專利名稱：吡咯烷雙環(huán)化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的吡咯烷雙環(huán)化合物、這些化合物作為藥物的應(yīng)用及含有這些化合物的藥物組合物。
宿主生物中微生物感染的治療要求有在殺滅微生物的同時(shí)對(duì)宿主的損傷盡可能小的有效手段。因此，針對(duì)致病生物特有特征的藥物對(duì)治療來(lái)說(shuō)是理想的。青霉素是這類藥物的一個(gè)極為熟知的例子。青霉素通過(guò)抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的生物合成而起作用。由于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的存活并不需要細(xì)胞壁，對(duì)受細(xì)菌感染的人給予青霉素會(huì)殺滅細(xì)菌但卻不殺傷人細(xì)胞。
但是，抗生素和抗微生物劑的使用也造成了對(duì)這些藥物的抗性增加。隨著細(xì)菌對(duì)較老的、使用較為廣泛的抗微生物劑產(chǎn)生抗性，必須開(kāi)發(fā)新的抗微生物劑以為受微生物感染的人和非人動(dòng)物提供有效的治療。
肽脫甲?；?PDF)是一種存在于原核生物如細(xì)菌中的金屬肽酶。原核生物中的蛋白質(zhì)合成是以N-甲?；琢虬彼?fMet)開(kāi)始的。蛋白質(zhì)合成開(kāi)始后，甲?；籔DF脫除。這一活性是蛋白質(zhì)成熟所必需的?，F(xiàn)已證明，PDF對(duì)細(xì)菌的生長(zhǎng)是必需的(Chang等，J.Bacteriol.，Vol.171，pp.4071-4072(1989)；Meinnel等，J.Bacteriol.，Vol.176，No.23，pp.7387-7390(1994)；Mazel等，EMBO J.，Vol.13，No.4，pp.914-923(1994))。由于真核生物的蛋白質(zhì)合成并不依靠fMet起始，所以能夠抑制PDF的藥物對(duì)開(kāi)發(fā)新的抗微生物藥物和抗菌藥物來(lái)說(shuō)是誘人的候選藥物。原核生物，包括致病原核生物，描述于Balows A.，H.G. Truper，M.Dworkin，W.Harder and K.-H.Schleifer(eds.)，“The Prokaryotes”，2nd ed.，New YorkSpringer-Verlag(1992)；Holt，J.G.(主編)，“Bergey′s Manual of SystematicBacteriology”，Vols.1-4，BaltimoreWilliams & Wilkins(1982，1986，1989)。
PDF屬于金屬蛋白酶這個(gè)大類。雖然PDF明顯具有能夠表征金屬蛋白酶的許多特征，但在許多重要方面不同于該大類的其他成員。首先，活性酶中的金屬離子似乎是Fe(II)，也有可能是另一種二價(jià)金屬陽(yáng)離子，而不是較為常見(jiàn)的鋅離子(Rajagopalan等，J.Am.Chem.Soc.，Vol.119，pp.12418-12419(1997))。其次，該二價(jià)離子似乎不僅在催化方面，而且在蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)完整性方面都起到重要的作用。第三，該二價(jià)離子的第三個(gè)配體是半胱氨酸，而不是其他金屬蛋白酶中的組氨酸或谷氨酸，該配體不是位于HEXXH基序的C末端，而是位于氨基酸序列上的遠(yuǎn)離該基序的N末端。最后，溶液結(jié)構(gòu)表明PDF的二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)與其他原型金屬蛋白酶相比有明顯的差別(見(jiàn)Meinnel等，J.Mol.Biol.，Vol.262，pp.375-386(1996))。大腸桿菌(E.coli)、噬熱脂肪芽孢桿菌(Bacillusstearothermophilus)、噬熱棲熱菌(Thermus thermophilus)的PDF已得到定性鑒定(見(jiàn)Meinnel等，J.Mol.Biol.，Vol.267，pp.749-761(1997))。Meinnel等人所研究的酶中所含的二價(jià)離子是鋅離子，從含鋅的蛋白質(zhì)中獲得了前面概述的結(jié)構(gòu)特征。該蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)已用NMR法測(cè)定(見(jiàn)O’Connell等，J.Biomol.NMR，Vol.13，No.4，pp.311-324(1999))。
金屬蛋白酶對(duì)正常代謝的很多方面都是很關(guān)鍵的。其中稱為基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)的一類金屬蛋白酶參與重建過(guò)程，例如細(xì)胞外基質(zhì)的降解。據(jù)信，這些酶在正常的或有益的生物學(xué)現(xiàn)象中起作用，如妊娠過(guò)程中黃體的形成(見(jiàn)Liu等，Endocrinology，Vol.140，No.11，pp.5330-5338(1999))、傷口愈合(Yamagiwa等，Bone，Vol.25，No.2，pp.197-203(1999))、以及健康兒童的骨骼生長(zhǎng)(Bord等，Bone，Vol.23，No.1，pp.7-12(1998))。在許多疾病如癌癥、關(guān)節(jié)炎和自身免疫疾病中都曾并發(fā)涉及金屬蛋白酶的紊亂。
由于MMP在正常生理過(guò)程中的重要性，較為理想的是開(kāi)發(fā)出抑制只存在于原核生物中的金屬蛋白酶PDF，同時(shí)又避免對(duì)MMP有明顯抑制的藥物。另外，如果抑制PDF的治療效果勝過(guò)由于MMP抑制造成副作用的風(fēng)險(xiǎn)，則也可以使用同時(shí)也抑制MMP的PDF抑制劑。
現(xiàn)已開(kāi)發(fā)出許多種化合物作為MMP和其他金屬蛋白酶的候選抑制劑，另外也有許多研究工作致力于尋找這些化合物及相關(guān)化合物的合成方法(見(jiàn)Izquierdo-Martin等，J.Am.Chem.Soc.，Vol.114，pp.325-331(1992)；Cushman等，Chapter 5，“Specific Inhibitors of Zinc Metallopeptidases”，Topics in Molecular Pharmacology，Burgen & Roberts，eds.(1981)；Mohler等，Nature，Vol.370，pp.218-220(1994)；Gearing等，Nature，Vol.370，pp.555-557(1994)；McGeehan等，Nature，Vol.370，pp.558-561(1994)；美國(guó)專利4,052,511、4,303,662、4,311,705、4,321,383、4,599,361、4,804,676、5,128,346、5,256,657、5,268,384、5,447,929、5,453,423、5,552,419、5,614,625、5,643,908、5,712,300、5,869,518；歐洲專利公開(kāi)EP236872、EP274453、EP334244、EP423943、EP489577、EP489579、EP497192、EP574758；PCT國(guó)際專利申請(qǐng)公開(kāi)WO90/05716、WO90/05719、WO91/02716、WO92/13831、WO92/22523、WO93/09090、WO93/09097、WO93/20047、WO93/24449、WO93/24475、WO94/02446、WO94/02447、WO94/21612、WO94/25434、WO94/25435、WO95/33731、WO96/25156、WO96/26918、WO97/30707、WO97/49674、WO98/55449、WO99/02510)。
對(duì)PDF抑制劑的研究工作比起MMP抑制劑來(lái)要少得多。國(guó)際專利申請(qǐng)WO99/39704敘述了N-甲酰基羥胺衍生物。Durand等人(Arch.Biochem.Biophys.，Vol.367，No.2，pp.297-302(1999))敘述了PDF的肽醛抑制劑。Hao等人(Bioehem.，Vol.38，pp.4712-4719(1999))敘述了PDF抑制劑(S)-2-O-(H-膦酰氧基)-L-己?；?L-亮氨酰-對(duì)硝基苯胺。Hu等人(Bioorg.Med.Chem.Lett.，Vol.8，pp.2479-2482(1998))討論了PDF的肽基H-膦酸酯抑制劑。Meinnel等人(Biochem.，Vol.38，No.1，pp.4288-4295(1999))介紹了甲酰化肽和假肽是PDF抑制劑。
鑒定出能夠作用于對(duì)現(xiàn)有抗生素有抗性的細(xì)菌的新抗生素是十分重要的，但對(duì)PDF抑制劑進(jìn)行的研究工作卻相對(duì)較少。有鑒于此，希望開(kāi)發(fā)出可供作為抗菌劑和抗微生物劑評(píng)定和使用的新的PDF抑制劑。本發(fā)明滿足了這一需要。
具體地說(shuō)，本發(fā)明提供一種N-[1-氧-(任選2-氮雜)-2-烴基-3-(羧基或硫羥基或羥基氨基羰基或N-羥基甲酰氨基)-丙基]-(芳基或雜芳基)-氮雜環(huán)4-7烷或硫雜氮雜環(huán)4-7烷(本申請(qǐng)中統(tǒng)稱為“本發(fā)明化合物”)、其鹽或其前藥，例如式(I)的化合物或其鹽或其前藥 其中R1為與環(huán)氮原子的α位或β位連接的芳基或雜芳基；R2為氫、鹵素或羥基；R3為氫、鹵素、C1-10烴基、C1-10雜烴基，或(R2和R3)共同形成C4-7環(huán)烷基，前提是當(dāng)R3為鹵素時(shí)，R2不為羥基；X是-CH2-或-S-；W是NR5或CR4R5，其中R4是氫、鹵素、C1-10烴基或C1-10雜烴基，R5是C1-10烴基，或(R4和R5)共同形成C4-7環(huán)烷基，前提是當(dāng)W是NR5時(shí)，R2和R3是氫、C1-10烴基或雜烴基；Y是-COOH、-SH、-N(OH)-CHO或-CO-NH(OH)，前提是當(dāng)Y是-N(OH)-CHO或-SH時(shí)，R2是氫，R3是氫、C1-10烴基或C1-10雜烴基；n為0至3，前提是當(dāng)n是0時(shí)，X是-CH2-。
除非特別指明，本申請(qǐng)中使用的下列術(shù)語(yǔ)具有以下的含義。
術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷”或“環(huán)烷基”是含有3-6個(gè)環(huán)碳原子的飽和環(huán)烴基，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基。
術(shù)語(yǔ)“氮雜環(huán)4-7烷”含有一個(gè)環(huán)雜原子，該雜原子為氮。包括該雜原子在內(nèi)，它含有4-7個(gè)、優(yōu)選5個(gè)環(huán)原子。
術(shù)語(yǔ)“硫雜氮雜環(huán)4-7烷”含有二個(gè)環(huán)雜原子，即氮和硫。包括這兩個(gè)雜原子在內(nèi)，它含有4-7個(gè)、特別是5個(gè)環(huán)原子。
氮雜環(huán)4-7烷和硫雜氮雜環(huán)4-7烷在環(huán)氮原子的α位或β位被如下定義的雜芳基或芳基取代。
術(shù)語(yǔ)“烴基”指飽和或不飽和脂族基、環(huán)烷基、或取代烴基，包括具有1-10個(gè)碳原子的直鏈、支鏈和環(huán)狀基團(tuán)，優(yōu)選具有1-7個(gè)、尤其是1-4個(gè)碳原子的飽和低級(jí)烴基。烴基的實(shí)例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、新戊基、正己基或正庚基、環(huán)丙基，尤其是正丁基。
術(shù)語(yǔ)“取代烴基”指被1個(gè)或更多個(gè)取代基、優(yōu)選1-3個(gè)取代基取代的烴基，所述取代基包括但不限于諸如鹵素、低級(jí)烴氧基、羥基、巰基、羧基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基等取代基。取代烴基的實(shí)例包括但不限于-CF3、-CF2-CF3、羥甲基、1-或2-羥乙基、甲氧甲基、1-或2-乙氧乙基、羧甲基、1-或2-羧乙基、環(huán)戊基乙基等。
術(shù)語(yǔ)“芳基”指具有一個(gè)單環(huán)(包括但不限于諸如苯基等基團(tuán))或多個(gè)稠合環(huán)(包括但不限于諸如萘基或蒽基等基團(tuán))的6-14個(gè)碳原子的芳香碳環(huán)基團(tuán)，尤其是苯基。芳基可以未被取代或被1個(gè)或更多個(gè)取代基(優(yōu)選1-3個(gè)取代基)取代，所述取代基包括但不限于諸如低級(jí)烴基、鹵素和低級(jí)烴氧基等基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“雜芳基”指4-7元單環(huán)芳香雜環(huán)或由一個(gè)4-7元單環(huán)芳香雜環(huán)和一個(gè)稠合苯環(huán)組成的雙環(huán)。該雜芳基在其環(huán)內(nèi)具有至少一個(gè)雜原子，優(yōu)選一或二個(gè)雜原子，包括但不限于諸如N、O和S等雜原子。代表性的實(shí)例包括但不限于噁唑基、噻唑基、吡啶基和咪唑基、苯并咪唑基、異噁唑基、苯并噻唑基等。雜芳基可以未被取代或被1個(gè)或更多個(gè)取代基取代，所述取代基包括但不限于低級(jí)烴基、鹵代低級(jí)烴基、鹵素、羥基、低級(jí)烴氧基、芳基(優(yōu)選芳基)等。
術(shù)語(yǔ)“雜烴基”指具有1-10個(gè)碳原子的如上定義的飽和或不飽和烴基，尤其是作為該基團(tuán)的主鏈、支鏈或環(huán)鏈一部分的、含有一個(gè)或更多個(gè)雜原子的1-4個(gè)碳原子的飽和低級(jí)雜烴基。雜原子獨(dú)立地選自-NR-(其中R是氫或烴基)、-S-、-O-和-P-，優(yōu)選-NR-(其中R是氫或烴基)和/或-O-。雜烴基可以與分子的其余部分在雜原子(如果有可利用的價(jià)鍵)或碳原子處連接。雜烴基的實(shí)例包括但不限于諸如-O-CH3、-CH2-O-CH3、-CH2-CH2-O-CH3、-S-CH2-CH2-CH3、-CH2-CH(CH3)-S-CH3和-CH2-CH2-NH-CH2-CH2-等基團(tuán)。
該雜烴基可以未被取代或被1個(gè)或更多個(gè)取代基、優(yōu)選1-3個(gè)取代基取代，所述取代基包括但不限于烴基、鹵素、烴氧基、羥基、巰基、羧基和苯基。該基團(tuán)上的雜原子及碳原子可以被取代。雜原子也可以是氧化形式。
本申請(qǐng)中所用的術(shù)語(yǔ)“烴氧基”是指與氧原子連接的C1-10烴基，優(yōu)選具有1-7個(gè)碳原子的飽和低級(jí)烴氧基。烴氧基的實(shí)例包括但不限于諸如甲氧基、乙氧基、叔丁氧基和烯丙氧基等基團(tuán)。
本申請(qǐng)中所用的術(shù)語(yǔ)“鹵素”是指氯、溴、氟、碘，尤其是氟。
“保護(hù)基”是指具有下列特征的化學(xué)基團(tuán)1)能夠以良好的產(chǎn)率與所期望的官能團(tuán)選擇性反應(yīng)，生成受保護(hù)底物，而該受保護(hù)底物對(duì)需要保護(hù)的預(yù)定反應(yīng)是穩(wěn)定的；2)可以從受保護(hù)底物上選擇性脫除，生成所期望的官能團(tuán)；3)可以被與這些預(yù)定反應(yīng)中存在或生成的其他官能團(tuán)相容的試劑以良好的產(chǎn)率脫除。適宜的保護(hù)基的例子見(jiàn)于Greene等，“ProtectiveGroups in Organic Synthesis”，2nd Ed.，John Wiley & Sons，Inc.，NewYork(1991)。優(yōu)選的氨基保護(hù)基包括但不限于芐氧羰基(CBz)、叔丁氧羰基(Boc)、叔丁基二甲基硅烷基(TBDMS)、9-芴基甲氧羰基(Fmoc)，或適宜的光不穩(wěn)定性保護(hù)基，例如6-硝基藜蘆氧羰基(Nvoc)、硝基胡椒基、芘基甲氧羰基、硝基芐基、二甲基二甲氧基芐基、5-溴-7-硝基二氫吲哚基等。優(yōu)選的羥基保護(hù)基包括Fmoc、TBDMS、光不穩(wěn)定性保護(hù)基(例如硝基藜蘆氧基甲基醚(Nvom))、Mom(甲氧基甲基醚)和Mem(甲氧基乙氧基甲基醚)。特別優(yōu)選的保護(hù)基包括NPEOC(4-硝基苯乙氧羰基)和NPEOM(4-硝基苯乙氧基-甲氧羰基)。
應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明的化合物，例如式(I)化合物，可以以旋光異構(gòu)體、外消旋體或非對(duì)映異構(gòu)體形式存在。例如，R2和R3為不同殘基的式(I)化合物是不對(duì)稱的，因此可以有R或S構(gòu)型。應(yīng)該理解，本發(fā)明包括所有對(duì)映體及其混合物。同樣的表述也適用于所提到的具有不對(duì)稱碳原子的起始原料。
本發(fā)明化合物，例如式(I)化合物，可以以游離形式或鹽形式存在，例如以可藥用鹽的形式存在。化合物的“可藥用鹽”指生理上或藥學(xué)上可接受的鹽，該鹽具有母體化合物的所期望的藥理活性，并且不產(chǎn)生不良的毒理效應(yīng)。這類鹽包括(1)與無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸形成的酸加成鹽，無(wú)機(jī)酸的例子有鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；有機(jī)酸的例子有乙酸、丙酸、己酸、環(huán)戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、蘋果酸、馬來(lái)酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、3-(4-羥基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙烷二磺酸、2-羥基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟腦磺酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羥基萘甲酸、水楊酸、硬脂酸、粘康酸等；或者(2)母體化合物中存在的酸性質(zhì)子被金屬離子(如堿金屬離子、堿土金屬離子或鋁離子)置換或者與有機(jī)堿(如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等)配合而形成的鹽。
本發(fā)明化合物，例如式(I)化合物，可以起前藥的作用。“前藥”是指在該前藥給予哺乳動(dòng)物對(duì)象時(shí)能夠在體內(nèi)釋放出式(I)的活性母體藥物的任何化合物。式(I)化合物的前藥的制備方法是修飾式(I)化合物中存在的官能團(tuán)，使得該修飾可以在體內(nèi)裂解而釋放出母體化合物。前藥包括這樣一些式(I)化合物，其中有一個(gè)羥基、氨基或巰基與任何可以在體內(nèi)裂解而分別再生出游離的羥基、氨基或巰基的基團(tuán)鍵接。前藥的例子包括但不限于式(I)化合物中的羥基官能團(tuán)的酯(例如乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物)、氨基甲酸酯(例如N，N-二甲氨基羰基)等。
在本發(fā)明化合物，例如式(I)化合物中，以下含義本身或在任何亞組合中是優(yōu)選的1.Y是-COOH、-SH、-CO-NH(OH)或-N(OH)-CHO，優(yōu)選-CO-NH(OH)。
2.X是-CH2-。
3.R2是羥基、氟或氫。
4.R3是氫。
5.W是CR4R5，其中R4是氫，R5是氫或C1-10烴基，優(yōu)選正丁基。
6.n是1。
7.R1是苯基或雜芳基。
8.作為R1的雜芳基是噁唑基、噻唑基、吡啶基和苯并咪唑基。當(dāng)雜芳基是噁唑基時(shí)，該噁唑基可以被低級(jí)烴基尤其是甲基取代。當(dāng)雜芳基是噻唑基時(shí)，該噻唑基可以被一個(gè)或二個(gè)選自低級(jí)烴基和苯基的取代基取代。優(yōu)選R1是噁唑基或甲基噁唑基。
9.R1優(yōu)選與式(I)所示的氮雜環(huán)烷的α位連接。
本發(fā)明化合物，例如式(I)化合物，可以按照有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域公知的方法制備。式(I)化合物可以如下制備使式II化合物與羥胺化試劑如NH2OH反應(yīng)， 其中X、R1、R2、R3、W和n如上所限定，Ya是COOH或其官能衍生物，需要時(shí)將以游離形式獲得的產(chǎn)物化合物轉(zhuǎn)化成鹽形式，或者將以鹽形式獲得的產(chǎn)物化合物轉(zhuǎn)化成游離形式。
作為Ya的COOH的官能衍生物是例如鹵化物，例如酰氯、酯或酸酐。
以上反應(yīng)可以按照本領(lǐng)域已知的方法或反應(yīng)方案A-K和下面的實(shí)施例中所公開(kāi)的方法進(jìn)行。
盡管未具體敘述起始原料的制備，但是這些化合物通常是已知的或可以用與本領(lǐng)域已知方法類似的方法或如后面的實(shí)施例所公開(kāi)的方法來(lái)制備。
使用以下縮寫AcOH＝乙酸BuLi＝正丁基鋰DAST＝二乙氨基三氟化硫DCC＝二環(huán)己基碳二亞胺
DCE＝二氯乙烷DCM＝二氯甲烷DIC＝二異丙基碳二亞胺DIAD＝偶氮二甲酸二異丙基酯DIEA＝二異丙基乙胺DME＝1，2-二甲氧基乙烷DMF＝二甲基甲酰胺DMSO＝二甲亞砜EDC＝N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺EtOAc＝乙酸乙酯HATU＝O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸鹽LDA＝二異丙基氨基鋰MeOH＝甲醇NaHMDS＝六甲基二硅胺烷基鈉PyBOP＝苯并三唑-1-基-氧-三-吡咯烷六氟磷酸鏻rt＝室溫TEA＝三乙胺TFA＝三氟乙酸THF＝四氫呋喃p-TSA＝對(duì)甲苯磺酸TMSCI＝三甲基硅烷基氯通用方法AN-羥基-3-氨基羰基丙酰胺
步驟1于-78℃下，在4-(S)-芐基噁唑烷-2-酮(56mmol)(Aldrich，Milwaukee，WI)的THF溶液中，加入2.5M正丁基鋰的己烷溶液(22.4ml，56mmol)，于-78℃下攪拌反應(yīng)物2小時(shí)。經(jīng)套管加入酰氯A-1(R＝己?；?，65mmol)在THF中的-78℃溶液，混合物在-78℃下攪拌2小時(shí)，然后使其升溫至室溫，再攪拌過(guò)夜。然后用飽和NH4Cl水溶液停止反應(yīng)，用EtOAc萃取，干燥，用硅膠色譜法(己烷/EtOAc)純化，得到N-己?；?4-(S)-芐基噁唑烷-2-酮(A-2)。
步驟2于-78℃下，在N-己?；?4-(S)-芐基噁唑烷-2-酮A-2(7.3mmol)的THF溶液中，加入1.0M NaHMDS(8.8mmol)，于-78℃下攪拌反應(yīng)物1小時(shí)。然后滴加溴乙酸甲酯(8.8mmol)的THF溶液，所得混合物于-78℃下攪拌1小時(shí)，然后于室溫下攪拌過(guò)夜。用NH4Cl停止反應(yīng)，濃縮，然后懸浮于EtOAc中，用0.5N HCl和鹽水洗滌，用硅膠色譜法(EtOAc/己烷)純化，得到3-(R)-正丁基-3-[4-(S)-芐基噁唑烷-2-酮-3-基羰基]丙酸甲酯(A-3)。
步驟3于0℃下，在3-(R)-正丁基-3-[4-(S)-芐基噁唑烷-2-酮-3-基羰基]丙酸甲酯A-3的THF/水溶液中，加入30％H2O2(5.76mmol)和固體氫氧化鋰(1.44mmol)，于0℃下攪拌反應(yīng)物3小時(shí)。用2.0M Na2SO3停止反應(yīng)，濃縮，懸浮于EtOAc中，再進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的水性后處理。粗產(chǎn)物用硅膠色譜法(MeOH/DCM)純化，得到3-(R)-正丁基丙酸甲酯(A-4)。
步驟4在單保護(hù)的琥珀酸酯(例如，2-(R)-丁基琥珀酸單-4-甲基酯A-4(1mmol)的DMF溶液中，加入胺A-5(1mmol)、DIEA (0.4ml，2.3mmol)和活化劑(例如EDC、PyBOP、DIC、DCC等，1mmol)。將混合物攪拌過(guò)夜，然后用EtOAc稀釋，用HCl水溶液(1N)、水、飽和NaHCO3、鹽水洗滌，然后干燥(Na2SO4)。將濾液濃縮，然后用硅膠(Merck 60；EtOAc/己烷)純化，得到3-氨基羰基丙酸酯A-6。
步驟5用二氧雜環(huán)己烷(1ml)和羥胺(50％水溶液，2ml)處理3-氨基羰基丙酸酯A-6(0.1mmol)1-3天，然后用制備性反相(C18)HPLC純化，得到所需的N-羥基-3-氨基羰基丙酰胺(A-7)。
通用方法B2(S)-羥基-3(R)-[2(S)-噁唑-2-基-吡咯烷-1-羰基]-庚酸羥基酰胺的合成步驟1于0℃下，在二異丙胺(14ml，100mmol)的THF溶液中，于10分鐘內(nèi)加入BuLi(2.5M己烷溶液，40ml，100mmol)?；旌衔镉谑覝叵聰嚢?0分鐘，然后將該混合物經(jīng)套管加入到-78℃的馬來(lái)酸二甲酯B-1(7.71g，47.6mmol)在THF(130ml)中的溶液中。使混合物在2小時(shí)內(nèi)升溫至-20℃，然后再冷卻至-78℃。加入巴豆基溴(8.1g，60mmol)，然后使混合物升溫至室溫，再攪拌過(guò)夜。然后將該溶液冷卻至-10℃，再用NH4Cl(10％，100ml)停止反應(yīng)。除去THF，殘余物用EtOAc(2×200ml)萃取。有機(jī)層合并后用HCl(1N，3×50ml)、飽和NaHCO3水溶液(3×50ml)和鹽水洗滌，然后用無(wú)水Na2SO4干燥。溶液經(jīng)過(guò)濾和濃縮，得到的殘余物用硅膠(EtOAc/己烷1∶4)純化，得到(2S，3R)-3-(2-丁烯基)-2-羥基琥珀酸二甲酯B-2。
步驟2在(2S，3R)-3-(2-丁烯基)-2-羥基琥珀酸二甲酯B-2(2.5g)的EtOAc(50ml)溶液中加入10％Pd/C(0.25g)，在氫氣氛下攪拌反應(yīng)物20小時(shí)。懸浮液用硅藻土過(guò)濾，用EtOAc(3×)洗滌，然后真空濃縮，得到(2S，3R)-3-(正丁基)-2-羥基琥珀酸二甲酯B-3。
步驟3在(2S，3R)-3-(正丁基)-2-羥基琥珀酸二甲酯B-3的MeOH(28ml)溶液中加入NaOH(2.2g，55mmol)的水(28ml)溶液。24小時(shí)后除去MeOH，粗反應(yīng)物用HCl(6N，12ml)酸化至pH＝1，然后用EtOAc(3×50ml)萃取。有機(jī)層合并后干燥(Na2SO4)，濃縮，得到(2S，3R)-3-(正丁基)-2-羥基琥珀酸B-4。
步驟4在(2S，3R)-3-(正丁基)-2-羥基琥珀酸B-4(300mg，1.58mmol)在2，2-二甲氧基丙烷(10ml)中的溶液中，加入p-TSA(20mg)，在室溫下攪拌反應(yīng)物16小時(shí)。溶液用DCM稀釋，用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)，然后用硅膠色譜法純化，得到1.2mmol 2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸B-5。
步驟52-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸B-5(1.2mmol)的DMF(10ml)溶液中加入雙環(huán)吡咯烷A-5(1.2mmol)、HATU(1.2mmol)和DIEA(2.5mmol)?；旌衔飻嚢柽^(guò)夜，然后濃縮，用硅膠進(jìn)行純化(EtOAc/己烷1∶4)，得到275mg所需酰胺B-6。
步驟6在冷的B-6二氧雜環(huán)己烷溶液(5ml)中，加入50％羥胺水溶液(400μl)，溶液于4℃下攪拌8小時(shí)。然后該粗反應(yīng)混合物用制備性反相(C18)HPLC純化，得到2(S)-羥基-3(R)-[2(S)-噁唑-2-基-吡咯烷-1-羰基]-庚酸羥基酰胺B-7。
通用方法C2-氟-3(R)-(2-S-噁唑-2-基-吡咯烷-1-羰基)-庚酸羥基酰胺的合成 步驟1在2，2-二甲基-5-[2(S)-噁唑-2-基-吡咯烷-1-羰基-戊基]-[1，3]二氧戊環(huán)-4-酮B-6(5mmol，50％)(5mmol)的MeOH(20ml)溶液中，加入甲醇鈉(催化劑，pH調(diào)至10)，將溶液攪拌1小時(shí)。加入Amberlite IR-120樹(shù)脂(H+型)，然后將溶液過(guò)濾并濃縮，得到2(S)-羥基-3-(2(S)-噁唑-2-基-吡咯烷-1-羰基)-庚酸甲酯C-1。
步驟2于-20℃下，在2(S)-羥基-3-(2(S)-噁唑-2-基-吡咯烷-1-羰基)-庚酸甲酯C-1(5mmol)的DCM(5ml)溶液中加入DAST(15mmol)。溶液在室溫下攪拌16小時(shí)。反應(yīng)混合物用NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)并濃縮，然后用硅膠(EtOAc/己烷)純化，得到2-(R/S)-氟-3-(2(S)-噁唑-2-基-吡咯烷-1-羰基)-庚酸甲酯C-2。
該產(chǎn)物的1H NMR分析表明S/R非對(duì)映異構(gòu)體的比例約為1∶2。用硅膠柱色譜法分離這兩種異構(gòu)體。
步驟3在中間體C-2(0.15mmol，每種異構(gòu)體分別處理)的二氧雜環(huán)己烷(1ml)溶液中，加入50％羥胺水溶液(0.5ml)，于5℃下攪拌反應(yīng)物16小時(shí)。然后該粗反應(yīng)混合物用制備性反相(C18)HPLC純化，得到2-氟-3(R)-(2-S-噁唑-2-基-吡咯烷-1-羰基)-庚酸羥基酰胺C-3。
通用方法DN-羥基-N-{2-R-[2-S-(噁唑-2-基)-吡咯烷-1-羰基]-己基}甲酰胺 步驟1如上所述制備2-正丁基丙烯酸(D-2)(R＝正丁基)。
步驟24-芐基-3-(2-丁基丙烯?；?-噁唑烷-2-酮(D-3)將2-正丁基丙烯酸(9.90g，77.2mmol，1當(dāng)量)溶解于無(wú)水THF(260ml)中，并在氮?dú)鈯A層下冷卻至-78℃。以一定的速度加入Hunig堿(17.5ml，100.4mmol，1.3當(dāng)量)和新戊酰氯(9.5ml，77.2mmol，1當(dāng)量)，使溫度保持在-60℃以下。將混合物在-78℃下攪拌30分鐘，溫?zé)嶂潦覝?小時(shí)，最后再冷卻回-78℃。
在另一個(gè)燒瓶中，將(S)-(-)-4-芐基-2-噁唑烷酮(13.49g，77.24mmol)溶解于無(wú)水THF(150ml)中，并在氮?dú)庀吕鋮s至-78℃。于-78℃下緩慢加入正丁基鋰(2.5M己烷溶液，30.9ml，77.2mmol，1當(dāng)量)，將混合物在室溫下攪拌30分鐘。將所得的陰離子經(jīng)套管緩慢轉(zhuǎn)移至原來(lái)的反應(yīng)容器中。使該混合物升溫至室溫，并于室溫下攪拌過(guò)夜。用1M KHCO3停止反應(yīng)，減壓除去溶劑。殘余物在EtOAc和水之間分配。有機(jī)層用鹽水洗滌，用無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾，濃縮，得到黃色油狀物，經(jīng)閃式色譜純化(己烷∶EtOAc＝4∶1)，得到標(biāo)題化合物D-3，為白色固體。
1H NMR(CDCl3)δ7.39-7.20(m，5H)，5.42-5.40(d，J＝7.14Hz，2H)，4.76-4.68(m，1H)，4.29-4.156(m，2H)，3.40-3.35(dd，J＝3.57，13.46Hz，1H)，2.86-2.79(dd，J＝9.34，13.46Hz，1H)，2.42-2.37(t，J＝7.69Hz，2H)，1.55-1.30(m，4H)，0.951-0.904(t，J＝7.14Hz，3H).ES-MS計(jì)算值C17H21NO3(287.35)；實(shí)測(cè)值288.5 [M+H]。
步驟34-芐基-3-[2-(芐氧基氨基甲基)-己酰基]-噁唑烷-2-酮(對(duì)甲苯磺酸鹽)將化合物D-3(8.25g，28.7mmol)與O-芐基羥胺(7.07g，57.4mmol，2當(dāng)量)混合，于氮?dú)庀率覝財(cái)嚢?0小時(shí)。將該混合物溶解于EtOAc中，加入p-TSA(21.84g，114.8mmol，4當(dāng)量)，沉淀出白色固體狀的過(guò)量O-芐基羥胺。濾掉白色固體，濃縮濾液得到粗制黃色油狀物。在該粗制黃色油狀物中加入過(guò)量乙醚，冷卻至0℃30分鐘，過(guò)濾收集所得固體并真空干燥，得到標(biāo)題化合物，為白色結(jié)晶固體(單個(gè)非對(duì)映異構(gòu)體)。
1H NMR(CDCl3)δ8.07-8.04(d，J＝8.24Hz，2H)，7.59-7.39(m，10H)，7.18-7.15(d，J＝7.69Hz，2H)，5.49-5.40(q，J＝8.61Hz，2H)，4.65-4.56(m，1H)，4.25-4.08(m，3H)，3.83-3.79(d，J＝13.46Hz，1H)，3.15-3.11(d，J＝13.46Hz，1H)，2.56(s，3H)，1.83-1.67(m，4H)，1.40(bs，4H)，1.00-0.951(t，J＝6.87，3H).ES-MS計(jì)算值C24H30N2O4*C7H8O3S(582.71)；實(shí)測(cè)值411.7[M+H]游離堿。
步驟44-芐基-3-[2-(芐氧基氨基甲基)-己酰基]-噁唑烷-2-酮(D-5)在p-TSA鹽(22.9g，39.3mmol)的EtOAc(400ml)溶液中加入1MNa2CO3(200ml，5當(dāng)量)，室溫?cái)嚢?0分鐘。分開(kāi)各層，水層用EtOAc萃取。有機(jī)層合并后用無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾，濃縮，得到標(biāo)題化合物，為淺色不透明油狀物。
1H NMR(CDCl3)δ7.57-7.38(m，10H)，4.98-4.90(m，2H)，4.87-4.79(m，1H)，4.38-4.28(m，3H)，3.64-3.57(dd，J＝9.21，12.64Hz，1H)，3.46-3.36(td，J＝3.76，13.05Hz，2H)，2.68-2.60(dd，J＝10.03，13.46Hz，1H)，1.90-1.88(m，1H)，1.78-1.71(m，1H)，1.51-1.44(m，4H)，1.10-1.06(t，J＝6.73Hz，3H).ES-MS計(jì)算值C24H30N2O4(410.51)；實(shí)測(cè)值411.7[M+H]。
步驟5N-[2-(4-芐基-2-氧-噁唑烷-3-羰基)-己基]-N-芐氧基-甲酰胺(D-6)將化合物D-5(5.38g，13.1mmol，1當(dāng)量)的甲酸(7.4ml，196.6mmol，15當(dāng)量)溶液在氮?dú)庀吕鋮s至0℃。在另一個(gè)燒瓶中，將甲酸(7.4ml，196.6mmol，15當(dāng)量)在氮?dú)庀吕鋮s至0℃，滴加乙酸酐(2.47ml，26.2mmol，2當(dāng)量)。該溶液于0℃下攪拌15分鐘。將生成的混合酸酐用注射器緩慢移至原來(lái)的反應(yīng)容器。將該混合物于0℃下攪拌1小時(shí)，再在室溫下攪拌3小時(shí)。濃縮混合物，用DCM吸收，依次用飽和NaHCO3和鹽水洗滌。有機(jī)層用無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾，濃縮，所得的不透明油狀物用閃式色譜(先用己烷∶EtOAc＝2∶1，再用DCM∶丙酮＝9∶1)純化，得到標(biāo)題化合物，為無(wú)色油狀物。
1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ8.38(s，0.7H)，8.21(s，0.3H)，7.54-7.35(m，10H)，5.0-5.00(m，2H)，4.88-4.81(m，1H)，4.39-4.29(m，4H)，4.07-4.03(m，1H)，3.43-3.39(m，1H)，2.66-2.58(m，1H)，1.89(bs，1H)，1.73(bs，1H)，1.49-1.44(m，3H)，1.10-1.06(t，J＝6.73Hz，3H).ES-MS計(jì)算值C25H30N2O5(438.52)；實(shí)測(cè)值439.7[M+H]。
步驟62-[(芐氧基甲酰氨基)-甲基]-己酸(D-7)將化合物D-6(0.163g，0.372mmol，1當(dāng)量)溶解于THF(4.5ml)和水(1.5ml)中，并冷卻至0℃。滴加過(guò)氧化氫(30％水溶液，228μl，2.23mmol，6當(dāng)量)，然后緩慢加入氫氧化鋰(0.019g，0.446mmol，1.2當(dāng)量)的水(350μl)溶液。所得混合物于0℃下攪拌1.5小時(shí)。于0℃下在該堿性反應(yīng)混合物中加入Amberlite IR-120樹(shù)脂(H+)至pH4-5。濾出該樹(shù)脂，用EtOAc沖洗。濃縮該混合物以除去THF，然后用EtOAc吸收。分出水層，有機(jī)層用無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾，濃縮，所得的不透明油狀物用閃式色譜(先用DCM∶丙酮＝4∶1，再用丙酮∶甲醇＝99∶1)純化，得到標(biāo)題化合物D-7，為無(wú)色油狀物。
1H NMR(DMSO-d6，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ11.2(s，1H)，8.20(s，0.2H)，7.95(s，0.8H)，7.33-7.41(m，5H)，4.87(s，2H)，3.71(bs，2H)，2.50(bs，1H)，1.35-1.45(m，2H)，1.14-1.28(m，4H)，0.857-0.813(t，J＝13.1Hz，3H).ES-MS計(jì)算值C15H21NO4(279.33)；實(shí)測(cè)值278.5[M-H]，302.5[M+Na]。
步驟71-{2-[(芐氧基甲酰氨基)-甲基]-己?；鶀-吡咯烷-2-甲酸酰胺在化合物D-7(0.190g，0.680mmol，1當(dāng)量)的無(wú)水二氧雜環(huán)己烷(4ml)溶液中，在氮?dú)庀掠谑覝匾来渭尤際unig堿(391μl，2.24mmol，3.3當(dāng)量)、化合物A-5(0.748mmol，1.1當(dāng)量)和HATU(0.284g，0.748mmol，1.1當(dāng)量)。所得混合物于室溫下攪拌22小時(shí)。使該混合物在EtOAc和10％檸檬酸之間分配。有機(jī)層用鹽水和飽和NaHCO3洗滌，用無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾，濃縮。殘余物用閃式色譜(DCM∶丙酮＝3∶1)純化，得到標(biāo)題化合物，為無(wú)色油狀物。
步驟81-{2-[(甲?；u基氨基)-甲基]-己?；鶀-吡咯烷-2-甲酸酰胺(D-8)于氮?dú)庀?，在上述化合?0.550mmol，1當(dāng)量)在1∶1 EtOAc/乙醇溶液(12ml)中的溶液中，加入Pd-C(0.059g，0.1當(dāng)量)?；旌衔镌跉錃夥障聰嚢?6小時(shí)。用硅藻土過(guò)濾除去催化劑。濃縮濾液，殘余物用制備性TLC(DCM∶丙酮＝2∶1)純化，得到標(biāo)題化合物，為無(wú)定形固體。
通用方法E2-吡咯烷-2-基-噁唑(氫溴酸鹽)的合成 如下制備2-(S)-吡咯烷-2-基-噁唑E-5(X＝CH2，n＝1)。
步驟12-氯羰基-吡咯烷-1-甲酸芐酯(E-2)
在氮?dú)庀拢瑢-L-Pro-OH E-1(10.0g，40.1mmol，1當(dāng)量)和亞硫酰氯(30ml，401.2mmol，10當(dāng)量)在DCM(200ml)中的混合物加熱回流20分鐘，并真空濃縮。殘余油狀物與甲苯一起共蒸發(fā)3次，濃縮，得到Z-L-Pro-Cl，為不透明油狀物。
步驟22-(三甲基硅烷基)-2H-[1，2，3]三唑(E-3)在氮?dú)庀拢谑覝卦?H-1，2，3-三唑(4.98g，72.10mmol，1當(dāng)量)在無(wú)水苯(145ml)中的溶液中，加入TEA(11.05ml，79.31mmol，1當(dāng)量)，然后滴加TMSCl(9.15ml，72.10mmol，1當(dāng)量)。出現(xiàn)白色沉淀。反應(yīng)混合物于室溫和氮?dú)庀聰嚢?小時(shí)。過(guò)濾除去所得沉淀物，并用無(wú)水苯充分洗滌。小心地濃縮濾液，以避免高揮發(fā)性產(chǎn)物蒸發(fā)，得到定量產(chǎn)率的帶有少量苯的TMS-三唑。
步驟32-噁唑-2-基-吡咯烷-1-甲酸芐酯(E-4)在室溫和氮?dú)庀拢赥MS-三唑(14.17g，100.3mmol，1當(dāng)量)在環(huán)丁砜(290ml)中的溶液中，滴加Z-L-Pro-Cl(26.85g，100.3mmol，1當(dāng)量)在環(huán)丁砜(70ml)中的溶液。所得混合物在室溫下攪拌30分鐘，然后將溫度提高到140℃保持3小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫后，倒入過(guò)量的鹽水中，用乙醚萃取。乙醚萃取液用鹽水洗滌，用無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)。殘余物用閃式色譜(DCM∶丙酮＝9∶1)純化，得到標(biāo)題化合物，為淺黃色油狀物。
1H NMR(CDCl3)δ7.79-7.70(s，1H)，7.67-7.47(m，5H)，7.37-7.23(m，1H)，5.42-5.19(m，2H)，3.92-3.69(m，2H)，2.49-2.14(m，5H).ES-MS計(jì)算值C15H16N2O3(272.30)；實(shí)測(cè)值273.5[M+H]。
步驟42-吡咯烷-2-基-噁唑(氫溴酸鹽)(E-5)在室溫下，用HBr(5.7M，33％在AcOH中的溶液，204ml，1162mmol，50當(dāng)量)處理化合物E-4(6.33g，23.25mmol，1當(dāng)量)在AcOH(116ml)中的溶液，混合物于室溫下攪拌1小時(shí)。在反應(yīng)混合物中加入過(guò)量乙醚，并冷卻至0℃保持30分鐘，過(guò)濾收集所得固體并真空干燥，得到標(biāo)題化合物，為棕色粉末。
1H NMR(DMSO-d6)δ9.98(bs，1H)，8.47(s，1H)，7.53(s，1H)，5.14-5.05(m，1H)，3.54-3.46(m，2H)，2.62-2.53(m，1H)，2.43-2.33(m，1H)，2.28-2.15(m，2H).ES-MS計(jì)算值C7H10N2O*HBr(219.08)；實(shí)測(cè)值139.4[M+H]游離堿。
通用方法F5-烴基-2(S)-吡咯烷-2-基-噁唑的合成 5-甲基-2(S)-吡咯烷-2-基-噁唑(F-5)在室溫下，用1-氨基-丙-2-酮(1.5當(dāng)量)的吡啶溶液處理1當(dāng)量(S)-N-(三氟乙?；?脯氨酰氯(Aldrich)的DCM溶液5小時(shí)。經(jīng)常規(guī)后處理后，得到1-三氟乙酰基-吡咯烷-2-甲酸(2-氧-丙基)-酰胺。
1H NMR(CDCl3)δ4.55-4.50(m，1H)，4.15(s，2H)，3.78-3.69(m，2H)，2.18(s，3H)，2.15-1.85(m，4H)。
在70℃下用POCl3處理該中間體2小時(shí)，得到2，2，2-三氟-1-{2(S)-(5-甲基-噁唑-2-基)-吡咯烷-1-基}-乙酮。
用2M氨的甲醇溶液處理該物料5小時(shí)，得到標(biāo)題化合物。
MSm/z＝153.4(M+1)。
通用方法G2-(烷基化噻唑)-2-吡咯烷的合成
如下制備2-(S)-吡咯烷-2-基-(4，5-二甲基-噻唑)G-4(X＝CH2，n＝1，R2＝R3＝CH3)。
在硫代酰胺G-2(0.11g，1當(dāng)量)的DME(5ml)溶液中加入3-溴-2-丁酮(0.16ml，3當(dāng)量)和KHCO3(0.40g，8當(dāng)量)，并攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃，然后加入吡啶(0.4ml，8.5當(dāng)量)和三氟乙酸酐(0.32ml，4當(dāng)量)，混合物于室溫下攪拌16小時(shí)，用EtOAc稀釋，用水和鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)并減壓濃縮。殘余物用硅膠色譜法，用己烷-EtOAc(1∶1)作溶劑梯度進(jìn)行純化，得到所需的中間體。
1H NMR(CDCl3)δ5.18-4.86(m，1H)，3.68-3.43(m，2H)，2.35 & 2.30(每個(gè)s，2×3H)，2.15-1.81(m，2H)，2.54-1.45(m，2H)，1.35，(s，9H).ES-MS計(jì)算值C14H22N2O2S(282.14)；實(shí)測(cè)值283.3[M+1]。
用4M HCl的二氧雜環(huán)己烷溶液處理上述化合物，得到標(biāo)題化合物。
使硫代酰胺G-2(0.13g，1當(dāng)量)的DME(5ml)溶液與2-溴-苯乙酮(0.34g，3當(dāng)量)和KHCO3(0.45g，8當(dāng)量)反應(yīng)，再如上所述進(jìn)行后處理，制得2-(S)-吡咯烷-2-基-(5-苯基-噻唑)G-4(X＝CH2，n＝1，R2＝C6H5，R3＝H)。
1H NMR(CDCl3)δ8.25-8.15(m，3H)，7.71-7.45(m，3H)，5.39-5.22(dd，J＝2.8Hz，1H)，3.79-3.65(m，2H)，2.59-2.41(m，1H)，2.38-2.22(m，1H)，2.19-2.12(m，2H)，1.551(bs，9H).ES-MS計(jì)算值C18H22N2O2S(330.45)；實(shí)測(cè)值331.5[M+1]。用4M HCl的二氧雜環(huán)己烷溶液處理上述化合物，得到標(biāo)題化合物。
通用方法H2-吡咯烷-2-基-苯并咪唑的合成 在氮?dú)夥障?，將N-Cbz-L-脯氨酰胺[X＝CH2，n＝1](4g，16.1mmol)和鄰苯二胺(1.7g，15.5mmol)加熱至165℃并保持2.5小時(shí)，然后將溫度提高到220℃并保持40分鐘。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，溶解于DCM中，并用飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌，然后用MgSO4干燥，并蒸發(fā)至干。殘余物用2∶1異丙醇/水重結(jié)晶，再用乙醚/己烷重結(jié)晶，得到Cbz保護(hù)的苯并咪唑630mg。然后用AcOH(3ml)吸收該受保護(hù)物質(zhì)，并加入33％HBr的AcOH(6ml)溶液。40分鐘后加入乙醚，將溶液冷卻至0℃，用玻璃濾器收集沉淀物。用甲醇/乙醚重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物的HBr鹽。
1H NMR(CDCl3)δ7.63(dd，J＝3.3，6.3，2H)，7.43(dd，J＝3.0，6.3，2H)，5.13(dd，J＝8.0，8.0，1H)，4.57-3.37(m，2H)，2.64-2.58(m，1H)，2.43-2.04(m，3H).ES-MS計(jì)算值C11H13N3(187.1)；實(shí)測(cè)值188.1[M+H]。
通用方法I 步驟1
在氨基酸甲酯鹽酸鹽I-1(P＝甲基，R1＝H，88mmol)在飽和NaHCO3水溶液(25ml)中的溶液中，在劇烈攪拌下加入2-硝基苯-磺酰氯(77mmol)在THF(50ml)中的溶液。在2小時(shí)內(nèi)再加入一些NaHCO3以維持堿性pH。然后用DCM(500ml)萃取反應(yīng)混合物，有機(jī)層用水洗滌，干燥(Na2SO4)，濃縮，粗產(chǎn)物用2∶1水/異丙醇重結(jié)晶，然后用P2O5真空干燥，得到N-2-硝基苯基磺酰基氨基酸甲酯I-2，為無(wú)色結(jié)晶。在N-2-硝基苯基磺?；被峒柞-2(28mmol)、醇R1OH(25mmol)和三苯膦(28mmol)在THF(10ml)中的0℃溶液中，用5分鐘緩慢加入DIAD(28mmol)。使反應(yīng)升溫至室溫，然后再攪拌24小時(shí)。除去溶劑，粗產(chǎn)物用硅膠(Merck 60；己烷/DCM/THF 12∶6∶1)純化，得到N-2-硝基苯基磺酰基-N-烴基-氨基酸甲酯I-3。
步驟3在N-2-硝基苯基磺酰基-N-烴基-氨基酸甲酯I-3(R2＝2-環(huán)戊基乙基，11mmol)和結(jié)合了聚合物的1，3，4，6，7，8-六氫-2H-嘧啶并[1，2-a]嘧啶(12mmol)在DMF(40ml)中的攪拌懸浮液中，加入苯硫酚(22mmol)。1小時(shí)后，反應(yīng)混合物用乙醚(300ml)稀釋，過(guò)濾，濾液用鹽水(5×50ml)和飽和NaHCO3(50ml)洗滌。堿性洗滌液合并后再用DCM(2×50ml)反萃取，合并DCM層。然后用0.5M HCl(5×25ml)萃取醚相，用固體NaHCO3使水性萃取液呈堿性，然后用NaCl飽和，再用(5×50ml)DCM萃取。合并所有DCM層，干燥(Na2SO4)，用4N HCl的二氧雜環(huán)己烷溶液酸化并蒸發(fā)，得到仲胺鹽酸鹽I-4。在另一個(gè)燒瓶中，在NaHCO3(1mol)在水(125ml)和醚(200ml)中的劇烈攪拌的0℃懸浮液中，加入光氣(20％甲苯溶液；0.11mol)。用30分鐘時(shí)間向其中滴加仲胺鹽酸鹽的水(125ml)溶液和另一份光氣(0.11mol)。使反應(yīng)混合物升溫至室溫，然后再攪拌15分鐘。分開(kāi)各相，有機(jī)相用1M HCl(2×75ml)、鹽水(75ml)洗滌，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)，得到N-烴基-氨基酸甲酯氨基甲酰氯I-5(2步)。
步驟4在胺A-5(5.3mmol)在吡啶(4ml)中的0℃溶液中，加入一份溶解于DCM(4ml)中的N-烴基-氨基酸甲酯氨基甲酰氯I-5。30分鐘后，反應(yīng)混合物用乙醚(100ml)稀釋，用10％KHSO4(2×25ml)和鹽水(25ml)洗滌，干燥(NaSO4)并蒸發(fā)，得到所需的脲I-6。
在N-[(2-羧基吡咯烷-1-羰基)氨基]氨基酸甲酯I-6(200μmol)在二氧雜環(huán)己烷(2ml)中的溶液中。該溶液用50％羥胺水溶液(1ml)稀釋，并攪拌反應(yīng)物24-36小時(shí)。然后用制備性反相(C18)HPLC純化粗制反應(yīng)混合物，得到N-羥基-2-[(2-酰氨基吡咯烷)氨基]乙酰胺I-7。
通用方法J1-[2-S-(噁唑-2-基)-吡咯烷-1-基]-2-R/S-巰基甲基-烴-1-酮的合成 步驟12-丁基-1-(2-S-噁唑-2-基-吡咯烷-1-基)-丙烯酮在2-丁基丙烯酸D-2(1.2mmol)在DMF(10ml)中的溶液中，加入雙環(huán)吡咯烷F-5(1.2mmol)、HATU(1.2mmol)和DIEA(2.5mmol)?；旌衔飻嚢柽^(guò)夜，然后濃縮，再用硅膠(EtOAc/己烷1∶4)純化，得到所需的酰胺J-1。
步驟2硫羥乙酸S-{2-R/S-[2-S-(噁唑-2-基)-吡咯烷-1-羰基]-己基}酯在90°下，將J-1(3mmol)在硫羥乙酸(15ml)中的溶液加熱3小時(shí)，然后冷卻至室溫。用EtOAc稀釋，用鹽水、冷NaHCO3水溶液洗滌，用Na2SO4干燥并減壓濃縮。殘余物用由5％-20％丙酮的DCM溶液組成的溶劑梯度洗脫在硅膠柱上純化，得到J-2。
步驟31-[2-S-(5-叔丁基-噁唑-2-基)-吡咯烷-1-基]-2-R/S-巰基甲基-己烷-1-酮在氬氣和攪拌下，將J-2(1mmol)溶解于MeOH(5ml)。加入經(jīng)過(guò)脫氣的2M NaOH溶液(6mmol)，混合物攪拌3小時(shí)。反應(yīng)混合物用IR-120(H+)樹(shù)脂酸化至pH2。過(guò)濾除去樹(shù)脂，濾液經(jīng)減壓濃縮，得到標(biāo)題J-3，為透明油狀物。
通用方法K2-S-羥基-3-R-(2-S-(噁唑-2-基)-吡咯烷-1-羰基)-烴酸的合成 步驟15-R-{1-[2-S-(5-叔丁基-噁唑-2-基)-吡咯烷-1-羰基]-戊基}-2，2-二甲基-[1，3]二氧戊環(huán)-4-酮在雙環(huán)胺鹽(0.852g，2.4mmol，1.1當(dāng)量)的DMF溶液(7ml)中，加入Hunig堿(2.1ml，12mmol，5.5當(dāng)量)，并將混合物冷卻至0℃。然后于0℃下加入丙酮化合物(500mg，2.17mmol，1.0當(dāng)量)和HATU(0.913g，2.4mmol，1.1當(dāng)量)。所得混合物于室溫下攪拌16小時(shí)?；旌衔镌谶^(guò)量EtOAc和10％檸檬酸之間分配。有機(jī)層用鹽水和飽和NaHCO3洗滌，用無(wú)水Na2SO4干燥，過(guò)濾并濃縮，得到K-1。殘余物直接用于最后步驟。
ES-MS計(jì)算值C22H34N2O5(406.25)；實(shí)測(cè)值407.5 [M+H]。
步驟23-R-[2-S-(5-叔丁基-噁唑-2-基)-吡咯烷-1-羰基]-2-S-羥基庚酸將丙酮化合物K-1溶解于10％(95∶5 TFA∶H2O)/DCE(10ml)中，室溫下攪拌反應(yīng)物7小時(shí)。終產(chǎn)物用制備性HPLC純化，經(jīng)冷凍干燥得到最終化合物K-2，為無(wú)色粉末。
實(shí)施例1(S)-羥基-3(R)-[2(R/S)-吡啶-2-基-吡咯烷-1-羰基]-庚酸羥基酰胺按照通用方法B，由2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸B-5和市售2-吡咯烷-2-基-吡啶A-5制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO)δ8.6-8.5(m，1H)，7.97-7.92(t，J＝7.4 & 7.1Hz，1H)，7.5-7.3(m，2H)，5.14-4.94(m，1H)，3.96-3.44(m，3H)，3.1-2.9(m，1H)，2.3-1.9(m，6H)，1.3-1.1(m，4H)，0.87-0.9(m，3H).ES-MS計(jì)算值C17H25N3O4(335.40)；實(shí)測(cè)值336.5[M+1]。
實(shí)施例22(S)-羥基-3(R)-[3(R/S)-吡啶-2-基-吡咯烷-1-羰基]-庚酸羥基酰胺按照通用方法B，由2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸B-5和市售2-吡咯烷-3-基-吡啶A-5制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO)δ8.85-8.8(m，1H)，8.21-8.14(m，2H)，7.8-7.6(m，4H)，4.4-3.9(m，4H)，3.8-3.6(m，2H)，3.09-3.06(d，J＝9.34Hz，1H)，2.5-2.2(m，2H)，1.63(bs，2H)，1.38(bs，4H)，1.06-0.96(m，3H).ES-MS計(jì)算值C17H25N3O4(335.40)；實(shí)測(cè)值336.5[M+1]。
實(shí)施例32(S)-羥基-3(R)-[2-吡啶-3-基-吡咯烷-1-羰基]-庚酸羥基酰胺(異構(gòu)體1)按照通用方法B，由2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸B-5和市售3-吡咯烷-2-基-吡啶A-5制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO)δ8.61(s，2H)，7.99-7.97(d，J＝7.97Hz，1H)，7.67-7.63(m，1H)，5.11-5.07(m，1H)，4.02-3.57(m，3H)，2.99-2.93(m，1H)，2.49-2.24(m，2H)，1.96-1.76(m，4H)，1.37-1.0(m，4H)，-0.98-0.78(m，3H).ES-MS計(jì)算值C17H25N3O4(335.40)；實(shí)測(cè)值336.5[M+1]。
實(shí)施例42(S)-羥基-3(R)-[2-吡啶-3-基-吡咯烷-1-羰基]-庚酸羥基酰胺(異構(gòu)體2)標(biāo)題化合物是從實(shí)施例3所述反應(yīng)中分離出的另一種異構(gòu)體。
1H NMR(DMSO)δ8.86-8.76(m，2H)，8.32-8.3(d，J＝7.97Hz，1H)，7.9-7.88(m，1H)，5.4-5.32(m，1H)，4.3-3.74(m，3H)，3.22-3.16(t，J＝9.34Hz，1H)，2.52-2.46(m，2H)，2.26-1.98(m，3H)，1.63-1.38(m，5H)，1.07-1.01(m，3H).ES-MS計(jì)算值C17H25N3O4(335.40)；實(shí)測(cè)值336.5[M+1]。
實(shí)施例52(S)-羥基-3(R)-[2-吡啶-4-基-吡咯烷-1-羰基]-庚酸羥基酰胺(異構(gòu)體1)按照通用方法B，由2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸B-5和市售4-吡咯烷-2-基-吡啶A-5制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO)δ8.89-8.87(d，J＝4.7Hz，2H)，7.77-7.75(d，J＝5.8Hz，2H)，5.3-5.25(m，1H)，4.23-3.8(m，3H)，3.33-3.15(m，1H)，2.52-2.43(m，2H)，2.13-1.86(m，3H)，1.56-1.26(m，5H)，1.07-1.05(m，3H).ES-MS計(jì)算值C17H25N3O4(335.40)；實(shí)測(cè)值336.5[M+1]。
實(shí)施例62(S)-羥基-3(R)-[2-吡啶-4-基-吡咯烷-1-羰基]-庚酸羥基酰胺(異構(gòu)體2)標(biāo)題化合物是從實(shí)施例5所述反應(yīng)中分離出的另一種異構(gòu)體。
1H NMR(DMSO)δ8.89-8.85(t，J＝6.32 & 6.6Hz，2H)，7.92-7.68(m，2H)，5.39-5.36(dd，1H)，4.25-3.8(m，3H)，3.25-3.2(t，J＝7.96 & 8.8Hz，1H)，2.56-2.47(m，2H)，2.12-1.62(m，3H)，1.46-1.38(m，5H)，1.07-1.01(m，3H).ES-MS計(jì)算值C17H25N3O4(335.40)；實(shí)測(cè)值336.5[M+1]。
實(shí)施例72(S)-羥基-3(R)-[3(R/S)-吡啶-4-基-吡咯烷-1-羰基]-庚酸羥基酰胺按照通用方法B，由2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸B-5和市售4-吡咯烷-3-基-吡啶A-5制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO)δ8.94(dd，2H)，8.06-8.02(t，J＝4.12 & 6.32Hz，2H)，4.2-3.53(m，6H)，3.1-3.02(dd，1H)，2.7-2.1(m，2H)，1.66-1.28(m，6H)，1.05-0.96(m，3H).ES-MS計(jì)算值C17H25N3O4(335.40)；實(shí)測(cè)值336.5[M+1]。
實(shí)施例82(S)-羥基-3(R)-[2(R/S)-苯基-吡咯烷-1-羰基]-庚酸羥基酰胺按照通用方法B，由2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸A-5和市售2-苯基-吡咯烷B-5制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO)δ7.6-7.3(m，5H)，5.6-5.57(d，J＝7.14Hz，1H)，5.3-5.24(m，1H)，4.21-3.72(m，4H)，3.2-3.14(t，J＝7.96 & 10.44Hz，1H)，2.4-2.33(m，1H)，2.3-1.85(m，4H)，1.6-1.36(m，5H)，1.04-0.97(m，3H).ES-MS計(jì)算值C18H26N2O4(334.42)；實(shí)測(cè)值335.5[M+1]。
實(shí)施例92(S)-羥基-3(R)-[3(R/S)-苯基-吡咯烷-1-羰基]-庚酸羥基酰胺按照通用方法B，由2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸B-5和市售3-苯基-吡咯烷A-5制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO)δ7.56-7.4(m，5H)，4.4-3.4(m，＝6H)，3.09-3.08(d，J＝3.85Hz，1H)，2.49-1.97(m，3H)，1.64-1.34(m，5H)，1.05-1.02(m，3H).ES-MS計(jì)算值C18H26N2O4(334.42)；實(shí)測(cè)值335.5[M+1]。
實(shí)施例102(S)-羥基-3(R)-[3(R/S)-吡啶-3-基-吡咯烷-1-羰基]-庚酸羥基酰胺按照通用方法B，由2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸B-5和市售3-吡咯烷-3-基-吡啶A-5制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO)δ8.89-8.76(m，2H)，8.26-8.2(m，1H)，7.79-7.74(t，J＝4.7 & 7.7Hz，1H)，4.1-3.5(m，6H)，3.09-3.07(d，J＝7.42Hz，1H)，2.54-1.37(m，8H)，1.05-0.97(m，3H).ES-MS計(jì)算值C17H25N3O4(335.40)；實(shí)測(cè)值336.5[M+1]。
實(shí)施例112(S)-羥基-3(R)-[2(S)-噁唑-2-基-吡咯烷-1-羰基]-庚酸羥基酰胺按照通用方法B，由2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸B-5和2-(S)-吡咯烷-2-基-噁唑(其合成描述于方法E)A-5制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(CDCl3)δ7.8(s，1H)，7.3(s，1H)，5.45-5.43(t，J＝3.9& 3.8Hz，1H)，4.45(d，J＝2.5Hz，1H)，4.1-3.96(m，2H)，3.54-3.51(t，J＝5.5 & 2.2Hz，1H)，2.5-2.3(m，4H)，1.95-1.91(m，2H)，1.57-1.53(m，4H)，1.12-1.08(t，J＝6.04 & 7.14Hz，3H).ES-MS計(jì)算值C15H23N3O5(325.36)；實(shí)測(cè)值326.4[M+1]。
實(shí)施例122(S)-羥基-3(R)-[2(S)-(5-甲基-噁唑-2-基-吡咯烷-1-羰基]-庚酸羥基酰胺按照通用方法B，由2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸和5-甲基-2-(S)-吡咯烷-2-基-噁唑F-5(R1＝H，R2＝CH3；其制備描述于方法F)制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(CDCl3)δ7.46(s，1H)，5.36-5.33(m，1H)，4.45-4.42(m，1H)，4.15-3.91(m，2H)，3.58-3.40(m，1H)，2.46(s.3H)，2.40-2.21(m，4H)，1.93-1.83(m，2H)，1.51-1.49(m，4H)，1.08(t，J＝6.9Hz，3H).ES-MS計(jì)算值C16H25N3O5(339.39)；實(shí)測(cè)值340.6[M+1]。
實(shí)施例132(R)-氟-3(R)-(2-S-噁唑-2-基-吡咯烷-1-羰基)-庚酸羥基酰胺按照通用方法C制備標(biāo)題化合物。使2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸B-5與5-甲基-2(S)-吡咯烷-2-基-噁唑A-5(如方法E所述制備)偶合，得到B-6，然后如方法C所述進(jìn)行后處理，得到標(biāo)題化合物，為異構(gòu)體之一。
1H NMR(DMSO)δ8.16(s，1H)，7.3(s，1H)，5.22-5.18(dd，1H)，5.07-4.9(dd，J＝7.97 & 8.24Hz，1H)，3.9-3.65(m，2H)，3.4-3.35(m，1H)，2.37-2.07(m，4H)，1.78-1.76(d，J＝6.04Hz，2H)，1.42(bs，4H)，1.03(bs，3H).ES-MS計(jì)算值C15H22FN3O4(327.56)；實(shí)測(cè)值350.5[M+23]。
實(shí)施例142(S)-氟-3(R)-[2-S-噁唑-2-基-吡咯烷-1-羰基]-庚酸羥基酰胺標(biāo)題化合物是從實(shí)施例13所述反應(yīng)中分離出的另一種異構(gòu)體。
1H NMR(DMSO)δ8.16(s，1H)，7.3(s，1H)，5.33-5.29(dd，1H)，4.97-4.78(dd，J＝9.89 & 10.44Hz，1H)，3.94-3.7(m，2H)，3.38-3.32(m，1H)，2.42-2.08(m，6H)，1.54-1.38(m，4H)，1.02-0.99(m，3H).ES-MS計(jì)算值C15H22FN3O4(327.56)；實(shí)測(cè)值328.5[M+1]。
實(shí)施例15N-羥基-N-2-[(2-噁唑-2-基-吡咯烷-1-羰基)己基]-甲酰胺按照通用方法D，由2-[(芐氧基甲酰氨基)-甲基]-己酸D-7(R＝正丁基)和2-(S)-吡咯烷-2-基-噁唑E-5(如方法E所述制備)制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO-d6)δ9.89(s，1H)，8.16(s，1H)，7.97(s，1H)，7.29(s，1H)，5.28-5.21(m，1H)，3.88-3.45(m，4H)，3.31-3.02(m，1H)，2.4 1-2.27(m，1H)，2.20-2.03(m，4H)，1.57-1.41(m，5H)，1.02(bs，3H).ES-MS計(jì)算值C15H23N3O4(309.36)；實(shí)測(cè)值310.6[M+H]，332.5M+Na]。
實(shí)施例16N-羥基-N-[3(R)-(2-R/S-吡啶-2-基-吡咯烷-1-羰基)己基]-甲酰胺(異構(gòu)體1)按照通用方法D，由2-[(芐氧基甲酰氨基)-甲基]-己酸D-7(R＝正丁基)和市售2-吡咯烷-2-基-吡啶A-5制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(D2O)δ8.55(d，J＝4.9，1H)，7.99-7.96(m，1H)，7.78(s，1H)，7.37-7.28(m，2H)，5.02(dd，J＝3.6，3.6，1H)，3.80-3.63(m，1H)，3.61-3.52(m，1H)，3.32-3.25(m，1H)，2.37-2.09(m，1H)，1.98-1.85(m，2H)，1.48-1.35(m，1H)，1.36-1.19(m，4H)，0.85-0.81(t，J＝11.8，3H).ES-MS計(jì)算值C18H27N5O4(319.2)；實(shí)測(cè)值320.5[M+H]。
實(shí)施例17N-羥基-N-[3(R)-(2-R/S-吡啶-2-基-吡咯烷-1-羰基)己基]-甲酰胺(異構(gòu)體2)標(biāo)題化合物是從實(shí)施例16所述反應(yīng)中分離出的另一種異構(gòu)體。
1H NMR(D2O)δ8.59(d，J＝5.8，1H)，8.41(dd，J＝7.7，7.7 1H)，7.82-7.75(m，1H)，7.59(s，1H)，7.56-7.49(m，1H)，5.22(dd，J＝4.7，8.8，1H)，4.05-3.89(m，1H)，3.87-3.80(m，1H)，3.72-3.62(m，1H)，3.54(dd，J＝3.9，14.8，1H)，3.41-3.28(m，1H)，2.53-2.44(m，2H)，2.12-1.94(m，4H)，1.80-1.45(m，2H)，1.40-1.23(m，4H)，0.89(dd，J＝5.5，6.9，3H).ES-MS計(jì)算值C18H27N5O4(319.2)；實(shí)測(cè)值320.5[M+H]。
實(shí)施例182(S)-羥基-3(R)-[2-S-(4，5-二甲基-噻唑-2-基-吡咯烷-1-羰基]-庚酸羥基酰胺按照通用方法B，由2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸B-5和2-(S)-吡咯烷-2-基-(4，5-二甲基-噻唑)G-4(R2＝R3＝CH3，其合成描述于方法G)制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(CDCl3)δ5.41-5.37(dd，J＝2.5Hz，1H)，4.04-4.01(m，1H)，3.97(d，J＝9Hz，1H)，3.85-3.78(m，1H)，3.14-3.08(m，1H)，2.44 & 2.39(eachs，2×3H)，2.32-2.11(m，4H)，1.61-1.39(m，6H)，1.03(t，J＝6.0Hz，3H).ES-MS計(jì)算值C17H27N3O4S(369.17)；實(shí)測(cè)值370.3[M+1]。
實(shí)施例192(S)-羥基-3(R)-[2-S-(4-苯基-噻唑-2-基-吡咯烷-1-羰基)-庚酸羥基酰胺按照通用方法B，由2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸B-5和2-(S)-吡咯烷-2-基-(4-苯基-噻唑)G-4(R2＝C6H5，R3＝H，其合成描述于方法G)制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(CDCl3)δ8.18-8.10(m，3H)，7.64-7.49(m，3H)，5.59-5.58(dd，J＝2.8Hz，1H)，4.10-4.01(m，1H)，3.95(d，J＝7Hz，1H)，3.91-3.89(m，1H)，3.18-3.14(m，1H)，2.41-2.19(m，4H)，1.64-1.37(m，6H)，1.01(t，J＝6.0Hz，3H).ES-MS計(jì)算值C21H27N3O4S(417.52)；實(shí)測(cè)值418.5[M+1]。
實(shí)施例202(S)-羥基-3(R)-[2-S-(4-甲基-噻唑-2-基-吡咯烷-1-羰基)-庚酸羥基酰胺按照通用方法B，由2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸B-5和2-(S)-吡咯烷-2-基-(4-甲基-噻唑)G-4(R2＝CH3，R3＝H，其制備描述于方法G)制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(CDCl3)δ7.49-7.6(dd，1H)，7.05(bs，1H)，5.71-5.69(d，J＝6.04Hz，1H)，4.45(bs，1H)，4.08-3.94(d，2H)，3.51(bs，1H)，2.67-2.63(t，3H)，2.3 9bs，4H)，1.96(bs，2H)，1.57(bs，4H)，1.12-1.10(d，3H).ES-MS計(jì)算值C16H25N3O4S(355.47)；實(shí)測(cè)值356.3[M+1]。
實(shí)施例212(S)-羥基-3(R)-[2-S-(苯并咪唑-2-基-吡咯烷-1-羰基)-庚酸羥基酰胺按照通用方法B，由2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸B-5和2-(S)-吡咯烷-2-基-(苯并咪唑)G-4(其合成描述于方法G)制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO)δ7.78-7.66(m，2H)，7.51-7.37(m，2H)，5.41-5.37(m，1H)，5.25-5.21(t，J＝6.32Hz，1H)，3.8-3.52(m，2H)，3.02-2.9(m，1H)，2.38-2.06(m，4H)，1.47-1.03(m，6H)，0.87-0.70(m，3H).ES-MS計(jì)算值C19H26N4O4(374.44)；實(shí)測(cè)值375.3[M+1]。
實(shí)施例22N-羥基-2-[N-(2-環(huán)戊基乙基)-N]-[2-S-(4-苯基)-噻唑-2-基-吡咯烷]-乙酰胺按照通用方法I-4，由I-5和2-(S)-吡咯烷-2-基-(5-苯基-噻唑)G-4(R2＝C6H5，R3＝H)制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(D6DMSO)δ7.93-7.91(m，3H)，8.41(dd，J＝7.1，7.1 2H)，7.35-7.30(m，1H)，5.31(dd，J＝6.9，6.9 1H)，3.89(d，J＝16.2 1H)，3.62(d，J＝16.2 1H)，3.58-3.40(m，2H)，3.30-3.15(m，2H)，2.42-2.39(m，1H)，1.96-1.83(m，3H)，1.69-1.60(m，3H)，1.54-1.43(m，6H)，1.07-0.96(m，2H).ES-MS計(jì)算值C23H30N4O3S(442.2)；實(shí)測(cè)值465.3[M+Na]。
實(shí)施例23N-羥基-2-[N-(2-環(huán)戊基乙基)-N]-[2-(2-噁唑-2-基-吡咯烷-1-羰基)己基]-乙酰胺按照通用方法I-4，由I-5和5-甲基-2-(S)-吡咯烷-2-基-噁唑E-5(如方法E所述制備)制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(D6DMSO)δ7.97(s，1H)，7.09(s，1H)，5.07(dd，J＝7.1，7.11H)，3.81(d，J＝16.2 1H)，3.47-3.39(m，2H)，3.25-2.99(m，2H)，2.26-2.22(m，1H)，1.98-1.81(m，3H)，1.69-1.60(m，3H)，1.78-1.42(m，7H)，1.04-1.02(m，2H).ES-MS計(jì)算值C17H26N4O4(350.2)；實(shí)測(cè)值373.4[M+Na]。
實(shí)施例242(S)-羥基-3(R)-[2(S)-(5-叔丁基-噁唑-2-基-吡咯烷-1-羰基)-庚酸羥基酰胺按照通用方法B，由2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸和5-叔丁基-2(S)-吡咯烷-2-基-噁唑F-5(R1＝H，R2＝叔丁基)制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO)δ6.87-6.85(d，J＝5.22Hz，1H)，5.25-5.21(dd，J＝3.02 & 2.74Hz，1H)，4.04-3.96(m，2H)，3.86-3.79(m，1H)，3.13-3.07(t，J＝9.06 & 9.9 1Hz)，2.35-2.28(m，2H)，2.26-2.05(m，2H)，1.59-1.37(m，6H)，1.013-0.997(t，J＝4.8 & 6.32Hz，3H)；ES-MS計(jì)算值C19H31N3O5(381.47)；實(shí)測(cè)值382.4[M+H]。
如下所述制備5-叔丁基-2(S)-吡咯烷-2-基-噁唑1-氨基-頻哪酮于0℃下，在1-溴-頻哪酮(5.4g，1當(dāng)量)的DMF(30ml)溶液中，加入疊氮化鈉(4g，5當(dāng)量)，于0℃下攪拌1小時(shí)，然后再在室溫下攪拌1小時(shí)。反應(yīng)混合物用EtOAc(150ml)稀釋，用冷水洗滌，用硫酸鈉干燥。用10％Pd-C在乙醇-濃HCl中的懸浮液處理該疊氮化合物，得到相應(yīng)的標(biāo)題化合物。
5-叔丁基-2-S-吡咯烷-2-基-噁唑于室溫下，用1-氨基-頻哪酮(1.2當(dāng)量)的吡啶溶液處理Z-L-Pro氯(1當(dāng)量)的DCM溶液5小時(shí)。經(jīng)常規(guī)后處理后，所得的酰胺中間體于70℃下用POCl3處理2小時(shí)，得到Z-N-保護(hù)的雙環(huán)化合物。用HBr-AcOH處理得到標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO)δ9.51(bs，1H)，5.04(bs，1H)，3.49(bs，2H)，2.54-2.21(m，4H)，1.45(bs，9H).ES-MS計(jì)算值C11H18N2O(194.14)；實(shí)測(cè)值195.3[M+H]。
實(shí)施例252(S)-羥基-3(R)-[2(S)-(5-苯基-噁唑-2-基-吡咯烷-1-羰基)-庚酸羥基酰胺按照通用方法B，由2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸和5-苯基-2-(S)-吡咯烷-2-基-噁唑F-5(R1＝H，R2＝苯基)制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO)δ7.86-7.83(m，1H)，7.77(bs，1H)，7.76-7.62(m，3H)，7.56-7.52(m，1H)，5.6-5.58(d，J＝6.32Hz，1H)，5.32-5.29(d，J＝6.59Hz，1H)，4.07-3.92(m，2H)，3.14-3.11(m，1H)，2.42-2.18(m，4H)，1.56-1.37(m，6H)，0.882(bs，3H).ES-MS計(jì)算值C21H27N3O5(401.46)；實(shí)測(cè)值402.2[M+H]。
按照與實(shí)施例24所述相同的方法，由2-溴苯乙酮制備胺。
實(shí)施例262(S)-羥基-3(R)-[2(S)-(5-異丁基-噁唑-2-基-吡咯烷-1-羰基)-庚酸羥基酰胺按照通用方法B，由2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸和5-異丁基-2-(S)-吡咯烷-2-基-噁唑F-5(R1＝H，R2＝異丁基)制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO)δ6.93(bs，1H)，5.23-5.19(dd，J＝3.57 & 3.02Hz，1H)，4.05-3.95(m，2H)，3.83-3.78(dd，J＝6.87 & 7.14Hz，1H)，3.13-3.07(t，J＝9.34 & 8.42Hz，1H)，2.7-2.57(m，2H)，2.47-1.97(m，5H)，1.58-1.35(m，6H)，1.13-0.99(m，9H)；ES-MS計(jì)算值C19H31N3O5(381.47)；實(shí)測(cè)值382.3[M+H]。
使4-甲基-2-丁酮溴化，得到所需的溴代化合物(主產(chǎn)物)，同時(shí)以低產(chǎn)率得到其他位置異構(gòu)體。按照與實(shí)施例24所述相同的方法，由該溴化物制備胺。
實(shí)施例272(S)-羥基-3(R)-[2(S)-(4，5-二甲基-噁唑-2-基-吡咯烷-1-羰基)-庚酸羥基酰胺按照通用方法B，由2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸和4，5-二甲基-2-(S)-吡咯烷-2-基-噁唑F-5(R1＝Me，R2＝Me)制備標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO)δ5.17-5.13(dd，J＝3.57 & 3.02Hz，1H)，4.06-3.92(m，2H)，3.86-3.82(dd，J＝7.42 & 4.12Hz，1H)，3.12-3.06(t，J＝8.79& 8.06Hz，1H)，2.56-2.26(m，2H)，2.35(bs，3H)，2.18-2.05(m，2H)，2.14(bs，3H)，1.57-1.35(m，6H)，1.04-1.02(d，J＝6.043Hz，3H).ES-MS計(jì)算值C17H27N3O5(353.41)；實(shí)測(cè)值354.63[M+H]。
如下制備4，5-二甲基-2(S)-吡咯烷-2-基-噁唑2-氨基丁-3-酮在氬氣氛下，在亞氨基甲酸二叔丁基酯(28g，1當(dāng)量)的DMF溶液中，加入Cs2CO3(134g，3當(dāng)量)和碘化四丁銨(154g，3當(dāng)量)。1小時(shí)后，在反應(yīng)混合物中加入2-氯-丁-3-酮(40ml，3當(dāng)量)，混合物在室溫下攪拌72小時(shí)，用EtOAc稀釋，用硅藻土過(guò)濾除去無(wú)機(jī)物。濾液用NaHCO3、水、10％檸檬酸水溶液洗滌，用Na2SO4干燥并減壓濃縮。殘余物用硅膠色譜法純化，得到Boc保護(hù)的化合物。用4M HCl處理該中間體16小時(shí)，蒸發(fā)溶劑后得到2-氨基丁-3-酮。
4，5-二甲基-2-S-吡咯烷-2-基-噁唑在室溫下，用2-氨基丁-3-酮(1.5當(dāng)量)的吡啶溶液處理Z-L-Pro氯(1當(dāng)量)的DCM溶液5小時(shí)。經(jīng)常規(guī)后處理后，所得的酰胺中間體于70℃下用POCl3處理2小時(shí)，得到Z-N-保護(hù)的雙環(huán)中間體。用HBr-AcOH處理該物質(zhì)得到標(biāo)題化合物。
1H NMR(DMSO)δ4.99-4.94(t，J＝7.32 & 6.7Hz，1H)，3.49-3.42(m，2H)，2.56-2.1(m，10H)；ES-MS計(jì)算值C9H14N2O(166.11)；實(shí)測(cè)值167.3[M+H]。
實(shí)施例282-S-羥基-3-R-(2-S-噁唑-2-基-吡咯烷-1-羰基)-庚酸按照通用方法K，由2-(2，2-二甲基-4-氧-1，3-二氧戊環(huán)-5-基)己酸和5-叔丁基-2-(S)-吡咯烷-2-基-噁唑F-5(R1＝H，R2＝叔丁基)制備標(biāo)題化合物，然后用90％ TFA-DCE水溶液處理。
1H NMR(DMSO)δ6.48(s，1H)，5.21-5.18(dd，J＝3.65 & 3.3Hz，1H)，4.15-3.92(m，3H)，3.80-3.74(m，1H)，2.92-2.86(m，2H)，2.32-2.28(m，1H)，2.14-2.03(m，3H)，2.02-1.36(m，15H)，1.012-0.973(t，J＝6.6 & 5.22Hz，3H)；ES-MS計(jì)算值C19H30N2O5(366.46)；實(shí)測(cè)值367.5[M+H]。
實(shí)施例291-[2-S-(5-叔丁基-噁唑-2-基)-吡咯烷-1-基]-2-R/S-巰基甲基-己-1-酮按照通用方法J，由2-丁基丙烯酸(D-2)和5-叔丁基-2-(S)-吡咯烷-2-基-噁唑F-5(R1＝H，R2＝叔丁基)制備標(biāo)題化合物，然后在90℃下用硫羥乙酸處理3小時(shí)，得到S-乙酰基化合物。用2N氫氧化鈉的甲醇溶液脫除乙酰基，得到標(biāo)題硫代化合物的異構(gòu)體混合物。
1H NMR(CDCl3)δ6.62(s，0.6H)，6.55(s，0.4H)，4.09-4.04(m，0.6H)，3.72-3.74(m，2H)，3.62-3.53(m，0.4H)，2.95-2.73(m，2H)，2.61-2.40(m，0.6H)，2.38-2.30(m，0.4H)2.27-2.00(m，6H)，1.71-1.64(m，4H)，1.56-1.44(m，1H，SH)，1.26(bs，9H)，0.89(t，J＝7Hz，3H)，0.74(t，J＝7Hz，3H)；ES-MS計(jì)算值C18H30N2O2S(338.51)；實(shí)測(cè)值339.5[M+H]。
本發(fā)明的優(yōu)選化合物為例如實(shí)施例11至15的化合物。
游離形式的本發(fā)明化合物，例如式(I)化合物，或其可藥用鹽形式或其前藥，具有重要的藥理性質(zhì)，例如如體外和體內(nèi)試驗(yàn)所表明的那樣具有抗感染劑的性質(zhì)，因此可用于治療。
A.肽脫甲酰基酶活性的抑制采用PDF/FDH偶合試驗(yàn)(Lazennec，C. & Meinnel，T.，Anal.Biochem.，Vol.224，pp.180-182(1997))。在該偶合試驗(yàn)中，由PDF從其底物fMAS中釋放出的甲酸被偶合酶FDH氧化，將一分子的NAD+還原為NADH，從而引起340nm處的光吸收增加。所有試驗(yàn)都在室溫下，在50mM HEPES，pH7.2，10mM NaCl，0.2mg/ml BSA緩沖液中，在半面96孔微量滴定板(Corning)上進(jìn)行。加入0.5單位/ml FDH、1mM NAD+、以及所需濃度的fMAS的混合物使反應(yīng)起始。為測(cè)定IC50(抑制50％酶活性所需的濃度)值，使PDF與不同濃度的actinonin預(yù)溫育10分鐘，加入含有4mM fMAS的反應(yīng)混合物使脫甲?；磻?yīng)起始。使用SpectraMax讀板儀(MolecularDevices，Sunnyvale，CA)測(cè)定340nm處光吸收增加的初始速率，得到初始反應(yīng)速率y。使用以下公式計(jì)算抑制50％酶活性的抑制劑濃度[In]，即IC50y＝y(tǒng)o/(1+[In]/IC50)其中yo是不加抑制劑時(shí)的反應(yīng)速率。在y＝y(tǒng)o/2的[In]下解這個(gè)關(guān)于IC50的方程，求出IC50。使用商業(yè)軟件包(Deltapoint，Inc.，Chicago，IL.)，按照非線性最小二乘法回歸擬合法計(jì)算出IC50。
利用這一測(cè)定法，測(cè)定各種本發(fā)明化合物的IC50。各種化合物的IC50是用含有鎳和鋅作為金屬離子的脫甲酰基酶測(cè)定的。用含鋅脫甲?；笢y(cè)定的優(yōu)選式(I)化合物的IC50值在約0.585μM至約0.004μM的范圍。用含鎳脫甲?；笢y(cè)定的優(yōu)選式(I)化合物的IC50值在約0.06μM至約0.0001μM的范圍。
B.測(cè)試抗微生物活性的測(cè)定方法利用在96孔平板中進(jìn)行的微量稀釋法測(cè)定最低抑制濃度(MIC)。將化合物以5或10mg/ml懸浮在DMSO中，于4℃下貯存?zhèn)溆?。將化合物稀釋在Mueller-Hinton Broth(MHB)或胰胨豆胨培養(yǎng)液(TSB)中，用于MIC測(cè)定。用二倍稀釋體系測(cè)試的濃度范圍為64-0.0625μg/ml終濃度。
由培養(yǎng)在胰胨豆胨瓊脂(TSA)上的細(xì)胞制備接種物，并于35℃下培養(yǎng)過(guò)夜。用5-10個(gè)菌落接種MHB或TSB液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)物于35℃下培養(yǎng)過(guò)夜。將該過(guò)夜培養(yǎng)物按1∶10稀釋，于35℃下培養(yǎng)1小時(shí)，稀釋至適當(dāng)?shù)慕臃N量，加到盛有液體培養(yǎng)基和受試化合物的小孔中。接種量為2×104CFU/ml。
將平板于35℃下培養(yǎng)48小時(shí)，培養(yǎng)細(xì)菌18小時(shí)后記錄MIC。MIC定義為化合物在培養(yǎng)后不產(chǎn)生可見(jiàn)生長(zhǎng)的最低濃度。
各種優(yōu)選式(I)化合物的最低抑制濃度對(duì)流感嗜血菌(H.influenza)(四個(gè)菌株)在約0.125μg/ml至約2.0μg/ml的范圍，對(duì)金黃色葡萄球菌(S.aureus)(四個(gè)菌株)在約0.25μg/ml至大于64μg/ml的范圍，對(duì)肺炎鏈球菌(S.pneumonia)(三個(gè)菌株)在約2μg/ml至約16μg/ml的范圍，對(duì)M.catarrhalis在約0.125μg/ml至約2μg/ml的范圍。脫甲?；傅米源竽c桿菌(E.coli)。
C.PDF相對(duì)于MMP-7(基質(zhì)金屬蛋白酶-7)的選擇性抑制的闡釋如前面所述，為避免副作用，需要相對(duì)于MMP對(duì)肽脫甲酰基酶具有選擇性的抑制劑。
為測(cè)試本發(fā)明化合物對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶的可能抑制效應(yīng)，使用以下MMP-7(基質(zhì)金屬蛋白酶-7)測(cè)定法。
MMP-7(基質(zhì)金屬蛋白酶-7)測(cè)定法使用硫肽(Pro-Leu-Gly-S-Leu-Leu-Gly)作底物測(cè)定基質(zhì)金屬蛋白酶-7活性。經(jīng)酶水解，釋放出硫醇化物產(chǎn)物。所生成的硫醇化物與DTNB(二硫代硝基苯)反應(yīng)，所生成的黃色在405nM處進(jìn)行監(jiān)測(cè)。在室溫下在半面96孔微量滴定板中進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定緩沖液含有50mM三(羥甲基)甲基甘氨酸，pH7.5、0.2M NaCl、10mM CaCl2和0.05％Brij。加入200 TM DTNB和100 TM硫肽在緩沖液中的混合物啟動(dòng)反應(yīng)。為測(cè)定IC50(抑制50％酶活性所需的濃度)值，使MMP-7與不同濃度的化合物預(yù)溫育10分鐘，加入含有硫肽和DTNB的反應(yīng)混合物使水解反應(yīng)起始。使用SpectraMax讀板儀(MolecularDevices，Sunnyvale，CA)記錄反應(yīng)速率，即30分鐘內(nèi)OD405的光吸收增加。使用以下公式計(jì)算抑制50％酶活性的抑制劑濃度[In]，即IC50y＝y(tǒng)o/(1+[In]/IC50)其中yo是不加抑制劑時(shí)的反應(yīng)速率。在y＝y(tǒng)o/2的[In]下解這個(gè)關(guān)于IC50的方程，求出IC50。
利用這一測(cè)定法，測(cè)定各種化合物的IC50。各種優(yōu)選式(I)化合物對(duì)MMP-7的IC50為約100μM，而這些化合物對(duì)含鋅PDF的IC50在約0.004μM至約0.585μM的范圍，對(duì)含鎳PDF的IC50在約0.001μM至約0.006μM的范圍。因此可以看出，本發(fā)明提供的化合物相對(duì)于其對(duì)MMP-7的活性對(duì)PDF具有優(yōu)異的選擇性。觀察到這些化合物相對(duì)于MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-13、MT-MMP-1和組織壞死因子轉(zhuǎn)化酶對(duì)肽脫甲?；妇哂蓄愃频倪x擇性。相對(duì)于其他金屬蛋白酶如血管緊張素轉(zhuǎn)化酶也觀察到類似的選擇性。
D.用于測(cè)定體內(nèi)效力的小鼠敗血病模型取每只重18-22g的CD1雌性遠(yuǎn)系繁殖小鼠(Charles RiverLaboratories)，腹膜內(nèi)注射0.5ml含有5×107cfu金黃色葡萄球菌(Smith菌株)和7％豬胃粘膜(胃粘蛋白)的懸浮液。注射1小時(shí)和5小時(shí)后對(duì)小鼠進(jìn)行皮下、靜脈或口服處理。將小鼠分為六組，每組六只小鼠，給予不同劑量的每種化合物的二倍稀釋液(100-0.1mg/kg的范圍)。用萬(wàn)古霉素作為對(duì)照抗生素，并皮下給予?；衔锱渲圃赑BS中，未處理的對(duì)照組只給予載體。
在6天內(nèi)每天監(jiān)測(cè)每組的死亡數(shù)，用累計(jì)死亡率，采用Reed和Muench的方法求出50％保護(hù)劑量(PD50)。若干種優(yōu)選式(I)化合物在小鼠體內(nèi)對(duì)金黃色葡萄球菌的ED50(皮下)在約3.45mg/kg至大于10mg/kg的范圍。這些式(I)化合物在小鼠體內(nèi)對(duì)金黃色葡萄球菌的PD50(口服)在7.06mg/kg至約10.83mg/kg的范圍。
E.PDF抑制劑在小鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究在體重20-25g的CD1雌性遠(yuǎn)系繁殖小鼠(Charles River Laboratories)中測(cè)定PDF化合物的藥代動(dòng)力學(xué)。在20％環(huán)糊精(Aldrich)中配制PDF化合物，并通過(guò)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌。以10ml/kg的濃度靜脈內(nèi)和口服給予單一化合物或4-6種化合物的混合物。每種化合物的劑量在3-15mg/kg的范圍。在給藥后的0.083、0.25、0.5、1、2、4和7小時(shí)，通過(guò)在麻醉下心臟穿刺采集血清樣品。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)使用不同組的小鼠，每組四只小鼠。血清樣品于-80℃儲(chǔ)存待分析。
加入乙腈使血清蛋白沉淀。蛋白沉淀后的樣品用LC/MS/MS法進(jìn)行分析。對(duì)每種化合物制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于測(cè)定血清中的化合物濃度。按照標(biāo)準(zhǔn)方法計(jì)算出藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，包括最大濃度時(shí)間(Tmax)、最大濃度(Cmax)、終末半壽期(t1/2)和曲線下面積(AUC)。以口服給予的AUC相對(duì)于靜脈給予的AUC的比例計(jì)算出口服生物利用度。優(yōu)選式(I)化合物的生物利用度大于35％。
所以，本發(fā)明化合物可用于抑制細(xì)菌或治療和/或預(yù)防由各種細(xì)菌或原核生物引起的感染性疾病。細(xì)菌的實(shí)例包括但不限于革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性需氧細(xì)菌和厭氧細(xì)菌，包括葡萄球菌(Staphylococci)，例如(S.aureus)和表皮葡萄球菌(S.epidermidis)；腸球菌(Enterococci)，例如糞腸球菌(E.faecalis)和(E.faecium)；鏈球菌(Streptococci)，例如肺炎鏈球菌(S.pneumoniae)；嗜血菌(Haemophilus)，例如流感嗜血菌(H.influenza)；莫拉氏菌(Moraxella)，例如M.catarrhalis；擬桿菌(Bacteroides)，例如脆弱擬桿菌(Bacteroides fragilis)；梭菌(Clostridium)，例如艱難梭菌(Clostridiumdifficile)；奈瑟氏球菌(Niesseria)，例如腦膜炎奈瑟氏球菌(N.meningitidis)和淋病奈瑟氏球菌(N.gonorrhoae)；Legionella和埃希氏菌(Escherichia)，例如大腸桿菌(E.coli)。其他實(shí)例包括分枝桿菌(Mycobacteria)，例如結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)；胞間微生物，例如衣原體(Chlamydia)和立克次氏體(Rickettsiae)；支原體(Mycoplasma)，例如肺炎支原體(M.pneumoniae)；假單胞菌(Pseudomonas)，例如銅綠假單胞菌(P.aeruginosa)；Helicobacterpylori；以及寄生蟲(chóng)，例如惡性瘧原蟲(chóng)(Plasmodium falciparum)。
本申請(qǐng)中所用的“感染性疾病”一詞是指以存在微生物感染例如存在細(xì)菌感染為特征的任何疾病。這種感染性疾病包括，例如，中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染、外耳感染、中耳感染(例如急性中耳炎)、硬膜竇感染、眼感染、口腔感染(例如牙齒、牙齦和粘膜感染)、上呼吸道感染、下呼吸道感染、生殖泌尿系感染、胃腸道感染、婦科感染、敗血病、骨和關(guān)節(jié)感染、皮膚和皮膚結(jié)構(gòu)感染、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、燒傷、外科手術(shù)抗菌預(yù)防、免疫抑制患者(例如接受癌癥化療的患者)或器官移植患者的抗菌預(yù)防，以及由感染性生物引起的慢性疾病(如動(dòng)脈硬化)。
這些化合物可用于對(duì)某種宿主進(jìn)行處理，以治療、預(yù)防感染和/或降低感染的嚴(yán)重程度。宿主包括動(dòng)物、植物、血液制品、培養(yǎng)物以及醫(yī)療或科研設(shè)備(例如玻璃、針頭、外科設(shè)備和管道以及準(zhǔn)備臨時(shí)或永久植入機(jī)體的物品)的表面。優(yōu)選的動(dòng)物包括哺乳動(dòng)物，例如小鼠、大鼠、貓、狗、牛、羊、豬、馬、豬、靈長(zhǎng)類(例如獼猴、黑猩猩、大猩猩，最優(yōu)選的是人)。對(duì)宿主的處理包括但不限于預(yù)防、減少和/或消除由微生物對(duì)宿主的感染引起的臨床癥狀；預(yù)防、減少和/或消除微生物對(duì)宿主的感染；或預(yù)防、減少和/或消除微生物對(duì)宿主的污染。所涉及的微生物優(yōu)選為原核生物，更為優(yōu)選的是細(xì)菌。
對(duì)于以上用途，所需的劑量當(dāng)然會(huì)隨給藥方式、特別是所要治療的癥狀和所需的療效而變化。組合物可以含有例如約0.1％至約99％(重量)(例如約10-60％(重量))的活性物質(zhì)，這取決于給藥方法。如果組合物含有劑量單位，每個(gè)單位含有例如約1-1000mg活性成分，例如1-500mg活性成分。成人治療所采用的劑量在例如每天約1-3000mg的范圍，例如每天約1500mg，這取決于給藥途徑和給藥頻率。這樣的劑量相當(dāng)于每天約0.015-50mg/kg。適宜的是，該劑量為每天約5-20mg/kg。適宜的口服單位劑型包含約0.25-1500mg活性成分。
“可藥用載體”是指用于制備藥物組合物的賦形劑，通常安全、無(wú)毒，在生物學(xué)和其他方面都無(wú)不良效應(yīng)，包括獸用賦形劑和人藥用賦形劑。本說(shuō)明書和權(quán)利要求書中所用的“可藥用載體”既包括一種也包括一種以上這樣的載體。
這些化合物可以以任何常規(guī)途徑給藥，例如局部給藥或全身性給藥，例如口服給藥、局部給藥、腸胃外給藥、皮下給藥或吸入給藥，并可用于治療宿主的細(xì)菌感染，如動(dòng)物、優(yōu)選哺乳動(dòng)物、更優(yōu)選的是人的細(xì)菌感染。
組合物可以以本領(lǐng)域已知的任何常規(guī)途徑給藥，例如皮下給藥、吸入給藥、口服給藥、局部給藥或腸胃外給藥，并可用于治療宿主的細(xì)菌感染，如動(dòng)物、優(yōu)選哺乳動(dòng)物、更優(yōu)選的是人的細(xì)菌感染。
本發(fā)明化合物可以類似于其他抗生素那樣以任何方便用于人類醫(yī)學(xué)或獸醫(yī)學(xué)的方式配制成給藥形式。這些方法是本領(lǐng)域已知的(參見(jiàn)例如Remington’s Pharmaceutical Sciences，Easton，PAMack Publishing Co.)，在此不再贅述。
這些化合物可以是本領(lǐng)域已知的任何劑型，包括但不限于片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、糖錠劑、霜?jiǎng)┗蛞后w制劑，例如口服或無(wú)菌非腸胃用溶液或混懸劑。這些化合物還可以以脂質(zhì)體制劑給藥。這些化合物還可以作為前藥給藥，此時(shí)所給予的前藥會(huì)在所治療的哺乳動(dòng)物體內(nèi)經(jīng)過(guò)生物轉(zhuǎn)化而成為生物活性形式。
本發(fā)明的局部制劑可以是例如軟膏劑、霜?jiǎng)┗蛳磩?、溶液劑、油膏劑、乳劑、硬膏劑、眼藥膏和滴眼液或滴耳液、浸漬敷料和氣霧劑，可以含有適當(dāng)?shù)某Ｒ?guī)添加劑如防腐劑、幫助藥物穿透的溶劑，以及軟膏和霜?jiǎng)┲械臐?rùn)膚劑。
這些制劑還可含有相容性的常規(guī)載體，例如霜?jiǎng)┗蜍浉嗷希约坝糜谙磩┑囊掖蓟蛴痛?。這些載體在制劑中的含量可以是例如約1％至約99％。例如，這些載體可以占制劑的高達(dá)約80％。
口服片劑和膠囊劑可以是單位劑型，并可以含有常規(guī)賦形劑如粘合劑，例如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃蓍膠或聚乙烯吡咯烷酮；填充劑，例如乳糖、蔗糖、玉米淀粉、磷酸鈣、山梨醇或甘氨酸；壓片潤(rùn)滑劑，例如硬脂酸鎂、滑石、聚乙二醇或硅石；崩解劑，例如馬鈴薯淀粉；或可接受的潤(rùn)濕劑，例如月桂基硫酸鈉。片劑可以按照標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)踐中公知的方法進(jìn)行包衣。
口服液體制劑的劑型可以是例如水混懸劑或油混懸劑、溶液劑、乳劑、糖漿劑或酏劑，也可以是供用水或另一種適宜載體在使用前復(fù)制的干產(chǎn)品。這些液體制劑可以含有常規(guī)添加劑，例如懸浮劑，例如山梨醇、甲基纖維素、葡萄糖糖漿、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用脂肪；乳化劑，例如卵磷脂、脫水山梨糖醇單油酸酯或阿拉伯膠；非水性載體(可包括食用油)，例如杏仁油、油性酯如甘油、丙二醇或乙醇；防腐劑，例如對(duì)羥基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸；需要時(shí)還可含有常規(guī)調(diào)味劑或著色劑。
對(duì)于腸胃外給藥，利用化合物和無(wú)菌載體(優(yōu)選水)制備液體單位劑型?；衔锛瓤梢詰腋∫部梢匀芙庠谳d體或其他適宜溶劑中，這取決于所用的載體和濃度。在制備溶液時(shí)，可以將化合物溶解于注射用水中，并在裝入適宜的小瓶或安瓿中之前過(guò)濾除菌，然后再密封。有利的是，可以將諸如局部麻醉劑保存劑和緩沖劑溶解于載體中。為增強(qiáng)穩(wěn)定性，可以在將組合物裝入小瓶后將其冷凍并真空除水。然后將凍干粉密封在小瓶中，并另提供一瓶注射用水以供在使用前復(fù)制出液體。腸胃外用懸浮液以基本相同的方式制備，所不同的是化合物是懸浮在載體中而不是溶解在載體中，并且不能用過(guò)濾法除菌?？梢酝ㄟ^(guò)與氧化乙烯接觸將化合物滅菌，然后再懸浮于無(wú)菌載體中。有利的是，在組合物中加入表面活性劑或潤(rùn)濕劑，以利于化合物的均勻分布。
本發(fā)明化合物，例如式(I)化合物，可以以游離形式或如上所述的可藥用鹽形式給藥。這些鹽可以以常規(guī)形式制備，并且具有與游離化合物相同等級(jí)的活性。
按照前述內(nèi)容，本發(fā)明進(jìn)一步提供1.1一種治療和/或預(yù)防宿主如人或其他動(dòng)物宿主的感染性疾病的方法，該方法包括給予所述宿主有效量的本發(fā)明化合物，例如式(I)化合物，其可藥用鹽或其前藥。
1.2一種抑制宿主中的肽脫甲?；傅姆椒?，該方法包括給予所述宿主有效肽脫甲酰基酶抑制量的本發(fā)明化合物，例如式(I)化合物，其可藥用鹽或其前藥。
2.一種游離形式或可藥用鹽形式的本發(fā)明化合物，例如式(I)化合物，該化合物用作藥物，例如以前面1.1或1.2所示的任何方法用作藥物。
3.一種藥物組合物，例如以前面1.1或1.2所示的任何方法使用的藥物組合物，該組合物包含游離形式或可藥用鹽形式的本發(fā)明化合物，例如式(I)化合物，及其可藥用稀釋劑或載體。
4.一種本發(fā)明化合物，例如式(I)化合物，其可藥用鹽或其前藥，該化合物用作藥物或用于藥物組合物的制備，該藥物和藥物組合物用于前面1.1或1.2所示的任何方法。
疾病的“治療”和“處理”包括(a)預(yù)防疾病，即，使疾病的臨床癥狀在可能已接觸該疾病或易患該疾病但尚未經(jīng)歷或顯示該疾病的癥狀的宿主(如哺乳動(dòng)物)體內(nèi)不發(fā)展；(b)抑制疾病，即，阻滯或減輕該疾病或其臨床癥狀的發(fā)展；或(c)緩解疾病，即，使該疾病或其臨床癥狀退行。
“有效肽脫甲酰基酶抑制量”是指化合物、其可藥用鹽或其前藥的量在給予宿主以治療對(duì)肽脫甲?；傅囊种朴蟹磻?yīng)的感染性疾病或用于抑制肽脫甲?；笗r(shí)，足以抑制肽脫甲?；??！坝行щ拿摷柞；敢种屏俊钡淖兓Q于所用的化合物、其鹽或其前藥、宿主體內(nèi)受抑制的微生物、治療宿主的年齡、體重、性別、醫(yī)學(xué)狀況、種屬、疾病及其嚴(yán)重程度、以及給藥途徑，但這一量很容易由本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)確定。
本發(fā)明化合物，例如式(I)化合物，其可藥用鹽或其前藥，既可以單獨(dú)給藥也可以與另一種治療劑聯(lián)合給藥。這類治療劑的實(shí)例包括但不限于其他抗菌劑，例如β-內(nèi)酰胺類，如青霉素類；頭孢菌素類；碳青霉烯類；酮內(nèi)酯類；喹諾酮類，例如氟喹諾酮類；大環(huán)內(nèi)酯類；例如克拉霉素、阿奇霉素或萬(wàn)古霉素；利福霉素類；單環(huán)內(nèi)酰胺類；異煙肼；licosamides；莫匹羅星；磺胺類；苯丙醇類；磷霉素；糖肽類；四環(huán)素類；鏈陽(yáng)性菌素類；氯霉素；以及噁唑烷酮類，抗炎劑，例如皮質(zhì)類固醇類或NSAID；止痛劑，例如麻醉性止痛劑或非麻醉性止痛劑。
根據(jù)上述內(nèi)容，本發(fā)明的另一方面提供5.一種如上所限定的方法，該方法包括將治療有效量的本發(fā)明化合物(例如式(I)化合物)、其可藥用鹽或其前藥和第二藥物聯(lián)合給藥，例如同時(shí)或順序給藥。
6.一種治療聯(lián)合體，例如一種藥盒，該聯(lián)合體包括a)本發(fā)明化合物(例如式(I)化合物)、其可藥用鹽或其前藥；b)至少一種第二活性劑。組分a)和組分b)可以同時(shí)或順序使用。該試劑盒可以包括其給藥說(shuō)明書。
以下是含有式(I)化合物的代表性藥物制劑。
實(shí)施例A片劑將以下成分緊密混合并壓制成單刻痕片劑成分每片的量(mg)本發(fā)明化合物 400玉米淀粉 50交聯(lián)羧甲基纖維素鈉25乳糖 120硬脂酸鎂 5實(shí)施例B膠囊劑將以下成分緊密混合并裝入硬殼明膠膠囊中成分 每膠囊的量(mg)本發(fā)明化合物 200噴霧干燥乳糖 148硬脂酸鎂 2實(shí)施例C混懸劑將以下成分混合制成口服混懸劑成分 量本發(fā)明化合物 1.0g富馬酸 0.5g氯化鈉 2.0g對(duì)羥基苯甲酸甲酯 0.15g對(duì)羥基苯甲酸丙酯 0.05g粒狀糖 25.0g山梨糖醇(70％溶液) 13.00gVeegum K(Vanderbilt Co.) 1.0g調(diào)味劑 0.035ml著色劑 0.5mg蒸餾水 加至100ml實(shí)施例D注射劑將以下成分混合制成注射劑成分 量本發(fā)明化合物 0.2-20mg乙酸鈉緩沖液(0.4M) 20mlHCl(1N)或NaOH(1N)加至適宜的pH無(wú)菌蒸餾水 加至20ml
實(shí)施例E栓劑將本發(fā)明化合物與WitepsolH-5(飽和植物脂肪酸的甘油三酯，Riches-Nelson，Inc.，New York制造)混合，制得總重量為2.5g的栓劑，其組成如下本發(fā)明化合物 500mgWitepsolH-15余量本發(fā)明并不僅僅限于本發(fā)明化合物的臨床應(yīng)用，即在治療宿主的感染中的應(yīng)用。本發(fā)明化合物可用于在任何需要抑制細(xì)菌的場(chǎng)合抑制細(xì)菌，方法是使細(xì)菌與一種或更多種本發(fā)明化合物接觸。本發(fā)明化合物由于能夠抑制細(xì)菌，特別可用于防止細(xì)胞培養(yǎng)物的污染。這里所使用的術(shù)語(yǔ)“抑制”是指遏制、控制、阻滯或殺傷細(xì)菌。出于各種原因，例如為了能夠生產(chǎn)各種物質(zhì)如蛋白質(zhì)，常常需要培養(yǎng)真核細(xì)胞尤其是動(dòng)物細(xì)胞。這些細(xì)胞的實(shí)例包括中國(guó)倉(cāng)鼠卵細(xì)胞(CHO細(xì)胞)、非洲綠猴腎細(xì)胞、通過(guò)使母本細(xì)胞(骨髓瘤等)與產(chǎn)生有用物質(zhì)的正常細(xì)胞(淋巴細(xì)胞等)融合而構(gòu)建的雜交瘤等。一般來(lái)說(shuō)，本發(fā)明化合物以細(xì)菌抑制量加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中，例如濃度為約0.0001-10微克/ml，優(yōu)選約0.0001-1微克/ml，更為優(yōu)選的是約0.001-0.1微克/ml。可以使用本領(lǐng)域已知的任何常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)基。
根據(jù)上述內(nèi)容，本發(fā)明的另一方面提供7.一種防止細(xì)胞培養(yǎng)基的細(xì)菌感染的方法，該方法包括在所述細(xì)胞培養(yǎng)基中加入細(xì)菌抑制量的本發(fā)明化合物，例如式(I)化合物，或其可藥用鹽。
8.一種細(xì)胞培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基包含細(xì)菌抑制量的本發(fā)明化合物，例如式(I)化合物，或其可藥用鹽。
為清楚和易于理解起見(jiàn)，上述發(fā)明已通過(guò)舉例而詳細(xì)敘述。對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的是，可以在所附的權(quán)利要求的范圍內(nèi)做出改變和修改。因此，應(yīng)該理解，上述說(shuō)明只是說(shuō)明性的而非限制性的。所以，本發(fā)明的范圍并非由上述說(shuō)明來(lái)確定，而是由所附的權(quán)利要求書及各項(xiàng)權(quán)利要求的完整等同范圍來(lái)確定。
就所有目的而言，本申請(qǐng)中所引用的所有專利、專利申請(qǐng)和出版物在此通過(guò)引用而全文并入本說(shuō)明書，其效力等同于每篇具體的專利、專利申請(qǐng)和出版物。
權(quán)利要求
1.一種N-[1-氧-(任選2-氮雜)-2-烴基-3-(羧基或硫羥基或羥基氨基羰基或N-羥基甲酰氨基)-丙基]-(芳基或雜芳基)-氮雜環(huán)4-7烷或硫雜氮雜環(huán)4-7烷、其鹽或其前藥。
2.權(quán)利要求1的化合物或其鹽或其前藥，所述化合物具有式(I) 其中R1為與環(huán)氮原子的α位或β位連接的芳基或雜芳基；R2為氫、鹵素或羥基；R3為氫、鹵素、C1-10烴基、C1-10雜烴基，或(R2和R3)共同形成C4-7環(huán)烷基，前提是當(dāng)R3為鹵素時(shí)，R2不為羥基；X是-CH2-或-S-；W是NR5或CR4R5，其中R4是氫、鹵素、C1-10烴基或C1-10雜烴基，R5是C1-10烴基，或(R4和R5)共同形成C4-7環(huán)烷基，前提是當(dāng)W是NR5時(shí)，R2和R3是氫、C1-10烴基或雜烴基；Y是-COOH、-SH、-N(OH)-CHO或-CO-NH(OH)，前提是當(dāng)Y是-N(OH)-CHO或-SH時(shí)，R2是氫，R3是氫、C1-10烴基或C1-10雜烴基；n為0至3，前提是當(dāng)n是0時(shí)，X是-CH2-。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中Y是-CO-NH(OH)或-N(OH)-CHO。
4.權(quán)利要求2或3的化合物，其中W是CR4R5，R4是氫，R5是C1-10烴基。
5.權(quán)利要求2-4中任一項(xiàng)的化合物，其中X是-CH2-，n是1。
6.權(quán)利要求2-5中任一項(xiàng)的化合物，其中R2是羥基、氟或氫，R3是氫。
7.權(quán)利要求2-6中任一項(xiàng)的化合物，其中R1是雜芳基，優(yōu)選噁唑基、甲基噁唑基或吡啶基。
8.一種藥物組合物，該組合物包含一種權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用鹽或其前藥。
9.一種權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用鹽或其前藥，該化合物或其可藥用鹽或其前藥用作藥物。
10.一種治療和/或預(yù)防宿主的感染性疾病的方法，該方法包括給予所述宿主有效量的權(quán)利要求1或2的化合物或其可藥用鹽或其前藥。
11.一種防止細(xì)胞培養(yǎng)基的細(xì)菌感染的方法，該方法包括在所述細(xì)胞培養(yǎng)基中加入細(xì)菌抑制量的權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用鹽。
12.一種細(xì)胞培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基包含細(xì)菌抑制量的權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的化合物或其可藥用鹽。
全文摘要
N－[1－氧－(任選2－氮雜)－2－烴基－3－(羧基或硫羥基或羥基氨基羰基或N－羥基甲酰氨基)－丙基]－(芳基或雜芳基)－氮雜環(huán)4－7烷或硫雜氮雜環(huán)4－7烷、其鹽或其前藥，具有重要的性質(zhì)，例如治療或預(yù)防可用肽脫甲酰基酶抑制劑治療的疾病，如治療細(xì)菌感染。
文檔編號(hào)A61K31/427GK1512991SQ02810990
公開(kāi)日2004年7月14日 申請(qǐng)日期2002年6月14日 優(yōu)先權(quán)日2001年6月15日
發(fā)明者D·V·帕特爾, 袁征宇, R·K·賈殷, J·G·劉易斯, J·雅各布斯, D V 帕特爾, 劉易斯, 賈殷, 韃妓 申請(qǐng)人:維克朗藥物公司