專利名稱：鬼臼毒素及其衍生物乳劑組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含鬼臼毒素及其衍生物乳劑的組合物，其特征在于該組合物含鬼臼毒素及其衍生物、油性載體、水和表面活性劑。包含納米微乳劑型和亞納米乳劑型，其中分散相的平均粒徑≤1um。
背景技術(shù)：
鬼臼毒素是曼德拉草提取物中的一種抗微管藥物，表鬼臼毒(epipodophyllotoxin)是為了提高鬼臼毒素(podophyllotoxin)的活性開發(fā)的。
鬼臼毒素或表鬼臼毒及其衍生物，其中包含下列結(jié)構(gòu)； 其中R1、R2、R3分別為R1 CH3OH R2 H CH3R3CH3 其中表鬼臼毒類藥物依托泊苷(etoposide，-16)(4’-去甲基表鬼臼毒素-β-D-乙叉吡喃葡萄糖甙)和替尼泊苷(teniposide，VM-26)(4-O-去甲基-1-O(4.6-0.2-噻吩甲叉-β-D-吡喃葡萄糖甙)已經(jīng)用于臨床了。4-脫氧-4-表鬼臼毒素衍生物、鬼臼亞乙苷、4-β-碳取代-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素衍生物和4′-脫甲基-4′-O-取代的-1-脫氧鬼臼毒的藥效正在研究中，在公開的專利文獻(xiàn)中，可以查到有關(guān)它們在合成方面的專利。而乳劑方面的文獻(xiàn)和專利卻未見報道。
目前市售的鬼臼毒類藥物有依托泊苷和替尼泊苷的的注射劑和凍干粉針，由于其臨床使用時強(qiáng)烈的刺激性，一直沒有得到很好的應(yīng)用。制成本發(fā)明的乳劑，由于乳劑為穩(wěn)定的O/W體系，與皮膚細(xì)胞特有的親和性，基本解決了鬼臼毒類藥物的刺激性，基于該類制劑特有的靶向作用，有望在臨床上得到很好的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的鬼臼毒素及其衍生物乳劑，包含納米微乳劑型和亞納米乳劑型。本發(fā)明乳劑由藥物鬼臼毒素及其衍生物、油性載體、水和表面活性劑組成，其中油性載體是指甘油三酯、脂肪酸甘油酯、脂肪酸/醇、脂肪酸乙酯、甾醇及其衍生物、聚氧乙烯脂肪酸酯中的一種或幾種；表面活性劑是指磷脂、吐溫、司盤、泊洛沙姆(poloxamer)、聚乙二醇及其衍生物中的一種或幾種；其中甘油三酯，包含大豆油、茶油、玉米油、紅花油、月見草油、橄欖油、C5-C14的甘油三酯中的一種或幾種；磷脂，包含動物磷脂如蛋黃卵磷脂、植物磷脂比如大豆磷脂、合成磷脂如聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE)以及改性磷脂如羥化磷脂中的一種或幾種；脂肪酸/醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸乙酯，其中脂肪酸的碳鏈為C5-C24，比如油酸、亞油酸、硬脂酸單甘油酯、油酸乙酯、亞油酸乙酯中的一種或幾種；聚乙二醇及其衍生物系列，如聚乙二醇200、400、600、1000、1500、2000、4000、6000、solutolHS15以及聚乙二醇琥珀酸酯中的一種或幾種；甾醇及其衍生物，其中包含膽固醇、膽固醇油酸酯、膽固醇硬脂酸酯、膽固醇壬酸酯、膽固醇苯甲酸酯中的一種或幾種。
本發(fā)明的鬼臼毒素及其衍生物是通過溶解在鬼臼毒素及其衍生物共溶劑中而被慘入油中的，鬼臼毒素及其衍生物和油性載體在水中形成穩(wěn)定的分散相；其中分散相的平均粒徑≤1um；在藥劑學(xué)上稱為鈉米乳和亞鈉米乳。其中共溶劑選自苯甲酸卞酯、苯甲酸甲酯、苯甲酸乙酯、二甲基亞砜(DMSO)、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺中的一種或幾種。
本發(fā)明的鬼臼毒素及其衍生物亞納米乳制劑，其制備方法如下a)將鬼臼毒素及其衍生物溶于苯甲酸卞酯、苯甲酸甲酯、苯甲酸乙酯、二甲基亞砜(DMSO)、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺中的一種或幾種共溶劑中，加入油相載體，于50～90℃高速攪拌制成油相，除去揮發(fā)性溶劑，其余組分溶于適量水中，于50～90℃高速攪拌制成水相，油水兩相混合于50～90℃高速攪拌制成初乳劑，調(diào)節(jié)PH值4.0～6.0。
b)取上述(a)中初乳劑，注射用水定容至處方量，轉(zhuǎn)移至高壓乳勻機(jī)中，反復(fù)乳化。至乳滴平均粒徑≤1微米。
C)取上述(b)的乳劑過濾后，充氮氣灌裝，滅菌既得。
本發(fā)明的鬼臼毒素及其衍生物注射用納米乳制劑，其制備方法如下a)將鬼臼毒素及其衍生物用適量苯甲酸卞酯或DMSO溶解，加入適量吐溫80、丙二醇、solutolHS15、聚氧乙烯蓖麻油、甘油三酯的一種或幾種的組合物中，于20～60℃充分?jǐn)嚢瑁偌尤胩幏搅康乃?，充分?jǐn)嚢?，調(diào)節(jié)PH值4.0～6.0。
b)取上述(a)的微乳制劑用活性炭處理除去熱原，再除菌過濾后，充氮氣灌裝，滅菌既得。
口服乳劑中還可以含芳香劑和防腐劑，其中芳香劑包括橘子香精、香蕉香精、草莓香精、奶油香精中的一種或幾種，防腐劑包括尼泊金酯類、苯甲酸類中的一種或幾種。
具體實施例實施例一(亞納米乳劑型)組方1鬼臼毒素及其衍生物0.01％～1.0％、甾醇及其衍生物0.01％～2.0％、生育酚0.01％～1.0％、磷脂1.0％～6.0％、油酸乙酯2％-6％、植物油5％～20％、甘油1.0％～6.0％、油酸1.0％～6.0％，注射用水添至100ml。
稱取鬼臼毒素及其衍生物100-500mg溶于0-5ml苯甲酸卞酯和0-2mlDMSO中，加入生育酚0.01-0.1g、膽固醇0.1-1.0g，充分溶解，加入2-6g油酸乙酯、15g精制植物油或中鏈油或兩者的混合物和0.1-0.3g油酸，于50℃～90℃高速攪拌使混合均勻，制成油相；稱取蛋黃卵磷脂2.0g、甘油3g，加入處方量的水于50℃～80℃高速攪拌使充分分散，制成水相。油水兩相混合，于50℃～80℃高速攪拌制成初乳劑。取初乳劑，注射用水定容至處方量，調(diào)節(jié)PH值為5.0～7.0，轉(zhuǎn)移至高壓乳勻機(jī)中，反復(fù)乳化至乳滴平均粒徑≤1微米，除菌過濾，充氮氣灌裝，滅菌既得。
組方2鬼臼毒素及其衍生物0.01％～1.0％、甾醇及其衍生物0.01％～2.0％、抗壞血酸棕櫚酸酯0.01％～1.0％、磷脂1.0％～6.0％、植物油5％～20％、甘油1.0％～6.0％、油酸0.1％～5.0％，泊洛沙姆0.05％～1.0％、注射用水添至100ml。
稱取鬼臼毒素及其衍生物100-500mg溶于0-5ml苯甲酸卞酯和0-2mlDMSO中，加入抗壞血酸棕櫚酸酯0.01-0.1g、膽固醇油酸酯0.01-0.1g，泊洛沙姆1880.5g-1.0g充分溶解，加入20g精制植物油或中鏈油或兩者的混合物和0.1-0.3g油酸，于50℃～90℃高速攪拌使混合均勻，制成油相；稱取蛋黃卵磷脂1.8g、甘油3g，加入處方量的水于50℃～80℃高速攪拌使充分分散，制成水相。油水兩相混合，于50℃～80℃高速攪拌制成初乳劑。取初乳劑，注射用水定容至處方量，調(diào)節(jié)PH值為5.0～7.0，轉(zhuǎn)移至高壓乳勻機(jī)中，反復(fù)乳化至乳滴平均粒徑≤1微米，除菌過濾，充氮氣灌裝，滅菌既得。
組方3鬼臼毒素及其衍生物0.01％～1.0％、磷脂0.5％～4.0％、膽固醇油酸酯0.01％～1.0％、solutolHS15 0.1％～3.0％、甘油1.0％～6.0％、油酸乙酯1-6g、甘油三酯5％～20％、油酸0.2％～3.0％、生育酚0.01％～1.0％、注射用水添至100ml。
稱取鬼臼毒素及其衍生物100-500mg溶于0-2mlDMSO、0-5ml苯甲酸卞酯和生育酚0.1-0.5g、0.1-1.0g膽固醇油酸酯中，充分溶解，加入1-6g油酸乙酯、15-20g精制植物油或中鏈油或兩者的混合物和油酸1.0g，于50℃～90℃高速攪拌使混合均勻制成油相；稱取大豆磷脂1.5g、solutolHS15 1.0g、甘油3g，加入處方量的水于50℃～80℃高速攪拌使充分分散，制成水相。油水兩相混合，于50℃～80℃高速攪拌制成初乳劑。取初乳劑，注射用水定容至處方量，調(diào)節(jié)PH值為5.0～7.0，轉(zhuǎn)移至高壓乳勻機(jī)中，反復(fù)乳化至乳滴平均粒徑≤1微米，除菌過濾充氮氣灌裝，滅菌既得。
組方4組方1鬼臼毒素及其衍生物0.01％～1.0％、奶油香精0.01％～1.0％、甾醇及其衍生物0.01％～1.0％、生育酚0.01％～1.0％、磷脂1.0％～6.0％、油酸乙酯2％-6％、植物油5％～20％、甘油1.0％～6.0％、油酸1.0％～6.0％，注射用水添至100ml。
稱取鬼臼毒素及其衍生物100-500mg溶于0-5ml苯甲酸卞酯和0-2mlDMSO中，加入生育酚0.01-1.0g、膽固醇0.1-1.0g、奶油香精0.01-0.2g，充分溶解，加入2-6g油酸乙酯、15g精制植物油或中鏈油或兩者的混合物和0.1-3g油酸，于50℃～90℃高速攪拌使混合均勻，制成油相；稱取蛋黃卵磷脂2.0g、甘油3g，加入處方量的水于50℃～80℃高速攪拌使充分分散，制成水相。油水兩相混合，于50℃～80℃高速攪拌制成初乳劑。取初乳劑，注射用水定容至處方量，調(diào)節(jié)PH值為5.0～7.0，轉(zhuǎn)移至高壓乳勻機(jī)中，反復(fù)乳化至乳滴平均粒徑≤1微米，除菌過濾，充氮氣灌裝，滅菌既得。
實施例二(納米微乳劑型)組方1鬼臼毒素及其衍生物0.01％～2.0％、甘油三酯0.01％～2.0％、solutolHS15 0.2％～5.0％、吐溫80 0.01％～2.0％、DMSO 0.01％～8％、注射用水添至100ml。
稱取鬼臼毒素及其衍生物100-500mg溶于0-2mlDMSO和0-5ml苯甲酸卞酯中，加入吐溫800.1g、solutolHS15 1.0g充分溶解，加注射用水定容至100ml，于20℃-80℃攪拌制成微乳。調(diào)節(jié)PH值為5.0～7.0，除菌過濾充氮氣灌裝，滅菌既得。
組方2鬼臼毒素及其衍生物0.01％～2.0％、磷脂0.2％～5.0％、丙二醇0.01％～2％、油酸乙酯0.01％～8％、注射用水添至100ml。
稱取鬼臼毒素及其衍生物100-500mg溶于0-2mlDMSO和0-5ml苯甲酸卞酯中，加入油酸乙酯0.5g、丙二醇0.1g、蛋黃磷脂0.2g-1.0g及適量水中，于20℃-80℃攪拌使混合均勻，加入適量注射用水容至100ml，調(diào)節(jié)PH值為5.0～7.0，于20℃-80℃攪拌制成微乳。轉(zhuǎn)移至高壓乳勻機(jī)中，反復(fù)乳化至乳滴平均粒徑≤0.5微米，除菌過濾充氮氣灌裝，滅菌既得。
組方3鬼臼毒素及其衍生物0.01％～2.0％、泊洛沙姆188 0.2％～2.0％、聚氧乙烯蓖麻油0.01％～5％、聚乙二醇400/600 0.1％～5.0％、注射用水添至100ml。
稱取鬼臼毒素及其衍生物100-500mg溶于0-2mlDMSO和0-5ml苯甲酸卞酯中，加入泊洛沙姆188 1.0g、聚氧乙烯蓖麻油0.5g及適量水中，于20℃-80℃攪拌使混合均勻；聚乙二醇400/600 1g溶于適量水中，兩者混合定容至100ml，調(diào)節(jié)PH值為5.0～7.0，于20℃-80℃攪拌制成微乳。轉(zhuǎn)移至高壓乳勻機(jī)中，反復(fù)乳化至乳滴平均粒徑≤0.5微米。除菌過濾充氮氣灌裝，滅菌既得。
組方4鬼臼毒素及其衍生物0.01％～2.0％、泊洛沙姆1880.2％～2.0％、吐溫80 0.01％～2.0％、中鏈甘油三酯0.01％～5％、羥丙基β～環(huán)糊精0.1％～5.0％、注射用水添至100ml稱取鬼臼毒素及其衍生物100-500mg溶于0-2mlDMSO和0-5ml苯甲酸卞酯，加入吐溫800.2g、泊洛沙姆1881.2g及適量水中，于20℃-80℃攪拌使混合均勻；羥丙基β～環(huán)糊精2g溶于適量水中，兩者混合定容至100ml，調(diào)節(jié)PH值為5.0～7.0，于20℃-80℃高速攪拌制成微乳。除菌過濾充氮氣灌裝，滅菌既得。
實施例三(血管刺激性試驗)試驗藥物依托泊苷和替尼泊苷乳劑，北京金方華醫(yī)藥科技有限公司提供。依托泊苷和替尼泊苷注射液組，自制，試驗時用0.9％氯化鈉注射液配制成5％溶液。
試驗動物健康家兔，體重2.3～2.5kg。
試驗方法取健康家兔14只，雌雄各半。按體重及性別分為0.9％氯化鈉注射液對照組和依托泊苷和替尼泊苷乳劑組以及依托泊苷、替尼泊苷注射液對照藥組，每組2只。依托泊苷、替尼泊苷乳劑組和依托泊苷、替尼泊苷注射液組于家兔左耳耳緣按臨床給藥濃度靜脈滴注10ml/kg，滴注速度1ml/分，每日1次，連續(xù)7日。對照組同法靜脈滴注0.9％氯化鈉注射液。除每次給藥時及給藥后觀察給藥局部表現(xiàn)外，于末次靜脈滴注后剪下藥側(cè)耳廓，常規(guī)固定后，在距靜脈滴注入針近心端1cm處，每隔1cm切取0.5cm寬標(biāo)本，共取3塊標(biāo)本。切片染色，進(jìn)行鏡下病理觀察，結(jié)果見下表血管刺激性試驗

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備注“++”嚴(yán)重、“+”少許、“-”無
權(quán)利要求
1.一種含鬼臼毒素及其衍生物的穩(wěn)定的水包油乳劑的組合物，其包含鬼臼毒素及其衍生物、油性載體、水和表面活性劑；其中鬼臼毒素及其衍生物包含下面的結(jié)構(gòu)
2.根據(jù)權(quán)利要求1中的鬼臼毒素及其衍生物主體結(jié)構(gòu)，其中的R1是指亞乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷或噻吩亞乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷；R2是指-H、-CH3或-C6H5。
3.根據(jù)權(quán)利要求2中的鬼臼毒素及其衍生物，是指依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)、4-脫氧-4-表鬼臼毒素衍生物、鬼臼亞乙苷、4-β-碳取代-4-脫氧-4’-去甲表鬼臼毒素衍生物、4′-脫甲基-4′-O-取代的-1-脫氧鬼臼毒中的一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1中的組合物，其中油性載體是指甘油三酯、脂肪酸甘油酯、脂肪酸/醇、脂肪酸乙酯、甾醇及其衍生物、聚氧乙烯脂肪酸酯中的一種或幾種；所述油性載體的用量以重量計為0.1％-30％。
5.根據(jù)權(quán)利要求1中的組合物，其中表面活性劑是指磷脂、吐溫、司盤、泊洛沙姆(poloxamer)、聚乙二醇及其衍生物中的一種或幾種；所述表面活性劑的用量以重量計為0.1％-10％。
6.根據(jù)權(quán)利要求1中的組合物，所述鬼臼毒素及其衍生物的用量以重量計為0.1％-1.0％。
7.根據(jù)權(quán)利要求1中的表面活性劑，其特征在于進(jìn)一步包含抗氧化劑α-生育酚、抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基羥基茴香醚(BHA)、二丁基羥基甲苯(BHT)中的一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求1中的表面活性劑，其特征在于進(jìn)一步包含甘油、丙二醇、乙醇、羥丙基β～環(huán)糊精中的一種或幾種。
9.根據(jù)權(quán)利要求1中的乳劑，是指鈉米乳和亞鈉米乳劑，其中鬼臼毒素及其衍生物是通過溶解在鬼臼毒素及其衍生物共溶劑中而被慘入油中的，鬼臼毒素及其衍生物和油性載體在水中形成穩(wěn)定的分散相；其中分散相的平均粒徑≤1um。
10.根據(jù)權(quán)利要求9中的鬼臼毒素及其衍生物的共溶劑，其特征在于選自苯甲酸卞酯、苯甲酸甲酯、苯甲酸乙酯、二甲基亞砜、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺中的一種或幾種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含鬼臼毒素及其衍生物的穩(wěn)定的水包油乳劑的組合物，其特征在于該組合物含鬼臼毒素及其衍生物、油性載體、水和表面活性劑；其中鬼臼毒素及其衍生物是通過溶解在鬼臼毒素及其衍生物共溶劑中而被摻入油中的；制成的乳劑是用表面活性劑將該溶液分散在水中，形成穩(wěn)定的水包油體系，其中分散相的平均粒徑≤1um。
文檔編號A61K31/365GK1686110SQ20051006955
公開日2005年10月26日 申請日期2005年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月16日
發(fā)明者張文芳 申請人:張文芳