本發(fā)明涉及魚類產(chǎn)品深加工技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及鱈魚活性提取物的制備方法。

背景技術(shù)：

鱈魚，拉丁名為gadusmacrocephalus，在生物學(xué)分類中，鱈魚屬于動(dòng)物界，動(dòng)物門，輻鰭魚綱，鱈形目，鱈科，鱈屬。鱈魚屬冷水性底層魚類，為北方沿海出產(chǎn)的海洋經(jīng)濟(jì)魚類之一。世界上不少國(guó)家把鱈魚作為主要食用魚類。在北歐，鱈魚被稱為“餐桌上的營(yíng)養(yǎng)師”，葡萄牙人就更直接把它稱為“液體黃金”，可見(jiàn)它的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值之高。鱈魚的肉質(zhì)厚實(shí)、刺少、味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)專家指出，鱈魚每百克肉含蛋白質(zhì)16.5克、脂肪0.4克，幾乎等于鯊魚肉。其肉質(zhì)白細(xì)鮮嫩，清口不膩，具有高營(yíng)養(yǎng)、低膽固醇、易于被人體吸收等優(yōu)點(diǎn)，是老少皆宜的營(yíng)養(yǎng)食品。鱈魚魚脂中含有球蛋白、白蛋白及磷的核蛋白，還含有兒童發(fā)育所必需的各種氨基酸，其比值和兒童的需要量非常相近，又容易被人消化吸收，還含有不飽和脂肪酸和鈣、磷、鐵、b族維生素等。然而，鱈魚加工后存在大量的邊角料碎肉，如果不進(jìn)行有效處理，不僅會(huì)造成環(huán)境的污染，而且會(huì)浪費(fèi)大量的資源。如能充分利用這些成分，不僅可提高鱈魚加工的附加值，同時(shí)可減少環(huán)境污染，獲得良好的經(jīng)濟(jì)效益與社會(huì)效益。

魚類活性提取物是從魚中提取的一類純天然營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，相對(duì)分子質(zhì)量較小，容易被吸收，且吸收效率非常高，一方面提供人體生長(zhǎng)發(fā)育所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另一方面對(duì)人體生命活動(dòng)發(fā)揮著極其重要的作用，作為高檔營(yíng)養(yǎng)食品、特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品和保健食品基料，市場(chǎng)前景非常廣闊。目前，中國(guó)鱈魚加工水平較低，多以初加工形式輸出給日本，下腳料作為加工的副產(chǎn)物大多被廢棄，若能從將鱈魚下腳料提取出活性物質(zhì)并且分離純化，不僅能開發(fā)新型的具有生物活性的產(chǎn)品，還能提高鱈魚皮的利用效率。

現(xiàn)有技術(shù)如授權(quán)公告號(hào)為cn104152518b的中國(guó)發(fā)明專利，公開了一種肝病輔食型鱈魚皮膠原蛋白肽的制備方法，該制備方法包括以下步驟：鱈魚皮預(yù)處理；酶解反應(yīng)：加入胰蛋白酶酶解反應(yīng)；超濾得gm2組分；deae-sepharoseff離子交換層析分離得到gm2-2組分；sephadexg-25層析分離得gm2-2-3組分，冷凍干燥后得到肝病輔食型膠原蛋白肽。該制備方法簡(jiǎn)單易行，生產(chǎn)成本低，可以顯著提高水產(chǎn)加工副產(chǎn)品的價(jià)值，避免浪費(fèi)的同時(shí)還保護(hù)了環(huán)境，但鱈魚皮量少，不能大規(guī)模生產(chǎn)，且鱈魚皮膠原蛋白肽產(chǎn)品稍有苦味。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種降血壓效果好，效果溫和、持久，安全無(wú)毒副作用，無(wú)腥苦味，加工制備方法簡(jiǎn)單的鱈魚活性提取物的復(fù)配物及其制備方法。

本發(fā)明針對(duì)上述技術(shù)中提到的問(wèn)題，采取的技術(shù)方案為：鱈魚活性提取物的制備方法，包括脫腥處理、復(fù)合酶的酶解、脫苦、凝膠層析分離，具體操作步驟為：

脫腥處理：將鱈魚下腳料添加占魚肉質(zhì)量1~2%(w/w)的β-環(huán)糊精，浸漬80~100min，除去鱈魚的腥味，然后用絞肉機(jī)攪碎得鱈魚糜，β-環(huán)糊精是環(huán)狀低聚葡萄糖，存在1個(gè)立體的疏水空腔，依據(jù)分子大小的匹配，以及范德華、疏水作用力與客體分子形成包合物，從而達(dá)到脫腥的目的，且不影響鱈魚肉的品質(zhì)；

復(fù)合酶的酶解：以鱈魚糜與水的比例為1:8~10加入去離子水，混勻，調(diào)節(jié)ph至6~7，按1000~1300u/g魚糜的量加入復(fù)合蛋白酶，復(fù)合蛋白酶為胰蛋白酶與中性蛋白酶，其質(zhì)量比為2~3:1，在40~50℃下酶解3~5h，滅酶，酶解產(chǎn)物含有一種ace抑制肽，其氨基酸序列為hshacascycrclrcrvlhpgcvncyrcsr，能夠很好地阻止血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的催化反應(yīng)，預(yù)防和抑制高血壓，同時(shí)增加舒緩肽和腦啡肽的水平，大大的降低了患有高血壓的風(fēng)險(xiǎn)，改善血管的功能，增加內(nèi)臟器官的供血量和身體機(jī)能，且該肽只對(duì)高血壓患者有降壓作用，對(duì)正常人血壓沒(méi)有影響，作用時(shí)間也較長(zhǎng)；

脫苦：酶解液中加入0.8~1.2wt%的活性炭，在35~45℃下脫苦50~70min，然后在進(jìn)口溫度170~190℃、出口溫度60~80℃條件下噴霧干燥，活性炭是一種多孔性含碳物質(zhì)，具有很強(qiáng)的吸附能力，可根據(jù)蛋白水解液中不同多肽成分的疏水性不同，將其中的疏水性高的多肽予以選擇性的去除，該脫苦方法操作簡(jiǎn)單、有效、成本低；

凝膠層析分離：填裝經(jīng)過(guò)預(yù)處理的凝膠到充滿去離子水的層析柱中，用去離子水2~4ml/min流速平衡2~3倍層析柱的體積，將脫苦后的樣品配成15~25g/l的樣品溶液，用0.4~0.5μm的濾膜過(guò)濾，即得鱈魚活性提取物，該提取物能夠很好地阻止血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的催化反應(yīng)，預(yù)防和抑制高血壓，安全性高，對(duì)人體無(wú)傷害，效果溫和、持久，無(wú)副作用，解決了鱈魚下腳料污染環(huán)境的問(wèn)題，提高鱈魚的附加值，減少環(huán)境污染。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：1）本發(fā)明鱈魚活性提取物能夠很好地預(yù)防和抑制高血壓，改善血管的功能，增加內(nèi)臟器官的供血量和身體機(jī)能，且只對(duì)高血壓患者有降壓作用，對(duì)正常人血壓沒(méi)有影響，作用時(shí)間也較長(zhǎng)；2）產(chǎn)品安全性高，對(duì)人體無(wú)傷害，效果溫和、持久，無(wú)副作用，無(wú)腥苦味，易于被消費(fèi)者接受；3）原料來(lái)源于鱈魚下腳料，解決了鱈魚下腳料污染環(huán)境的問(wèn)題，提高鱈魚的附加值，減少環(huán)境污染，加工制備方法簡(jiǎn)單，易于擴(kuò)大生產(chǎn)。

具體實(shí)施方式

下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明方案作進(jìn)一步說(shuō)明：

實(shí)施例1：

鱈魚活性提取物的制備方法，包括脫腥處理、復(fù)合酶的酶解、脫苦、凝膠層析分離，具體操作步驟為：

1）脫腥處理：將鱈魚下腳料添加占魚肉質(zhì)量1.2%(w/w)的β-環(huán)糊精，浸漬85min，除去鱈魚的腥味，然后用絞肉機(jī)攪碎得鱈魚糜，β-環(huán)糊精是環(huán)狀低聚葡萄糖，存在1個(gè)立體的疏水空腔，依據(jù)分子大小的匹配，以及范德華、疏水作用力與客體分子形成包合物，從而達(dá)到脫腥的目的，且不影響鱈魚肉的品質(zhì)；

2）復(fù)合酶的酶解：以鱈魚糜與水的比例為1:8加入去離子水，混勻，調(diào)節(jié)ph至6.5，按1200u/g魚糜的量加入復(fù)合蛋白酶，復(fù)合蛋白酶為胰蛋白酶與中性蛋白酶，其質(zhì)量比為2:1，在50℃下酶解4h，滅酶，酶解產(chǎn)物含有一種ace抑制肽，其氨基酸序列為hshacascycrclrcrvlhpgcvncyrcsr，能夠很好地阻止血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的催化反應(yīng)，預(yù)防和抑制高血壓，同時(shí)增加舒緩肽和腦啡肽的水平，大大的降低了患有高血壓的風(fēng)險(xiǎn)，改善血管的功能，增加內(nèi)臟器官的供血量和身體機(jī)能，且該肽只對(duì)高血壓患者有降壓作用，對(duì)正常人血壓沒(méi)有影響，作用時(shí)間也較長(zhǎng)；

3）脫苦：酶解液中加入1wt%的活性炭，在40℃下脫苦60min，然后在進(jìn)口溫度180℃、出口溫度70℃條件下噴霧干燥，活性炭是一種多孔性含碳物質(zhì)，具有很強(qiáng)的吸附能力，可根據(jù)蛋白水解液中不同多肽成分的疏水性不同，將其中的疏水性高的多肽予以選擇性的去除，該脫苦方法操作簡(jiǎn)單、有效、成本低；

4）凝膠層析分離：填裝經(jīng)過(guò)預(yù)處理的凝膠到充滿去離子水的層析柱中，用去離子水2.5ml/min流速平衡2倍層析柱的體積，將脫苦后的樣品配成18g/l的樣品溶液，用0.42μm的濾膜過(guò)濾，即得鱈魚活性提取物，該提取物能夠很好地阻止血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的催化反應(yīng)，預(yù)防和抑制高血壓，安全性高，對(duì)人體無(wú)傷害，效果溫和、持久，無(wú)副作用，解決了鱈魚下腳料污染環(huán)境的問(wèn)題，提高鱈魚的附加值，減少環(huán)境污染。

實(shí)施例2：

鱈魚活性提取物的制備方法，包括脫腥處理、復(fù)合酶的酶解、脫苦、凝膠層析分離，具體操作步驟為：

1）脫腥處理：將鱈魚下腳料添加占魚肉質(zhì)量2%(w/w)的β-環(huán)糊精，浸漬90min，除去鱈魚的腥味，然后用絞肉機(jī)攪碎得鱈魚糜，β-環(huán)糊精是環(huán)狀低聚葡萄糖，存在1個(gè)立體的疏水空腔，依據(jù)分子大小的匹配，以及范德華、疏水作用力與客體分子形成包合物，從而達(dá)到脫腥的目的，且不影響鱈魚肉的品質(zhì)；

2）復(fù)合酶的酶解：以鱈魚糜與水的比例為1:9加入去離子水，混勻，調(diào)節(jié)ph至7，按1300u/g魚糜的量加入復(fù)合蛋白酶，復(fù)合蛋白酶為胰蛋白酶與中性蛋白酶，其質(zhì)量比為2.7:1，在47℃下酶解4.5h，滅酶，酶解產(chǎn)物含有一種ace抑制肽，其氨基酸序列為hshacascycrclrcrvlhpgcvncyrcsr，能夠很好地阻止血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的催化反應(yīng)，預(yù)防和抑制高血壓，同時(shí)增加舒緩肽和腦啡肽的水平，大大的降低了患有高血壓的風(fēng)險(xiǎn)，改善血管的功能，增加內(nèi)臟器官的供血量和身體機(jī)能，且該肽只對(duì)高血壓患者有降壓作用，對(duì)正常人血壓沒(méi)有影響，作用時(shí)間也較長(zhǎng)；

3）脫苦：酶解液中加入0.9wt%的活性炭，在42℃下脫苦65min，然后在進(jìn)口溫度175℃、出口溫度75℃條件下噴霧干燥，活性炭是一種多孔性含碳物質(zhì)，具有很強(qiáng)的吸附能力，可根據(jù)蛋白水解液中不同多肽成分的疏水性不同，將其中的疏水性高的多肽予以選擇性的去除，該脫苦方法操作簡(jiǎn)單、有效、成本低；

4）凝膠層析分離：填裝經(jīng)過(guò)預(yù)處理的凝膠到充滿去離子水的層析柱中，用去離子水4ml/min流速平衡2倍層析柱的體積，將脫苦后的樣品配成25g/l的樣品溶液，用0.4~0.5μm的濾膜過(guò)濾，即得鱈魚活性提取物，該提取物能夠很好地阻止血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的催化反應(yīng)，預(yù)防和抑制高血壓，安全性高，對(duì)人體無(wú)傷害，效果溫和、持久，無(wú)副作用，解決了鱈魚下腳料污染環(huán)境的問(wèn)題，提高鱈魚的附加值，減少環(huán)境污染。

本發(fā)明的操作步驟中的常規(guī)操作為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，在此不進(jìn)行贅述。

以上所述的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行了詳細(xì)說(shuō)明，應(yīng)理解的是以上所述僅為本發(fā)明的具體實(shí)施例，并不用于限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的原則范圍內(nèi)所做的任何修改、補(bǔ)充或類似方式替代等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

sequencelisting

<110>新昌縣瑞天食品科技有限公司

<120>鱈魚活性提取物的制備方法

<130>1

<160>1

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>30

<212>prt

<213>人工合成

<400>1

hisserhisalacysalasercystyrcysargcysleuargcysarg

151015

valleuhisproglycysvalasncystyrargcysserarg

202530