGA、UAA或UAG)的mRNA在體外翻譯反應(yīng)中用作報(bào)告子，使用添加tRNA、氯高鐵原卟啉、肌酸激酶、氨基酸、KOAc、Mg(OAc)2以及磷酸肌酸的兔網(wǎng)織紅細(xì)胞溶胞產(chǎn)物。mRNA的翻譯在病毒來源的引導(dǎo)序列中起始，因?yàn)椴恍枰用钡腞NA，顯著降低了測定的成本。使用T7啟動子和MegaScript體外轉(zhuǎn)錄試劑盒(Ambion，Inc.；Austin，Texas)在體外制備合成mRNA。在本發(fā)明的測定中，已知慶大霉素、氨基糖甙的添加允許通讀提前終止密碼子，導(dǎo)致增強(qiáng)的熒光素酶活性，并能用作內(nèi)標(biāo)。本發(fā)明的分析可被用于高通量篩選中。成百上千的化合物能夠在本發(fā)明基于細(xì)胞的生物化學(xué)測定中篩選。在優(yōu)選的方面，基于細(xì)胞的功能性測定與所述的測定類似。
本發(fā)明的化合物包括能從包括提前終止密碼子的mRNA分子提高特異性功能蛋白表達(dá)的化合物。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物能優(yōu)先抑制翻譯提前終止。例如如果突變產(chǎn)生UAA，本發(fā)明的化合物能抑制該無義突變；但是如果所述突變產(chǎn)生UAG，本發(fā)明的化合物不能抑制該無義突變。能發(fā)生另一種非限定性的實(shí)例，如果突變產(chǎn)生UAA并且在+1位置緊接符合閱讀框(in-frame)的胞嘧啶，本發(fā)明的化合物能抑制無義突變，但是如果突變產(chǎn)生UAA并且在+1位置緊接符合閱讀框的腺嘌呤，本發(fā)明的化合物不能抑制無義突變。
帶有含UGA無義密碼子熒光素酶基因的穩(wěn)定細(xì)胞系可以用待測化合物處理。在此方面，細(xì)胞可以生長在補(bǔ)充有1％青霉素-鏈霉素(P/S)和10％胎牛血清的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基中至70％鋪滿，在處理前一天1∶1拆分。第二天，胰蛋白酶作用細(xì)胞，并且在96孔組織培養(yǎng)皿的每一孔中加入40000個(gè)細(xì)胞。制備每種化合物的系列稀釋液，以產(chǎn)生六個(gè)點(diǎn)跨越2個(gè)log(30μM至0.3μM)的劑量響應(yīng)曲線。二甲亞砜溶劑的終濃度保持常量每孔1％。用1％二甲亞砜處理后的細(xì)胞作為本底標(biāo)準(zhǔn)，并且用慶大霉素處理后的細(xì)胞作為陽性對照。
為闡述抑制特定遺傳疾病改變的mRNA上無義密碼子化合物的效果，在1282氨基酸處(W 1282X)帶有無義突變密碼子的支氣管上皮細(xì)胞系能用本發(fā)明的化合物處理，并且用硫丙基喹啉(sulfopropylquinolinium，SPQ)測定監(jiān)視作為cAMP激活的氯化物通道的囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子的功能(Yang等人，Hum.MoI.Genet.2(8)1253-1261(1993)and Howard等人，Nat.Med.2(4)467-469(1996))。在用本發(fā)明化合物處理的細(xì)胞中SPQ熒光的增加，與用cAMP處理的細(xì)胞以及未經(jīng)處理細(xì)胞的SPQ熒光進(jìn)行比較。細(xì)胞中SPQ熒光的增加與CFTR介導(dǎo)的鹵化物溢出的刺激以及無義密碼子的通讀增加一致。從用本發(fā)明化合物處理后的含無義密碼子等位基因表達(dá)全長CFTR，證明當(dāng)用本發(fā)明化合物處理后，囊性纖維化細(xì)胞系提高了氯化物通道活性。
D、本發(fā)明化合物的代謝產(chǎn)物這里所述的化合物在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物同樣落入本發(fā)明范圍。所述產(chǎn)物可以起因于例如給藥化合物的氧化、還原、水解、酰胺化、酯化等，主要?dú)w因于酶的處理。因此，本發(fā)明包括通過一種方法產(chǎn)生的化合物，該方法包括使本發(fā)明的化合物與哺乳動物組織或哺乳動物接觸一段時(shí)間，足以產(chǎn)生該化合物的代謝產(chǎn)物。所述化合物通常通過制備放射性標(biāo)記的本發(fā)明化合物(例如C14或H3)，以可測劑量(多于約0.5毫克/千克)給予諸如大鼠、小鼠、豚鼠、猴子的哺乳動物或者人，允許發(fā)生新陳代謝的足夠的時(shí)間(通常約為30秒至30小時(shí))，并且從尿、血或其他生物學(xué)樣本中分離轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物而鑒定。這些產(chǎn)物由于被標(biāo)記因此很容易分離(通過使用能結(jié)合在代謝產(chǎn)物上存在的抗原表位的抗體與其他物質(zhì)分離)。所述代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)以常規(guī)的方式鑒定，例如質(zhì)譜(MS)或核磁共振(NMR)分析。一般而言，代謝產(chǎn)物的分析可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的與常規(guī)藥物研究相同的方法完成。所述轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，只要它們不是與體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的不同，都有益于本發(fā)明化合物治療劑量的診斷測定，即使它們本身什么沒有生物學(xué)活性。
E、本發(fā)明的藥物組合物雖然可能以純的本發(fā)明化合物給藥，但是優(yōu)選配方該化合物成藥物組合物。照此，在本發(fā)明另一個(gè)方面，提供了用于本發(fā)明方法中的藥物組合物。本發(fā)明的藥物組合物可以根據(jù)給藥的具體方式以及劑量組成，與諸如載體、溶劑、穩(wěn)定劑、佐劑、稀釋劑等的藥學(xué)可接受的賦形劑制劑。所述藥物組合物一般應(yīng)當(dāng)制成達(dá)到生理適合pH的制劑，根據(jù)制劑以及給藥途徑，范圍可以從pH約3至pH約11，優(yōu)選pH約3至pH約7。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明藥物組合物的pH可以調(diào)節(jié)到pH約4至pH約7。在可選的實(shí)施方式中，優(yōu)選調(diào)節(jié)pH的范圍為pH約5至pH約8。
更具體地，本發(fā)明的藥物組合物包括治療或預(yù)防有效量的至少一種本發(fā)明化合物，以及一種或多種藥學(xué)可接受的賦形劑。任選地，本發(fā)明的藥物組合物可以包括本發(fā)明化合物的組合，或可以包括有益于癌癥、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、滲出性黃斑變性治療的第二活性成分。
本發(fā)明的制劑，例如用于腸胃外或口服給藥的，大多為通常的固體、液體溶液、乳劑或懸浮劑，而用于肺給藥的可吸入制劑，一般為液體或粉末，一般優(yōu)選粉末制劑。本發(fā)明優(yōu)選的藥物組合物還可以制成凍干固體制劑，在給藥前用生理可接受溶劑重新溶解配成原來濃度?？蛇x的本發(fā)明藥物組合物可以制成糖漿劑、乳膏、軟膏劑、片劑等。
本發(fā)明的藥物組合物能通過現(xiàn)有技術(shù)公知的任何藥物給藥途徑給予受治者。具體典型的給藥途徑包括口、眼(ocular)、直腸、頰、局部、鼻、眼(ophthalmic)、皮下、肌內(nèi)、靜脈(推注和滴注)、大腦內(nèi)、經(jīng)皮，以及肺的給藥。
術(shù)語“藥學(xué)可接受的賦形劑”是指用于諸如本發(fā)明化合物的藥物制劑的給藥賦形劑。該術(shù)語指任何給藥沒有過度毒性的藥物賦形劑。藥學(xué)可接受的賦形劑部分地由具體給藥的組合物以及用于該組合物給藥的具體方法決定。因此，本發(fā)明藥物組合物存在廣泛多樣的適合制劑(參見例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，18thEd.，Mack Publishing Co.，1990)。
合適的載體可以運(yùn)載包括大型、代謝慢的大分子例如蛋白質(zhì)、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、多聚氨基酸、氨基酸共聚物以及滅活病毒顆粒。。其他典型的賦形劑包括諸如抗壞血酸的抗氧化劑，諸如EDTA的螯合劑，諸如糊精、羥烷基纖維素、羥烷基甲基纖維素、硬脂酸的碳水化合物，諸如油、水、生理鹽水、甘油和乙醇的液體，潤濕或乳化劑，pH緩沖物質(zhì)等。脂質(zhì)體也包括在藥學(xué)可接受的賦形劑的定義內(nèi)。
本發(fā)明藥物組合物可以制成任何適于指定給藥方法的制劑形式。當(dāng)計(jì)劃用于口服使用時(shí)，可以制備例如片劑、含片(troches)、錠劑、水懸浮劑或有懸浮劑、非水溶液、可分散性粉末或顆粒(包括微?；念w粒或納米顆粒)、乳劑、硬膠囊或軟膠囊、糖漿劑、酏劑。計(jì)劃口服使用的組合物可以根據(jù)本領(lǐng)域公知的任何制備藥物組合物的方法制備，并且所述組合物可以含有一種或多種包括甜味劑、調(diào)味劑、著色劑和防腐劑的試劑以提供可口的制品。
特別適于與片劑結(jié)合使用的藥學(xué)可接受的賦形劑包括例如諸如纖維素、碳酸鈉或碳酸鈣、乳糖、磷酸鈉或磷酸鈣的惰性稀釋劑，諸如交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯酮、玉米淀粉或褐藻酸的崩解劑，諸如聚乙烯吡咯酮、淀粉、明膠或阿拉伯膠的粘合劑，以及諸如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石的潤滑劑。片劑可以不包衣，或者用包括微囊法的公知技術(shù)包衣以延遲崩解并在胃腸道中吸收，從而因此在較長時(shí)期里提供持續(xù)活性。例如可以單獨(dú)或與蠟一起使用諸如單硬酯酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯的時(shí)間延遲物質(zhì)。
口服使用的制劑還可以作成硬明膠膠囊，其中活性成分與例如纖維素、乳糖、磷酸鈣或高嶺土的惰性固體稀釋劑混合，或者作成軟明膠膠囊，其中活性成分與例如甘油、丙二醇、聚乙二醇、花生油、液體石蠟或橄欖油的非水或油性介質(zhì)混合。
在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明藥物組合物可以作成懸浮劑制劑，包括混合有至少一種適于制備懸浮劑的藥學(xué)可接受的賦形劑的本發(fā)明化合物。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的藥物組合物可以通過加入適宜的賦形劑制成適于制備成懸浮液的分散性粉末以及顆粒制劑。
適合用于與懸浮液相關(guān)的賦形劑包括諸如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、西黃蓍膠、阿拉伯膠的懸浮劑，諸如天然產(chǎn)生的磷脂(如卵磷脂)的分散劑或濕潤劑，烯烴氧化物與脂肪酸的縮合物(如聚氧乙烯硬脂酸酯)，環(huán)氧乙烷與長鏈脂肪族醇的縮合物(如十七烷乙烯氧化乙醇(heptadecaethyleneoxycethanol))，環(huán)氧乙烷與具有得自脂肪酸和己糖醇酐的部分酯的縮合物(如聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯)，以及卡波姆、蜂蠟、固體石蠟或鯨蠟醇的增稠劑。所述懸浮劑還可以含有一種或多種諸如乙酸、甲基和/或正丙基對羥基苯甲酸甲酯防腐劑，一種或多種著色劑，以中或多種調(diào)味劑以及一種或幾種諸如蔗糖或糖精的甜味劑。
本發(fā)明藥物組合物還可以為水包油乳劑形式。所述油相可以為例如橄欖油或花生油的植物油，例如液體石蠟的礦物油，或者它們的混合物。適合的乳化劑包括諸如阿拉伯膠或西黃蓍膠的天然產(chǎn)生的膠，諸如大豆卵磷脂的天然產(chǎn)生的磷脂，得自脂肪酸和己糖醇酐的酯或部分酯例如失水山梨醇單硬脂酸酯，以及這些部分酯與環(huán)氧乙烷的縮合物例如聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯。所述乳劑還可以包括甜味劑和調(diào)味劑。糖漿劑和酏劑可以用諸如甘油、山梨醇或蔗糖的甜味劑制成制劑。所述制劑還可以包括濕潤劑、防腐劑、調(diào)味劑或著色劑。
此外本發(fā)明的組合物可以制成無菌注射制品形式，例如無菌注射水性乳劑或油狀懸浮劑(oleaginous suspension)。所述乳劑或懸浮劑可以根據(jù)已知現(xiàn)有技術(shù)使用上述所述的合適的分散劑或濕潤劑以及懸浮劑制備。所述無菌注射制品還可以為無毒腸胃外可接受稀釋劑或諸如丙二醇的溶劑中的無菌注射溶液或懸浮液。所述無菌注射液制品還可以制備成凍干粉末?？梢允褂玫目山邮茌d體和溶劑中包括水、林格氏液(Ringer’s solution)和等滲氯化鈉溶液。此外，無菌不揮發(fā)油可以用作溶液或懸浮液介質(zhì)。為此目的，可以使用任何溫和不揮發(fā)的油包括合成單甘油酯或甘油二酯。此外，諸如油酸的脂肪酸同樣可以用于可注射制品。
一般而言，在本發(fā)明方法中有益的本發(fā)明的化合物基本上不能溶解于水，并且在少量可溶于大多數(shù)藥學(xué)可接受的質(zhì)子溶劑以及植物油。然而，所述化合物通常可溶于長鏈脂肪酸(例如辛酸和癸酸)或甘油三酯介質(zhì)中，并在丙二醇的中碳鏈脂肪酸酯中具有高度溶解性。本發(fā)明中還考慮了被取代或添加化學(xué)或生物化學(xué)部分(moiety)而修飾的化合物，所述部分使化合物更適合于給藥(例如增加可溶性、生物活性、可口性、減少不利反應(yīng)等)，例如通過酯化作用、糖基化作用、聚乙二醇化作用(PEGylation)等。
在優(yōu)選
具體實(shí)施例方式
中，本發(fā)明所述化合物可以在適合于低溶解性化合物的脂質(zhì)制劑(lipid-based formulation)中制成用于口服給藥的的制劑。脂質(zhì)制劑一般能提高所述化合物的口服生物利用度。照此，優(yōu)選的本發(fā)明藥物組合物包括治療或預(yù)防有效量的本發(fā)明化合物、至少一種選自由中碳量脂肪酸或其丙二醇酯(例如諸如辛酸和癸酸的可食用脂肪酸的丙二醇酯)組成的組中的藥學(xué)可接受賦形劑，以及諸如聚乙二醇40氫化蓖麻油的藥學(xué)可接受表面活性劑。
在可選的優(yōu)選實(shí)施方式中，環(huán)糊精可以作為水溶解性增加劑加入。優(yōu)選的環(huán)糊精包括α-、β-和γ-環(huán)糊精的羥丙基、羥乙基、葡萄糖基、麥芽糖基和-麥芽三糖基衍生物。特別優(yōu)選的環(huán)糊精水溶解性增加劑為羥丙基-β-環(huán)糊精(HPBC)，可以加入上述任何物組合物組中，以進(jìn)一步提高本發(fā)明化合物的水溶解特性。在一種實(shí)施方式中，所述組合物包括0.1％至20％的羥丙基β-環(huán)糊精，更優(yōu)選1％至15％的羥丙基β-環(huán)糊精，甚至更優(yōu)選2.5％至10％的羥丙基β-環(huán)糊精。使用的溶解性增加劑的量取決于本發(fā)明的化合物在組合物中的量。
這里所用的治療有效量是指本發(fā)明藥物組合物治療、改善或調(diào)解已鑒定的疾病或狀態(tài)、或者顯示出可測治療或抑制效果的量。所述效果能夠通過例如本發(fā)明的測定法測得。所述效果還可以為預(yù)防在個(gè)體或高百分率的人群中預(yù)測到的疾病或狀態(tài)。
受治者精確的有效量取決于受治者的體重、身高以及健康；狀態(tài)的性質(zhì)和程度；給藥選擇的治療或治療的組合、蛋白質(zhì)的半衰期、mRNA的半衰期以及蛋白的定位。給定情況的治療有效量可以通過臨床醫(yī)生技能和判斷范圍內(nèi)的常規(guī)實(shí)驗(yàn)測定。
對于任何化合物，治療有效量最初能夠在例如瘤細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)測定，或者在通常為大鼠、小鼠、兔、犬或豬的動物模型中估計(jì)。所述動物模型還可以用于測定合適的濃度范圍和給藥途徑。然后上述信息能被用于測定人類中有效劑量和給藥途徑。治療/預(yù)防的有效性和毒性可以通過標(biāo)準(zhǔn)藥物操作在細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動物中測定，例如ED50(在50％群體中治療有效的劑量)和LD50(在50％群體中致死的劑量)。毒性和治療效果的劑量比為治療指數(shù)，并且可以表達(dá)為比例LD50/ED50。優(yōu)選顯示出治療指數(shù)大的藥物組合物。得自細(xì)胞培養(yǎng)測定以及動物研究的數(shù)據(jù)可以用于計(jì)算人用制劑的劑量范圍。在所述組合物中含有的劑量優(yōu)選為低毒或無毒的包括ED50的循環(huán)濃度范圍內(nèi)。所述劑量可以根據(jù)應(yīng)用劑量形式、病人敏感度以及給藥途徑在此范圍內(nèi)變化。
更具體地，關(guān)于本發(fā)明化合物觀察到的濃度-生物學(xué)效果關(guān)系表明初始的血漿靶濃度的范圍為從大約5微克/毫升至大約100微克/毫升，優(yōu)選為從大約10微克/毫升至大約50微克/毫升，更優(yōu)選為大約10微克/毫升至大約25微克/毫升。為了達(dá)到上述血漿濃度，本發(fā)明所述化合物根據(jù)給藥途徑，以從1毫克/千克至150毫克/千克的變化劑量給藥。文獻(xiàn)中提供了關(guān)于具體給藥劑量和給藥方法的指導(dǎo)，并且所述文獻(xiàn)為本領(lǐng)域的開業(yè)醫(yī)生普遍可得。一般而言，所述劑量范圍為約1毫克/天至約10克/天，或者為約0.1克/天至約3克/天，或者為約0.3克/天至約3克/天，或者為約0.5克/天至約2克/天，以單次劑量、分份劑量或連續(xù)劑量給予約40至約100千克體重的病人(其中劑量可以為高于或低于此體重范圍的病人，特別是低于40千克的兒童進(jìn)行調(diào)整)。
然而，本發(fā)明特殊活性成分在急性或慢性疾病或狀況的處理中的預(yù)防或治療劑量的量值，將隨疾病或狀況的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，以及活性成分的給藥途徑而變化。所述劑量以及大概劑量頻率也根據(jù)個(gè)體病人的年齡、體重和應(yīng)答而變化。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠容易地根據(jù)對上述因素適當(dāng)考慮，選擇合適的劑量服用法。一般而言，由于這里所述存在的情況，推薦每日劑量范圍為每天從約1毫克/千克至約150毫克/千克。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物作為一天單獨(dú)一次的劑量給予。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物作為分份劑量貫穿一天給予。更具體地，以單次劑量或相等的分份劑量給予每日劑量。優(yōu)選地，每日劑量范圍應(yīng)該為每天從約5毫克/千克到約100毫克/千克，更優(yōu)選地，為約10毫克/千克到約90毫克/千克之間每天，甚至更優(yōu)選為20毫克/千克到60毫克/千克每天。在住院病人中，所述治療應(yīng)該以較低劑量開始，大概約200毫克至300毫克，根據(jù)病人的整體反應(yīng)情況，如果必要以單次劑量或分份劑量增加至每天約600毫克至約4000毫克。在某些情況下，必需使用的活性成分劑量超出這里公開的范圍，對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員顯而易見。此外，值得注意的是臨床醫(yī)師或治療內(nèi)科醫(yī)師了解如何以及何時(shí)中斷、調(diào)整或終止治療結(jié)合個(gè)體病人的反應(yīng)。
本領(lǐng)域普通技術(shù)人員很容易了解不同的治療有效量可以用于不同的疾病和狀況。類似地，足以治療或預(yù)防所述疾病的量，但是不足以引起或足以減少伴隨常規(guī)治療不利效果的量也包括在上述劑量的量和劑量頻率時(shí)間表中。
如前文所述，精確劑量將由醫(yī)生根據(jù)與要求治療的受治者相關(guān)的因素測定。劑量和給藥得以調(diào)整以提供足夠水平的活性試劑或保持所需的效果。需要考慮的因素包括疾病狀態(tài)的嚴(yán)重程度、受治者的全身健康狀態(tài)、受治者的年齡、體重以及性別、飲食、時(shí)間、感興趣蛋白的半衰期、感興趣RNA的半衰期、給藥的頻率、藥物組合、反應(yīng)敏感性以及對治療的耐受/應(yīng)答。長效藥物組合物可以根據(jù)具體制劑的半衰期和清除率每3至4天、每周或每兩周給藥一次。
F、聯(lián)合療法任何本發(fā)明的化合物可能組合一種或多種有益于這里所述的與mRNA無義突變相關(guān)疾病的治療其他活性成分，包括單一劑量的形式、分離劑量形式同時(shí)或連續(xù)給予需要治療病人的化合物。當(dāng)連續(xù)給藥時(shí)，所述組合物可能給藥兩次或者更多次。在可選實(shí)施方式中，本發(fā)明的一種或多種化合物以及一種或多種另外的活性成分可能以不同途徑給藥。
本領(lǐng)域技術(shù)人員會認(rèn)識到各種活性成分能與本發(fā)明化合物組合給藥，能起到增強(qiáng)或協(xié)同增強(qiáng)本發(fā)明化合物的抑制無義突變活性。
根據(jù)本發(fā)明的方法，活性成分的組合可以是(1)共同制劑并且給藥，或在組合制劑中同時(shí)給藥；(2)作為單獨(dú)制劑交替給藥或平行給藥；或(3)本領(lǐng)域公知任何其他組合治療用藥法。當(dāng)交替治療給藥時(shí)，本發(fā)明所述方法可以包括連續(xù)給予或遞送活性成分，例如在單獨(dú)的溶液、乳劑、懸浮劑、片劑、丸劑或膠囊劑中，或者通過單獨(dú)的注射器進(jìn)行不同的注射。一般而言，在交替治療中，每種活性成分的有效劑量得以連續(xù)給藥，即，連續(xù)地，但是在同時(shí)的治療中，兩種或兩種以上活性成分的有效劑量一起給藥。也可以使用各種順序的間隔組合治療。
G、基因治療本發(fā)明的化合物或其他無義化合物(nonsense compound)能與基因治療結(jié)合應(yīng)用。在此實(shí)施方式中，基因可以被引入或提供給在所需基因中含有特定無義突變的哺乳動物，優(yōu)選人類。在優(yōu)選方面，所需基因選自由IGF1、EPO、p53、p19ARF、p21、PTEN、EI24和ApoAI組成的組中。為了得到病人或哺乳動物中全長多肽的表達(dá)，當(dāng)該多肽是所需的多肽時(shí)，將給所述病人或哺乳動物提供有效量的本發(fā)明化合物或其他無義化合物。
主要有兩種途徑使含有無義突變的核苷酸(選擇性的在載體中含有)到達(dá)病人細(xì)胞中體內(nèi)和體外。對于體內(nèi)給藥，如果已知，通常在需要所述多肽的位點(diǎn)，即該多肽的合成位點(diǎn)以及需要所述多肽生物學(xué)活性的位點(diǎn)(例如實(shí)體瘤)，直接將核苷酸注射給病人。對于體外治療，移出病人細(xì)胞，將核苷酸引入所述分離的細(xì)胞，并將改良的細(xì)胞或者直接給予病人，或者例如包被在多孔膜中植入病人(參見例如US 4892538和US 5283187)。有多種技術(shù)可供將核苷酸引入活細(xì)胞。所述技術(shù)根據(jù)核苷酸轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)細(xì)胞，或轉(zhuǎn)入預(yù)期宿主的體內(nèi)細(xì)胞而變化。適合于體外轉(zhuǎn)移核苷酸進(jìn)入哺乳動物細(xì)胞的技術(shù)包括脂質(zhì)體、電穿孔術(shù)、顯微注射、轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞融合、二乙氨基乙基葡聚糖、磷酸鈣沉淀方法等的應(yīng)用。轉(zhuǎn)導(dǎo)包括復(fù)制缺陷重組病毒(優(yōu)選逆轉(zhuǎn)錄病毒)粒子與細(xì)胞報(bào)告子的聯(lián)合，然后將含在所述粒子中核苷酸的引入細(xì)胞。通常用于基因體外給藥的載體為逆轉(zhuǎn)錄病毒。
現(xiàn)有優(yōu)選體內(nèi)核的轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)包括用病毒或非病毒載體(例如腺病毒、慢病毒屬、單純皰疹I(lǐng)型病毒或腺病毒伴隨病毒(adeno-associatedvirus，AAV))以及基于脂質(zhì)系統(tǒng)(對脂介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移有用的脂類例如DOTMA、DOPE和DC-Choi；參見例如Tonkinson el al，CancerInvestigation，14(1)54-65(1996))的轉(zhuǎn)染。用于基因治療最優(yōu)選的載體為病毒，最優(yōu)選腺病毒、AAV、慢病毒屬或逆轉(zhuǎn)錄病毒。例如逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的病毒載體包括至少一個(gè)轉(zhuǎn)錄啟動子/增強(qiáng)子或基因座定義元件(locus-defining element)，或者通過諸如交替剪接、核RNA導(dǎo)出、或者翻譯后修飾信使的另外方式來控制基因表達(dá)的其他元件。此外，諸如逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的病毒載體包括一種核酸序列，當(dāng)轉(zhuǎn)錄編碼多肽的基因時(shí)，該核酸序列可操作地連接于編碼序列，起翻譯起始序列作用。所述載體構(gòu)建還包括包裝信號，長末端重復(fù)(long terminal repeats，LTRs)或其部分，以及適合于所用病毒的正義鏈和反義鏈引物結(jié)合位點(diǎn)(如果仍沒有存在于病毒載體中)。此外，所述載體通常包括用于從多肽所在的宿主細(xì)胞中分泌該多肽的信號序列。優(yōu)選所述用于此目的的信號序列為哺乳動物信號序列，更優(yōu)選該多肽的天然信號序列?？蛇x地，所述載體構(gòu)建體還可以包括指導(dǎo)多腺苷酸化信號，以及一種或多種限制位點(diǎn)和翻譯終止序列。通過實(shí)例，所述載體通常包括5’LTR、tRNA結(jié)合位點(diǎn)、包裝信號、第二鏈DNA合成起始點(diǎn)，以及3’LTR或其部分?？梢允褂玫钠渌d體為非病毒載體，例如陽離子脂質(zhì)、多聚賴氨酸和樹突三聚體(Dendrimer)。
在某些情況下，需要提供核酸放射源以及靶向靶細(xì)胞的試劑，諸如特異性細(xì)胞表面膜蛋白或靶細(xì)胞的抗體、靶細(xì)胞上受體配基等。在使用脂質(zhì)體的地方，結(jié)合細(xì)胞表面膜蛋白的與內(nèi)吞作用相關(guān)的蛋白可以用來靶向和/或促進(jìn)攝取，例如衣殼蛋白或其片段趨向特定細(xì)胞類型，在循環(huán)中經(jīng)受細(xì)胞內(nèi)攝作用的蛋白的抗體，以及靶向細(xì)胞內(nèi)定位并提高細(xì)胞內(nèi)半衰期的蛋白。受體介導(dǎo)(recpto-mediated)的內(nèi)吞作用技術(shù)通過例如Wu等人，J.Biol.Chem.2624429-4432(1987)和Wagner等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，873410-3414(1990)得到描述。為了回顧現(xiàn)有已知的基因標(biāo)記和基因治療方案，參見Anderson等人，Science 256808-813(1992)，還參考WO 93/25673，以及這里引用的文獻(xiàn)。
適合的基因治療以及制備逆轉(zhuǎn)錄病毒粒子和結(jié)構(gòu)蛋白的方法可以從諸如US 5681746、US 6800604和US 6800731中找到。
包括了以下實(shí)施例以輔助理解本發(fā)明。關(guān)于本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)當(dāng)然不應(yīng)當(dāng)解釋為對本發(fā)明的特別限定，并且本發(fā)明在本領(lǐng)域技術(shù)人員眼界中的現(xiàn)在已知或者以后發(fā)展的變化，都認(rèn)為落入這里所述以及在下文中要求的本發(fā)明的范圍中。
實(shí)施例參照下面的非限定性實(shí)施例來更詳細(xì)地描述本發(fā)明，這些實(shí)施例用于更充分地說明本發(fā)明，而不能理解為限定本發(fā)明的范圍。這些實(shí)施例闡述了本發(fā)明某些化合物的制備，這些化合物的體內(nèi)和/或體外測試。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解這些實(shí)施例所述的技術(shù)作為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的優(yōu)選模式，表示本發(fā)明人描述的用于很好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解的是，根據(jù)本發(fā)明公開的內(nèi)容，對于公開的具體方法可以做合適的改變，并且仍可獲得類似的結(jié)果，而不背離本發(fā)明的精神和范圍。
實(shí)施例1本發(fā)明化合物的制備A.吡咯的制備一般地，本發(fā)明的吡咯可以如下制備3-[1-(4-三氟甲基苯基)-]-1H-吡咯-3-基]苯甲酸鈉鹽(化合物14)的制備A部分.往1-(三異丙基甲硅烷基)吡咯-3-硼酸(根據(jù)Alvarez，A.；Guzman，A.；Ruiz，A.；Velarde，E.，J.Org.Chem.1992，57，1653-1656的方法制備)(6.12g，22.9mmol)在無水二甲氧基乙烷(76毫升)的溶液中加入4-碘苯甲酸甲酯(96.61g，25.2mmol)、二氯雙(三苯基膦)鈀(II)(0.484g，0.69mmol)和氟化銫(6.96g，45.8mmol)。將該混合物在氮?dú)鈿夥障录訜峄亓?7小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用水(100毫升)稀釋，并用乙酸乙酯(4×25mL)提取。提取物用水洗滌，用MgSO4干燥，并濃縮得到粗產(chǎn)物。該產(chǎn)物用硅凝膠色譜法(5-15％乙酸乙酯/己烷)提純，得到2.69g為白色固體的4-(1H-吡咯-3-基)苯甲酸甲酯(收率58％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.83(s，3H)，6.53(m，1H)，6.83(m，1H)，7.35(m，1H)，7.66(d，2H，J＝8.4Hz)，7.86(d，2H，J＝8.4Hz)，11.11(br s，1H)。
B部分.往4-(1H-吡咯-3-基)苯甲酸甲酯在無水二噁烷(67mL)的溶液中加入4-碘三氟甲苯(4.39g，16.1mmol)、二氧化銅(0.255g，1.34mmol)、乙二胺(81mg，1.35mmol)和磷酸鉀(10.16g，44.1mmol)。將該混合物在氮?dú)鈿夥障录訜峄亓?0小時(shí)，然后冷卻至室溫。將固體過濾，用乙酸乙酯洗滌并棄去。將濾出液濃縮，得到深色固體，該深色固體用水(50mL)稀釋并用乙酸乙酯(3×20mL)提取。提取物用水(2×20mL)洗滌，合并，用，MgSO4干燥，濃縮，得到粗產(chǎn)物。該粗產(chǎn)物用硅凝膠色譜法(5-20％乙酸乙酯)提純，得到為白色固體的2.00g 3-[1-(4-三氟甲基-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸甲酯(收率73％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.93(s，3H)，6.75(m，1H)，7.19(m，1H)，7.50(m，1H)，7.55(d，2H，J＝8.7Hz)，7.63(d，2H，J＝6.6Hz)，7.73(d，2H，J＝8.4Hz)，8.04(d，2H，J＝6.6Hz)。
C部分.往3-[1-(4-三氟甲基-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸甲酯(1.24g，3.59mmol)在叔丁醇(4mL)和水(16mL)的懸浮體中加入氫氧化鈉(0.215g，5.38mmol)。將該反應(yīng)混合物在氮?dú)鈿夥障录訜峄亓?小時(shí)，然后冷卻至室溫。將固體過濾，用水(3×4mL)洗滌，干燥，得到為灰色固體的0.90g產(chǎn)物(收率71％)。MS(ES+)m/z 332.61。
D部分.3-[1-(4-三氟甲基-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸的鈉鹽的一部分用1N aq.HCl中和，然后過濾、水洗滌并真空干燥，得到游離酸。熔點(diǎn)；224-226℃。MS(ES+)m/e 332.28(100)。MS(ES-)m/e 330.31(100)。
4-[1-(4-三氟甲基-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸(化合物105)A部分.往甲基三苯基溴化鏻(10.88g，30.46mmol，1eq.)和叔丁氧化鉀(31mL，1M的THF溶液，30.46mmol，1eq.)在THF中的漿料中加入4-甲酰苯甲酸甲酯(5.0g，30.46mmol，1eq.)。將淺黃色的反應(yīng)混合物在室溫下攪拌5小時(shí)。加入己烷，攪拌10分鐘后，將混合物過濾并用己烷洗滌兩次。真空除去溶劑，將粗制的油狀殘余物用硅凝膠色譜法(0-14％乙酸乙酯/己烷)提純，得到3.76g白色油狀固體，4-乙烯基苯甲酸甲酯(23.21mmol，76.2％yield)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.99(2H，d，J＝9Hz)，7.45(2H，d，J＝9Hz)，6.76(1H，dd，J＝17，11Hz)，5.86(1H，d，J＝17Hz)，5.37(1H，d，J＝11Hz)，3.91(3H，s)。
B部分.在氮?dú)庀聦⑹宥⊙趸c(3.681g，38.3mmol，2.0eq.)懸浮在無水DMSO中。通過套管向其中轉(zhuǎn)入4-乙烯基苯甲酸甲酯(3.11g 19.15mmol，1.0eq.)和甲苯磺?；愲?4.86g，24.89mmol，1.3eq.)在無水DMSO中的溶液。將該深棕色混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。加入10％10％HCl溶液將混合物的pH調(diào)至6，用水稀釋并用乙酸乙酯(3×50mL)提取。合并的有機(jī)提取物用水(2×50mL)和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，濃縮。粗制的殘留物用硅凝膠色譜法(20-40％乙酸乙酯/己烷)提純，得到990mg(4.92mmol，25.7％)膏狀有色固體4-(1H-吡咯-3-基)苯甲酸甲酯。MS(ES+)m/e 201.08.1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.39(1H，br s)，8.00(2H，d，J＝9Hz)，7.58(2H，d，J＝9Hz)，7.20(1H，m)，6.85(1H，m)，6.60(1H，m)，3.91(3H，s)。
C部分.往4-(1H-吡咯-3-基)苯甲酸甲酯(402mg，1.997mmol，1.0eq.)和4-三氟甲基-1-碘苯(652mg，2.39mmol，1.2eq.)在無水1，4-二噁烷(15mL)的攪拌溶液中加入銅(I)碘化物(38mg，0.199mmol，0.1eq.)、乙二胺(13μL，0.199mmol，0.1eq.)和三磷酸鉀(762mg，1.66mmol，3.31eq.)。反應(yīng)混合物除去氣體，用氮?dú)鉀_洗并加熱回流18小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻、過濾并用乙酸乙酯洗滌。濾出液濃縮并用硅凝膠色譜法(10％乙酸乙酯/己烷)提純，得到白色粉末4-[1-(4-三氟甲基-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸甲酯(363.2mg，1.05mmol，52.7％)。MS(ES+)m/e 345.11.1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.04(2H，d，J＝8Hz)，7.72(2H，d，J＝8Hz)，7.63(2H，d，J＝8Hz)，7.54(2H，d，J＝8Hz)，7.50(1H，m)，7.18(1H，m)，6.75(1H，m)，3.93(3H，s).
D部分.4-[1-(4-三氟甲基-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸甲酯(150mg，0.434mmol，1eq.)懸浮在10mL of75％乙醇/水中。加入氫氧化鉀(73μL1M溶液，3.0eq.)，將混合物在60℃下加熱6小時(shí)。混合物用水稀釋并用氯仿(2×3mL)洗滌。將水層酸化至pH 3，得到的沉淀過濾并用水洗滌。白色固體高度真空干燥，得到標(biāo)題產(chǎn)物121mg(0.365mmol，84.15％)。熔點(diǎn)315-317℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ8.03(1H，m)，7.90(2H，d，J＝8Hz)，7.83-7.76(4H，m)，7.58(1H，m)，7.52(2H，d，J＝8Hz)，6.76(1H，m).MS(ES+)m/e 332.24(100)。MS(ES-)m/e 330.25(100)。
使用修改的上述方法，可以制得以下化合物。
化合物63-[1-(4-異丙基-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)210-215℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.30(1H，s)，7.92(1H，d，J＝8Hz)，7.80(1H，d，J＝8Hz)，7.46(1H，t，J＝8Hz)，7.44(1H，s)，7.37(2H，d，J＝8Hz)，7.31(2H，d，J＝8Hz)，7.11(1H，d，J＝2Hz)，6.69(1H，d，J＝2Hz)，2.96(1H，heptet，J＝7Hz)，1.29(6H，d，J＝7Hz).MS(ES+)m/e 306(100)。.
化合物1064-[1-(4-異丙基-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)240-243℃。MS(ES+)m/e 306.35(100)。MS(ES-)m/e 304.26(100)。
化合物1253-[1-(4-乙基-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)190-192℃。MS(ES+)m/e 292.36(100)。MS(ES-)m/e 290.37(100)。
化合物126
4-[1-(4-甲氧基-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)178-180℃。MS(ES+)m/e 294.26(100)。MS(ES-)m/e 292.26(100)。
化合物1274-[1-(3，4-二氟-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)231-233℃。MS(ES+)m/e 300.27(100)。MS(ES-)m/e 298.27(100)。
化合物1284-[1-(3-三氟甲基-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)209-211℃。MS(ES+)m/e 332.34(100)。MS(ES-)m/e 330.35(100)。
化合物1294-[1-(4-乙基-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)278-280℃。MS(ES+)m/e 292.34(100)。MS(ES-)m/e 290.31(100)。
化合物1304-(1-苯基-1H-吡咯-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)239-241℃。MS(ES+)m/e264.27(100)。MS(ES-)m/e 262.32(100)。
化合物1314-[1-(4-三氟甲氧基-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)318-320℃。MS(ES+)m/e 348.30(100)。MS(ES-)m/e 346.33(100)。
化合物1504-[1-(2，3-二氫苯并[1，4]二氧芑-6-基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)273-276℃。MS(ES+)m/e 321.34(100)。MS(ES-)m/e 320.33(100)。
化合物1514-[1-(2-氟-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)202-204℃。MS(ES+)m/e 282.3(100)。MS(ES-)m/e 280.3(100)。
化合物1524-[1-(3-氟-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)211-213℃。MS(ES+)m/e 282.28(100)。MS(ES-)m/e 280.24(100)。
化合物1534-[1-(3，5-二氟-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)243-245℃。MS(ES+)m/e 300.35(100)。MS(ES-)m/e 298.38(100)。
化合物1553-[1-(4-氯-苯基)1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)211-213℃。MS(ES+)m/e 282.28(100)。MS(ES-)m/e 280.24(100)。
化合物1563-(1-p-甲苯基-1H-吡咯-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)178-181℃。MS(ES+)m/e278.29(100)。MS(ES-)m/e 276.34(100)。
化合物1573-(1-m-甲苯基-1H-吡咯-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)201-202℃。MS(ES+)m/e348.32(100)。MS(ES-)m/e 346.32(100)。
化合物1583-[1-(4-三氟甲氧基-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸MS(ES+)m/e348.32(100)。MS(ES-)m/e 346.32(100)。
化合物1594-(1-p-甲苯基-1H-吡咯-3-基)苯甲酸MS(ES+)m/e 278.35(100)。MS(ES-)m/e 21631(100)。
化合物1604-[1-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)200-202℃。MS(ES+)m/e 294.32(100)。MS(ES-)m/e 292.36(100)。
化合物1944-(1-m-甲苯基-1H-吡咯-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)212-213℃。MS(ES+)m/e278.29(100)。MS(ES-)m/e 276.33(100)。
化合物1954-(1-o-甲苯基-1H-吡咯-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)208-209℃。MS(ES+)m/e278.30(100)。MS(ES-)m/e 276.33(100)。
化合物1964-[1-(4-氯-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)＞350℃。MS(ES+)m/e298.25(100)。MS(ES-)m/e 296.29(100)。
化合物1974-[1-(2-氯-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)200-202℃。MS(ES+)m/e 298.25(100)。MS(ES-)m/e 296.30(100)。
化合物1983-[1-(2-氯-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)198-200℃。MS(ES+)m/e 298.25(100)。MS(ES-)m/e 296.29(100)。
化合物1994-[1-(2-三氟甲氧基-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)164-165℃。MS(ES+)m/e 348.24(100)。MS(ES-)m/e 346.34(100)。
化合物2003-[1-(2-甲氧基-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)＞350℃。MS(ES+)m/e 294.28(100)。MS(ES-)m/e 292.35(100)。
化合物2403-(1-o-甲苯基-1H-吡咯-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)161-163℃。MS(ES+)m/e278.27(100)。MS(ES-)m/e 276.29(100)。
化合物2413-[1-(3-氟-4-甲基-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)205-208℃。MS(ES+)m/e 296.23(100)。MS(ES-)m/e 294.27(100)。
化合物2423-[1-(2，5-二氟-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)193-194℃。MS(ES+)m/e 300.21(100)。MS(ES-)m/e 298.20(100)。
化合物2434-[1-(3-氯-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)199-201℃。MS(ES+)m/e 298.19(100)。MS(ES-)m/e 296.27(100)。
化合物2444-[1-(3-氟-4-甲基-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)264-268℃。MS(ES+)m/e 296.23(100)。MS(ES-)m/e 294.23(100)。
化合物245
4-[1-(2，5-二氟-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)215-218℃。MS(ES+)m/e 300.21(100)。MS(ES-)m/e 298.20(100)。
化合物2463-[1-(3-芐氧基-苯基)-1H-吡咯-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)142-144℃。MS(ES+)m/e 370.28(100)。MS(ES-)m/e 368.26(100)。
化合物2473-(1-苯并[1，3]二氧環(huán)戊烯-5-基-1H-吡咯-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)177-180℃。MS(ES+)m/e 308.26(100)。MS(ES-)m/e 306.24(100)。
B.咪唑的制備本發(fā)明的咪唑通?？扇缦轮苽?。
3-[4-(4-異丙基苯基)咪唑-1-基]苯甲酸(化合物2)的制備A部分.異丙基苯(50g)在二硫化碳(250毫升)的溶液用氯化鋁(170g)處理，得到的混合物冷卻至0℃。以1mL/min的速度加入乙酰氯(33g)，得到的混合物攪拌過夜。混合物倒入液態(tài)HCl(2N，400mL)中，分層。水相用乙酸乙酯提取，并且將有機(jī)相合并，用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，得到油狀產(chǎn)物4-異丙基苯乙酮(66g)。
B部分.4-異丙基苯乙酮(65g)在乙酸乙酯(250mL)的溶液冷卻至0℃，并用溴(65g)逐滴處理。將混合物攪拌5小時(shí)，然后加入水(250mL)淬滅。分相，水層用乙酸乙酯提取。有機(jī)相用飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌，合并，用硫酸鈉干燥，過濾，蒸發(fā)，得到產(chǎn)物2-溴-4′-異丙基苯乙酮(64g，66％)。
C部分.2-溴-4′-異丙基苯乙酮(2.41g)和甲酰胺(10mL)的混合物在180℃下加熱1小時(shí)，然后冷卻，倒入水中，用乙酸乙酯提取。有機(jī)相用鹽水洗滌，合并，用硫酸鈉干燥，過濾，蒸發(fā)。殘余物用柱色譜法提純，得到黃色固體產(chǎn)物4-(4-異丙基-苯基)-1H-咪唑(550mg)。
D部分.4-(4-異丙基-苯基)-1H-咪唑(190mg)、3-碳甲氧基.-苯基硼酸(360mg)和Cu(OAc)2(300mg)在二氯甲烷(15mL)的溶液用吡啶(160mg)和4A分子篩(500mg)處理。在空氣存在下將混合物攪拌14小時(shí)，然后通過塞里塑料過濾，塞里塑料墊用乙酸乙酯充分洗滌。濾出液和洗滌液合并，蒸發(fā)。殘留物質(zhì)用柱色譜法分離，得到黃色固體產(chǎn)物3-[4-(4-異丙基-苯基)-咪唑-1-基]苯甲酸甲酯(190mg)。
E部分.3-[4-(4-異丙基-苯基)-咪唑-1-基]苯甲酸甲酯(190mg)在5mL甲醇-1mL水中的溶液用氫氧化鋰水合物(125mg)處理，得到的混合物加熱回流1小時(shí)。溶液冷卻并用醋酸中和。通過過濾收集得到的沉淀，用水洗滌，真空干燥，并從丙酮重結(jié)晶，得到為白色固體的題目產(chǎn)物(90mg)。熔點(diǎn)248-250℃。1H NMR(400MHz，DMSOd6)δ8.38(1H，s)，8.31(1H，s)，8.18(1H，s)，7.97(1H，d，J＝8Hz)，7.91(1H，d，J＝8Hz)，7.78(2H，d5 J＝8Hz)，7.66(1H，t，J＝8Hz)，7.24(2H，d，J＝8Hz)，2.88(1H，heptet，J＝7Hz)，1.20(6H，d，J＝7Hz).MS(ES+)m/e 308(21)，307(100)。
使用以上實(shí)施例所述的方法(使用合適的原料)合成以下化合物。
化合物23-[1-(4-異丙基-苯基)-1H-咪唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)225-226℃。1HNMR(400MHz，DMSOd6)δ12.94(1H，br)，8.43(1H，s)，8.35(1H，s)，8.30(1H，s)，8.06(1H，d，J＝8Hz)，7.79(1H，d，J＝8Hz)，7.63(2H，d，J＝8Hz)，7.51(1H，t，J＝8Hz)，7.39(2H，d，J＝8Hz)，2.95(1H，heptet，J＝7Hz)，1.22(6H，d，J＝7Hz).MS(ES+)m/e 308(18)，307(100)。
化合物2623-(4-苯基-咪唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)277-279℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.33(1H，br)，8.42(1H，d，J＝1.5Hz)，8.39(1H，d，J＝1.5Hz)，8.19(1H，t，J＝1.8Hz)，7.98(1H，ddd，J＝8.22.3，1.2Hz)，7.91(1H，dt，J＝7.9，1.2Hz)，7.89-7.85(2H，m)，7.66(1H，t，J＝7.9Hz)，7.42-7.35(2H，m)，7.26-7.20(1H，m).MS(ES+)m/e 266(44)，265(100)。MS(ES-)m/e 264(18)，263(100)。
化合物2634-(4-苯基-咪唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)263-265℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.11(1H，br)，8.47(1H，d，J＝1.2Hz)，8.40(1H，d，J＝1.2Hz)，8.07(2H，d，J＝8.8Hz)，7.89-7.84(4H，m)，7.42-7.36(2H，m)，7.27-7.21(1H，m).MS(ES+)m/e 266(37)，265(100)。MS(ES-)m/e 264(19)，263(100)。
3-[2-氨基-4-(4-異丙基苯基)-1H-咪唑-1-基]苯甲酸(化合物1)的制備A部分.往3-氨基苯甲酸甲酯(4.76g，31.5mmol)和K2CO3(6.21g，45.0mmol)在DMF(150mL)的懸浮體中加入α-溴-4-異丙基苯乙酮(7.23g，30.0mmol)。混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。真空除去DMF，對殘余物進(jìn)行色譜處理，得到氨基酮，3-{[2-(4-異丙基苯基)-2-氧乙基]氨基}苯甲酸甲酯(2.15g，23％)。(ES+)m/e 312.
B部分.3-{[2-(4-異丙基苯基)-2-氧乙基]氨基}苯甲酸甲酯(0.62g，2.0mmol)用在乙醇(15mL)中的氨基氰(1.68g，40mmol)回流48小時(shí)，真空除去溶劑。殘余物用水處理。通過過濾收集沉淀，干燥，并進(jìn)行色譜處理(硅凝膠，首先用1∶4乙酸乙酯-己烷，然后用50∶1二氯甲烷-甲醇)。最后的餾分(0.26g)用THF(10mL)中的NaOH(1N，3.0mL，3.0mmol)在65℃處理過夜。除去溶劑后，殘余物用水處理，并用HCl(1N)酸化。通過過濾收集沉淀，用乙酸乙酯徹底洗滌，干燥，通過LC/MS得到單一成分的所需產(chǎn)物，3-[2-氨基-4-(4-異丙基苯基)-1H-咪唑-1-基]苯甲酸(0.13g，20％)，熔點(diǎn)279-282℃(decomp.).1H NMR(CDCl3，300MHz)δ(ppm)1.27(d，6H)，2.87-2.97(m，1H)，4.36(s，br，2H)，7.01(s，1H)，7.21-7.26(m，3H)，7.59-7.69(m，3H)，8.05-8.12(m，2H).(ES+)m/e 322.
C.1，3-吡唑的制備本發(fā)明的1，3-吡唑可以如下制備。
3-[3-(4-三氟甲氧基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸(化合物95)A部分.4′-三氟甲氧基苯乙酮(1.50g)和二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛(8.6mL)在115℃下加熱16小時(shí)，然后冷卻。蒸發(fā)掉揮發(fā)性組分，得到的棕色油直接用于下個(gè)步驟。該材料(1.90g)和水合肼(1.14mL)在醋酸(10mL)中的溶液在109℃下加熱15小時(shí)，然后冷卻并倒入水中(100mL)。用乙酸乙酯(2×100mL)提取，提取物用鹽水洗滌，合并，用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，得到純的固體產(chǎn)物3-(4-三氟甲氧基-苯基)-1H-吡唑，LC/MS確定純度為100％。
B部分.3-(4-三氟甲氧基-苯基)-1H-吡唑(250mg)、3-甲氧基羰基苯基硼酸(540mg)和吡啶(0.18mL)在二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液用銅(II)醋酸鹽(214mg)和粉末化的活性4A分子篩(0.5g)處理。得到的混合物在60℃下加熱16小時(shí)，并冷卻。反應(yīng)混合物倒入1M HCl溶液中(300mL)，得到的混合物通過玻璃微纖維濾墊過濾。該濾墊用乙酸乙酯洗滌，濾出液蒸發(fā)，得到固體產(chǎn)物3-[3-(4-三氟甲氧基-苯基)-吡唑-1-基]苯甲酸甲酯(204mg)。
C部分.3-[3-(4-三氟甲氧基-苯基)-吡唑-1-基]苯甲酸甲酯(100mg)和氫氧化鈉(0.58mL，1M水溶液)在乙醇(5mL)中的溶液加熱回流2天?；旌衔锢鋮s并蒸發(fā)，殘余物用1M HCl溶液酸化并用乙酸乙酯提取。提取物用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，蒸發(fā)，得到純度為91％(通過LC/MS)的題目粉末固體(90mg)，熔點(diǎn)191-194℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.70(1H，d，J＝2.7Hz)，8.44(1H，t，J＝1.9Hz)，8.15(1H，ddd，J＝8.2，2.4，0.9Hz)，8.05(2H，d，J＝8.8Hz)，7.87(1H，dt，J＝7.7，1.1Hz)，7.64(1H，t，J＝8.0Hz)，7.43(2H，dd，J＝8.8，0.8Hz)，7.11(1H，d，J＝2.7Hz).MS(ES+)m/e 350(20)，349(100)。MS(ES-)m/e 348(20)，347(100)。
可以使用該方法的稍微改動的版本來制備以下化合物。
化合物783-[3-(3-氰基-苯基)-吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)164-166℃。1H NMR(300MHz5DMSO-d6)δ8.73(1H，d，J＝2.5Hz)，8.44(1H，s)，8.37(1H，s)，8.28(1H，d，J＝7.9Hz)，8.17(1H，dd，J＝8.0，2.2Hz)，7.88(1H，d，J＝7.7Hz)，7.82(1H，d，J＝7.7Hz)，7.69-7.62(2H，m)，7.22(1H，d，J＝2.7Hz).MS(ES+)m/e 291(20)，290(100)。MS(ES-)m/e 289(20)，288(100)。
化合物79
3-(3-苯基-吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)180-182℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ8.67(1H，dd，J＝2.5，1.4Hz)，8.43(1H，m)，8.15(1H，dt，J＝8.2，1.1Hz)，7.94-7.91(2H，m)，7.86(1H，dd，J＝7.7，1.1Hz)，7.63(1H，t，J＝8.0Hz)，7.47-7.32(3H，m)，7.06(1H，d，J＝2.7Hz).MS(ES+)m/e 266(20)，265(100)。MS(ES-)m/e 264(20)，263(100)。
化合物803-[3-(4-氯苯基)吡唑-1-熔點(diǎn)230-235℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)68.69(1H，d，J＝2.7Hz)，8.43(1H，narrow m)，8.16(1H，dm，J＝8Hz)，7.96(2H，d，J＝8.5Hz)，7.86(1H，d，J＝7.7Hz)，7.64(1H，t，J＝8.0Hz)，7.50(2H，d，J＝8.5Hz)，7.10(1H，d，J＝2.5Hz).MS(ES+)m/e 301(35)，299(100)。MS(ES-)m/e 299(35)，297(100)。
化合物813-[3-(4-甲氧基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)210-211℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)68.63(1H，d，J＝2.5Hz)，8.41(1H，t，J＝1.7Hz)，8.13(1H，dm，J＝8Hz)，7.85(2H，d，J＝8.8Hz)，7.84-7.80(1H，m)，7.62(1H，t，J＝8.0Hz)，7.00(2H，d，J＝8.8Hz)，6.98(1H，d，J＝2.5Hz)，3.78(3H，s).MS(ES+)m/e 296(20)，295(100)。MS(ES-)m/e 294(20)，293(100)。
化合物823-[3-(4-嗎啉-4-基-苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)230-235℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)68.61(1H，dd，J＝2.6，1.0Hz)，8.41(1H，s)，8.12(1H，dt，J＝8.2，1.2Hz)，7.83(1H，d，J＝8Hz)，7.80(2H，d，J＝8.2Hz)，7.61(1H，t，J＝8.0Hz)，7.07(2H，d，J＝8.2Hz)，6.96(1H，dd，J＝2.3，1.5Hz)，3.76(4H，br)，3.19(4H，br)。MS(ES+)m/e 351(20)，350(100)。MS(ES-)m/e 349(20)，348(100)。
化合物923-[3-(4-氟-苯基)-吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)237-240℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)68.67(1H，d，J＝2.7Hz)，8.43(1H，t，J＝1.9Hz)，8.14(1H，ddd，J＝7.0，2.5，1.4Hz)，7.97(2H，dd，J＝8.8，5.5Hz)，7.85(1H，dt，J＝6.6，1.1Hz)37.63(1H，t，J＝7.8Hz)，7.28(2H，t，J＝8.8Hz)，7.06(1H，d，J＝2.5Hz).MS(ES+)m/e 284(20)，283(100)。MS(ES-)m/e 282(20)，281(100)。
化合物933-[3-(3-氟苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)173-174℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.70(1H，d，J＝2.5Hz)，8.42(1H，t，J＝1.8Hz)，8.16(1H，ddd，J＝8.2，2.4，1.1Hz)，7.87(1H，dt，J＝7.7，1.2Hz)，7.79(1H，dt，J＝7.9，1.1Hz)，7.73(1H，ddd，J＝10.3，2.5，1.4Hz)，7.64(1H，t，J＝8.0Hz)，7.51(1H，dt，J＝8.3，6.1Hz)，7.19(1H，ddt，J＝8，2，1Hz)，7.14(1H，d，J＝2.6Hz).MS(ES+)m/e 284(20)，283(100)。MS(ES-)m/e 282(20)，281(100)。
化合物973-[3-(4-三氟甲基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)225-227℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ8.74(1H，d，J＝2.5Hz)，8.46(1H，t，J＝1.9Hz)，8.20-8.14(3H，m)，7.88(1H，d，J＝7.7Hz)，7.80(2H，d，J＝8.8Hz)，7.65(1H，t，J＝8.0Hz)，7.21(1H，d，J＝2.5Hz).MS(ES+)m/e 334(20)，333(100)。MS(ES-)m/e 332(20)，331(100)。
化合物53-[3-(4-異丙基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)215-216℃。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.26(1H，br)，8.65(1H，d，J＝2Hz)，8.43(1H，s)，8.13(1H，d，J＝8Hz)，7.87-7.82(3H，m)，7.63(1H，t，J＝8Hz)，7.30(2H，d，J＝8Hz)，7.01(1H，d，J＝2Hz)，2.90(1H，heptet，J＝7Hz)，1.20(6H，d，J＝7Hz).MS(ES+)m/e 308(22)，307(100)。
化合物1373-(4，5-[g]吲唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)191-192℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.25(1H，br s)，8.44-8.39(2H，m)，8.11-8.06(1H，m)，7.84-7.80(2H，m)，7.61(1H，dt，J＝7.9，4.1Hz)，7.32-7.22(3H，m)，2.92-2.87(2H，m)，2.83-2.78(2H，m).MS(ES+)m/e 292(20)，291(100)。MS(ES-)m/e 290(21)，289(100)。
化合物1383-(4H-茚并[1，2-c]吡唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)249-250℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.24(1H，br)，8.54(1H，s)，8.44(1H，t，J＝1.8Hz)，8.12(1H，dd，J-8.0，2.1Hz)，7.82(1H，d，J＝7.6Hz)，7.78(1H，dd，J＝7.9，1.2Hz)，7.61(1H，t，J＝7.9Hz)，7.57(1H，d，J＝7.6Hz)，7.42-7.32(2H，m)，3.76(2H，s).MS(ES+)m/e 278(18)，277(100)。MS(ES-)m/e 276(20)，275(100)。
化合物1393-(6-甲氧基-4H-茚并[1，2-c]吡唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)272-273℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ13.16(1H，br)，8.47(1H，s)，8.41(1H，s)，8.08(1H，dd，J＝8.1，2.0Hz)，7.80(1H5d，J＝7.6Hz)，7.67(1H，d，J＝8.5Hz)，7.59(1H，t，J＝7.9Hz)，7.17(1H，d，J＝2.0Hz)，6.95(1H，dd，J＝8.5，2.3Hz)，3.80(3H，s)，3.72(2H，s).MS(ES+)m/e 308(20)，307(100)。MS(ES-)m/e 306(21)，305(100)。
化合物1403-(7-甲氧基-4H-茚并[1，2-c]吡唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)225-227℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ13.25(1H，br)，8.52(1H，s)，8.45(1H，s)，8.11(1H，ddd，J＝8.2，2.4，1.2Hz)，7.82(1H，d，J＝7.6Hz)，7.61(1H，t，J＝7.9Hz)，7.45(1H，d，J＝8.5Hz)，7.34(1H，d，J＝2.3Hz)，6.90(1H，dd，J＝8.5，2.3Hz)，3.82(3H，s)，3.67(2H，s).MS(ES+)m/e 308(20)，307(100)。MS(ES-)m/e 306(18)，305(100)。
化合物1423-(7-甲氧基-4，5-[g]吲唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)217-218℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ13.23(1H，br)，8.38(1H，s)，8.37(1H，d，J＝2Hz)，8.06(1H，dd，J＝8.2，2.0Hz)，7.80(1H，d，J＝7.6Hz)，7.74(1H，d，J＝8.5Hz)，7.59(1H，t，J＝7.9Hz)，6.91-6.84(2H，m)，3.77(3H，s)，2.92-2.86(2H，m)，2.78-2.72(2H，m).MS(ES+)m/e 322(20)，321(100)。MS(ES-)m/e 320(21)，319(100)。
化合物143
3-(8-甲氧基-4，5-[g]吲唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)192-193℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.25(1H，br)，8.43(1H，s)，8.38(1H，t，J＝1.8Hz)，8.09(1H，dd，J＝8.2，2.3Hz)，7.83(1H，d，J＝7.6Hz)，7.61(1H，t，J＝7.9Hz)，7.33(1H，d，J＝3.0Hz)，7.22(1H，d，J＝8.5Hz)，6.83(1H，dd，J＝8.5，3.0Hz)，3.80(3H，s)，2.87-2.82(2H，m)，2.77-2.72(2H，m).MS(ES+)m/e322(18)，321(100)。MS(ES-)m/e 320(24)，319(100)。
化合物1443-(4H-苯并吡喃[4，3-c]吡唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)227-228℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.29(1H，br)，8.49(1H，s)，8.39(1H，t，J＝1.9Hz)，8.09(1H，dd，J-8.2，2.3Hz)，7.86(1H，d，J＝7.6Hz)，7.76(1H，dd，J＝7.4，1.6Hz)，7.63(1H，t，J-7.9Hz)，7.26(1H，dt，J＝8.0，1.8Hz)，7.07-6.96(2H，m)，5.33(2H，s).MS(ES+)m/e 294(17)，293(100)。MS(ES-)m/e 292(18)，291(100)。
化合物1454-(8-甲氧基-4，5-[g]吲唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)290-292℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ12.98(1H，br)，8.45(1H，s)，8.04(2H，d，J-8.8Hz)，7.98(2H，d，J-8.8Hz)，7.34(1H，d，J＝2.9Hz)，7.23(1H，d，J＝8.5Hz)，6.84(1H，dd，J＝8.5，2.9Hz)，3.79(3H，s)，2.86-2.81(2H，m)，2.78-2.73(2H，m).MS(ES+)m/e 323(4)，322(22)，321(100)。MS(ES-)m/e 319(100)。
化合物1473-(6-甲氧基-4，5-[g]吲唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)232-233℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.25(1H，br)，8.42(1H，s)，8.39(1H，t，J＝1.9Hz)，8.08(1H，dd，J-8.0，2.2Hz)，7.82(1H，d，J＝7.6Hz)，7.61(1H，t，J＝7.9Hz)，7.46(1H，d，J＝7.6Hz)，7.27(1H，t，J＝8.0Hz)，6.96(1H，d，J＝8.2Hz)，3.81(3H，s)，2.90-2.85(2H，m)，2.77-2.72(2H，m).MS(ES+)m/e 322(19)，321(100)。MS(ES-)m/e 320(18)，319(100)。
化合物1484-(6-甲氧基-4，5-二氫苯并[g]吲唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)288-290℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ12.97(1H，br)，8.44(1H，s)，8.03(2H，d，J＝8.8Hz)，7.97(2H，d，J＝8.8Hz)，7.46(1H，d，J＝7.3Hz)，7.28(1H，t，J＝7.9Hz)，6.97(1H，d，J＝8.2Hz)，3.81(3H，s)，2.90-2.85(2H，m)，2.78-2.73(2H，m).MS(ES+)m/e 323(3)，322(20)，321(100)。
化合物1494-(7-甲氧基-4H-茚并[1，2-c]吡唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)304-306℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ12.95(1H，br)，8.55(1H，s)，8.04(2H，d，J＝9.0Hz)，8.00(2H，d，J＝9.0Hz)，7.46(1H，d，J＝8.4Hz)，7.30(1H，d，J＝2.4Hz)，6.92(1H，dd，J＝8.4，2.4Hz)，3.82(3H，s)，3.67(2H，s).MS(ES+)m/e 308(20)，307(100)。
化合物1614-(4，5-二氫苯并[g]吲唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)288-290℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ12.98(1H，br)，8.45(1H，s)，8.04(2H，d，J＝8.8Hz)，7.98(2H，d，J＝8.8Hz)，7.82(1H，dd，J＝7.6，2.0Hz)，7.34-7.26(3H，m)，2.95-2.90(2H，m)，2.81-2.76(2H，m).MS(ES+)m/e 292(15)，291(100)。MS(ES-)m/e 290(20)，289(100)。
化合物1624-(4H-苯并吡喃[4，3-c]吡唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)308-310℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.03(1H，br)，8.50(1H，s)，8.05(2H，d，J＝8.8Hz)，7.98(2H，d，J＝8.8Hz)，7.74(1H，dd，J＝7.5，1.6Hz)，7.27(1H，dt，J-7.8，1.8Hz)，7.05(1H，dt，J＝7.3，1.2Hz)，6.99(1H，d，J＝8.2Hz)，5.34(2H，s).MS(ES+)m/e294(16)，293(100)。MS(ES-)m/e292(22)，291(100)。
化合物1634-(7-甲氧基-4，5-二氫苯并[g]吲唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)279-280℃。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.94(1H，br)，8.41(1H，s)，8.02(2H，d，J＝8.8Hz)，7.95(2H，d，J＝8.8Hz)，7.74(1H，d，J＝8.2Hz)，6.91(1H，d，J＝2.6Hz)，6.87(1H，dd，J＝8.2，2.6Hz)，3.77(3H，s)，2.92-2.87(2H，m)，2.79-2.74(2H，m).MS(ES+)m/e 322(20)，321(100)。MS(ES-)m/e 320(20)，319(100)。
化合物1693-[3-(2-氟-苯基)-吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)166-167℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.73(1H，d，J＝2.5Hz)，8.44(1H，t，J＝1.9Hz)，8.17(1H，ddd，J＝8.2，2.3，1.1Hz)，8.06(1H，dt，J＝7.7，1.9Hz)，7.88(1H，dt，J＝7.7，1Hz)，7.65(1H，t，J＝7.8Hz)，7.44-7.27(3H，m)，6.93(1H，dd，J＝3.9，2.8Hz).MS(ES+)m/e 284(20)，283(100)。MS(ES-)m/e 282(20)，281(100)。
化合物1703-(3-p-甲苯基-吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)180-182℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.12(1H，br)，8.54(1H，d，J＝2.5Hz)，8.47(1H，t，J＝1.8Hz)，8.13(1H，dt，J＝7.9，1.8Hz)，7.90(1H，dt，J＝7.9，1.3Hz)，7.80(2H，d，J＝8.5Hz)，7.57(1H，t，J＝7.8Hz)，7.31(2H，d，J＝8.5Hz)，7.09(1H，d，J＝2.5Hz)，2.34(3H，s).MS(ES+)m/e 280(14)，279(100)。MS(ES-)m/e278(19)，277(100)。
化合物2194-[3-(4-甲氧基-苯基)-吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)268-270℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ8.65(1H，d，J＝2.5Hz)，8.05(2H，d，J＝9.1Hz)，8.01(2H，d，J＝9.1Hz)，7.87(2H，d，J＝8.5Hz)，7.02(1H，d，J＝2.5Hz)，7.01(2H，d，J＝8.5Hz)，3.79(3H，s).MS(ES+)m/e 296(20)，295(100)。MS(ES-)m/e 294(23)，293(100)。
化合物2203-[3-(3-甲氧基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)179-180℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ8.67(1H，d，J＝2.5Hz)，8.42(1H，s)，8.15(1H，dm，J＝8.0Hz)，7.86(1H，d，J＝7.7Hz)，7.64(1H，t，J＝7.8Hz)，7.51(1H，d，J＝7.7Hz)，7.46(1H，s)，7.36(1H，t，J＝7.9Hz)，7.08(1H，d，J＝2.5Hz)，6.93(1H，dd，J＝8.2，2.5Hz)，3.82(3H，s).MS(ES+)m/e 296(20)，295(100)。MS(ES-)m/e 294(20)，293(100)。
化合物221
4-[3-(3-甲氧基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)200-202℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.69(1H，d，J＝2.5Hz)，8.05(4H，s)，7.52(1H，dd，J＝7.7，1Hz)，7.48(1H，dd，J＝2.6，1Hz)，7.37(1H，t，J-7.9Hz)，7.12(1H，d，J＝2.5Hz)，6.94(1H，dd，J＝7.5，2.6Hz)，3.82(3H，s).MS(ES+)m/e 296(20)，295(100)。MS(ES-)m/e 294(20)，293(100)。
化合物2224-(3-苯基-吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)244-245℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.69(1H，d，J＝2.5Hz)，8.05(4H，s)，7.96-7.92(2H，m)，7.48-7.36(3H，m)，7.11(1H，d，J＝2.5Hz).MS(ES+)m/e 266(20)，265(100)。MS(ES-)m/e 264(20)，263(100)。
D.1，4-吡唑的制備本發(fā)明的1，4-吡唑可以如下制備。
3-[4-(4-甲氧基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸(化合物47)的制備3-肼苯甲酸(300mg，1.97mmol)和4-甲氧基苯基丙二醛(351mg，1.97mmol)在4mL醋酸中的溶液在110℃下加熱20小時(shí)。冷卻后，溶液產(chǎn)生棕褐色沉淀，通過過濾收集沉淀，用乙酸乙酯和二乙醚洗滌。粉末進(jìn)行真空干燥，得到題目化合物(429mg，1.46mmol，74％).熔點(diǎn)238-239℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.26(1H，s)，9.02(1H，s)，8.41(1H，s)，8.17(1H，s)，8.12(1H，d，J＝7.9Hz)，7.85(1H，d，J＝7.9Hz)，7.65(2H，d，J＝8.5Hz)，7.64(1H，t，J＝7.9Hz)，6.96(2H，d，J＝8.5Hz)，3.76(3H，s).MS(ES+)m/e 296(18)，295(100)。MS(ES-)m/e 294(17)，293(100)。
下面的化合物可以使用剛才所述的類似方法制備。
化合物483-(4-p-甲苯基吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)208-209℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.26(1H，s)，9.08(1H，s)，8.42(1H，s)，8.21(1H，s)，8.12(1H，d，J＝8.2Hz)，7.85(1H，d，J＝7.7Hz)，7.63(1H，t，J＝8Hz)，7.62(2H，d，J＝8.2Hz)，7.20(2H，d，J＝8.2Hz)，2.30(3H，s).MS(ES+)m/e 280(18)，279(100)。MS(ES-)m/e 278(17)，277(100)。
化合物493-[4-(4-氯苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)253-254℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.28(1H，s)，9.17(1H，s)，8.42(1H，s)，8.27(1H，s)，8.11(1H，dd，J＝8.0，1.3Hz)，7.86(1H，d，J-7.7Hz)，7.76(2H，d，J＝8.2Hz)，7.63(1H，t，J＝8.0Hz)，7.44(2H，d，J＝8.2Hz).MS(ES+)m/e 301(35)，300(19)，299(100)。MS(ES-)m/e 299(40)，298(17)，297(100)。
化合物504_[4-(4-甲氧基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)289-290℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.02(1H，s)，9.00(1H，s)，8.20(1H，s)，8.06(2H，d，J＝8.4Hz)，7.99(2H，d，J＝8.4Hz)，7.64(2H，d，J＝8.5Hz)，6.96(2H，d，J＝8.5Hz)，3.76(3H，s)。MS(ES+)m/e 296(16)，295(100)。MS(ES-)m/e294(19)，293(100)。
化合物514-(4-p-甲苯基吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)298-299℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.02(1H3s)，9.07(1H，s)，8.25(1H，s)，8.06(2H，d，J＝8.8Hz)，8.00(2H，d，J＝8.8Hz)，7.61(2H，d，J＝8.2Hz)，7.20(2H，d，J＝8.2Hz)，2.30(3H，s).MS(ES+)m/e 280(20)，279(100)。MS(ES-)m/e 278(14)，277(100)。
化合物524-[4-(4-氯苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)300-302℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.03(1H，s)，9.14(1H，s)，8.29(1H，s)，8.06(2H，d，J＝8.8Hz)，7.98(2H，d，J-8.8Hz)，7.73(2H，d，J＝8.5Hz)，7.44(2H，d，J＝8.5Hz).MS(ES+)m/e 301(35)，300(16)，299(100)。MS(ES-)m/e 299(39)，298(18)，297(100)。
化合物1133-(4-吡啶-2-基-吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)243.245℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.29(1H，s)，8.58(1H，d，J＝5.0Hz)，8.44(1H，t，J＝1.8Hz)，8.38(1H，s)，8.17(1H，dd，J＝8.0，1.3Hz)，7.90-7.87(3H，m)，7.65(1H，t，J＝7.9Hz)，7.30(1H，q，J＝4.4Hz).MS(ES+)m/e 267(24)，266(100)。MS(ES-)m/e 265(19)，264(100)。
化合物1144-(4-吡啶-2-基-吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)260-262℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.39(1H，s)，8.61(1H，dd，J＝5.0，0.6Hz)，8.50(1H，s)，8.10-7.95(6H，m)，7.40(1H5dt，J＝6.0，1.5Hz).MS(ES+)m/e 267(29)，266(100)。MS(ES-)m/e 265(18)，264(100)。
化合物1153-(4-吡啶-4-基-吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)300-302℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.37(1H，s)，8.55(2H，d，J＝5.0Hz)，8.43(2H，s)，8.14(1H，dd，J＝8.2，1.5Hz)，7.89(1H，d，J＝7.6Hz)，7.73(2H，d，J＝6.1Hz)，7.66(1H，t，J＝7.9Hz).MS(ES+)m/e 267(21)，266(100)。MS(ES-)m/e265(18)，264(100)。
化合物1164-(4-吡啶-4-基-吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)＞350℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.36(1H，s)，8.56(2H，d，J-6.2Hz)，8.46(1H，s)，8.09(2H，d，J＝8.8Hz)，8.02(2H，d，J＝8.8Hz)，7.71(2H，d，J＝6.2Hz).MS(ES+)m/e 267(30)，266(100)。MS(ES-)m/e 265(17)，264(100)。
化合物1173-(4-吡啶-4-基-吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)297-299℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.95(1H，br)，9.45(1H，s)，9.12(1H，d，J＝1.2Hz)，8.77(1H，d，J＝5.2Hz)，8.47(1H，s)，8.45(1H，t，J＝1.8Hz)，8.18(1H，ddd，J＝8.2，2.3，0.9Hz)，7.94-7.89(2H，m)，7.66(1H，t，J＝7.9Hz).MS(ES+)m/e 268(15)，267(100)。MS(ES-)m/e 266(18)，265(100)。
化合物1184-(4-吡啶-4-基-吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)＞350℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.44(1H，s)，9.13(1H，dd，J＝4，1.4Hz)，8.79(1H，t，J＝4.5Hz)，8.51(1H，s)，8.07(4H，s)，7.90(1H，m).MS(ES+)m/e 268(17)，267(100)。MS(ES-)m/e 266(15)，265(100)。
化合物119
3-(4-吡啶-2-基-吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)310-311℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.31(1H，br)，9.38(1H，s)，9.13(1H，d，J＝1.4Hz)，8.60(1H，dd，J＝2.5，1.6Hz)，8.48-8.42(3H，m)，8.17(1H，dt，J＝7.9，1.1Hz)，7.90(1H，dd，J＝6.4，1.2Hz)，7.66(1H，t，J＝7.9Hz).MS(ES+)m/e268(13)，267(100)。MS(ES-)m/e 266(15)，265(100)。
化合物1204-(4-吡啶-2-基-吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)319-321℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.08(1H，br)，9.37(1H，s)，9.12(1H，d，J＝1.6Hz)，8.62(1H，dd，J＝2.5，1.6Hz)，8.49(1H，d，J＝2.5Hz)，8.47(1H，s)，8.08(2H，d，J＝9.0Hz)，8.05(2H，d，J＝9.0Hz).MS(ES+)m/e 268(11)，267(100)。MS(ES-)m/e 266(13)，265(100)。
化合物1213-(4-苯并惡唑噁唑-2-基-吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)331-333℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.31(1H，br)，9.48(1H，s)，8.49(1H，t，J＝1.9Hz)，8.46(1H，s)，8.23(1H，dd，J＝8.1，2.3Hz)，7.93(1H，d，J＝7.9Hz)，7.77-7.71(2H，m)，7.67(1H，t，J＝7.9Hz)，7.42-7.34(2H，m).MS(ES+)m/e 307(19)，306(100)。MS(ES-)m/e 305(22)，304(100).
化合物1223-(4-喹喔啉-2-基-吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)325-326℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.32(1H，br)，9.60.(1H，s)，9.46(1H，s)，8.59(1H，s)，8.49(1H，t，J＝1.8Hz)，8.22(1H，dt，J＝7.9，1.2Hz)，8.08-8.03(2H，m)，7.92(1H，dt，J＝7.7，1.6Hz)，7.87-7.75(2H，m)，7.69(1H，t，J＝7.9Hz).MS(ES+)m/e 318(20)，317(100)。MS(ES-)r/e 316(22)，315(100)。
化合物1233-(4-喹啉-2-基-吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)250-252℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.44(1H，s)，8.51(1H，s)，8.49(1H，t，J＝1.8Hz)，8.41(1H，d，J＝8.8Hz)，8.22(1H，dt，J＝6.7，1.0Hz)，8.04(1H，d，J＝8.5Hz)，8.00(1H，d，J＝8.4Hz)，7.92(1H，dt，J＝8.2，1.0Hz)，7.74(1H，dt，J＝7.8，1.5Hz)，7.67(1H，t，J＝7.9Hz)，7.54(1H，dt，J＝7.9，1.1Hz).MS(ES+)m/e 317(37)，316(100)。MS(ES-)m/e 315(18)，314(100)。
3-[4-(2-氟苯基)吡唑-1-基]苯甲酸(化合物84)的制備A部分.將含有氯氧化磷(3.25mL，34.9mmol)冷卻至ca.10℃，并逐滴添加二甲基甲酰胺(3.25mL)。攪拌30分鐘后，得到的混合物用2-氟苯基乙酸(1.79g，11.6mmol)在二甲基甲酰胺(6mL)中的溶液逐滴處理。該溶液加熱至70℃，然后冷卻并倒入冰中。融化后，混合物用固體NaHCO3中和，然后用50％NaOH水溶液調(diào)至堿性。攪拌1小時(shí)后，混合物用二乙醚(100mL)提取兩次，乙醚提取物用鹽水洗滌，合并，用無水硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，得到黃褐色油狀的3-二甲基氨基-2-(2-氟苯基)-丙烯醛(1.72g，8.92mmol，77％).TLC RF0.30(乙酸乙酯).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.08(1H，s)，7.29-7.19(2H，m)，7.14-7.01(2H，m)，6.91(1H，s)，2.88(6H，br)。MS(ES+)m/e 216(18)，195(23)，194(100)。
B部分.3-二甲基氨基-2-(2-氟苯基)-丙烯醛(812mg，4.20mmol)和3-肼苯甲酸(639mg，4.20mmol)在乙酸(8mL)中的溶液在110℃下加熱18小時(shí)，冷卻。通過過濾收集得到的棕褐色沉淀，用乙酸乙酯和二乙醚洗滌，真空干燥，得到作為粉末的題目化合物(833mg，2.95mmol，70％)。熔點(diǎn)225-226℃。1H NMR(300MHz，acetone-d6)δ8.90(1H，dd，J＝1.5，0.6Hz)，8.55(1H，t，J＝1.8Hz)，8.21(1H，dd，J＝2.0，0.6Hz)，8.18(1H，ddd，J＝8.12.4，1.1Hz)，7.98(1H，ddd，J＝7.91.6，1.0Hz)，7.90-7.83(1H，m)，7.65(1H，t，J＝7.7Hz)，7.35-7.20(3H，m)，1H missing.MS(ES+)m/e285(2)，284(18)，283(100)。
該過程可以適用于制備以下化合物。
化合物854-[4-(2-氟苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)260-261℃。1H NMR(300MHz，acetone-d6)δ8.97(1H，dd，J-1.5，0.6Hz)，8.25(1H，dd，J＝2.0，0.6Hz)，8.15(2H，d，J＝9.4Hz)，8.09(2H，d，J＝9.4Hz)，7.91-7.85(1H，m)，7.38-7.23(3H，m)，1H missing.MS(ES-)m/e 282(20)，281(100)。
化合物88
3-[4-(3-溴苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)177-178℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.24(1H，s)，8.43(1H，s)，8.32(1H，s)，8.13(1H，dd，J＝8.5，0.5Hz)，8.00(1H，s)，7.87(1H，d，J＝7.6Hz)，7.75(1H，d，J＝7.6Hz)，7.64(1H，t，J＝7.9Hz)，7.42(1H，d，J＝8.2Hz)，7.34(1H，t，J＝7.7Hz)，1H missing.MS(ES+)m/e 346(16)，345(100)，344(18)，343(99).MS(ES-)m/e 344(16)，343(92)，342(18)，341(100)。
化合物894-[4-(3-溴苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)247-248℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.06(1H，br)，9.23(1H，s)，8.36(1H，s)，8.09-7.98(5H，m)，7.74(1H，d，J＝7.6Hz)，7.42(1H，d，J＝7.9Hz)，7.35(1H，t，J＝7.8Hz).MS(ES+)m/e 346(14)，345(100)，344(15)，343(90)。MS(ES-)m/e344(14)，343(100)，342(13)，341(91)。
化合物903-(4-m-甲苯基吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)181-182℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.28(1H，br)，9.12(1H，s)，8.44(1H，t，J＝1.9Hz)，8.24(1H，s)，8.14(1H，dt，J＝8.2，1.3Hz)，7.86(1H，dd，J＝7.9，1.0Hz)，7.67-7.51(3H，m)，7.27(1H，t，J＝7.6Hz)，7.05(1H，d，J＝7.6Hz)，2.33(3H，s).MS(ES+)m/e 280(19)，279(100)。MS(ES-)m/e 278(20)，277(100)。
化合物914-(4-m-甲苯基吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)251-252℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.02(1H，br)，9.10(1H，s)，8.27(1H，s)，8.09-7.99(4H，m)，7.57-7.50(2H，m)，7.28(1H，t，J＝7.8Hz)，7.06(1H，d，J＝7.3Hz)，2.33(3H，s).MS(ES+)m/e 280(19)，279(100)。MS(ES-)m/e 278(21)，277(100)。
化合物983-(4-苯基吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)225-226℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.19(1H，br s)，9.14(1H，s)，8.43(1H，d，J＝1.7Hz)，8.26(1H，s)，8.14(1H，dd，J＝7.3，1.4Hz)，7.87(1H，d，J＝7.6Hz)，7.74(2H，d，J＝7.3Hz)，7.64(1H，t，J＝8.0Hz)，7.42-7.36(2H，m)，7.24(1H，t，J＝7.5Hz).MS(ES+)m/e 266(16)，265(100)。MS(ES-)m/e 264(13)，263(100)。
化合物994-(4-苯基吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)267-269℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.04(1H，br s)，9.13(1H，s)，8.30(1H，s)，8.07(2H，d，J-8.8Hz)，8.01(2H，d，J＝8.8Hz)，7.73(2H，d，J＝7.3Hz)，7.40(2H，t，J＝7.6Hz)，7.25(1H，t，J＝7.5Hz).MS(ES+)m/e 266(19)，265(100)。MS(ES-)m/e 264(13)，263(100)。
化合物1003-[4-(4-羥基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)282-284℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.95(1H，s)，8.40(1H，s)，8.12(1H，s)，8.12-8.09(1H，m)，7.84(1H，d，J＝7.6Hz)，7.62(1H，t，J＝7.9Hz)，7.53(2H，d，J＝8.5Hz)，6.78(2H，d，J＝8.5Hz).MS(ES+)m/e 282(18)，281(100)。MS(ES-)m/e 280(17)，279(100)。
化合物1013-[4-(4-硝基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)274-276℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.01(1H，br s)，9.39(1H，s)，8.44(2H，s)，8.25(2H，d，J＝8.8Hz)，8.14(1H，dd，J＝8.0，1.7Hz)，8.01(2H，d，J＝8.8Hz)，7.89(1H，d，J＝7.6Hz)，7.66(1H，t，J＝8.0Hz).MS(ES-)m/e 309(17)，308(100)。
化合物1024-[4-(4-硝基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)276-277℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.72(1H，br s)，9.37(1H，s)，8.47(1H，s)，8.26(2H，d，J＝8.8Hz)，8.09-7.97(6H，m).MS(ES-)m/e 309(24)，308(100)。
化合物1033-[4-(2，4-二氟苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)283-285℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.31(1H，br s)，9.02(1H，s)，8.42(1H，s)，8.19(1H，d，J＝1.5Hz)，8.14(1H，dt，J＝8.0，1.0Hz)，7.94-7.86(2H，m)，7.64(1H，t，J＝7.9Hz)，7.35(1H，dt，J＝10.1，2.6Hz)，7.17(1H，dt，J＝8.5，2.6Hz).MS(ES+)m/e 302(17)，301(100)。MS(ES-)m/e 300(19)，299(100)。
化合物1044-[4-(2，4-二氟苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)291-293℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.04(1H，br s)，9.01(1H，s)，8.23(1H，d，J＝1.7Hz)，8.06(2H，d，J＝6.7Hz)，8.02(2H，d，J＝6.7Hz)，7.92-7.84(1H，m)，7.40-7.32(1H，m)，7.22-7.15(1H，m).MS(ES+)m/e 302(21)，301(100)。MS(ES-)m/e 300(21)，299(100)。
化合物1073-[4-(4-二氟甲氧基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)118-120℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.18(1H，br s)，9.15(1H，s)，8.42(1H，t，J＝1.9Hz)，8.26(1H，s)，8.13(1H，dt，J＝8.2，2.3Hz)，7.86(1H，dd，J＝8.8，1.2Hz)，7.80(2H，d，J＝8.8Hz)，7.65(1H，t，J＝7.9Hz)，7.25(1H，t，J＝74.2Hz)，7.22(2H，d，J＝8.8Hz).MS(ES+)m/e 332(20)，331(100)。MS(ES-)m/e 330(20)，329(100)。
化合物1083-[4-(4-氨基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)209-210℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.85(1H，s)，8.39(1H，q，J＝2.0Hz)，8.11-8.06(1H，m)，8.05(1H，s)，7.82(1H，dt，J＝8.2，1.3Hz)，7.61(1H，t，J＝8.0Hz)，7.38(2H，d，J＝8.4Hz)，6.58(2H，d，J＝8.4Hz).MS(ES+)m/e 281(32)，280(100)。MS(ES-)m/e 279(18)，278(100).
化合物1094-[4-(3-甲氧基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)222-223℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.03(1H，br s)，9.14(1H，s)，8.31(1H，s)，8.07(2H，d，J＝9.0Hz)，8.01(2H，d，J＝9.0Hz)，7.34-7.29(3H，m)，6.85-6.80(1H，m)，3.80(3H，s).MS(ES+)m/e 296(18)，295(100)。MS(ES-)m/e 294(19)，293(100)。
化合物1103-[4-(4-二甲基氨基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)224-225℃。TLC RF0.41(乙酸乙酯).1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.27(1H，br s)，8.93(1H，s)，8.40(1H，t，J＝1.8Hz)，8.12(1H，s)，8.11(1H，ddd，J＝8.2，2.3，1.1Hz)，7.83(1H，dd5J＝8.0，1.2Hz)，7.62(1H，t，J＝7.9Hz)，7.55(2H，d，J＝8.8Hz)，6.75(2H，d，J＝8.8Hz)，2.90(6H，s).MS(ES+)m/e 309(48)，308(100)。MS(ES-)m/e 307(23)，306(100)。
化合物1113-(4-苯并[1，3]二氧環(huán)戊烯-5-基-吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)264-265℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.12(1H，br s)，9.04(1H，s)，8.40(1H，t，J＝1.9Hz)，8.19(1H，s)，8.10(1H，ddd，J＝8.2，2.3，0.9Hz)，7.85(1H，dt，J＝7.6，1.2Hz)，7.63(1H，t，J＝7.9Hz)，7.36(1H，d，J＝1.8Hz)，7.23(1H，dd，J＝7.9，1.8Hz)，6.94(1H，d，J＝7.9Hz)，6.02(2H，s).MS(ES+)m/e310(18)，309(100)。MS(ES-)m/e 308(22)，307(100)。
化合物1123-[4-(3-甲氧基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)157-158℃。TLC RF0.20(50∶50乙酸乙酯-己烷)。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.27(1H，br s)，9.15(1H，s)，8.43(1H，t，J＝1.9Hz)，8.27(1H，s)，8.13(1H，ddd，J＝8.2，2.4，1.2Hz)，7.86(1H，dt，J＝7.6，1.2Hz)，7.64(1H，t，J＝7.9Hz)，7.33-7.27(3H，m)，6.80(1H，dt，J＝6.4，2.8Hz)，3.80(3H，s).MS(ES+)m/e 296(18)，295(100)MS(ES-)m/e 294(20)，293(100)。
化合物2054-(4-苯并[1，3]二氧環(huán)戊烯-5-基-吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)286-288℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.03(1H，s)，8.22(1H，s)，8.05(2H，d，J＝8.5Hz)，7.96(2H，d，J＝8.5Hz)，7.33(1H，s)，7.22(1H，d，J＝8.3Hz)，6.95(1H，d，J＝8.3Hz)，6.02(2H，s).MS(ES+)m/e 310(30)，309(100)。MS(ES-)m/e 308(20)，307(100)。
化合物2064-[4-(3-羥基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)273-275℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ9.47(1H，s)，9.05(1H，s)，8.20(1H，s)，8.06(2H，d，J＝8.8Hz)，8.00(2H，d，J＝8.8Hz)，7.17(2H，m)，7.09(1H，s)，6.66(1H，dd，J＝8.6，1.2Hz).MS(ES+)m/e 282(10)，281(100)。MS(ES-)m/e 280(2O)5279(100)。
化合物2073-[4-(3-羥苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)272-274℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.45(1H，s)，9.06(1H，s)，8.43(1H，s)，8.15(2H，m)，7.86(1H，dd，J＝7.7，1.0Hz)，7.63(1H，t，J＝7.7Hz)，7.20(2H，m)，7.11(1H，s)，6.66(1H，m).MS(ES+)m/e 282(20)，281(100)。MS(ES-)m/e280(20)，279(100)。
化合物2084-[4-(3-三氟甲氧基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)225-227℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.26(1H，s)，8.39(1H，s)，8.08(2H，d，J＝8.8Hz)，8.00(2H，d，J＝8.8Hz)，7.78(2H，m)，7.53(1H，t，J＝8.0Hz)，7.22(1H，m).MS(ES+)m/e 350(20)，349(100)。MS(ES-)m/e 348(20)，347(100)。
化合物2093-[4-(3-三氟甲氧基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)166-168℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.28(1H，s)，8.43(1H，s)，8.36(1H，s)，8.14(1H，dd，J＝8.0，1.1Hz)，7.88(1H，dd，J＝7.7，0.8Hz)，7.80(2H，m)，7.66(1H，t，J＝7.7Hz)，7.53(1H，t，J＝7.8Hz)，7.21(1H，m).MS(ES+)m/e 350(30)，349(100)。MS(ES-)m/e 348(20)，347(100)。
化合物2103-[4-(3-氯苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)178-180℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.25(1H，s)，8.43(1H，s)，8.33(1H，s)，8.13(1H，dd，J＝7.4，1.0Hz)，7.87(2H，m)，7.72(1H，dd，J＝7.7，1.0Hz)，7.67(1H，t，J＝8.0Hz)，7.43(1H，t，J＝8.0Hz)，7.26(1H，dd，J＝8.0，0.9Hz).MS(ES+)m/e301(60)，299(100).MS(ES-)m/e 299(30)，297(100).
化合物2114-[4-(3-氯苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)252-255℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.23(1H，s)，8.36(1H，s)，8.07(2H，d，J＝8.8Hz)，7.99(2H，d，J＝8.8Hz)，7.84(1H，s)，7.70(1H，dd，J＝7.7，1.0Hz)，7.43(1H，t，J＝8.0Hz)，7.29(1H，dd，J＝8.0Hz).MS(ES+)m/e 301(30)，299(100)。MS(ES-)m/e 299(30)，297(100)。
化合物2124-[4-(3-氟苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)261-265℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.21(1H，s)，8.36(1H，s)，8.08(2H，d，J＝8.8Hz)，8.00(2H5d，J＝8.8Hz)，7.59(2H，m)，7.46(1H，m)，7.05(1H，m).MS(ES+)m/e 284(20)，283(100)。MS(ES-)m/e 282(20)，281(100)。
化合物2133-[4-(3-氟苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)228-230℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.22(1H，s)，8.43(1H，s)，8.32(1H，s)，8.12(1H，dd，J＝9.1，2.2Hz)，7.87(1H，dd，J＝7.7，0.9Hz)，7.62(3H，m)，7.41(1H，m)，7.05(1H，m).MS(ES+)m/e 284(30)，283(100)。MS(ES-)m/e 282(20)，281(100)。
化合物2144-[4-(3-三氟甲氧基苯基)-吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)220-222℃。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.21(1H，s)，8.35(1H，s)，8.07(2H，d，J＝8.8Hz)，7.99(2H，d，J＝8.8Hz)，7.59(2H，m)，7.45(1H，t，J＝8.0Hz)，7.28(1H，s)，7.05(1H，m).MS(ES+)m/e 332(20)，331(100)。MS(ES-)m/e330(20)，329(100)。
化合物2154-[4-(3-苯氧基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)211-213℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.16(1H，s)，8.31(1H，s)，8.05(2H，d，J＝9.1Hz)，7.99(2H，d，J＝9.1Hz)，7.51(2H，m)，7.39(3H，m)，7.12(1H，m)，7.05(2H，m)，6.85(1H，m).MS(ES+)m/e 358(25)，357(100)。MS(ES-)m/e 356(25)，355(100)。
化合物2163-[4-(3-苯氧基-苯基)-吡唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)164-165℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.18(1H，s)，8.43(1H，t，J＝1.2Hz)，8.27(1H，s)，8.13(1H，dd，J＝8.0，1.3Hz)，7.86(1H，dd，J＝7.7，0.9Hz)，7.63(1H，t，J＝8.0Hz)，7.56(2H，m)，7.12(1H，m)，7.02(2H，m)，6.84(1H，dd，J＝8.0，2.5Hz).MS(ES+)m/e 359(10)，358(60)，357(100)。MS(ES-)m/e 356(25)，355(100)。
3-(4，5-二氫苯并[e]吲唑3-基)苯甲酸(化合物135)的制備2-四氫萘酮(2.00mL，14.7mmol)和二甲基甲酰胺二甲基縮醛(2.10mL，15.0mmol)的混合物加熱回流14小時(shí)?；旌衔锢鋮s并蒸發(fā)，大約一半的殘余物溶于乙酸(10mL)中并用3-肼苯甲酸(750mL，4.93mmol)處理。溶液加熱回流12小時(shí)，然后冷卻并倒入水中(100mL)。通過過濾收集得到的沉淀，用水洗滌，高度真空蒸發(fā)，得到為棕褐色固體的標(biāo)題化合物(900mg，3.10mmol，63％)，熔點(diǎn)273-275℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.30(1H，br)，8.15(1H，s)，8.10(1H，t，J＝1.9Hz)，7.95(1H，dt，J＝7.6，1.3Hz)，7.82(1H，ddd，J＝8.0，2.2，1.0Hz)，7.66(1H，t，J＝7.9Hz)，7.53(1H，dd，J＝7.6，1.2Hz)，7.26-7.22(2H，m)，7.10(1H，dt，J＝7.3，1.2Hz)，3.05-3.02(2H，m)，3.00-2.87(2H，m).MS(ES+)m/e 292(21)，291(100)。MS(ES-)m/e 290(20)，289(100)。
使用這些過程，可以制得以下化合物。
化合物1363-(8H-茚并[2，1-c]吡唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)241-243℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ8.40(1H，t，J＝1.7Hz)，8.08(1H，dd，J＝8.2，1.4Hz)，8.01(1H，s)，7.88(1H，dt，J＝7.9，1.2Hz)，7.67(1H，t，J＝7.9Hz)，7.57(1H，d，J＝7.3Hz)，7.52(1H，d，J＝8.4Hz)，7.31(1H，dt，J＝7.9，0.9Hz)，7.18(1H，dt，J＝7.6，1.1Hz)，4.21(2H，s).MS(ES+)m/e 278(19)，277(100)。MS(ES-)m/e 276(19)，275(100)。
化合物1413-(4，5-二氫苯并[e]吲唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)233-234℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.22(1H，br)，8.99(1H，s)，8.38(1H，t，J＝1.8Hz)，8.07(1H，dd，J＝7.9，2.0Hz)，7.82(1H，d，J＝7.6Hz)，7.61(1H，t，J＝7.9Hz)，7.58(1H，d，J＝7.6Hz)，7.26(1H，d，J＝7.6Hz)，7.23(1H，d，J＝7.9Hz)，7.13(1H，dt，J＝7.9，1.0Hz)，3.00-2.95(2H，m)，2.89-2.84(2H，m).MS(ES+)m/e 292(18)，291(100)。MS(ES-)m/e 290(19)，289(100)。
化合物146
3-(8H-茚并[2，1-c]吡唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)246-248℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.24(1H，br)，8.75(1H，s)，8.39(1H，t，J＝1.8Hz)，8.10(1H，dd，J＝8.0，2.2Hz)，7.82(1H，d，J＝7.6Hz)，7.62(1H，t，J＝7.9Hz)，7.56(1H，d，J＝7.3Hz)，7.51(1H，d，J＝7.6Hz)，7.33(1H，t，J-7.8Hz)，7.22(1H，t，J＝7.2Hz)，3.85(2H，s).MS(ES+)m/e 278(18)，277(100)。MS(ES-)m/e 276(21)，275(100)。
化合物1833-(6-二氟甲氧基-4，5-二氫苯并[g]吲唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)235-237℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.27(1H，br)，8.47(1H，s)，8.40(1H，t，J＝1.8Hz)，8.09(1H，ddd，J＝8.2，2.3，1.2Hz)，7.84(1H，dt，J＝8.2，1.3Hz)，7.75(1H，dd，J＝7.6，1.1Hz)，7.62(1H，t，J＝7.9Hz)，7.36(1H，t，J＝7.9Hz)，7.22(1H，t，J＝74.1Hz)，7.15(1H，dd，J＝8.2，0.9Hz)，2.96-2.90(2H，m)，2.82-2.77(2H，m).19F NMR(300MHz，DMSOd6)δ-81.44(2F，d，J＝74.1Hz).MS(ES+)m/e 358(18)，357(100)。MS(ES-)m/e 356(23)，355(100)。
化合物1843-(5-甲氧基-4H-茚并[1，2-c]吡唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)277-278℃。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.24(1H，br)，8.53(1H，s)，8.42(1H，t，J＝1.9Hz)，8.10(1H，dd，J＝8.0，2.0Hz)，7.82(1H，d，J＝7.6Hz)，7.61(1H，t，J＝7.9Hz)，7.41(1H，d，J＝8Hz)，7.37(1H，d，J＝8Hz)，7.03-6.97(1H，m)，3.87(3H，s)，3.62(2H，s).MS(ES+)m/e 308(24)，307(100)。MS(ES-)m/e 306(19)，305(100)。
化合物1853-(5-二氟甲氧基-4H-茚并[1，2-c]吡唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)240-241℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.27(1H，br)，8.60(1H，s)，8.44(1H，t，J＝1.9Hz)，8.13(1H，ddd，J＝8.2，2.3，0.9Hz)，7.84(1H，dt，J＝7.9，1.3Hz)，7.69(1H，d，J＝7.4Hz)，7.62(1H，t，J-7.9Hz)，7.48(1H，t，J＝7.9Hz)，7.34(1H，t，J＝74.1Hz)，7.19(1H，dd，J＝7.9，0.6Hz)，3.77(2H，s).19FNMR(300MHz，DMSO-d6)δ-81.57(2F，d，J＝74.1Hz).MS(ES+)m/e344(23)，343(100)。MS(ES-)m/e 342(21)，341(100)。
化合物1864-(6-二氟甲氧基-4，5-二氫苯并[g]吲唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)282-283℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.00(1H，br)，8.48(1H，s)，8.05(2H，d，J＝9.0Hz)，7.99(2H，d，J＝9.0Hz)，7.74(1H，dd，J-7.6，0.9Hz)，7.38(1H，t，J＝7.9Hz)，7.23(1H，t，J＝74.2Hz)，7.16(1H，d，J＝8.2Hz)，2.96-2.91(2H，m)，2.83-2.77(2H，m).19F NMR(300MHz，DMSO-d6)δ-81.48(2F，d，J＝74.2Hz).MS(ES+)m/e 358(17)，357(100)。MS(ES-)m/e 356(23)，355(100)。
化合物1874-(5-甲氧基-4H-茚并[1，2-c]吡唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)311-313℃。1HNM[R(300MHz，DMSOd6)δ12.97(1H，br)，8.54(1H，s)，8.04(2H，d，J＝9.0Hz)，7.99(2H，d，J＝9.0Hz)，7.43-7.35(2H，m)，7.01(1H，dd，J＝7.0，1.8Hz)，3.87(3H，s)，3.63(2H，s).MS(ES+)m/e 308(19)，307(100)。MS(ES-)m/e 306(22)，305(100)。
化合物1884-(5-二氟甲氧基-4H-茚并[1，2-c]吡唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)277-278℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.00(1H，br)，8.60(1H，s)，8.05(2H，d，J＝9.4Hz)，8.01(2H，d，J＝9.4Hz)，7.66(1H，d，J＝7.4Hz)，7.49(1H，t，J＝7.9Hz)，7.34(1H，t，J＝74.0Hz)，7.20(1H，d，J＝7.6Hz)，3.77(2H，s).19F NMR(300MHz，DMSOd6)δ-81.60(2F，d，J＝74.0Hz).MS(ES+)m/e 345(13)，344(33)，343(100)。MS(ES-)m/e 342(22)，341(100)。
化合物2533-(8-甲氧基-4，5-二氫苯并[e]吲唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)239-241℃。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.01(1H，s)，8.35(1H，t，J＝1.8Hz).8.06(1H，ddd，J＝8.0，2.3，0.9Hz)，7.82(1H，dt，J＝7.6，1.3Hz)，7.61(1H，t，J＝7.9Hz)，7.21(1H，d，J＝2.9Hz)，7.16(1H，d，J＝8.4Hz)，6.70(1H，dd，J＝8.4，2.9Hz)，3.77(3H，s)，2.93-2.80(4H，m).MS(ES+)m/e 322(21)，321(100)。MS(ES-)m/e 320(23)，319(100)。
化合物2543-(8-甲氧基-4，5-二氫苯并[e]吲唑-2-基)苯甲酸熔點(diǎn)269-271℃。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.18(1H，s)，8.09(1H，t，J＝1.9Hz)，7.94(1H，dt，J＝7.9，1.3Hz)，7.81(1H，ddd，J＝8.2，2.3，1.2Hz)，7.66(1H，t，J＝7.9Hz)，7.16(1H，d，J＝8.5Hz)57.15(1H，d，J＝2.6Hz)，6.67(1H，dd，J＝8.5，2.6Hz)，3.76(3H，s)，3.05-2.99(2H，m)，2.91-2.85(2H，m).MS(ES+)m/e 322(23)，321(100)。MS(ES-)m/e 320(21)，319(100)。
E.3，1-吡唑的制備本發(fā)明的3，1-吡唑可以如下制備。
3-[1-(4-二氟甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸(化合物124)的制備A部分.3-乙?；讲㈦?40.0g，276mmol)和二甲基甲酰胺二甲基縮醛(321mL)的混合物在100℃下加熱攪拌72小時(shí)。將揮發(fā)性物質(zhì)蒸餾掉，將粗制產(chǎn)物(55g)放入乙酸中(250mL)。添加水合肼(42.6mL)，混合物在100℃下加熱36小時(shí)?；旌衔锢鋮s并倒入乙酸乙酯中(500mL)。用1M HCl溶液(1L)和飽和鹽水(250mL)洗滌。水相依次用乙酸乙酯(3×500mL)提取，提取物合并，用硫酸鎂干燥，蒸發(fā)。殘余物質(zhì)過濾，得到橙色固體產(chǎn)物3-(1H-吡唑-3-基)-苯并腈(45.0g)，通過HPLC分析，純度為88％。
B部分.4-二氟甲氧基-1-碘苯(1.50g，5.56mmol)和三異丙基硼酸酯(2.06mL，8.89mmol)在四氫呋喃(50mL)中的溶液冷卻至-78℃，在攪拌下逐滴添加正丁基鋰(9.8mL，1.6M己烷溶液，6.11mmol)。20分鐘，去除冷卻槽，溶液升溫至室溫。蒸發(fā)溶劑，殘余物質(zhì)放在1M HCl溶液中(100mL)。用乙酸乙酯(100mL)提取，提取物用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。HPLC分析表明產(chǎn)物4-二氟甲氧基苯硼酸(1.02g)的純度對下個(gè)步驟是足夠的。
C部分.3-(1H-吡唑-3-基)苯并腈(400mg，2.36mmol)和4-二氟甲氧基苯硼酸(1.02g，5.44mmol)在二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液用銅(II)乙酸酯(472mg)、吡啶(0.36mL)和粉末化的活性4A分子篩(1g)處理。得到的混合物在35℃加熱3小時(shí)，冷卻，部分蒸發(fā)。殘余物隔開在1M HCl溶液和乙酸乙酯(各200mL)，提取物用鹽水(100mL)洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物用柱色譜法(硅凝膠，1∶1CH2Cl2-己烷)分離，得到3-[1-(4-二氟甲氧基-苯基)-1H-吡唑-3-基]-苯并腈(200mg，23％)。
D部分.3-[1-(4-二氟甲氧基-苯基)-1H-吡唑-3-基]-苯并腈和濃鹽酸(5mL)在醋酸(5mL)中的溶液加熱回流16小時(shí)?；旌衔锢鋮s并倒入水中(100mL)。用乙酸乙酯提取，提取物用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物用柱色譜法(硅凝膠，1∶25∶74乙酸-CH2Cl2-己烷)分離，蒸發(fā)后得到做作為粉末的題目化合物(12mg，11％)(熔點(diǎn)182-183℃)。1H NMR(300MHz，acetone-d6)δ11.35(1H，br s)，8.64(1H，dt5J＝1.6，0.5Hz)，8.44(1H，dd，J＝2.6，1.4Hz)，8.22(1H，ddd，J＝7.8，1.9，1.1Hz)，8.06-7.99(3H，m)，7.60(1H，t，J＝8Hz)，7.38(2H，d，J＝9.1Hz)，7.09(1H，d，J＝2.6Hz)，7.07(1H，t，J＝74.0Hz).MS(ES+)m/e 332(20)，331(100)。MS(ES-)m/e330(20)，329(100)。
此方法可以按稍微修改的形式制備以下化合物。
化合物863-[1-(2-氟-苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)157-158℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.46(1H，t，J＝1.6Hz)，8.28(1H，t，J＝2.6Hz)，8.13(1H，dt，J＝8.0，1.4Hz)，7.93-7.86(2H，m)，7.57(1H，t，J＝7.7Hz)，7.53-7.34(3H，m)，7.13(1H，d，J＝2.6Hz).MS(ES+)m/e 284(20)，283(100)。MS(ES-)m/e 282(20)，281(100)。
化合物573-(1-苯基-1H-吡唑-3-基)苯并腈熔點(diǎn)78-80℃。MS(ES+)m/e 246(100)。
化合物583-[1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-基]苯并腈熔點(diǎn)110-112℃。MS(ES+)m/e 276(100)。
化合物593-[1-(3-甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-基]-苯并腈熔點(diǎn)100-101℃。MS(ES+)m/e 276(100)。
化合物603-(1-苯并[1，3]二氧環(huán)戊烯-5-基-1H-吡唑-3-基)苯并腈熔點(diǎn)144-147℃。MS(ES+)m/e 290(100)。
化合物613-[1-(4-三氟甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-基]苯并腈熔點(diǎn)83-84℃。MS(ES+)m/e 330(100)。
化合物623-[1-(4-三氟甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-基]苯并腈熔點(diǎn)70-74℃。MS(ES+)m/e 314(100)。
化合物633-[1-(3，4-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]苯并腈熔點(diǎn)142-145℃。MS(ES+)m/e 282(100)。
化合物643-[3-(3-氰基苯基)吡唑-1-基]苯甲酸甲酯熔點(diǎn)143-145℃。MS(ES+)m/e 304(100)。
化合物653-(1-苯基-1H-吡唑-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)202-204℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ8.59(1H，d，J＝2.5Hz)，8.47(1H，t，J＝1.7Hz)，8.14(1H，dt，J＝8.0，1.5Hz)，7.93(1H，t，J＝1.5Hz)，7.91-7.88(1H，m)，7.57(1H，t，J＝7.8Hz)，7.54-7.48(1H，m)，7.32(1H，tt，J＝7.4，1.1Hz)，7.11(1H，d，J＝2.5Hz).MS(ES+)m/e 266(20)，265(100)。MS(ES-)m/e 264(20)，263(100)。
化合物743-[1-(4-羥基-苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)228-230℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.63(1H，s)，8.44(1H，t，J-1.7Hz)，8.38(1H，d，J＝2.5Hz)，8.10(1H，dt，J-8.0，1.5Hz)，7.88(1H，dt，J＝7.7，1.4Hz)，7.67(2H，d，J＝9.0Hz)，7.55(1H，t，J＝7.7Hz)，7.03(1H，d，J＝2.5Hz)，6.86(2H，d，J＝9.0Hz).MS(ES+)m/e 282(20)，281(100)。MS(ES-)m/e 280(20)，279(100)。
化合物753-[1-(3-羥基苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)178-190℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.80(1H，s)，8.51(1H，d，J＝2.5Hz)，8.48(1H，s)，8.12(1H，d，J＝7.7Hz)，7.90(1H，d，J＝7.7Hz)，7.57(1H，t，J＝7.7Hz)，7.36-7.25(3H.m)，7.08(1H，d，J＝2.5Hz)，6.70(1H，dt，J＝6.9，2.2Hz).MS(ES+)m/e 282(20)，281(100)。MS(ES-)m/e 280(20)，279(100)。
化合物663-[1-(4-三氟甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)171-174℃。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.63(1H，t，J＝2.6Hz)，8.48(1H，m)，8.15(1H，d，J＝8.0Hz)，8.04(2H，dd，J＝9.0，2.5Hz)，7.91(1H，d，J＝7.7Hz)，7.58(1H，dd，J＝7.7，2.2Hz)，7.53(2H，d，J＝9.0Hz)，7.15(1H，t，J＝2.5Hz).MS(ES+)m/e 350(20)，349(100)。MS(ES-)m/e 348(20)，347(100)。
化合物673-[1-(4-三氟甲基苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)225-227℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ8.75(1H，d，J＝2.5Hz)，8.50(1H，t，J＝1.5Hz)，8.20-8.17(3H，m)，7.94(1H，dt，J＝8.2，1.4Hz)，7.88(2H，d，J＝8.5Hz)，7.59(1H，t，J＝7.6Hz)，7.21(1H，d，J＝2.5Hz).MS(ES+)m/e 334(20)，333(100)。MS(ES-)m/e 332(20)，331(100)。
化合物683-[1-(3，4-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)240-244℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ8.62(1H，d，J＝2.5Hz)，8.47(1H，t，J＝1.7Hz)，8.15(1H，dt，J-8.2，1.5Hz)，8.05(1H，ddd，J＝12.1，7.1，2.6Hz)，7.92(1H，dt，J＝8.0，1.4Hz)，7.84-7.78(1H，m)，7.66-7.55(2H，m)，7.15(1H，d，J＝2.5Hz).MS(ES+)m/e 302(20)，301(100)。MS(ES-)m/e 300(20)，299(100)。
化合物69**1，3-雙(3-羧基苯基)-1H-吡唑熔點(diǎn)＞300℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.71(1H，d，J＝1.7Hz)，8.48(1H，s)，8.44(1H，s)，8.16(2H，d，J＝7.2Hz)，7.93-7.85(2H，m)，7.64(1H，t，J＝8.0Hz)，7.57(1H，t，J＝8.2Hz)，7.14(1H，d，J＝2.7Hz).MS(ES+)m/e 310(20)，309(100)。MS(ES-)m/e 308(20)，307(100)。
化合物763-[1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)160-161℃。1H NMR(300MHz，acetone-d6)δ11.40(1H，br s)，8.63(1H，t，J＝1.5Hz)，8.33(1H，d，J＝2.5Hz)，8.21(1H，d，J＝7Hz)，8.02(1H，d，J＝7Hz)，7.86(2H，d，J＝9.1Hz)，7.59(1H，t，J＝7.7Hz)，7.09(2H，d，J＝9.1Hz)，7.03(1H，d，J＝2.5Hz)，3.87(3H，s).MS(ES+)m/e 296(20)，295(100)。MS(ES-)m/e294(20)，293(100)。
化合物773-[1-(3-甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)153-154℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ8.60(1H，dd，J＝2.5，1.5Hz)，8.45(1H，d，J＝1.1Hz)，8.14(1H5dd，J＝7.9，1.3Hz)，7.90(1H，dd，J＝7.7，1.1Hz)，7.60-7.38(4H，m)，7.11(1H，dd，J＝2.5，1.4Hz)，6.89(1H，d，J＝8.0Hz)，3.83(3H，s).MS(ES+)m/e 296(20)，295(100)。MS(ES-)m/e 294(20)，293(100)。
化合物873-(1-苯并[1，3]二氧環(huán)戊烯-5-基-1H-吡唑-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)210-215℃。1H NMR(300MHz，丙酮-d6)δ8.61(1H，dt，J＝1.7，0.5Hz)，8.32(1H，d，J＝2.5Hz)，8.21(1H，ddd，J＝7.7，1.7，1.1Hz)，8.02(1H，dt，J＝8.3，1.5Hz)，7.59(1H，dt，J＝7.7，0.6Hz)，7.49(1H，d，J＝2.2Hz)，7.41(1H，dd，J＝8.5，2.2Hz)，7.03(1H，d，J＝2.7Hz)，6.98(1H，d，J＝8.3Hz)，6.11(2H，s).MS(ES+)m/e 310(20)，309(100)。MS(ES-)m/e 308(10)，307(100)。
化合物963-[1-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)245-246℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ8.57(1H，d，J＝2.5Hz)，8.47(1H，t，J＝1.8Hz)，8.14(1H，dt，J＝7.7，1.5Hz)，7.98-7.88(3H，m)，7.57(1H，t，J＝7.7Hz)，7.36(2H，t，J＝8.8Hz)，7.11(1H，d，J＝2.5Hz).MS(ES+)m/e 284(20)，283(100)。MS(ES-)m/e 282(20)，281(100)。
化合物43-[1-(4-異丙基苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.62(1H，s)，8.21(1H，d，J＝8Hz)，8.08(1H，d，J＝8Hz)，7.95(1H，d，J-2Hz)，7.69(2H，d，J＝8Hz)，7.55(1H，t，J＝8Hz)，7.33(2H，d，J＝8Hz)，6.84(1H，d，J＝2Hz)，2.97(1H，heptet，J＝7Hz)，1.27(6H，d，J＝7Hz).MS(ES+)m/e 308(22)，307(100)。
如本發(fā)明的其他地方所述，下面的化合物可以通過3-(碳甲氧基苯基)-1H-吡唑與芳基碘化物試劑的碘化銅催化交叉耦合，然后用甲酸酯水解而制得化合物1604-[1-(3-甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)190-191℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ12.99(1H，br)，8.63(1H，d，J＝2.6Hz)，8.05(2H，d，J＝8.5Hz)，7.99(2H，d，J＝8.5Hz)，7.53-7.48(2H，m)，7.42(1H，t，J＝7.9Hz)，7.14(1H，d，J＝2.6Hz)，6.90(1H，ddd，J＝8，2.2，1.2Hz)，3.84(3H，s).MS(ES+)m/e 296(21)，295(100)。
化合物1643-[1-(3-二甲基氨基苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)180-183℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ8.56(1H，d，J＝2.7Hz)，8.44(1H，t，J＝1.7Hz)，8.13(1H，dt，J＝7.9，1.5Hz)，7.90(1H，dt，J＝7.7，1.5Hz)，7.56(1H，t，J＝7.8Hz)，7.28(1H，t，J＝8.5Hz)，7.16(1H，s)，7.16-7.13(1H，m)，7.07(1H，d，J＝2.5Hz)，6.68-6.64(1H，m)，2.97(6H，s).MS(ES+)m/e 309(20)，308(100)。MS(ES-)m/e 307(15)，306(100)。
化合物1653-[1-(3-溴苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)180-183℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ8.68(1H，d，J＝2.5Hz)，8.47(1H，s)，8.18-8.15(2H，m)，7.98-7.90(2H，m)，7.58(1H，t，J＝7.7Hz)，7.54-7.44(2H，m)，7.16(1H，d，J-2.5Hz).MS(ES+)m/e 345(100)，343(95).MS(ES-)m/e 343(98)，341(100)。
化合物1663-(1-p-甲苯基-1H-吡唑-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)192-193℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ8.54(1H，d，J＝2.5Hz)，8.47(1H，t，J＝2Hz)，8.13(1H，dm，J＝7.7Hz)，7.90(1H，dm，J＝8.0Hz)，7.80(2H，d，J＝8.3Hz)，7.57(1H，t，J＝7.7Hz)，7.32(2H，d，J＝8.5Hz)，7.09(1H，d，J＝2.5Hz)，2.34(3H，s).MS(ES+)m/e 280(20)，279(100)。MS(ES-)m/e 278(20)，277(100)。
化合物1673-(1-m-甲苯基-1H-吡唑-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)162-164℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ8.56(1H，d，J＝2.5Hz)，8.47(1H，t，J＝2Hz)，8.14(1H，d，J＝7.7Hz)，7.91(1H，d，J-8.0Hz)，7.76(1H，s)，7.70(1H，d，J＝8.0Hz)，7.57(1H，t，J＝7.7Hz)，7.39(1H，t，J＝7.8Hz)，7.13(1H，d，J＝7.2Hz)，7.10(1H，d，J＝2.5Hz)，2.40(3H，s).MS(ES+)m/e 280(23)，279(100)。MS(ES-)m/e 278(20)，277(100)。
化合物1683-[1-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)280-281℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ8.83(1H，d，J＝2.7Hz)，8.52(1H，s)，8.39(2H，d，J＝9.3Hz)，8.22(2H，d，J＝9.3Hz)，8.18(1H，d，J＝8Hz)，7.95(1H，d，J＝8.0Hz)，7.60(1H，t，J＝8Hz)，7.27(1H，d，J＝2.5Hz).MS(ES+)m/e 311(30)，310(100)。MS(ES-)m/e309(20)，308(100).
化合物1753-[1-(3-芐氧基苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)152-153℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.61(1H，d，J＝2.7Hz)，8.47(1H，t，J＝1.6Hz)，8.15(1H，dt，J＝7.7，1.2Hz)，7.91(1H，dt，J＝7.7，1.2Hz)，7.60-7.30(9H，m)，7.12(1H，d，J＝2.7Hz)，6.97(1H，dd，J＝7.7，2.2Hz)，5.20(2H，s).MS(ES+)m/e 372(25)，371(100)。MS(ES-)m/e 370(20)，369(100)。
化合物1763-[1-(4-芐氧基苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)210-212℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ8.47(1H，d，J＝2.5Hz)，8.45(1H，t，J＝1.8Hz)，8.12(1H，dt，J＝7.9，1.3Hz)，7.89(1H，dt，J＝7.7，1.3Hz)，7.82(2H，d，J＝9.1Hz)，7.56(1H，t，J＝7.8Hz)，7.49-7.30(5H，m)，7.15(2H，d，J＝9.1Hz)，7.07(1H，d，J＝2.5Hz)，5.15(2H，s).MS(ES+)m/e 372(20)，371(100)。MS(ES-)m/e 370(25)，369(100)。
化合物2174-[1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)252-253℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.49(1H，d，J＝2.5Hz)，8.03(2H，d，J＝8.7Hz)，7.99(2H，d，J＝8.7Hz)，7.82(2H，d，J＝9.0Hz)，7.09(1H，d，J＝2.5Hz)，7.07(2H，d，J＝9.0Hz)，3.79(3H，s).MS(ES+)m/e 296(20)，295(100)。MS(ES-)m/e 294(20)，293(100)。
化合物2184-[1-(4-三氟甲氧基苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)214-215℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ8.66(1H，d，J＝2.5Hz)，8.06-8.01(6H，m)，7.54(2H，d，J＝8.5Hz)，7.18(1H，d，J＝2.5Hz).MS(ES+)m/e 350(20)，349(100)。MS(ES-)m/e 348(20)，347(100)。
化合物2553-[1-(4-乙?；交?-1H-吡唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)215-216℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ12.99(1H，br)，8.75(1H，d，J＝2.6Hz)，8.50(1H，t，J＝1.6Hz)，8.17(1H，dt，J＝8.2，1.5Hz)，8.10(2H，d，J＝9.3Hz)，8.07(2H，d，J＝9.3Hz)，7.93(1H，dt，J＝7.9，1.5Hz)，7.59(1H，t，J＝7.9Hz)，7.20(1H，d，J＝2.6Hz)，2.60(3H，s).MS(ES+)m/e 308(19)，307(100)。MS(ES-)m/e 306(20)，305(100)。
化合物2564-[1-(4-乙酰基苯基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)278-279℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.00(1H，br)，8.76(1H，d，J＝2.6Hz)，8.10(2H，d，J＝9.3Hz)，8.08(2H，d，J＝9.3Hz)，8.07(2H，d，J＝8.8Hz)，8.01(2H，d，J＝8.8Hz)，7.22(1H，d，J＝2.6Hz)，2.60(3H，s)。MS(ES+)m/e 308(23)，307(100)。MS(ES-)m/e 306(20)，305(100)。
化合物2574-[1-(1H-吲哚-5-基)-1H-吡唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)281-282℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ12.90(1H，br)，11.27(1H，br)，8.49(1H，d，J＝2.6Hz)，8.04(2H，d，J＝8.8Hz)，8.03-8.00(1H，m)，7.99(2H，d，J＝8.8Hz)，7.64(1H，dd，J＝8.8，2.3Hz)，7.50(1H，d，J＝8.8Hz)，7.44(1H，t，J＝2.8Hz)，7.08(1H，d，J＝2.6Hz)，6.52-6.49(1H，m).MS(ES+)m/e 305(19)，304(100)。MS(ES-)m/e 303(22)，302(100)。
化合物2583-(1-噻吩-2-基-1H-吡唑-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)198-199℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.12(1H，br)，8.48(1H，d，J＝2.4Hz)，8.42(1H，s)，8.09(1H，d，J＝7.6Hz)，7.91(1H，d，J＝7.9Hz)，7.57(1H，t，J＝7.9Hz)，7.36(1H，dd，J＝3.8，1.1Hz)，7.31(1H，d，J-5.2Hz)，7.11(1H，d，J＝2.4Hz)，7.03(1H，dd，J＝5.2，3.8Hz).MS(ES+)m/e 273(8)，272(21)，271(100)。MS(ES-)m/e 271(6)，270(16)，269(100)。
化合物2594-(1-噻吩-2-基-1H-吡唑-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)200-202℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ12.97(1H，br)，8.50(1H，d，J＝2.6Hz)，8.00(2H，d，J＝9.3Hz)，7.97(2H，d，J＝9.3Hz)，7.38(1H，dd，J＝3.8，1.4Hz)，7.32(1H，dd，J＝5.6，1.5Hz)，7.13(1H，d，J＝2.6Hz)，7.03(1H，dd，J＝5.6，3.8Hz).MS(ES+)m/e 273(5)，272(15)，271(100)。MS(ES-)m/e 271(5)，270(16)，269(100)。
化合物2603-(1-吡啶-3-基-1H-吡唑-3-基)苯甲酸；熔點(diǎn)235-236℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.12(1H，br)，9.18(1H，d，J＝2.6Hz)，8.69(1H，d，J＝2.6Hz)，8.53(1H，dd，J＝4.7，1.2Hz)，8.49(1H，t，J＝1.6Hz)，8.31(1H，ddd，J＝8.5，2.6，1.5Hz)，8.17(1H，dt，J＝8.2，1.6Hz)，7.93(1H，dt，J＝7.9，1.6Hz)，7.59(1H，t，J＝7.9Hz)，7.56(1H，ddd，J＝8.2，4.7，0.6Hz)，7.19(1H，d，J＝2.6Hz).MS(ES+)m/e 267(34)，266(100)。MS(ES-)m/e 265(17)，264(100)。
化合物2614-(1-吡啶-3-基-1H-吡唑-3-基)苯甲酸；熔點(diǎn)280-282℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ12.99(1H，br)，9.21(1H，br)，8.71(1H，d，J＝2.6Hz)，8.56(1H，br)，8.32(1H，br d，J＝9.0Hz)，8.07(2H，d，J＝8.8Hz)，8.01(2H，d，J＝8.8Hz)，7.60-7.55(1H，brm)，7.21(2H，d，J＝2.6Hz).MS(ES+)m/e267(30)，266(100).MS(ES-)m/e 265(20)，264(100)。
F.4，1-吡唑的制備本發(fā)明的4，1-吡唑可以如下制備。
6-[1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基]-吡啶-2-羧酸(化合物53)的制備6-(二甲酸基甲基)-吡啶-2-羧酸(315mg，1.63mmol)、4-甲氧基苯基肼氫氧化物(285mg，1.63mmol)和醋酸鈉(134mg，1.63mmol)在醋酸(5mL)中的溶液在110℃下加熱18小時(shí)。，冷卻后將溶液過濾。固體產(chǎn)物用乙酸乙酯和二乙醚洗滌，真空干燥，得到淺褐色的標(biāo)題產(chǎn)物(294mg，0.99mmol，61％)，熔點(diǎn)122-123℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.11(1H，s)，8.38(1H，s)，7.99(2H，d，J＝4.7Hz)，7.86(1H，t，J＝4.4Hz)，7.80(2H，d，J＝9.1Hz)，7.08(2H，d，J＝9.1Hz)，3.80(3H，s)，1H missing.MS(ES+)m/e 297(18)，296(100)。MS(ES-)m/e 295(14)，294(100)。
可稍微修改上述方法以制備下列化合物。
化合物546-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑-4-基]吡啶-2-羧酸熔點(diǎn)194-196℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ9.25(1H3s)，8.45(1H，s)，8.01-7.86(5H，m)，7.59(2H，d，J＝8.5Hz)，1H missing.MS(ES+)m/e 302(36)，301(16)，300(100)。MS(ES-)m/e 300(36)，299(16)，298(100)。
化合物553-[1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基]-4-硝基苯甲酸熔點(diǎn)249-250℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.68(1H，br s)，8.81(1H，s)，8.20(1H，s)，8.02(2H，s)，7.79(2H，d，J＝9.1Hz)，7.79(1H，s)，7.06(2H，d，J＝9.1Hz)，3.79(3H，s).MS(ES+)m/e 341(20)，340(100)。MS(ES-)m/e 339(21)，338(100)。
化合物563-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑-4-基]-4-硝基苯甲酸熔點(diǎn)270-271℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ13.70(1H，br s)，8.96(1H，s)，8.20(1H，s)，8.03(2H，s)，7.92(2H，d，J＝8.8Hz)，7.86(1H，s)，7.57(2H，d，J＝8.8Hz).MS(ES+)m/e 346(37)，345(14)，344(100)。MS(ES-)m/e 344(42)，343(15)，342(100)。
3-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑4-基]苯甲酸(化合物83)的制備A部分.4-氯苯基肼氫氯化物(2.02g，11.3mmol)、1，1，3，3-四甲氧基丙烷(2.00niL，12.1mmol)和醋酸鈉(1.00g，12.2mmol)在醋酸(25mL)中的溶液加熱溫和地回流過夜。溶液冷卻并倒入水中(125mL)。部分加入固體碳酸氫鈉直到混合物pH為弱堿性。然后用乙酸乙酯(125mL)提取兩次，提取物用鹽水洗滌，合并，用無水硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，得到兩批1-(4-氯苯基)吡唑(1.13g+0.24g，7.65mmol，68％)。熔點(diǎn)50-53℃。TLC RF0.19(10∶90乙酸乙酯-己烷).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.89(1H，dd，J＝2.4，0.6Hz)，7.72(1H，d，J＝1.5Hz)，7.64(2H，d，J＝8.7Hz)，7.42(2H，d，J＝8.7Hz)，6.47(1H，dd，J＝2.4，1.8Hz).MS(ES+)m/e 182(3)，181(34)，180(6)，179(100)。
B部分.1-(4-氯苯基)吡唑(834mg，4.67mmol)在醋酸中(10mL)的溶液用溴(0.26mL，5.08mmol)處理。攪拌18小時(shí)后，溶液用40mL水稀釋，加入飽和NaHSO3水溶液，直到溴色消散。然后加入固體碳酸氫鈉，直到pH為中性。該混合物用乙酸乙酯(2×50mL)提取，提取物用鹽水洗滌，合并，用無水硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)。固體殘留物用環(huán)己烷重結(jié)晶，得到純的產(chǎn)物4-溴-1-(4-氯苯基)-吡唑(797mg，3.10mmol，66％)。熔點(diǎn)75-76℃環(huán)己烷).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.89(1H，s)，7.66(1H，s)，7.57(2H，d，J＝9.0Hz)5 7.41(2H，d，J＝9.0Hz).MS(ES+)m/e 261(26)，259(100)，257(77).
C部分.4-溴-1-(4-氯苯基)吡唑(422mg，1.64mmol)、3-羧基苯硼酸(326mg，1.96mmol)、醋酸鈀(20mg，0.089mmol)、三苯基膦(93mg，0.355mmol)和Na2CO3水溶液(2.50mL，2.0M，5.00mmol)在二甲氧基乙烷(25mL)中的溶液通過三次真空抽氣/氮吹洗而脫氣。然后將溶液加熱回流18小時(shí)。得到的黑色混合物冷卻，通過塞里塑料(celite)過濾，倒入到120mL HCl(0.5N)中。用乙酸乙酯(2×120mL)提取，提取物用鹽水洗滌，合并，用無水硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)。通過過濾收集到少量(50mg)固體產(chǎn)物，通過光譜分析為純的標(biāo)題化合物，熔點(diǎn)205-206℃。1H NMR(300MHz，acetone-d6)δ9.03(1H，s)，8.32(1H，t，J＝1.6Hz)，8.26(1H，s)，8.01(2H，d，J＝9.0Hz)，7.97-7.87(2H，m)，7.56(2H，d，J＝9.0Hz)，7.53(1H，t，J＝8.2Hz)，1H missing.MS(ES+)m/e 302(4)，301(31)，300(19)，299(100)。MS(ES-)m/e 300(2)，299(31)，298(23)，297(100)。
可稍微修改上述方法以制備下列化合物。
化合物973-[1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)223-225℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ13.07(1H，s)，9.01(1H，s)，8.24(1H，s)，8.22(1H，s)，7.94(1H，d，J＝7.6Hz)，7.82(2H，d，J＝9.9Hz)，7.81(1H，d，J＝7.8Hz)，7.52(1H，t，J＝7.7Hz)，7.06(2H，d，J＝9.9Hz)，3.79(3H，s).MS(ES+)m/e 296(19)，295(100)。MS(ES-)m/e 294(17)，293(100)。
化合物1333-[1-(4-三氟甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)213-215℃。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.18(1H，s)，8.32(1H，s)，8.26(1H，s)，7.99(3H，m)，7.81(1H，d，J＝6.3Hz)，7.53(3H，m).MS(ES+)m/e 350(20)，349(100)。MS(ES-)m/e 348(20)，347(100)。
化合物1344-[1-(4-三氟甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)246-248℃。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.18(1H，s)，8.35(1H，s)，8.01(2H，d，J＝8.9Hz)，7.96(2H，d，J＝8.2Hz)，7.83(2H，d，J＝8.2Hz)，7.55(2H，d，J＝8.9Hz).MS(ES+)m/e 350(20)，349(100)。MS(ES-)m/e 348(20)，347(100)。
化合物1714-[1-(3-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)211-212℃。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.16(1H，s)，8.31(1H，s)，7.95(2H，d，J＝8.5Hz)，7.83(2H，d，J-8.5Hz)，7.44(3H，m)，6.90(1H，m)，3.84(3H，s).MS(ES+)m/e 297(5)，296(45)，295(100)。MS(ES-)m/e 294(20)，293(100)。
化合物1723-[1-(3-三氟甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)179-181℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ9.21(1H，s)，8.33(1H，s)，8.27(1H，s)，7.95(1H，dd，J＝8.0，1.2Hz)，7.80(3H，m)，7.55(2H，m)，7.35(1H，s)，7.12(1H，m).MS(ES+)m/e 332(60)，331(100)。MS(ES-)m/e 330(20)，329(100)。
化合物1734-[1-(3-三氟甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)255-257℃。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.20(1H，s)，8.34(1H，s)，7.96(2H，d，J＝8.5Hz)，7.82(2H，d，J＝8.5Hz)，7.77(1H，m)，7.73(1H，m)，7.57(1H，m)，7.36(1H，s)，7.14(1H，m).MS(ES+)m/e 333(10)，332(60)，331(100)。MS(ES-)m/e 330(20)，329(100)。
化合物1743-[1-(3-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)156-157℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.15(1H，s)，8.27(2H，s，overlapping)，7.96(1H，dd，J-7.7，1.1Hz)，7.81(1H，dd，J＝7.4，1.1Hz)，7.50(3H，m)，7.43(1H，m)，6.88(1H，dd，J＝8.0，1.1Hz)，3.83(3H，s).MS(ES+)m/e 296(20)，295(100)。MS(ES-)m/e 294(20)，293(100)。
化合物1773-(1-p-甲苯基-1H-吡唑-4-基)苯甲酸熔點(diǎn)229-231℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.07(1H，s)，8.25(2H，s，重疊)，7.94(1H，d，J＝7.4Hz)，7.78(3H，m)，7.51(1H，t，J＝7.4Hz)，7.30(2H，d，J＝8.0Hz)，2.33(3H，s).MS(ES+)m/e 280(20)，279(100)。MS(ES-)m/e 278(20)，277(100)。
化合物1784-(1-p-甲苯基-1H-吡唑-4-基)苯甲酸熔點(diǎn)280-282℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.08(1H，s)，8.28(1H，s)，7.95(2H，d，J＝8.3Hz)，7.83(2H，d，J＝8.3Hz)，7.77(2H，d，J＝8.6Hz)，7.32(2H，d，J＝8.6Hz)，2.33(3H，s).MS(ES+)m/e 280(20)，279(100)。MS(ES-)m/e 278(20)，277(100)。
化合物1793-[1-(2，4-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)200-202℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ8.74(1H，d，J＝1.9Hz)，8.32(1H，s)，8.21(1H，s)，7.87(3H，m)，7.58(2H，m)，7.28(1H，m).MS(ES+)m/e 302(20)，301(100)。MS(ES-)m/e 300(20)，299(100)。
化合物1804-[1-(2，4-二氟苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)258-260℃，1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ8.76(1H，d，J＝2.2Hz)，8.36(1H，s)，7.94(2H，d，J＝8.3Hz)，7.88(1H，m)，7.83(2H，d，J＝8.3Hz)，7.61(1H，m)，7.29(1H，m).MS(ES+)m/e 302(20)，301(100)。MS(ES-)m/e 300(20)，299(100)。
化合物1813-[1-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)235-237℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.11(1H，s)，8.26(2H，d，J＝6.3Hz)，7.94(3H，m)，7.81(1H，d，J＝7.7Hz)，7.52(1H，t，J＝7.7Hz)，7.36(2H，m).MS(ES+)m/e284(40)，283(100)。MS(ES-)m/e 282(20)，281(100)。
化合物1824-[1-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)266-268℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.11(1H，s)，8.31(1H，s)，7.95(2H，d，J＝8.4Hz)，7.92(2H，m)，7.83(2H，d，J＝8.4Hz)，7.38(2H，m).MS(ES+)m/e 284(40)，283(100)。MS(ES-)m/e 282(20)，281(100)。
化合物2233-[1-(3-三氟甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)143-145℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ8.30(1H，s)，8.21(1H，s)，8.03(2H，m)，7.76(1H，dd，J＝6.9，1.0Hz)，7.65(2H，m)，7.49(2H，m)，7.17(1H，dd，J＝8.3，1.3Hz).MS(ES+)m/e 350(30)，349(100)。MS(ES-)m/e 348(20)，347(100)。
化合物2244-[1-(3-三氟甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)230-231℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ8.24(1H，s)，7.90(1H，s)，7.86(2H，m)，7.53(2H，m)，7.45(2H，m)，7.33(1H，m)，6.98(1H，m).MS(ES+)m/e 350(30)，349(100)。MS(ES-)m/e 348(20)，347(100)。
化合物2253-[1-(2，3-二氫苯并[1，4]二氧芑-6-基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)201-203℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.01(1H，s)，8.23(1H，s)，8.20(1H，s)，7.91(1H，dd，J＝7.7，1.1Hz)，7.79(1H，dd，J＝7.4，1.0Hz)，7.50(1H，t，J＝7.7Hz)，7.36(2H，m)，6.97(1H5d，J＝8.8Hz)，4.28(4H，t，J＝1.2Hz).MS(ES+)m/e 324(20)，323(100)。MS(ES-)m/e 322(20)，321(100)。
化合物2264-[1-(2，3-二氫苯并[1，4]二氧芑-6-基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)238-240℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.01(1H，s)，8.23(1H，s)，7.93(2H，d，J＝8.3Hz)，7.75(2H，d，J＝8.3Hz)，7.36(2H，m)，6.98(1H，d，J＝8.8Hz)，4.28(4H，t，J＝1.9Hz).MS(ES+)m/e 324(20)，323(100)。MS(ES-)m/e 322(20)，321(100)。
化合物2274-(1-苯并[1，3]二氧芑-5-基-1H-吡唑-4-基)苯甲酸熔點(diǎn)266-268℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ9.00(1H，s)，8.25(1H，s)，7.94(2H，d，J＝8.2Hz)，7.80(2H，d，J＝8.2Hz)，7.47(1H，d，J＝2.2Hz)，7.35(1H，dd，J＝8.5，2.2Hz)，7.04(1H，d，J＝8.5Hz)，6.09(2H，s)。MS(ES+)m/e 310(20)，309(100)。MS(ES-)m/e 308(15)，307(70)，242(100).
化合物2283-[1-(4-異丙基苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)212-215℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ9.06(1H，s)，8.25(1H，t，J＝2.2Hz)，8.24(1H，s)，7.94(1H，dd，J＝7.1，1.1Hz)，7.81(2H，d，J＝8.6Hz)，7.79(1H，s)，7.51(1H，m)，7.36(2H，d，J＝8.6Hz)，2.91(1H，heptet(七重峰)，J＝6.9Hz)，1.21(6H，d，J＝6.9Hz).MS(ES+)m/e 308(20)，307(100)。MS(ES-)m/e 306(20)，305(100)。
化合物2294-[1-(4-異丙基苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)215-218℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.08(1H，s)，8.28(1H，s)，7.94(2H，d，J＝8.3Hz)，7.83(2H，d，J＝8.3Hz)，7.79(2H，d，J＝8.5Hz)，7.38(2H，d，J＝8.5Hz)，2.93(1H，heptet，J＝6.9Hz)，1.21(6H，d，J＝6.9Hz).MS(ES+)m/e 308(20)，307(100)。MS(ES-)m/e 306(20)，305(100).
化合物2303-[1-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)209-211℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ9.16(1H，s)，8.33(1H，s)，7.93(3H，m)，7.85(2H，m)，7.58(2H，m)，2.31(3H，s).MS(ES+)m/e 315(30)，313(100)。MS(ES-)m/e 313(30)，311(100)，277(10).
化合物2314-[1-(3-氯-4-甲基苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)285-288℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ9.17(1H，s)，8.31(1H，s)，7.97(1H，s)，7.94(2H，d，J＝8.3Hz)，7.81(2H，d，J-8.3Hz)，7.77(1H，d，J＝8.5Hz)，7.49(1H，d，J＝8.3Hz)，2.34(3H，s).MS(ES+)m/e 315(30)，313(100)。MS(ES-)m/e 313(30)，311(100)。
化合物2323-[1-(3，4-二氯苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)135-138℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.24(1H，s)，8.34(1H，s)，8.27(1H，s)，8.23(1H，d，J＝2.5Hz)，7.93(2H，m)，7.80(2H，m)，7.51(1H，t，J＝7.7Hz).MS(ES+)m/e 337(10)，335(60)，333(100)。MS(ES-)m/e 335(10)，333(60)，331(100)。
化合物233
4-[1-(3，4-二氯苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)286-289℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.23(1H，s)，8.36(1H，s)，8.19(1H，d，J＝1.1Hz)，7.95(2H，d，J＝7.2Hz)，7.90(1H，m)，7.82(2H，d，J＝7.2Hz)，7.80(1H，s).MS(ES+)m/e 337(10)，335(50)，333(100)。MS(ES-)m/e 335(10)，333(60)，331(100)。
化合物2344-[1-(4-氯-苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)259-261℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.16(1H，s)，8.33(1H，s)，7.95(2H，d，J＝7.6Hz)，7.91(2H，d，J＝8.5Hz)，7.82(2H，d，J＝7.6Hz)，7.58(2H，d，J＝8.5Hz).MS(ES+)m/e 301(30)，299(100)。MS(ES-)m/e 299(30)，297(100)。
化合物2353-[1-(4-三氟甲基苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)218-220℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ9.30(1H，s)，8.38(1H，s)，8.30(1H，s)，8.15(2H，d，J＝8.1Hz)，7.96(1H，dd，J＝7.7，1.1Hz)，7.89(2H，d，J＝8.1Hz)，7.83(1H，dd，J＝7.8，1.2Hz)，7.53(1H，m).MS(ES+)m/e 334(20)，333(100)。MS(ES-)m/e 332(20)，331(100)。
化合物2364-[1-(4-三氟甲基苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)271-273℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ9.28(1H，s)，8.40(1H，s)，8.10(2H，d，J＝7.7Hz)，7.96(2H5d，J＝7.7Hz)，7.89(4H，m).MS(ES+)m/e 334(20)，333(100)。MS(ES-)m/e 332(20)，331(100)，287(10).
化合物2373-[1-(3，4-二甲基苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)196-197℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ9.03(1H，s)，8.25(1H，s)，8.22(1H，s)，7.91(1H，d，J＝7.4Hz)，7.80(1H，dd，J＝7.2，1.1Hz)，7.72(1H，s)，7.60(1H，dd，J＝8.3，2.2Hz)，7.49(1H，m)，7.23(1H，d，J＝8.0Hz)，2.29(3H，s)，2.23(3H，s).MS(ES+)m/e 294(20)，293(100)。MS(ES-)m/e 292(20)，291(100)。
化合物238
4-[1-(3，4-二甲基苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酸熔點(diǎn)254-256℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ9.05(1H，s)，8.25(1H，s)，7.93(2H，d，J＝6.9Hz)，7.88(2H，d，J＝6.9Hz)，7.68(1H，s)，7.57(1H，d，J＝8.0Hz)，7.25(1H，d，J＝8.0Hz)，2.28(3H，s)，2.23(3H，s).MS(ES+)m/e 294(20)，293(100)。MS(ES-)m/e 292(20)，291(100)，247(10).
化合物2393-(1-苯并[1，3]二氧環(huán)戊烯-5-基-1H-吡唑-4-基)苯甲酸熔點(diǎn)221-223℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.01(1H，s)，8.23(1H，t，J＝1.7Hz)，8.22(1H，s)，7.92(1H，d，J＝7.7Hz)，7.79(1H，dd，J＝7.7，1.1Hz)，7.53-7.48(2H，m)，7.37(1H，dd，J＝8.3，2.2Hz)，7.03(1H，d，J＝8.3Hz)，6.09(2H，s).MS(ES+)m/e 310(20)，309(100)。MS(ES-)m/e 308(20)，307(100)。
G.1，2，4-三唑的制備3-[1-(4-甲氧基苯基)-lH-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸(化合物12)的制備A部分.甲基3-氰基苯甲酸酯(1.06g，6.58mmol)在甲醇(8mL)中的溶液冷卻至0℃，用氯化乙酰(10.0mL，140mmol)逐滴處理。得到的混合物攪拌6小時(shí)，升溫至室溫。溶液的揮發(fā)性組分蒸發(fā)掉，得到的白色固體用二乙醚洗滌而凈化。真空干燥后，該固體直接用于下個(gè)步驟。
B部分.4-甲氧基苯基肼氫氯化物(1.30g，7.44mmol)用飽和碳酸氫鈉飽和水溶液(15mL)處理，并攪拌10分鐘。用二氯乙烷(2×20mL)洗滌，提取物用鹽水洗滌，合并，用無水硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，得到為白色粉末的游離堿。懸浮在1，4-二噁烷(10mL)中，加入以上A部分中制得的亞胺酯鹽。得到的溶液在110℃下加熱3.5小時(shí)，冷卻?；旌衔镉枚颐严♂專ㄟ^過濾收集得到的白色沉淀，真空干燥，得到3-[亞氨基(2-(4-甲氧基)苯基肼基)甲基]苯甲酸甲酯(0.48g，21％)。MS(ES+)m/e 300(100)。
C部分.3-[亞氨基-(2-(4-甲氧基)苯基肼基)甲基]苯甲酸甲酯(0.28g，0.94mmol)的溶液用濃甲酸(3.5mL)處理。溶液加熱回流12小時(shí)，冷卻，倒入水中，攪拌1小時(shí)。形成白色固體(3-[1-(4-甲氧基-苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸甲酯)，通過過濾收集，用水和己烷洗滌，真空干燥(0.22g，76％)。MS(ES+)m/e 310.
D部分.3-[1-(4-甲氧基苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸甲酯(0.21g，6.8mmol)和NaOH水溶液(5mL)在THF(5mL)中的混合物加熱回流5小時(shí)。溶液冷卻并蒸發(fā)，殘余物用1N HCl處理，直到pH為弱酸性。這使得白色固體沉淀，用乙醇/水重結(jié)晶，得到標(biāo)題產(chǎn)物(0.13g，65％)。熔點(diǎn)230-232℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.26(1H，s)，8.64(1H，s)，8.29(1H，d，J＝8Hz)，8.00(1H，d，J＝8Hz)，7.84(2H，d，J＝8.8Hz)，7.63(1H，t，J＝8Hz)，7.12(2H，d，J＝8.8Hz)，3.82(3H，s).MS(ES+)m/e297(20)，296(100)。MS(ES-)m/e295(20)，294(100)。
該過程可以用來合成下列化合物。
化合物83-(3-苯基-[1，2，4]三唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)268-271℃。1H NMR(300MHz，丙酮-d6)δ9.27(1H，s)，8.57(1H，t，J＝1.9Hz)，8.26-8.19(3H，m)，8.09(1H，dt，J＝7.9，1.3Hz)，7.75(1H，t，J＝7.9Hz)，7.54-7.43(3H，m).MS(ES+)m/e 267(18)，266(100)。MS(ES-)m/e 265(17)，264(100)。分析計(jì)算C15H11N3O2·1.52H2OC，61.57；H，4.83；N，14.36；發(fā)現(xiàn)C，62.79；H，4.27；N，13.00.
化合物93-[3-(4-羥基苯基)-[1，2，4]三唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)307-311℃。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.41(1H，s)，8.41(1H，s)，8.16(1H，dd，J＝7.9，2.0Hz)，7.95-7.84(3H，m)，7.68(1H，t，J＝7.9Hz)，6.87(2H，d，J＝8.5Hz).MS(ES+)m/e 283(18)，282(100)。MS(ES-)m/e 281(18)，280(100)。分析計(jì)算C15H11N3O3·2.03H2OC，56.69；H，4.78；N，13.22；發(fā)現(xiàn)C，56.38；H，3.66；N，13.02.
化合物10
3-[3-(4-芐氧基苯基)-[1，2，4]三唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)259-261℃。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.37(1H，br s)，9.42(1H，s)，8.42(1H，s)，8.16(1H，ddd，J＝8.1，2.3，1.2Hz)，8.03(2H，d，J＝9.2Hz)，7.95(1H，dt，J＝7.9，1.0Hz)，7.69(1H，t，J＝7.8Hz)，7.48-7.32(5H，m)，7.13(2H，d，J＝9.2Hz)，5.16(2H，s).MS(ES+)m/e 373(21)，372(100)。MS(ES-)m/e371(23)，370(100)。分析計(jì)算C22H17N3O3·0.18H2OC，70.54；H，4.67；N，11.22；發(fā)現(xiàn)C，70.55；H，4.46；N，11.07.
化合物113-[3-(4-甲氧基苯基)-[1，2，4]三唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)268-270℃。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.36(1H，br s)，9.42(1H，s)，8.42(1H，s)，8.17(1H，dt，J＝8.1，1.1Hz)，8.03(2H，d，J＝8.2Hz)，7.94(1H，dd，J＝7.8，1.1Hz)，7.69(1H，t，J＝7.6Hz)，7.05(2H，d，J＝8.2Hz)，3.81(3H，s).MS(ES+)m/e 297(23)，296(100)。MS(ES-)m/e 295(17)，294(100)。分析計(jì)算C16H13N3O3·0.17H2OC，64.42；H，4.51；N，14.08；發(fā)現(xiàn)C，64.69；H，4.43；N，13.77.
化合物133-[1-(4-氟苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)＞310℃。1H NMR(300M[Hz，DMSO-d6)δ9.31(1H，s)，8.60(1H，s)，8.25(1H，d，J＝6.6Hz)，8.00-7.90(3H，m)，7.59(1H，t，J＝7.5Hz)，7.42-7.36(2H，m).MS(ES+)m/e 285(25)，284(100)。MS(ES-)m/e 283(20)，282(100)。
化合物143-(1-p-甲苯基-1H-[1，2，4]三唑-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)263-265℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.26(1H，d)，8.57(1H)，8.21(1H)，7.91(1H)，7.73(1H)，7.55(1H，d)，7.29(2H)，2.30(3H，s).MS(ES+)m/e 281(25)，280(100)。MS(ES-)m/e 279(20)，278(100)。
化合物163-[1-(2，4-二氟苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)290-292℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.09(1H，t，J＝1.9Hz)，8.63(1H，d，J＝1.4Hz)，8.28(1H，d，J＝6.3Hz)，8.03-7.90(2H，m)，7.71-7.61(2H，m)，7.34(1H，t，J＝7Hz).MS(ES+)m/e 303(20)，302(100)。MS(ES-)m/e 301(20)，300(100)。
化合物153-[1-(4-異丙基苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)173-175℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ9.25(1H)，8.58(1H)，8.22(1H)，7.92(1H)，7.75(2H)，7.56(1H)，7.34(2H)，2.89(1H)，1.15(6H).MS(ES+)m/e 309(40)，308(100)。MS(ES-)m/e 307(20)，306(100)。
化合物173-[1-(2-氟苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)239-241℃。1HNMR(300MHz5DMSOd6)δ9.12(1H，s)，8.66(1H，s)，8.31(1H，d，J＝7.4Hz)，8.03(1H，d，J＝7.1Hz)，7.91(1H，t，J＝7.5Hz)，7.64(1H，t，J＝7.7Hz)，7.60-7.50(2H，m)，7.43(1H，br)。MS(ES+)m/e 285(20)，284(100)。MS(ES-)m/e 283(20)，282(100)。
化合物183-[1-(4-三氟甲基苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)141-143℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.55(1H，s)，8.67(1H，s)，8.32(1H，d，J＝7.7Hz)，8.19(2H，d，J＝8.5Hz)，8.02(1H5d，J＝7.7Hz)，7.95(2H5d，J＝8.5Hz)，7.65(1H，t，J＝7.7Hz).MS(ES+)m/e 335(20)，334(100)。MS(ES-)m/e 333(20)，332(100)。
化合物193-[1-(4-三氟甲氧基苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)219-221℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.43(1H，s)，8.66(1H5s)，8.28(1H，d，J＝7.4Hz)，8.13-8.00(3H，m)，7.67-7.58(3H，m).MS(ES+)m/e 351(15)，350(100)。MS(ES-)m/e 349(15)，348(100)。
化合物203-[1-(3，5-雙三氟甲基苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)271-273℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.68(1H，s)，8.65(1H，s)，8.62(2H，s)，8.34(1H，d，J＝7.7Hz)，8.16(1H，s)，8.02(1H，d，J＝7.7Hz)，7.63(1H，t，J＝7.7Hz).MS(ES+)m/e 403(25)，402(100)。
化合物213-[1-(2-乙基苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)176-178℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ8.96(1H，s)，8.64(1H，s)，8.28(1H，dd，J＝7.7，1.1Hz)，8.01(1H，dd，J＝7.7，1.1Hz)，7.63(1H，t，J＝7.7Hz)，7.52-7.40(4H，m)，2.55(2H，q，J＝7.7Hz)，1.06(3H，t，J＝7.7Hz).MS(ES+)m/e 295(30)，294(100)。
化合物223-[1-(4-溴苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)＞310℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.39(1H，s)，8.65(1H，s)，8.03-7.93(4H，m)，7.76(2H，d，J＝8.2Hz)，7.40(1H，t，J＝7.3Hz).MS(ES+)m/e 347(15)，346(100)，345(15)，344(100)。
化合物233-[1-(4-硝基苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)284-286℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ9.41(1H，s)，8.65(1H，s)，8.31(1H，d，J＝7.7Hz)，8.30-8.25(1H，m)，8.05-7.95(2H，m)，7.70-7.60(3H，m).MS(ES+)m/e 312(20)，311(100)。
化合物253-[1-(3-氯-4-氟苯基)-1H-[1，2，4][1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)270-272℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.42(1H，s)，8.65(1H，s)，8.31(1H，dd，J-7.7，1.1Hz)，8.25-8.22(1H，m)，8.04-7.95(2H5m)，7.68-7.61(2H，m).MS(ES+)m/e 320(35)，318(100)。
化合物293-[1-(3-氟苯基)-1H-[1，2，4][1，2，4]三唑-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)266-268℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.45(1H，s)，8.66(1H，s)，8.31(1H，d，J＝7.8Hz)，8.02(1H，d，J＝7.6Hz)，7.89-7.80(2H，m)，7.66-7.58(2H，m)，7.28(1H，t，J＝8.3Hz).MS(ES+)m/e 285(20)，284(100)。
化合物303-[1-(2-溴苯基)-1H-[1，2，4][1，2，4]三唑-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)245-247℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.04(1H，s)，8.62(1H，d，J-1.2Hz)，8.27(1H，dd，J＝7.8，1.2Hz)，8.00(1H，dd，J-7.8，1.3Hz)，7.90(1H，dt，J＝8.0，2.2Hz)，7.74-7.49(4H，m).MS(ES+)m/e 2＞A1(20)，346(100)，345(20)，344(100)。
化合物314-[3-(3-羧基苯基)-[1，2，4]三唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)＞300℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.53(1H，s)，8.67(1H，s)，8.32(1H，d，J＝7.6Hz)，8.10(4H，s)，8.02(1H5d，J＝7.6Hz)，7.65(1H，t，J＝7.6Hz).MS(ES+)m/e 311(20)，310(100)。
化合物353-[1-(3-溴苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)253-255℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ9.48(1H，s)，8.67(1H，s)，8.33(1H，d，J＝7.8Hz)，8.22(1H，s)，8.05-7.97(2H，m)，7.68-7.62(2H，m)，7.54(1H，t，J＝7.8Hz).MS(ES+)m/e 347(20)，346(100)，345(20)，344(100)。MS(ES-)m/e 345(15)，344(95)，343(15)，342(100)。
化合物363-(1-吡啶-2-基-1H-[1，2，4]三唑-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)241-244℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.47(1H，s)，8.68(1H，s)，8.56(1H，br)，8.34(1H，d，J＝7.3Hz)，8.10-7.98(3H，m)，7.66(1H，t5J＝7.3Hz)，7.50(1H，br)。MS(ES+)m/e 268(25)，267(100)。MS(ES-)m/e 266(20)，265(100)。
化合物373-(1-苯基-1H-[1，2，4]三唑-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)257-259℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.41(1H，s)，8.68(1H，s)，8.33(1H，d，J＝7.6Hz)，8.03(1H，d，J＝7.6Hz)，8.01-7.93(2H，m)，7.68-7.55(3H，m)，7.44(1H，t，J＝7.1Hz).MS(ES+)m/e 267(25)，266(100)。MS(ES-)m/e 265(20)，264(100)。
化合物383-[1-(3-氯-4-甲基-基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)269-272℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ9.43(1H，s)，8.66(1H，s)，8.32(1H5d，J＝6.8Hz)，8.06(1H，s)，8.02(1H，d，J＝7.5Hz)，7.85(1H，t，J＝7.6Hz)，7.65(1H，t，J＝7.5Hz)，7.57(1H，d，J＝8.5Hz)，2.39(3H，s).MS(ES+)m/e314(100)。MS(ES-)m/e 312(100)。
化合物393-(1-m-甲苯基-1H-[1，2，4]三唑-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)223-225℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.37(1H，s)，8.66(1H，s)，8.31(1H，d，J＝7.5Hz)，8.01(1H，d，J＝7.5Hz)，7.78(1H，s)，7.73(1H，d，J＝8.3Hz)，7.64(1H，t，J＝7.5Hz)，7.45(1H，t，J＝7.8Hz)，7.24(1H，d，J＝7.5Hz)，2.41(3H，s).MS(ES+)m/e 281(30)，280(100)。MS(ES-)m/e 279(20)，278(100)。
化合物403-(1-o-甲苯基-1H-[1，2，4]三唑-3-基)苯甲酸熔點(diǎn)209-211℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.98(1H，s)，8.64(1H，s)，8.29(1H，d，J-7.3Hz)，8.01(1H，d，J＝7.3Hz)，7.63(1H，t，J＝7.3Hz)，7.53-7.41(4H，m)，2.27(3H，s).MS(ES+)m/e 280(100)。
化合物454-[1-(3-甲氧基苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)203-205℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.43(1H，s)，8.21(2H，d，J＝8Hz)，8.06，2H，d，J＝8Hz)，7.51-7.47(3H，m)，7.02-6.99(1H，m)，3.85(3H，s).MS(ES+)m/e 297(20)，296(100)。MS(ES-)m/e 295(20)，294(100)。
3-(1-聯(lián)苯-4-基-lH-[1，2，4]三唑-3-基)苯甲酸(化合物24)的制備在帶有攪拌棒的10mL玻璃試管中加入3-[1-(4-溴-苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸甲酯(265mg，0.74mmol)、苯硼酸(90.2mg，0.74mmol)、碳酸鈉(235mg)、四丁基碘化銨(273mg)，palladium acetate(0.8mg)和6mL水。容器密封并放到微波反應(yīng)器的反應(yīng)腔中。在150℃下用60W的功率反應(yīng)，用LC/MS監(jiān)控。確定反應(yīng)完成后，混合物通過塞里塑料過濾，并使用1N HCl酸化，直至介質(zhì)pH小于7。通過過濾收集得到的固體，用THF-己烷重結(jié)晶純化，得到為白色粉末的標(biāo)題產(chǎn)物(200mg，79％)，熔點(diǎn)263-265℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.47(1H，s)，8.69(1H，s)，8.34(1H，d，J＝7.5Hz)，8.05-7.39(HH，m).MS(ES+)m/e 343(30)，342(100)。
使用上述過程制備以下實(shí)施例，如果需要可以稍微改動。
化合物263-[1-(4-苯并呋喃-2-基-苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)293-295℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.50(1H，s)，8.69(1H，s)，8.34(1H，d，J＝7.8Hz)，8.14-7.99(4H，m)，7.66(2H，t，J＝7.8Hz)，7.56(1H，s)，7.36-7.24(4H，m).MS(ES+)m/e 383(25)，382(100)。
化合物273-[1-(4-甲氧基聯(lián)苯-4-基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)243-246℃。1U NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.44(1H，s)，8.68(1H，s)，8.29(1H，d，J＝7.5Hz)，8.01(1H，d，J＝7.7Hz)，7.99(2H，d，J＝8.8Hz)，7.82(2H，d，J＝8.8Hz)，7.68(2H，d，J＝8.8Hz)，7.61(1H，t，J＝7.7Hz)，7.04(2H，d，J＝8.8Hz)，3.80(3H，s).MS(ES+)m/e 373(30)，372(100)。
化合物283-[1-(4-異丙基聯(lián)苯-4-基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)225-228℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.44(1H，s)，8.69(1H，s)，8.26(1H，d，J＝7.3Hz)，8.01(2H，d，J＝8.0Hz)，8.00(1H，obscurred)，7.84(2H，d，J＝8.5Hz)，7.64(2H，d，J＝8.1Hz)，7.62(1H，t，J＝7.7Hz)，7.34(2H，d，J＝7.8Hz)，2.95(1H，heptet，J＝6.6Hz)，1.22(6H，d，J＝6.6Hz).MS(ES+)m/e 385(25)，384(100)。
化合物323-[1-(4-氟聯(lián)苯-4-基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)272-275℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ9.46(1H，s)，8.68(1H，s)，8.33(1H，d，J＝7.8Hz)，8.05-7.60(9H，m)，7.31(1H，t，J＝8.7Hz).MS(ES+)m/e 361(25)，360(100)。MS(ES-)m/e 359(25)，358(100)。
3-[1-(3-氟苯基)-5-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸(化合物34)的制備3-[亞氨基-2-(3-氟苯基肼基)甲基]苯甲酸甲酯(0.43g，1.50mmol)和原乙酸三乙酯(6.07g，37.4mmol)在乙醇(8mL)中的溶液加熱回流過夜。冷卻后，將溶液倒入水中，通過過濾收集得到的固體。然后對該酯化合物(230mg，0.73mmol)進(jìn)行水解(3mL 1N氫氧化鈉水溶液在3mL THF中，回流3小時(shí))。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)、酸化后，通過過濾收集得到的殘余物，真空干燥，得到固體產(chǎn)物(153mg，70％)，熔點(diǎn)236-238℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.61(1H，s)，8.24(1H，d，J＝7.6Hz)，7.99(1H，d，J＝7.6Hz)，7.68-7.53(4H，m)，7.39(1H，t，J-7.6Hz)，2.57(3H，s).
下列化合物可以通過該方法制備。
化合物333-[1-(4-溴苯基)-5-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)295-298℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.60(1H，s)，8.24(1H，d，J＝7Hz)，7.98(1H，d，J＝7Hz)，7.78(2H，d，J＝8Hz)，7.66(2H，d，J＝8Hz)，7.64(1H，t，J＝7Hz)，2.55(3H，s).MS(ES+)m/e 361(15)，360(100)，359(15)，358(100)。MS(ES-)m/e 359(15)，358(100)，357(15)，356(95).
3-(5-氧-1-o-甲苯基-4，5-二氫-1H-[1，2，4]三唑-3-基)-苯甲酸(化合物41)的制備A部分.3-[亞氨基-2-(2-甲基苯基肼基)甲基]苯甲酸甲酯(1.13g，36.4mmol)在甲苯(8mL)中溶液用N，N′-羰基二咪唑(0.61g，37.6mmol)。在攪拌和用TLC監(jiān)控的條件下，溶液加熱回流14小時(shí)。冷卻后，反應(yīng)混合物倒入水中(50mL)，用乙酸乙酯(2×50mL)提取。提取物合并，用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)。殘留的固體懸浮在二乙醚中，通過過濾收集，真空干燥，得到白色粉末3-(5-氧-1-o-甲苯基-4，5-二氫-1H-[1，2，4]三唑-3-基)苯甲酸甲酯(92.0mg)。
B部分.3-(5-氧-1-o-甲苯基-4，5-二氫-1H-[1，2，4]三唑-3-基)苯甲酸甲酯(92mg，0.30mmol)和碘化鋰(478mg，3.57mmol)在吡啶(3mL)中的溶液加熱回流12小時(shí)。冷卻的反應(yīng)混合物倒入水中，并通過添加1N HCl進(jìn)行酸化。通過過濾收集得到的固體，用水和醚洗滌，真空干燥，得到為白色粉末的標(biāo)題產(chǎn)物(72.8mg，83％)，熔點(diǎn)＞310℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.80(1H，br)，8.44(1H，s)，8.29(1H，t，J＝7.7Hz)，8.15-8.05(2H，m)，7.85-7.75(1H，m)，7.64(1H，t，J＝7.8Hz)，7.42-7.30(3H，m)，2.25(3H，s).MS(ES+)m/e 297(20)，296(100)。MS(ES-)m/e 295(29)，294(100)。
上述方法可以用于制備下列化合物。
化合物423-[1-(3-氟苯基)-5-氧-4，5-二氫-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)＞310℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ8.68(1H，s)，8.03(2H，d，J＝7.5Hz)，7.86(2H，d，J＝7.3Hz)，7.56-7.46(2H，m)，7.04(1H，t，J＝8.0Hz).MS(ES+)m/e 301(15)，300(100)。MS(ES-)m/e 299(15)，298(100)。
3-{l-[4-(2-氧吡啶-1-基)-苯基]-1H-[1，2，4]三唑-3-基}-苯甲酸(化合物43)的制備A部分.含有3-[1-(4-溴苯-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸甲酯(407mg，1.14mmol)、銅(I)碘化物(10.8mg，0.057mmol)、吡啶-2-酮(121mg，1.42mmol)和碳酸鉀(138mg，2.28mmol)的50毫升培養(yǎng)試管抽真空，然后充入氮?dú)?。加入N-N′-二甲基乙二胺(10mg，0.12mmol)和甲苯(5mL)，試管用PTFE蓋密封，反應(yīng)混合物在110℃下加熱攪拌12小時(shí)。冷卻的反應(yīng)混合物分割在水和乙酸乙酯之間，有機(jī)提取物用水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)。殘留物質(zhì)用柱色譜法(硅凝膠，1∶20甲醇-二氯甲烷)分離，得到棕褐色固體3-{1-[4-(2-氧吡啶-1-基)-苯基]-1H-[1，2，4]三唑-3-基}-苯甲酸甲酯(380mg，92％)。
B部分.3-{1-[4-(2-氧吡啶-1-基)-苯基]-1H-[1，2，4]三唑-3-基}-苯甲酸甲酯(101.6mg，0.28mmol)和碘化鋰(451mg，3.37mmol)在吡啶(3mL)中的溶液在干燥的氮?dú)鈿夥障录訜峄亓?小時(shí)，然后冷卻并倒入1N HCl水溶液中。通過過濾收集得到的固體，用水和醚洗滌，真空干燥，得到為棕褐色固體的標(biāo)題產(chǎn)物(75.3mg，77％)，熔點(diǎn)270-273℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.36(1H，s)，8.66(1H，s)，8.31(1H，d，J＝7.6Hz)，8.02(1H，d，J＝7.1Hz)，7.93(2H，d，J＝8.5Hz)，7.86(2H，d，J＝8.5Hz)，7.64(1H，t，J-7.8Hz)，3.88(2H，m)，2.53(2H，m)，2.08(2H，m).MS(ES+)m/e350(30)，349(100)。MS(ES-)m/e 348(25)，347(100)。
下列化合物可以使用上述過程的微小改動而制備。
化合物443-{1-[4-(2-氧-吖啶-1-基)-苯基]-1H-[1，2，4]三唑-3-基}苯甲酸熔點(diǎn)295-297℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.33(1H，s)，8.65(1H，s)，8.31(1H，d，J＝7.8Hz)，8.01(1H，d，J＝6.8Hz)，7.93(2H，d，J＝8.0Hz)，7.64(1H，t，J＝7.3Hz)，7.51(2H，d，J＝8.0Hz)，3.68(2H，br)，3.11(2H，br)。MS(ES+)m/e 336(30)，335(100)。MS(ES-)m/e 334(20)，333(100)。
3-[1-(4-吡啶-l-基苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸(化合物45)的制備A部分.3-{1-[4-(2-氧吡啶-1-基)-苯基]-1H-[1，2，4]三唑-3-基}-苯甲酸甲酯(278mg，0.77mmol)在THF(5mL)中的溶液用硼烷-四氫呋喃絡(luò)合物(3.85mmol)在室溫下處理。得到的溶液攪拌16小時(shí)，通過添加6N HCl水溶液淬滅。攪拌30分鐘后，通過添加1N氫氧化鈉水溶液將混合物變?yōu)閴A性?；旌衔锊糠终舭l(fā)，直到形成沉淀，通過過濾收集沉淀，用水洗滌，真空干燥，得到226mg(84％)3-[1-(4-吡啶-1-基-苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸甲酯。
B部分.使用上述的碘化鋰-吡啶酯裂解法，將3-[1-(4-吡啶-1-基-苯基)-1H-[1，2，4]三唑-3-基]苯甲酸甲酯轉(zhuǎn)化成標(biāo)題化合物，熔點(diǎn)263-265℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.14(1H，s)，8.64(1H，s)，8.28(1H，d，J＝7.3Hz)，7.98(1H，d，J＝6.9Hz)，7.68-7.59(3H，m)，6.64(2H，d，J＝8.5Hz)，3.26(4H，s)，1.96(4H，s).MS(ES+)m/e 336(40)，335(100)。MS(ES-)m/e 334(30)，333(100)。
3-(5H-4-氧-13，9b-三氮-環(huán)戊[a]萘-2-基)苯甲酸(化合物46)的制備A部分.將3-(5-氧-1-o-甲苯基-4，5-二氫-1H-[1，2，4]三唑-3-基)苯甲酸甲酯(0.58g，1.88mmol)、N-溴琥珀酰亞胺(368mg，2.07mmol)和氮雜異丁腈(5mg)在2∶1 CCl4/CHCl3(23mL)中的懸浮體加熱回流3天。冷卻后，溶液分割在水和乙酸乙酯之間，有機(jī)提取物用水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)。殘余物質(zhì)(0.62g)放在四氫呋喃(6mL)中，用氫化鈉處理(7mg 60％重量/重量的礦物油懸浮體，0.29mmol)。得到的混合物加熱回流6小時(shí)，冷卻，蒸發(fā)。殘余物質(zhì)用柱色譜法(5∶95乙酸乙酯-己烷)分離，得到環(huán)化的化合物(66mg)。
B部分.將上述A部分的酯化合物(66mg)在1∶1四氫呋喃水溶液(6mL)中的溶液用氫氧化鋰(7.7mg)處理，得到的混合物加熱回流1小時(shí)。溶液冷卻并倒入1N HCI中。得到的固體通過過濾來收集并用柱色譜法分離，得到標(biāo)題產(chǎn)物(2.2mg)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.50(1H，s)，8.00(1H，d，J＝7.8Hz)，7.80(1H，d，J＝7.5Hz)，7.43(1H，d，J＝7.8Hz)，7.28-7.21(2H，m)，7.03-6.99(2H，m)，5.31(2H，s).MS(ES+)m/e 295(30)，294(100)。MS(ES-)m/e 293(20)，292(100)。
H.1，2，3-三唑本發(fā)明的三唑如下制備。
4-[4-(3-甲氧基苯基)-[1，2，3]三唑-1-基]苯甲酸(化合物204)的制備向1-乙炔基-3-甲氧基苯(396mg，3.00mmol，Aldrich)在50％叔丁醇/水(4.0mL)中的溶液中，加入300μL(0.30mmol)抗壞血酸鈉水溶液(594mg在3mL水中)、100μL(0.030mmol)CuSO4.5H2O水溶液(75mg在1mL水中)，接著加入4-疊氮苯甲酸(489mg，3mmol)。得到的混合物攪拌7天，得到的懸浮體過濾，用水(3×30mL)、乙醚(2×15mL)和己烷(3×30mL)洗滌。固體真空干燥(70℃，10torr)，得到880mg(99％)為淺黃色粉末的4-[4-(3-甲氧基-苯基)-[1，2，3]三唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)276-277℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.44(s，1H)，8.16(d，J＝8.5Hz，2H)，8.08(d，J＝8.3Hz，2H)，7.52(m，2H)，7.40(t，J＝7.8Hz，1H)，6.95(ddd，J＝8.3，2.5，0.8Hz，1H)，3.82(s，3H).MS m/z 296.29，計(jì)算C16Hj3N3O3(M+H+)296.
該方法可以用于合成下列化合物。
化合物201
4-(4-p-甲苯基-[1，2，3]三唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)302-303℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.40(s，1H)，8.15(d，J＝8.5Hz，2H)，8.08(d，J＝8.5Hz，2H)，7.82(d，J＝8.0Hz，2H)，7.30(d，J＝8.0Hz，2H)，2.33(s，3H).MS(ES+)m/e 280.36(100)。
化合物2024-[4-(4-三氟甲基-苯基)-[1，2，3]三唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)305-306℃。1H NMR(300MHz，DMSOd6)δ9.60(s，1H)，8.14(m，6H)，7.87(m，2H).MS(ES+)m/e 334.30(100)。
化合物2034-[4-(4-甲氧基-苯基)-[1，2，3]三唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)294-295℃。1HNMR(300MHz，DMSOd6)δ9.30(s，1H)，8.11(m，4H)，7.86(d，J＝8.5Hz，2H)，7.05(d，J＝8.3Hz，2H)，3.79(s，3H).MS(ES+)m/e 296.35(100)。
化合物2644-[4-(2-氟-苯基)-[1，2，3]三唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)292-294℃。1H NMR(DMSOd6)δ9.17(1H，s)，8.15(5H，m)，7.90(3H，m).MS(ES+)m/e284.20(100)。
化合物2654-[4-(3-氟-苯基)-[1，2，3]三唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)327-328℃。1H NMR(DMSOd6)δ9.49(1H，s)，8.16(2H，d，J＝8.5Hz)，8.07(2H，d，J＝8.5Hz)，7.76(2H，m)，7.54(1H，m)，7.22(1H，tm，J＝7.6Hz).MS(ES+)m/e 284.22(100)。
化合物2664-[4-(4-氟-苯基)-[1，2，3]三唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)321-323℃。1H NMR(DMSO-de)δ9.41(1H，s)，8.16(2H，d，J＝8.5Hz)，8.07(2H，d，J＝8.5Hz)，7.97(2H，m)，7.34(2H，t，J＝8.8Hz).MS(ES+)m/e 284.26(100)。
化合物2674-[4-(4-溴-2-氟-苯基)-[1，2，3]三唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)327-328℃。1HNMR(DMSO-d6)δ9.21(1H，s)，8.14(5H，m)，7.76(1H，dm，J＝9.9Hz)，7.57(1H，dm，J＝7.4Hz).MS(ES+)m/e 366(100)，364.15(100)。
化合物2684-[4-(2，4-二氟-苯基)-[1，2，3]三唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)312-313℃。1HNMR(DMSOd6)δ9.17(1H，s)，8.14(5H，m)，7.97(2H，tm，J＝9.5Hz)，7.25(1H，m).MS(ES+)m/e 302.19(100)。
化合物2694-[4-(4-氯-苯基)-[1，2，3]三唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)313-314℃。1H NMR(DMSOd6)δ9.46(1H，s)，8.16(2H，d，J＝8.4Hz)，8.07(2H，d，J-8.4Hz)，7.95(2H，d，J＝8.4Hz)，7.56(2H，d，J＝8.4Hz).MS(ES+)m/e 300.29(100)。
化合物2704-[4-(2-溴-苯基)-[1，2，3]三唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)261-262℃。1H NMR(DMSO-d6)δ9.32(1H，s)，8.14(4H，m)，7.90(1H，d，J＝6.6Hz)，7.78(1H，d，J＝7.7Hz)，7.52(1H，t，J＝7.5Hz)，7.37(1H，t，J＝7.7Hz).MS(ES+)m/e 346.11(100)，348(100)。
化合物2714-(4-萘-1-基-[1，2，3]三唑-1-基)苯甲酸熔點(diǎn)265-266℃。1H NMR(DMSOd6)δ9.38(1H，s)，8.53(1H，m)，8.18(4H，m)，8.00(2H，m)，7.86(1H，m)，7.59(3H，m).MS(ES+)m/e 316.23(100)。
化合物2724-[4-(3，4-二甲氧基-苯基)-[1，2，3]三唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)253-254℃。1H NMR(DMSO-d6)δ9.33(1H，s)，8.15(1H，d，J＝8.0Hz)，8.07(1H5d，J＝8.0Hz)，7.48(2H，m)，7.06(1H，d，J＝8.3Hz)，3.83(3H5s)，3.78(3H，s).MS(ES+)m/e 326.23(100)。
化合物2734-[4-(4-乙氧基-苯基)-[1，2，3]三唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)310-311℃。MS(ES+)m/e 310(100)。
化合物2744-[4-(4-甲氧基-2-甲基-苯基)-[1，2，3]三唑-1-基]苯甲酸熔點(diǎn)244-245℃。1H NMR(DMSOd6)δ9.04(1H5s)，8.16(4H5m)，7.71(2H5d，J＝8.0Hz)56.89(2H5m)，3.77(3H，s)，2.48(3H，s).MS(ES+)m/e 310.26(100)。
化合物2754-[4-(4-異丙基-苯基)-[1，2，3]三唑-1-基]-苯甲酸熔點(diǎn)311-312℃。1HNMR(DMSO-d6)δ9.36(1H，s)，8.15(2H，d，J＝8.5Hz)，8.09(2H，d，J＝8.5Hz)，7.85(2H，d，J＝8.0Hz)，7.36(2H，d，J＝8.2Hz)，2.91(1H，heptet，J＝6.9Hz)，1.21(6H，d，J＝6.9Hz).MS(ES+)m/e 308.26(100)。
I.噁二唑酮(Oxadiazolone)的制備本發(fā)明的噁二唑酮可以如下制備。
4-[5-(3-氰基苯基)-2-氧-1，3，4-噁二唑-3(2H)-基]苯甲酸(化合物280)的制備A部分.在0℃，往3-氰基苯甲酸(0.62g，4.2mmol)在二氯甲烷(15mL)中的懸浮體中逐滴加入THF，直到體系變得均一，然后加入1-羥基苯并三唑(0.57g，4.2mmol)和二環(huán)己基碳二亞胺(0.87g，4.2mmol)?；旌衔锞徛潦覝夭嚢璋胄r(shí)。往混合物中添加4-肼基苯甲酸甲酯(0.63g，3.8mmol)，將混合物攪拌2小時(shí)。通過過濾移去沉淀并用二氯甲烷洗滌。濾出液用水和鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥，之后棄去硫酸鈉。除去溶劑而得到的粗制產(chǎn)物用柱色譜法(硅凝膠，1∶19乙酸乙酯-二氯甲烷)分離，得到中間體4-[2-(3-氰基苯甲酰)肼基]苯甲酸甲酯(0.68g，61％)。MS(ES+)m/z296.
B部分.4-[2-(3-氰基苯甲酰)肼基]苯甲酸甲酯(0.59g，2.0mmol)和羰基二咪唑(0.49g，3.0mmol)在80℃下在二氯甲烷(20mL)中攪拌過夜，然后直接對混合物進(jìn)行色譜處理(硅凝膠，1∶9乙酸乙酯-二氯甲烷)，得到4-[5-(3-氰基苯基)-2-氧-1，3，4-噁二唑-3(2H)-基]苯甲酸甲酯(0.63g，98％)。MS(ES+)m/z322.
C部分.4-[5-(3-氰基苯基)-2-氧-1，3，4-噁二唑-3(2H)-基]苯甲酸甲酯(0.60g，1.87mmol)然后用三溴化硼(1M在二氯甲烷中，5.6mL，5.6mmol)在二氯甲烷中(20mL)在室溫下處理過夜。真空除去揮發(fā)性成分，殘留物用水處理。粗制產(chǎn)物用柱色譜法(硅凝膠，1∶9甲醇-二氯甲烷)，以得到想要的產(chǎn)物4-[5-(3-氰基苯基)-2-氧-1，3，4-噁二唑-3(2H)-基]苯甲酸(0.46g，81％)。熔點(diǎn)294-295℃(decomp.).1H NMR(CDCl3，300MHz)δ(ppm)7.47(t，1H)，7.77(d，2H)，7.88-8.00(m，4H).(ES+)m/z307.
下列化合物可以用與上述類似的方式制備。對于硫代-1，3，4-oxadizolone類似物，可以使用硫代羰基二咪唑代替羰基二咪唑。化合物276還可以用4-甲氧基羰基苯甲酸和4-異丙基苯基肼作為原料類似地制得。
化合物2764-[4-(4-異丙基-苯基)-5-氧-4，5-二氫-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸熔點(diǎn)263-267℃。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.15(d，2H)，2.80-2.88(m，1H)，7.20(d，2H)，7.69(d，2H)，7.87(d，2H)，8.05(d，2H).MS(ES-)m/e323.
化合物2774-[5-(4-異丙基-苯基)-2-氧-[1，3，4]噁二唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)252-254℃。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.19(d，2H)，2.82-2.96(m，1H)，7.25(d，2H)，7.76(d，2H)，7.93(d，2H)，8.04(d，2H).MS(ES-)m/e 323.
化合物2793-[5-(4-異丙基-苯基)-2-氧-[1，3，4]噁二唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)218-220℃(分解).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.31(d，2H)，2.93-3.08(m，1H)，7.37(d，2H)，7.60(t，1H)，7.89(d，2H)，8.00-8.05(m，1H)，8.27-8.31(m，1H)，8.66(t，1H).MS(ES-)m/e 323.
化合物2833-[5-(4-異丙基-苯基)-2-硫代氧-[1，3，4]噁二唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)215-217℃。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.31(d，2H)，2.95-3.05(m，1H)，7.40(d，2H)，7.66(t，1H)，7.97(d，2H)，8.14-8.19(m，1H)，8.55-8.60(m，1H)，8.90(t，1H).MS(ES-)m/e 339.
化合物2854-[5-(4-異丙基-苯基)-2-硫代氧-[1，3，4]噁二唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)239-240℃。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.30(d，2H)，2.96-3.05(m，1H)，7.41(d，2H)，7.96(d，2H)，8.28(d，2H)，8.46(d，2H).MS(ES-)m/e 339.
4-[5-(4-異丙基苯基)-2-氧-1，3，4-噻重氮-3(2H)-基]苯甲酸(化合物281)的制備A部分.往4-[2-(4-異丙基苯基)肼基]苯甲酸甲酯(0.94g，3.0mmol)的甲苯(25mL)溶液中加入勞氏試劑(1.82g，4.5mmol)，其中4-[2-(4-異丙基苯基)肼基]苯甲酸甲酯是使用上述的交叉耦合技術(shù)由4-甲氧基羰基苯基肼和4-苯甲酸異丙酯制得。混合物在120℃下攪拌10小時(shí)，冷卻至室溫。除去沉淀，將濾出液濃縮，色譜處理(硅凝膠，1∶9乙酸乙酯-己烷)，得到中間體化合物，MS(ES+)m/e 496.該中間體然后用NaOH(1.25N，2.63mL，3.3mmol)在THF(20mL)中在65℃下處理1小時(shí)。然后溶劑替換為醚(50mL)，混合物用水洗滌，干燥，色譜處理，得到硫代酰肼，4-{2-[(4-異丙基苯基)碳硫基]肼基}苯甲酸甲酯(0.82g，81％).MS(ES+)m/e 329.
B部分.4-{2-[(4-異丙基苯基)碳硫基]肼基}苯甲酸甲酯(0.26g，0.8mmol)和羰基二咪唑(0.19g，1.2mmol)在80℃下在二氯乙烷(20mL)中攪拌過夜，直接對混合物進(jìn)行色譜處理(硅凝膠，4∶1乙酸乙酯-己烷)，得到4-[5-(4-異丙基苯基)-2-氧-1，3，4-噻重氮-3(2H)-基]苯甲酸甲酯(0.21g，75％)。MS(ES+)m/e 355.
C部分.4-[5-(4-異丙基苯基)-2-氧-1，3，4-噻重氮-3(2H)-基]苯甲酸甲酯(0.20g，0.56mmol)然后在二氯甲烷(10mL)中在室溫下用三溴化硼(1M在二氯甲烷中，1.7mL，1.7mmol)處理過夜。真空除去揮發(fā)性成分，殘留物用水處理。收集沉淀并用水徹底洗滌，得到想要的產(chǎn)物，4-[5-(4-異丙基苯基)-2-氧-1，3，4-噻重氮-3(2H)-基]苯甲酸(0.19g，100％)，熔點(diǎn)205-208℃。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ(ppm)1.30(d，6H)2.92-3.06(m，1H)，7.35(d，2H)，7.70(d，2H)，8.11-8.23(m，4H).(ES+)m/z341.
下列化合物可以用與上述類似的方式制備。對于硫-1，3，4-噻二唑酮(thiadiazolone)類似物，可以使用硫代羰基二咪唑代替羰基二咪唑。
化合物282
4-[5-(4-異丙基-苯基-2-硫代氧-[1，3，4]噻二唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)176-179℃。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.19(d，2H)，2.83-2.92(m，1H)，7.24(d，2H)，7.55(d，2H)，7.87(d，2H)，8.01(d，2H)，12.35(s，1H).MS(ES-)m/e 355.
化合物2843-[5-(4-異丙基-苯基)-2-氧-[1，3，4]噻二唑-3-基]苯甲酸熔點(diǎn)220-221℃。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.29(d，2H)，2.93-3.03(m，1H)，7.34(d，2H)，7.59(t，1H)，7.71(d，2H)，8.05-8.08(m，1H)，8.21-8.25(m，1H)，8.63(t，1H).MS(ES-)m/e 3394-{[5-(4-異丙基苯基)-2-氧-1，3，4-噁二唑-3(2H)-基]甲基}苯甲酸(化合物278)的制備A部分.在0℃，往4-異丙基苯甲酸(3.28g，20.0mmol)、三乙胺(2.12g，2.93niL，21.0mmol)在二氯甲烷/THF(15mL/5mL)中的溶液中加入氯甲酸異丁酯(2.87g，2.72mL，21.0mmol)。混合物在0℃下攪拌20分鐘，在2小時(shí)內(nèi)升至室溫，然后用肼基乙酸乙酯(2.18g，21.0mmol)處理，并攪拌過夜。然后混合物用水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥。去除溶劑后得到的粗制產(chǎn)物進(jìn)行色譜處理(硅凝膠，5∶1二氯甲烷-乙酸乙酯)，得到[2-(4-異丙基苯甲酰)肼基]乙酸乙酯(4.85g，97％).MS(ES+)m/e 251.
B部分.[2-(4-異丙基苯甲酰)肼基]乙酸乙酯(4.85g，19.4mmol)用氯氧化磷(50mL)處理，加熱回流3小時(shí)，然后倒在冰上。收集沉淀，用水徹底洗滌，在空氣中干燥得到5-(4-異丙基苯基)-1，3，4-噁二唑-2(3H)-酮(2.30g，58％)MS(ES+)m/e 205.
C部分.5-(4-異丙基苯基)-1，3，4-噁二唑-2(3H)-酮(0.41g，2.0mmol)溶入二氯甲烷中(5mL)，用4-溴甲基苯甲酸甲酯(0.50g，2.2mmol)在氫氧化鈉(1.25N，1.76mL，2.2mmol)和四正丁基溴化銨(0.07g，0.022mmol)在室溫下劇烈攪拌過夜。真空除去溶劑，殘余物用水洗滌。通過過濾收集沉淀，用己烷徹底洗滌，在空氣中干燥，得到4-{[5-(4-異丙基苯基)-2-氧-1，3，4-噁二唑-3(2H)-基]甲基}苯甲酸甲酯(0.65g，93％)。(ES+)m/e 353.
D部分.4-{[5-(4-異丙基苯基)-2-氧-1，3，4-噁二唑-3(2H)-基]甲基}苯甲酸甲酯(50mg，0.14mmol)用碘化鋰(0.19g，1.4mmol)在吡啶中(5mL)回流48小時(shí)，冷卻至室溫后用水(30mL)稀釋混合物。通過過濾收集沉淀，用二氯甲烷徹底洗滌，在空氣中干燥，得到想要的產(chǎn)物4-{[5-(4-異丙基苯基)-[2-氧-1，3，4-噁二唑-3(2H)-基]甲基}苯甲酸(31mg，66％)，熔點(diǎn)217-219℃。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ(ppm)1.13(d，6H)2.70-2.90(m，1H)，4.86(s，2H)，7.17(d，2H)，7.30(d，2H)，7.59(d，2H)，7.89(d，2H).MS(ES+)m/e 339.
3-[4-(2，4-二氟-苯基)-5-氧-4，5-二氫-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸(化合物286)的制備A部分.異酞酸單芐酯(根據(jù)J.Med.Chem.2001，44，1491-1508公開的方法制得)(1.72g，6.71mmol在二乙醚(30mL)中的懸浮體用吡啶(550μL，6.80mmol)處理，然后氰尿酰氟(1當(dāng)量)在乙醚(10mL)中的溶液通過套管在15分鐘內(nèi)逐滴加入。形成粘性沉淀，通過蒸發(fā)掉部分醚并添加二氯甲烷(50毫升)而使得到的混合物均一。3小時(shí)后，溶液用二氯甲烷稀釋并倒在冰上。有機(jī)層用鹽水洗滌。水層用二氯甲烷提取，有機(jī)提取物合并，用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，得到芐基間苯二甲酰氟(1.68g，97％)，直接用于下個(gè)步驟。
B部分.含有2，4-二氟苯基肼(41.5mg，0.29mmol)、聚苯乙烯-NMM樹脂(0.303g，2當(dāng)量)和無水二甲基甲酰胺(5mL)的16×100mm螺旋蓋試管用芐基間苯二甲酰氟(0.289mmol)在二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液處理。將試管密封，在室溫下混合5.5天。試管的內(nèi)容物過濾到另一試管中，樹脂用額外的二甲基甲酰胺洗滌。溶液加熱至80℃用部分羰基二咪唑(各100mg)處理，直到LC/MS分析表明原料完全消耗掉。試管冷卻并蒸發(fā)掉溶劑。殘余物質(zhì)通過硅凝膠短柱用梯度10∶90至40∶60乙酸乙酯-氯仿洗脫，收集含有產(chǎn)物的部分并蒸發(fā)，3-[4-(2，4-二氟-苯基)-5-氧-4，5-二氫-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸苯甲酯。
C部分.B部分的3-[4-(2，4-二氟-苯基)-5-氧-4，5-二氫-[1，3，4]噁二唑-2-基]苯甲酸苯甲酯用45％溴化氫溶液處理。1小時(shí)后，加入醚(5mL)，得到的溶液再攪拌1小時(shí)。蒸發(fā)掉溶劑，殘余物質(zhì)的LC/MS分析表明存在未轉(zhuǎn)化的原料。殘余物放在氯仿中(10mL)，冷卻至0℃，用三溴化硼溶液(1mL，1.0M)處理。攪拌17小時(shí)后，溶液蒸發(fā)，殘余物懸浮在10mL冷水中?；旌衔镞M(jìn)行聲波處理，得到均一的懸浮體，過濾。得到的溶液用HPLC分離，得到純的標(biāo)題產(chǎn)物。MS(ES+)m/e 320(20)，319.13(100)。
總之，本發(fā)明的特定優(yōu)選化合物可以按照與上述類似的方式制得。
表1














實(shí)施例2無義抑制活性以熒光素酶介導(dǎo)的化學(xué)發(fā)光為基礎(chǔ)的基于細(xì)胞翻譯的功能性測定(于2003年7月23日提交的國際申請PCT/US2003/023185一并引入作為參考)可以評價(jià)mRNA中正常終止密碼子的翻譯通讀。在含有胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)人胚腎細(xì)胞(293細(xì)胞)。這些細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染有在氨基酸190位點(diǎn)含有提前終止密碼子的熒光素酶基因，代替熒光素酶基因在該位點(diǎn)正常存在的蘇氨酸密碼子(ACA)。通過定點(diǎn)誘變引入3個(gè)可能的無義密碼子(TAA、TAG或TGA)之一，以及緊接在所述無義密碼子之后的重要下游+1位點(diǎn)的4個(gè)可能的核苷酸(腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶或鳥嘌呤)之一。照此，熒光素酶基因中的氨基酸190含有的提前終止密碼子為TAA、TAG或TGA。對于每一個(gè)終止密碼子，在含有的提前終止密碼子的熒光素酶基因中的氨基酸190之后的核苷酸被腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶或鳥嘌呤(A、T、C、G)之一取代，這樣所述誘變不會改變熒光酶基因的閱讀框。在圖1中展示了這些構(gòu)建體的示意圖。
如上所述，來自本發(fā)明的基于細(xì)胞的熒光素酶報(bào)告子測定的無義抑制活性如下(表2)所示。人胚腎293細(xì)胞與含有UGA無義突變密碼子的熒光素酶報(bào)告子構(gòu)建體在190位點(diǎn)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，其接著符合閱讀框的腺苷酸(UGAA)。
在含有UGA提前終止密碼子的本發(fā)明構(gòu)建體的基于細(xì)胞的熒光素酶報(bào)告子分析中，測定表2中活性測量結(jié)果，所述UGA提前終止密碼子接著符合閱讀框的腺苷酸(UGAA)。
已知氨基糖甙抗生素慶大霉素允許提前終止密碼子的通讀，用作內(nèi)標(biāo)?；钚詼y量基于所需在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生給定蛋白的化合物最小濃度與在該濃度下細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白的量的定性比。發(fā)現(xiàn)具有非常高效能和非常高蛋白質(zhì)合成效率任一或兩者的化合物分類為“*****”。發(fā)現(xiàn)具有中等的效能和/或蛋白質(zhì)合成效率的化合物分類為“****”、“***”或“**”。類似地，發(fā)現(xiàn)具有較低的效能和/或蛋白質(zhì)合成效率的化合物分類為“*”。
表2
















在上述分析中的無義抑制活性示于下文表3中，用于構(gòu)建190位點(diǎn)的UGA無義突變，繼之以胞嘧啶核苷酸閱讀框(UGAC)；用于構(gòu)建190位點(diǎn)的UAG無義突變，繼之以腺嘌呤核苷酸閱讀框(UAGC)；用于構(gòu)建190位點(diǎn)的UAA無義突變，繼之以腺嘌呤核苷酸閱讀框(UAAC)；以及用于構(gòu)建190位點(diǎn)的UAA無義突變，繼之以胞嘧啶核苷酸閱讀框(UAAC)。還包括在表3中的是一列(“蛋白質(zhì)印跡”)，指示是否用指示的化合物處理的細(xì)胞抑制在熒光素酶中的特定的密碼子區(qū)(UGAA、UGAC、UAAA和UAAC)的無義突變并導(dǎo)致作為蛋白質(zhì)印跡的正信號所確定的熒光素酶蛋白的產(chǎn)生。蛋白質(zhì)印跡分析中的正結(jié)果由“+”和被抑制的無義密碼子和密碼子區(qū)指示。
表3



實(shí)施例3通讀測定以熒光素酶介導(dǎo)的化學(xué)發(fā)光為基礎(chǔ)的基于細(xì)胞翻譯的功能性測定(于2003年7月23日提交的國際申請PCT/US2003/023185一并引入作為參考)可以評價(jià)mRNA中正常終止密碼子的翻譯通讀。在含有胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)人胚腎細(xì)胞(293細(xì)胞)。這些細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染有在氨基酸190位點(diǎn)含有提前終止密碼子的熒光素酶基因，代替熒光素酶基因在該位點(diǎn)正常存在的蘇氨酸密碼子(ACA)。通過定點(diǎn)誘變引入3個(gè)可能的無義密碼子(TAA、TAG或TGA)之一，以及緊接在所述無義密碼子之后的重要下游+1位點(diǎn)的4個(gè)可能的核苷酸(腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶或鳥嘌呤)之一。照此，熒光素酶基因中的氨基酸190含有的提前終止密碼子為TAA、TAG或TGA。對于每一個(gè)終止密碼子，在含有的提前終止密碼子的熒光素酶基因中的氨基酸190之后的核苷酸被腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶或鳥嘌呤(A、T、C、G)之一取代，這樣所述誘變不會改變熒光酶基因的閱讀框。在圖1中展示了這些構(gòu)建體的示意圖。
本發(fā)明的另一測定可以評估促進(jìn)無義突變抑制的化合物。圖1中展示的熒光素酶構(gòu)建體，在熒光素酶蛋白的氨基端設(shè)計(jì)帶有兩個(gè)抗原表位標(biāo)簽。基于熒光素酶蛋白的產(chǎn)生，所述構(gòu)建體定量地評價(jià)翻譯-通讀的水平。通過免疫沉淀被抑制的熒光素酶蛋白(使用抗His標(biāo)簽的抗體)后，使用抗第二抗原表位(the XpressTMepitope；Invitrogen；Carlsbad，California)抗體進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡(western blotting)來測定通過所述提前終止密碼子的抑制而產(chǎn)生的全長熒光素酶蛋白的存在。所述構(gòu)建體在圖2中展示。
帶有圖2構(gòu)建體的細(xì)胞當(dāng)用本發(fā)明化合物處理時(shí)，顯示出全長蛋白產(chǎn)量增加。在處理20小時(shí)后，收集含有圖2構(gòu)建體的細(xì)胞，并使用識別His抗原表位的抗體免疫沉淀熒光素酶蛋白。免疫沉淀后，使用XpressTM抗原表位的抗體(Invitrogen；Carlsbad，California)進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡以檢測截短的熒光素酶(當(dāng)沒有無義抑制發(fā)生時(shí)產(chǎn)生)，并檢測全長蛋白(由無義密碼子抑制產(chǎn)生)。用被測化合物處理的細(xì)胞產(chǎn)生全長蛋白，并且不產(chǎn)生通讀蛋白。如果正常終止密碼子的抑制發(fā)生時(shí)，產(chǎn)生所述通讀蛋白。本發(fā)明的化合物抑制提前終止密碼子即無義突變，但并不抑制熒光素酶mRNA中的正常終止密碼子。
本發(fā)明的化合物任選地作用于哺乳動物中的提前終止密碼子，而不作用于正常終止密碼子。
通過強(qiáng)飼法(口服)給予大暑和犬高劑量化合物(達(dá)1800毫克/千克)，每天一次，共14天。治療之后，收集組織，制備溶胞產(chǎn)物并進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡。用于評價(jià)正常終止密碼子通讀的蛋白的選擇，主要基于相應(yīng)的在3’非翻譯區(qū)內(nèi)具有第二終止密碼子的mRNA符合正常終止密碼子閱讀框。在該兩個(gè)終止密碼子之間，每一被選蛋白都具有核苷酸插入序列，該序列編碼第一個(gè)終止密碼子的核糖體通讀事件中蛋白的延長。如果所述化合物具有誘導(dǎo)非特異性、核糖體通讀的能力，延長的蛋白得以用蛋白質(zhì)印跡與野生型蛋白區(qū)分開。收集大鼠的組織，并分析波形蛋白mRNA中正常終止密碼子(UAA)的抑制。沒有跡象表明發(fā)生抑制。收集用本發(fā)明化合物治療的犬的組織。沒有證據(jù)表明帶有UAG終止密碼子的β-肌動蛋白的正常終止密碼子受抑制。
在健康人志愿者中，口服給予單次劑量(200毫克/千克)本發(fā)明化合物。收集血液樣本，制備血漿，并用來自女性和男性受試者的血漿樣本進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡。使用帶有UGA終止密碼子的C-反應(yīng)性蛋白(C-reactive protein，CRP)檢測用本發(fā)明化合物治療的受試者是否導(dǎo)致了CRP mRNA中正常終止密碼子的抑制。熒光素酶測定結(jié)合提前終止測定表明了提前終止密碼子而不是正常終止密碼子的選擇性抑制。
實(shí)施例4動物模型動物模型系統(tǒng)還能用于指示本發(fā)明化合物的安全和有效。用感興趣的疾病、狀態(tài)或綜合征的動物模型測試本發(fā)明的化合物生物學(xué)活性。所述動物模型包括設(shè)計(jì)含有靶RNA元件配對功能性讀出系統(tǒng)的動物，例如轉(zhuǎn)基因小鼠。
囊性纖維化病囊性纖維化病的動物模型實(shí)例包括但不限于cftr(-/-)小鼠(參見例如，F(xiàn)reedman等人，2001，Gastroenterology 121(4)950-7)、cftr(tmlHGU/tmlHGU)小鼠(參見例如，Bernhard等人，2001，Exp LungRes 27(4)349-66)、伴隨缺陷環(huán)磷腺苷介導(dǎo)Cl(-)轉(zhuǎn)導(dǎo)(Cl(-)conductance)的囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子缺陷小鼠(參見例如，Stotland等人，2000，Pediatr Pulmonol 30(5)413-24)和C57BL/6-Cftr(mlUNC)/Cftr(mIUNC)敲除小鼠(參見例如，Stotland等人，2000，Pediatr Pulmonol30(5)413-24)。
肌營養(yǎng)不良肌營養(yǎng)不良的動物模型實(shí)例包括但不限于小鼠、倉鼠、貓、犬及線蟲(C.elegans)。肌營養(yǎng)不良的小鼠模型實(shí)例包括但不限于dy-/-(參見例如，Connolly等人，2002，J Neuroimmunol 127(1-2)80-7)、肌營養(yǎng)不良伴隨肌炎(muscular dystrophy with myositis，mdm)小鼠突變(參見例如，Garvey等人，2002，Genomics 79(2)146-9)、mdx小鼠(參見例如，Nakamura等人，2001，Neuromuscul Disord 11(3)251-9)、utrophin-抗肌萎縮蛋白敲除(utrophin-dystrophin knockout，dko)小鼠(參見例如，Nakamura等人，2001，Neuromuscul Disord 11(3)251-9)、dy/dy小鼠(參見例如，Dubowitz等人，2000，Neuromuscul Disord 10(4-5)292-8)、mdx(Cv3)小鼠模型(參見例如，Pillers等人，1999，Laryngoscope 109(8)1310-2)以及肌強(qiáng)直的ADR-MDX突變小鼠(參見例如，Kramer等人，1998，Neuromuscul Disord 8(8)542-50)。肌營養(yǎng)不良的倉鼠模型實(shí)例包括但不限于肌聚糖-缺陷(sarcoglycan-deficient)倉鼠(參見例如，Nakamura等人，2001，Am J Physiol Cell Physiol 281(2)C690-9)和BIO14.6營養(yǎng)不良倉鼠(參見例如，Schlenker & Burbach，1991，JAppl Physiol71(5)1655-62)。肌營養(yǎng)不良的貓模型實(shí)例包括但不限于貓肥大性肌營養(yǎng)不良模型(參見例如，Gaschen & Burgunder，2001，Acta Neuropathol(Berl)101(6)591-600)。肌營養(yǎng)不良的犬模型實(shí)例包括但不限于金毛尋回犬(golden retriever)肌營養(yǎng)不良(參見例如，F(xiàn)letcher等人，2001，Neuromuscul Disord 11(3)239-43)和犬X-lmked肌營養(yǎng)不良(參見例如，Valentine等人，1992，Am J Med Genet 42(3)352-6)。肌營養(yǎng)不良的線蟲模型在Chamberlain&Benian，2000，Curr Biol 10(21)R795-7以及Culette&Sattelle，2000，Hum MoI Genet 9(6)869-77中描述。
家族性高膽固醇血癥家族性高膽固醇血癥的動物模型實(shí)例包括但不限于缺乏功能性低密度脂蛋白受體報(bào)告基因的小鼠(參見例如，Aji等人，1997，Circulation95(2)430-7、Yoshida大鼠(參見例如，F(xiàn)antappie等人，1992，Life Sci50(24)1913-24)、JCRLA-cp大鼠(參見例如，Richardson等人，1998，Atherosclerosis 138(1)135-46)、豬(參見例如，Hasler-Rapacz等人，1998，Am J Med Genet 76(5)379-86)和Watanabe遺傳性高脂血癥兔(參見例如，Tsutsumi等人，2000，Arzneimittelforschung 50(2)118-21；Harsch等人，1998，Br J Pharmacol 124(2)227-82；和Tanaka等人，1995，Atherosclerosis 114(1)73-82)。
人類癌癥人類癌癥動物模型實(shí)例一般包括但不限于伴生動物(companionanimals)的自發(fā)性產(chǎn)生腫瘤(參見例如，Vail&MacEwen，2000，CancerInvest 18(8)781-92)。肺癌的動物模型實(shí)例包括但不限于Zhang和Roth描述的肺癌動物模型(1994，In Vivo 8(5)755-69)以及p53功能中斷的轉(zhuǎn)基因小鼠(參見例如，Morris等人，1998，JLa State Med Soc 150(4)179-85)。乳腺癌的動物模型實(shí)例包括但不限于過度表達(dá)細(xì)胞周期蛋白Dl的轉(zhuǎn)基因小鼠(參見例如，Hosokawa等人，2001，Transgenic Res10(5)471-8)。結(jié)腸癌的動物模型實(shí)例包括但不限于TCRβ和p53雙敲除小鼠(參見例如，Kado等人，2001，Cancer Res 61(6)2395-8)。胰腺癌的動物模型實(shí)例包括但不限于Panc02鼠胰腺癌轉(zhuǎn)移性模型(參見例如，Wang等人，2001，Int J Pancreatol 29(1)37-46)和產(chǎn)生皮下胰腺腫瘤的裸小鼠(參見例如，Ghaneh等人，2001，Gene Ther 8(3)199-208)。非何杰金氏淋巴瘤(non-Hodgkin′s lymphoma)的動物模型實(shí)例包括但不限于重度聯(lián)合免疫缺陷癥(severe combined immunodeficiency，″SCID″)小鼠(參見例如，Bryant等人，2000，Lab Invest 80(4)553-73)以及IgHmu-HOX11轉(zhuǎn)基因小鼠(參見例如，Hough等人，1998，Proc Natl AcadSci USA 95(23)13853-8)。食管癌的動物模型實(shí)例包括但不限于轉(zhuǎn)有人乳頭瘤病毒屬型16E7致癌基因的轉(zhuǎn)基因小鼠(參見例如，Herber等人，1996，J Virol 70(3)1873-81)。結(jié)腸直腸癌的動物模型實(shí)例包括但不限于Ape小鼠模型(參見例如，F(xiàn)odde&Smits，2001，Trends MoI Med7(8)369-73和Kuraguchi等人，2000，Oncogene 19(50)5755-63)。多發(fā)性神經(jīng)纖維瘤的動物模型實(shí)例包括但不限于突變體NF1小鼠(參見例如，Cichowski等人，1996，Semin Cancer Biol 7(5)291-8)。成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤的動物模型實(shí)例包括但不限于在視網(wǎng)膜內(nèi)表達(dá)猿猴病毒40移植抗原轉(zhuǎn)基因小鼠(參見例如，Howes等人，1994，Invest Ophthalmol Vis Sci35(2)342-51和Windle等人，1990，Nature 343(6259)665-9)和近親交配大鼠(參見例如，Nishida等人，1981，Curr Eye Res 1(1)53-5和Kobayashi等人，1982，Acta Neuropathol(Berl)57(2-3)203-8)。維爾姆斯氏腫瘤(Wilm′s tumor)的動物模型實(shí)例包括但不限于WT1敲除小鼠(參見例如，Scharnhorst等人，1997，Cell Growth Differ 8(2)133-43)、具有腎胚細(xì)胞瘤高發(fā)病率的大鼠亞系(參見例如，Mesfin & Breech，1996，LabAnim Sci 46(3)321-6)和具有維爾姆斯氏腫瘤Wistar/Furth大鼠(參見例如，Murphy等人，1987，Anticancer Res 7(4B)717-9)。
視網(wǎng)膜色素變性視網(wǎng)膜色素變性的動物模型實(shí)例包括但不限于皇家外科醫(yī)師學(xué)會(Royal College of Surgeons，″RCS″)大鼠(參見例如，Vollrath等人，2001，Proc Natl Acad Sci USA 98(22)；12584-9和Hanitzsch等人，1998，Acta Anat(Basel)162(2-3)119-26)、視紫紅質(zhì)敲除大鼠(參見例如，Jaissle等人，2001，Invest Ophthalmol Vis Sci 42(2)506-13)和Wag/Rij大鼠(參見例如，Lai等人，1980，Am J Pathol 98(1)281-4)。
肝硬化肝硬化的動物模型實(shí)例包括但不限于四氯化碳暴露(CCl4-exposed)大鼠(參見例如，Kloehn等人，2001，Horm Metab Res33(7)394-401)以及細(xì)菌細(xì)胞成分或大腸炎引發(fā)的嚙鼠動物模型(參見例如，Vierling，2001，Best Pract Res Clin Gastroenterol 15(4)591-610)。
血友病血友病的動物模型實(shí)例包括但不限于血友病A的嚙鼠動物模型(參見例如，Reipert等人，2000，Thromb Haemost 84(5)826-32；Jarvis等人.，.1996，Thromb Haemost 75(2)318-25；以及Bi等人，1995，Nat Genet10(1)119-21)、血友病A的犬模型(參見例如，Gallo-Penn等人，1999，HumGene Ther 10(11)1791-802和Connelly等人，1998，Blood91(9)；3273-81)、血友病B的鼠類模型(參見例如，Snyder等人，1999，NatMed 5(1)64-70；Wang等人，1997，Proc Natl Acad Sci USA 94(21)11563-6；以及Fang等人，1996，Gene Ther 3(3)217-22)、血友病B的犬模型(參見例如，Mount等人，2002，Blood 99(8)2670-6；Snyder等人，1999，NatMed 5(1)64-70；Fang等人，1996，Gene Ther 3(3)217-22)；以及Kay等人，1994，Proc Natl Acad Sci USA 91(6)2353-7)和血友病B的獼猴模型(參見例如，Lozier等人，1999，Blood 93(6)1875-81)。
馮·維勒布蘭德病馮·維勒布蘭德病的動物模型實(shí)例包括但不限于近親交配鼠品系RIIIS/J (參見例如，Nichols等人，1994，83(11)3225-31和Sweeney等人，1990，76(11)2258-65)、美洲矛頭蝮毒蛋白的大鼠(參見例如，Sanders等人，1988，Lab Invest 59(4)443-52)以及馮·維勒布蘭德病的豬模型(參見例如，Nichols等人，1995，Proc Natl Acad Sci USA 92(7)2455-9；Johnson&Bowie，1992，J Lab Clin Med 120(4)553-8)；以及Brinkhous等人，1991，Mayo Clin Proc 66(7)733-42)。
β地中海貧血癥β地中海貧血癥的動物模型實(shí)例包括但不限于珠蛋白基因突變的鼠類模型(參見例如，Lewis等人，1998，Blood 91(6)2152-6；Raja等人，1994，BrJ Haematol 86(1)156-62；Popp等人，1985，445432-44；和Skow等人，1983，Cell 34(3)1043-52)。
腎結(jié)石腎結(jié)石的動物模型實(shí)例包括但不限于遺傳性高鈣尿大鼠(genetichypercalciuric rats)(參見例如，Bushinsky等人，1999，Kidney Int55(1)234-43and Bushinsky等人，1995，Kidney Int 48(6)1705-13)、化學(xué)處理大鼠(參見例如，Grases等人，1998，Scand J Urol Nephrol 32(4)261-5；Burgess等人，1995，Urol Res 23(4)239-42；Kumar等人，1991，J Urol146(5)1384-9；Okada等人，1985，Hinyokika Kiyo 31(4)565-77；和Bluestone等人，1975，Lab Invest 33(3)273-9)、高草酸尿的大鼠(參見例如，Jones等人，1991，J Urol 145(4)868-74)、單側(cè)退行性可曲腎鏡檢查(flexible nephroscopy)的豬(參見例如，Seifmah等人，2001，57(4)832-6)以及上泌尿道梗阻的兔(參見例如，Itatani等人，1979，Invest Urol17(3)234-40)。
共濟(jì)失調(diào)性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥共濟(jì)失調(diào)性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥的動物模型實(shí)例包括但不限于共濟(jì)失調(diào)性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥的鼠類模型(參見例如，Barlow等人，1999，ProcNatl Acad Sci USA 96(17)9915-9和Inoue等人，1986，Cancer Res46(8)3979-82)。
溶酶體貯積癥溶酶體貯積癥的動物模型實(shí)例包括但不限于粘多糖增多癥VII型小鼠模型(參見例如，Brooks等人，2002，Proc Natl Acad Sci USA.99(9)6216-21；Monroy等人，2002，Bone 30(2)352-9；Vogler等人，2001，Pediatr Dev Pathol 4(5)421-33；Vogler等人，2001，Pediatr Res.49(3)342-8；以及Wolfe等人，2000，MoI Ther.2(6)552-6)、異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良小鼠模型(參見例如，Matzner等人，2002，Gene Ther.9(1)53-63)、桑德霍夫病(Sandhoff disease)小鼠模型(參見例如，Sango等人，2002，Neuropathol Appl Neurobiol 28(1)23-34)、粘多糖增多癥III A型小鼠模型(參見例如，Bhattacharyya等人，2001，Glycobiology 11(1)99-10和Bhaumik等人，1999，Glycobiology 9(12)1389-96.)、酰基硫酸酯酶A(arylsulfataseA，ASA)缺陷小鼠(參見例如，D′Hooge等人，1999，BrainRes.847(2)352-6和D′Hooge等人，1999，Neurosci Lett.273(2)93-6)、天冬氨酰葡糖胺尿癥的突變小鼠(參見例如，Jalanko等人，1998，HumMoI Genet.7(2)265-72)、粘多糖增多癥VI型貓模型(參見例如，Crawley等人，1998，J Clin Invest.101(1)109-19和Norrdin等人，1995，Bone17(5)485-9)、尼-皮病C型貓模型(參見例如，March等人，1997，ActaNeuropathol(Berl).94(2)164-72)、酸性鞘磷脂酶缺陷小鼠(參見例如，Otterbach&Stoffel，1995，Cell 81(7)1053-6)和甘露糖苷過多癥牛(參見例如，Jolly等人，1975，Birth Defects Orig Arctic Ser.11(6)273-8)。
結(jié)節(jié)性硬化癥(Tuberous Sclerosis)結(jié)節(jié)性硬化癥的動物模型實(shí)例包括但不限于TSCl小鼠模型(參見例如，Kwiatkowski等人，2002，Hum MoI Genet.11(5)525-34)、Tsc1(TSC1同系物)敲除小鼠(參見例如，Kobayashi等人，2001，Proc NatlAcad Set USA.2001JuI 17；98(15)8762-7)、TSC2基因突變體(Eker)大鼠模型(參見例如，Hino 2000，Nippon Rinsho 58(6)1255-61；Mizuguchi等人，2000，J Neuropathol Exp Neurol.59(3)188-9；以及Hino等人，1999，Prog Exp Tumor Res.3595-108)和Tsc2(+/-)小鼠(參見例如，Onda等人，1999，J Clin Invest.104(6)687-95)。
實(shí)施例5mdx小鼠動物模型研究引起427kDa抗肌萎縮蛋白多肽翻譯提前終止的mdx小鼠中的突變，已經(jīng)表現(xiàn)出在外顯子23中3185位置上C到T的轉(zhuǎn)變(Sicinski等人，Science 244(4912)1578-1580(1989))。得自2天齡mdx小鼠的原代骨骼肌培養(yǎng)物按照以前記載的方法(Barton-Davis等人，J.Clin.Invest.104(4)375-381(1999))制備。細(xì)胞在本發(fā)明化合物存在下培養(yǎng)10天。每四天更換細(xì)胞培養(yǎng)基，并且通過以前記載的免疫染色法(Barton-Davis等人，J.Clin.Invest.104(4)375-381(1999))測定成肌細(xì)胞培養(yǎng)物中抗肌萎縮蛋白的存在。使用未經(jīng)稀釋的抗肌萎縮蛋白羧基端的第一單克隆抗體，結(jié)合抗鼠IgG的若丹明用作第二抗體。所述抗體檢測通過抑制無義密碼子產(chǎn)生的全長蛋白。用Leica DMR顯微鏡、數(shù)碼相機(jī)并聯(lián)合圖像軟件觀察染色。
如以前記載(Barton-Davis等人，J.Clin.Invest.104(4)375-381(1999))，通過Alzet滲透泵植入麻醉小鼠皮下來傳遞化合物。本發(fā)明的每種化合物給藥兩個(gè)劑量。慶大霉素作為陽性對照，并且滿泵溶劑只作為陰性對照。泵中裝載適量的化合物，這樣計(jì)算暴露給組織的劑量為10mM和20mM。計(jì)算所述慶大霉素的濃度達(dá)到組織暴露大約200mM。在試驗(yàn)初期，治療小鼠14天，之后用開他敏(ketamine)麻醉動物并放血。然后離體分離、冷凍實(shí)驗(yàn)動物的脛骨前肌(tibialisanterior，TA)，并用于免疫熒光分析橫紋肌中的抗肌萎縮蛋白的摻入。通過以前記載的免疫染色(Barton-Davis et ah，J.Clin.Invest.104(4)375-381(1999))檢測TA肌肉中抗肌萎縮蛋白的存在。
蛋白印跡分析使用商業(yè)上可供的抗肌萎縮蛋白抗體，通過蛋白印跡分析得自本發(fā)明化合物治療4周的mdx小鼠的四頭肌。提取自野生小鼠四頭肌的蛋白作為陽性對照。觀察在受治療小鼠中全長抗肌萎縮蛋白的產(chǎn)生。全長抗肌萎縮蛋白產(chǎn)生的量，作為無義抑制的結(jié)果但不限于此理論，大約為野生表達(dá)水平的10％。
免疫熒光用本發(fā)明不同的化合物(對于每一種化合物至少n＝2)治療雄性mdx小鼠(9-11周齡)。每天注射一次25毫克/千克的適量所述化合物，注射兩周。在兩周治療后，處死小鼠移出肌肉檢測抗肌萎縮蛋白通讀效率。
使用抗肌萎縮蛋白抗體，在10微米冷凍切片上完成免疫熒光(Immunofluorescence，IF)。所述抗體識別mdx小鼠中發(fā)現(xiàn)的提前終止突變體羧基端抗原表位。圖像分析以同樣的方式在所有切片上分析。分析來自治療或未治療小鼠的圖像，信號強(qiáng)于未治療對照上的信號認(rèn)為陽性，表明提前終止密碼子抑制在抗肌萎縮蛋白mRNA中發(fā)生。
肌肉力學(xué)離體全面肌肉力學(xué)在來自動物的長伸肌(extensor digitorum longus，EDL)肌肉上進(jìn)行。最適肌肉長度(Optimum muscle length，Lo)定義為產(chǎn)生最大顫搐張力(twitch tension)的長度。最適肌肉長度處的最大強(qiáng)直性張力使用120赫茲、500毫秒脈沖在超大電壓下測量。監(jiān)視通過一系列5個(gè)偏心性陽極期間強(qiáng)直誘導(dǎo)的抗機(jī)械性損傷的保護(hù)。所述測量利用700毫秒興奮周期完成，在該期間內(nèi)肌肉最初500毫秒保持等長收縮，然后以0.5Lo/秒的速率伸長8％或10％的Lo?？箼C(jī)械性損傷的保護(hù)在80赫茲刺激頻率下評定。以在第一次和最后一次偏心性收縮之間的力量損失測定損傷。
實(shí)施例6p53基因中的無義突變抑制為動物模型系統(tǒng)，將CAOV-3細(xì)胞(1×107)注射到裸小鼠(nude/nude mice)的側(cè)腹。12天后，小鼠隨機(jī)分組(每組10只小鼠)，并用3毫克/千克本發(fā)明化合物皮下治療(每周5天)，或用30毫克/千克本發(fā)明化合物腹膜內(nèi)治療(每周1天)。每周測量腫瘤體積。通過本發(fā)明的化合物在p53基因中的無義突變抑制能抑制癌癥在體內(nèi)生長。
實(shí)施例7本發(fā)明化合物能修飾特異性核苷酸28S rRNA的方法以前的研究已經(jīng)證明慶大霉素以及其他氨基糖甙家族的成員降低結(jié)合16S rRNA的A位點(diǎn)的翻譯忠實(shí)度。通過化學(xué)足跡法(chemicalfootprinting)、紫外交聯(lián)以及核磁共振，慶大霉素已經(jīng)顯示在核苷酸1406、1407、1494和1496處結(jié)合所述16S rRNA的A位點(diǎn)(包括E.coli編號1400-1410和1490-1500的核苷酸)(Moazed&Noller，Nature327(6121)389-394(1978)；Woodcock等人，EMBO J.10(10)3099-3103(1991)；以及Schroeder等人，EMBOJ.191-9(2000))。
從海拉細(xì)胞制備的核糖體，與小分子孵育(在100mM濃度下)，然后用化學(xué)修飾劑(二甲基硫醚(DMS)和乙氧丁酮醛(KE))處理?；瘜W(xué)修飾后，rRNA得以用酚-氯仿提取，并用乙醇沉淀，在引物延伸反應(yīng)中使用末端標(biāo)記的雜交三種rRNA不同區(qū)域的寡聚核苷酸，并在6％聚丙烯酰胺凝膠上分析。引物延伸探針覆蓋全部18S(7寡聚核苷酸引物)、28S(24寡聚核苷酸引物)和5S(一個(gè)引物)的rRNA。這些實(shí)驗(yàn)中的對照包括二甲亞砜(二甲亞砜誘導(dǎo)的rRNA中趨近性的變化對照)、巴龍霉素(18S rRNA結(jié)合標(biāo)記)以及茴香霉素(28S rRNA結(jié)合標(biāo)記)。
這里引用的所有出版物以及專利申請?jiān)诖艘韵嗤某潭纫徊⒁胱鳛閰⒖迹仁姑恳粏为?dú)出版物或?qū)＠暾埖玫角宄覀€(gè)別地簡述以引入?yún)⒖肌?br> 雖然確定的實(shí)施方式已在上文詳細(xì)描述，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠清楚地理解實(shí)施方式中許多可能的不背離其教導(dǎo)的變化。所有這些變化確定包含在本發(fā)明的權(quán)利要求內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種治療或預(yù)防由體細(xì)胞突變引起的疾病的方法，所述方法包括向需要其的病人給藥有效量的式1的化合物或者所述式1的化合物的藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物、外消旋物、立體異構(gòu)體或多晶型物 其中A1為C、CH或N；V和X獨(dú)立地選自N或C；W選自N、C或CH；其中至少V、W或X之一為N，且其中如果W為N，則至少V或X之一也為N；Y和Z獨(dú)立地選自N、C、C-Rc、C＝O、C＝S，其中Rc為H、CH3或NH2；條件是當(dāng)Y或Z之一為C＝O或C＝S時(shí)，則另一個(gè)也可選自NH、S或O；R1為羧基、氰基或任選地被C1-C4烷氧基取代的羰基；R2不存在或者為硝基；Ar1為任選地被R基取代的C1-C4烷基；任選地被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)獨(dú)立選擇的R基取代的C6至C10芳基；任選地被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)獨(dú)立選擇的R基取代的5至10元雜環(huán)；與Ar2和跟Ar1及Ar2相連的雜環(huán)共同形成選自Ar1-2的環(huán)結(jié)構(gòu)；或與Ar3和跟Ar1及Ar3相連的雜環(huán)共同形成選自Ar1-3的環(huán)結(jié)構(gòu)；Ar2不存在或者與Ar1和跟Ar1及Ar2相連的雜環(huán)共同形成選自Ar1-2的環(huán)結(jié)構(gòu)；Ar3不存在或者與Ar1和跟Ar1及Ar3相連的雜環(huán)共同形成選自Ar1-3的環(huán)結(jié)構(gòu)；Ar4不存在；或者為其中任意一種與A1共同形成4至7元碳環(huán)或雜環(huán)的C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4硫代烷基；R為氫；-Ra基或兩個(gè)R基，其中R也可包括氧基，與跟其相連的苯基或雜環(huán)共同形成選自RR的環(huán)結(jié)構(gòu)；其中Ar1-2和Ar1-3選自任選地被一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)取代的11至14元雜三環(huán)的環(huán)結(jié)構(gòu)鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、任選地被鹵素或C1-C4烷氧基取代的C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基或者任選地被用C1-C4烷基取代的羰基取代的氨基；RR為任選地被一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)取代的9至10元雙環(huán)的環(huán)結(jié)構(gòu)鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、氧代基團(tuán)或C1-C4鹵代烷氧基；Ra選自羥基；鹵素；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的鹵素或羥基取代的C1-C4烷基；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的鹵素或苯基取代的C1-C4烷氧基；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的C1-C4烷基取代的C4-C8環(huán)烷基；-Rb基；-O-Rb基；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的C1-C4烷基、氧代或-Rb基取代的4至6元雜環(huán)；具有兩個(gè)環(huán)結(jié)構(gòu)的9至10元雜環(huán)；任選地被羥基、C1-C4烷基或C1-C4烷氧基取代的羰基；任選地被一個(gè)或兩個(gè)C1-C4烷基取代的氨基甲?；?；硝基；氰基；任選地被羥基、C1-C4烷基或-Rb基取代的硫代；任選地被羥基、C1-C4烷基或-Rb基取代的磺酰基；或任選地被一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立選擇的C1-C4烷基、磺酰基或羰基取代的氨基，其中氨基磺?；芜x地被羥基、C1-C4烷基或-Rb基取代且其中氨基羰基任選地被任選地用-Rb基取代的C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、苯甲酰氧基或氨基取代；其中-Rb為任選地被下列基團(tuán)中的一種或多種取代的C6-C8芳基羥基、鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基或者任選地被一個(gè)或多個(gè)C1-C4烷基取代的氨基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物多晶型物、外消旋物、立體異構(gòu)體或多晶型物以含有所述化合物和藥學(xué)可接受的載體或稀釋劑的組合物給藥。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述給藥是靜脈內(nèi)的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述式1的化合物為式1-A的化合物 其中A1、A2、A3、A4和A5獨(dú)立地選自N、C和CH；Ar3不存在或者為氫且n為0、1或2。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中R2不存在且A1、A2、A3、A4和A5獨(dú)立地選自C和CH。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中R1為羧基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述式1的化合物為式1-B的化合物
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中R1為羧基。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述式1的化合物為式1-C的化合物
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中Ar1為噻吩基。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中R1為羧基。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述式1的化合物為式1-D的化合物
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中Ar2不存在。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中Ar3為氫。
15.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中R1為羧基。
16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述式1的化合物為式1-E的化合物
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中Ar1為任選地被一個(gè)或兩個(gè)R基取代的苯基。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述一個(gè)或兩個(gè)R基獨(dú)立地選自C1-C4烷基和鹵素。
19.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中R1為羧基。
20.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述式1的化合物為式1-F的化合物
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中Ar1為任選地被一個(gè)或兩個(gè)R基取代的苯基。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述一個(gè)或兩個(gè)R基獨(dú)立地選自C1-C4烷基、鹵素、C1-C4鹵代烷基和甲磺?；?，或者兩個(gè)R基共同形成喹啉基。
23.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中R1為羧基。
24.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述式1的化合物為式1-G的化合物
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中Ar1為任選地被一個(gè)或兩個(gè)R基取代的苯基。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述一個(gè)或兩個(gè)R基獨(dú)立地選自C1-C4烷基和氰基。
27.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中R1為羧基。
28.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述式1的化合物為式1-H的化合物
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中Ar1為任選地被一個(gè)或兩個(gè)R基取代的苯基。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中所述一個(gè)或兩個(gè)R基為C1-C4烷基。
31.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中R1為羧基。
32.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述式1的化合物為式1-I的化合物
33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中Ar1為任選地被一個(gè)或兩個(gè)R基取代的苯基。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述一個(gè)或兩個(gè)R基為C1-C4烷基。
35.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中R1為羧基。
36.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述式1的化合物為式1-J的化合物
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中Ar1為任選地被一個(gè)或兩個(gè)R基取代的苯基。
38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的方法，其中所述一個(gè)或兩個(gè)R基為C1-C4烷基。
39.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中R1為羧基。
40.一種治療或預(yù)防自身免疫性疾病、血液病、膠原病、糖尿病、神經(jīng)變性疾病、心血管疾病、肺部疾病、炎癥性疾病或中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的方法，所述方法包括向需要其的病人給藥有效量的式1的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物、外消旋物、立體異構(gòu)體或多晶型物。
41.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中所述給藥是靜脈內(nèi)的。
42.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中所述自身免疫性疾病為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或移植物抗宿主病。
43.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中所述炎癥性疾病為關(guān)節(jié)炎。
44.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中所述中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病為多發(fā)性硬化、肌營養(yǎng)不良、迪謝納肌營養(yǎng)不良、阿爾茨海默病、神經(jīng)變性疾病或帕金森癥。
45.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中所述血液病為血友病、馮·維勒布蘭德病或β地中海貧血。
46.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中所述膠原病為成骨不全或硬化。
47.一種治療或預(yù)防家族性紅細(xì)胞增多癥、免疫缺陷、腎疾病、囊性纖維化病、家族性高膽固醇血癥、視網(wǎng)膜色素變性、淀粉樣變、血友病、阿爾茨海默病、泰-薩病、尼-皮病、帕金森癥、動脈粥樣硬化、巨人癥、侏儒癥、甲狀腺功能亢進(jìn)、衰老、肥胖癥、迪謝納肌營養(yǎng)不良或馬方綜合征的方法，所述方法包括向需要其的病人給藥有效量的式1的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物、外消旋物、立體異構(gòu)體或多晶型物。
48.根據(jù)權(quán)利要求47所述的方法，其中所述給藥是靜脈內(nèi)的。
49.一種治療或預(yù)防人類癌癥的方法，所述方法包括向需要其的人給藥有效量的式1的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物、外消旋物、立體異構(gòu)體或多晶型物。
50.根據(jù)權(quán)利要求49所述的方法，其中所述給藥是靜脈內(nèi)的。
51.根據(jù)權(quán)利要求49所述的方法，其中所述癌癥為頭與頸、眼、皮膚、口、咽、食道、胸、骨、血、肺、結(jié)腸、乙狀結(jié)腸、直腸、胃、前列腺、乳房、卵巢、腎、肝、胰腺、腦、腸、心臟或腎上腺的癌癥。
52.根據(jù)權(quán)利要求49所述的方法，其中所述化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物或立體異構(gòu)體包括藥學(xué)可接受的載體或稀釋劑。
53.根據(jù)權(quán)利要求49所述的方法，其中所述癌癥為實(shí)體瘤。
54.根據(jù)權(quán)利要求49所述的方法，其中所述癌癥為肉瘤、癌、纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、軟骨肉瘤、骨源性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內(nèi)皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因肉瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、胰癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細(xì)胞癌、肝癌、膽管癌、絨毛膜癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌、維爾姆斯瘤、子宮頸癌、睪丸瘤、肺癌、小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、卡波西肉瘤、松果體瘤、成血管細(xì)胞瘤、聽神經(jīng)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦膜瘤、黑素瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、血液產(chǎn)生的腫瘤或多發(fā)性骨髓瘤。
55.根據(jù)權(quán)利要求49所述的方法，其中所述癌癥為急性成淋巴細(xì)胞性白血病、B細(xì)胞型急性淋巴細(xì)胞白血病、T細(xì)胞型急性淋巴細(xì)胞白血病、急性粒細(xì)胞白血病、急性早幼粒細(xì)胞白血病、急性成單核細(xì)胞性白血病、急性紅白血病、急性成巨核細(xì)胞白血病、急性粒單核細(xì)胞白血病、急性非淋巴細(xì)胞白血病、急性未分化細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、多毛細(xì)胞白血病或多發(fā)性骨髓瘤。
56.一種治療或預(yù)防與p53基因突變相關(guān)的疾病的方法，所述方法包括向需要其的病人給藥有效量的式1的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物、外消旋物、立體異構(gòu)體或多晶型物。
57.根據(jù)權(quán)利要求56所述的方法，其中所述給藥是靜脈內(nèi)的。
58.根據(jù)權(quán)利要求56所述的方法，其中所述疾病為肉毒瘤、癌、纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、軟骨肉瘤、骨源性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內(nèi)皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因肉瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、胰癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細(xì)胞癌、肝癌、膽管癌、絨毛膜癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌、維爾姆斯瘤、子宮頸癌、睪丸瘤、肺癌、小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、卡波西肉瘤、松果體瘤、成血管細(xì)胞瘤、聽神經(jīng)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦膜瘤、黑素瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤或成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤。
59.一種抑制癌細(xì)胞生長的方法，所述方法包括使所述癌細(xì)胞與有效量的式1的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物、外消旋物、立體異構(gòu)體或多晶型物接觸。
60.一種在哺乳動物中選擇性地產(chǎn)生蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括在所述哺乳動物中轉(zhuǎn)錄含有無義突變的基因；并將有效量的本發(fā)明的化合物提供給所述哺乳動物，其中所述蛋白質(zhì)通過所述含有無義突變的基因產(chǎn)生。
61.一種式1的化合物或所述式1的化合物的藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物、外消旋物、立體異構(gòu)體或多晶型物 其中A1為C、CH或N；V和X獨(dú)立地選自N或C；W選自N、C或CH；其中至少V、W或X之一為N，且其中如果W為N，則至少V或X之一也為N；Y和Z獨(dú)立地選自N、C、C-Rc、C＝O、C＝S，其中Rc為H、CH3或NH2；條件是當(dāng)Y或Z之一為C＝O或C＝S時(shí)，則另一個(gè)也可選自NH、S或O；R1為羧基、氰基或者任選地被C1-C4烷氧基取代的羰基；R2不存在或者為硝基；Ar1為任選地被R基取代的C1-C4烷基；任選地被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)獨(dú)立選擇的R基取代的C6至C10芳基；任選地被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)獨(dú)立選擇的R基取代的5至10元雜環(huán)；與Ar2和跟Ar1及Ar2相連的雜環(huán)共同形成選自Ar1-2的環(huán)結(jié)構(gòu)；或與Ar3和跟Ar1及Ar3相連的雜環(huán)共同形成選自Ar1-3的環(huán)結(jié)構(gòu)；Ar2不存在或者與Ar1和跟Ar1及Ar2相連的雜環(huán)共同形成選自Ar1-2的環(huán)結(jié)構(gòu)；Ar3不存在或者與Ar1和跟Ar1及Ar3相連的雜環(huán)共同形成選自Ar1-3的環(huán)結(jié)構(gòu)；Ar4不存在；或者為其中任意一種與A1共同形成4至7元碳環(huán)或雜環(huán)的C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4硫代烷基；R為氫；-Ra基或兩個(gè)R基，其中R也可包括氧基，與跟其相連的苯基或雜環(huán)共同形成選自RR的環(huán)結(jié)構(gòu)；其中Ar1-2和Ar1-3選自任選地被一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)取代的11至14元雜三環(huán)的環(huán)結(jié)構(gòu)鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、任選地被鹵素或C1-C4烷氧基取代的C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷氧基或者任選地被用C1-C4烷基取代的羰基取代的氨基；RR為任選地被一個(gè)或多個(gè)以下基團(tuán)取代的9至10元雙環(huán)的環(huán)結(jié)構(gòu)鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、氧代基團(tuán)或C1-C4鹵代烷氧基；Ra選自羥基；鹵素；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的鹵素或羥基取代的C1-C4烷基；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的鹵素或苯基取代的C1-C4烷氧基；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的C1-C4烷基取代的C4-C8環(huán)烷基；-Rb基；-O-Rb基；任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選擇的C1-C4烷基、氧代或-Rb基取代的4至6元雜環(huán)；具有兩個(gè)環(huán)結(jié)構(gòu)的9至10元雜環(huán)；任選地被羥基、C1-C4烷基或C1-C4烷氧基取代的羰基；任選地被一個(gè)或兩個(gè)C1-C4烷基取代的氨基甲酰基；硝基；氰基；任選地被羥基、C1-C4烷基或-Rb基取代的硫代；任選地被羥基、C1-C4烷基或-Rb基取代的磺酰基；或任選地被一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立選擇的C1-C4烷基、磺?；螋驶〈陌被渲邪被酋；芜x地被羥基、C1-C4烷基或-Rb基取代且其中氨基羰基任選地被任選地用-Rb基取代的C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、苯甲酰氧基或氨基取代；其中-Rb為任選地被如下基團(tuán)中的一種或多種取代的C6-C8芳基羥基、鹵素、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基或者任選地被一個(gè)或多個(gè)C1-C4烷基取代的氨基。
62.根據(jù)權(quán)利要求61所述的化合物，其中Ar4不存在。
63.根據(jù)權(quán)利要求61所述的化合物，其中所述化合物選自表X的化合物。
64.一種具有下式的化合物(化合物編號1)
全文摘要
本發(fā)明涉及通過給藥本發(fā)明的化合物或組合物來治療或預(yù)防與mRNA中的無義突變相關(guān)的疾病的方法、化合物和組合物。更具體地，本發(fā)明涉及用于抑制與mRNA中的無義突變相關(guān)的翻譯提前終止的方法、化合物和組合物。
文檔編號A61K31/4152GK101076332SQ200580042744
公開日2007年11月21日 申請日期2005年10月13日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月13日
發(fā)明者N·阿爾姆斯戴德, G·M·卡普, R·懷爾德, E·韋爾奇, J·A·坎貝爾, 任洪玉, 陳光明 申請人:Ptc醫(yī)療公司