本發(fā)明屬于功能食品和健康食品領(lǐng)域，具體涉及一種表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物穩(wěn)定化魚油制劑及其制備方法。

背景技術(shù)：

魚油中富含多不飽和脂肪酸，是一種優(yōu)質(zhì)的動物油脂資源。多不飽和脂肪酸指含有兩個或兩個以上雙鍵且碳鏈長度為18～22個碳原子的直鏈脂肪酸，可分為ω-3和ω-6多不飽和脂肪酸。ω-3多不飽和脂肪酸中對人體最重要的兩種不飽和脂肪酸是DHA和EPA。EPA是二十碳五烯酸，具有清理血管中的垃圾(膽固醇和甘油三酯)的功能。DHA是二十二碳六烯酸，具有軟化血管、健腦益智、改善視力的功效。

許多研究顯示食用具有長鏈ω-3多不飽和脂肪酸的食物與減少冠心病的風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。必需脂肪酸對胎兒及嬰兒的生長發(fā)育極其重要，特別是腦部和視力的發(fā)育。但是魚油中多不飽和脂肪酸，極易發(fā)生氧化，并且魚油的水不溶性也極大的限制了其在食品中的應(yīng)用。因此魚油在食品中應(yīng)用需要添加乳化劑和抗氧化劑以實(shí)現(xiàn)其加工和儲運(yùn)穩(wěn)定性。

雞蛋因其營養(yǎng)價值高、味道鮮美等優(yōu)點(diǎn)成為日常生活的主要食物之一，由于蛋黃中富含卵磷脂、ω-3多不飽和脂肪酸、膽堿等生物活性物質(zhì)，實(shí)現(xiàn)了其高效利用。但人們對蛋清重視不夠，甚至廢棄不用。拓寬蛋清的應(yīng)用范圍意義重大。雞蛋清中的主要蛋白是卵清蛋白，為雞蛋中的貯藏蛋白，具有發(fā)泡性、凝膠性及乳化性等功能性質(zhì)，是一種優(yōu)良的食品乳化劑。不足之處是卵清蛋白的抗氧化性比較弱，通常需要額外添加抗氧化劑，但是二者結(jié)合效果有時不理想。因此利用我國特色茶葉資源中的天然抗氧化物質(zhì)表沒食子兒茶素沒食子酸酯，開發(fā)一種具有抗氧化功能的卵清蛋白獲得穩(wěn)定的魚油制劑，具有重要價值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物及其制備方法，該表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物可作為穩(wěn)定劑，尤其可作為抗氧化劑使用，且制備方法簡單，原料來源廣泛易得。

本發(fā)明提供了一種表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物穩(wěn)定化魚油制劑及其制備方法，該魚油制劑的氧化穩(wěn)定性大大提高，延長了貨架期，且制備方法簡單，原料來源廣泛易得。

一種表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物的制備方法，包括：以表沒食子兒茶素沒食子酸酯和卵清蛋白為原料通過接枝制備表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物。

一種表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物穩(wěn)定化魚油制劑的制備方法，包括以下配方和制作步驟：

(1)以表沒食子兒茶素沒食子酸酯和卵清蛋白為原料通過接枝制備表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物；

(2)利用得到的表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物制備穩(wěn)定化的魚油制劑。

作為優(yōu)選，所述的接枝為將表沒食子兒茶素沒食子酸酯接枝到卵清蛋白上。所述兒茶素通過自由基反應(yīng)接枝到卵清蛋白上。

作為優(yōu)選，所述的表沒食子兒茶素沒食子酸酯通過自由基方法引發(fā)到卵清蛋白上的接枝反應(yīng)。

作為優(yōu)選，所述的自由基通過L-抗壞血酸與過氧化氫氧化還原對產(chǎn)生。

作為優(yōu)選，所述的L-抗壞血酸與過氧化氫氧化摩爾比為1:(5-50)，優(yōu)選為1:(5-10)；

作為優(yōu)選，所述的表沒食子兒茶素沒食子酸酯與抗壞血酸的摩爾比為1:(1-50)，優(yōu)選為1:(1-5)。

作為優(yōu)選，所述的表沒食子兒茶素沒食子酸酯與卵清蛋白的質(zhì)量比為(0.1-5):5，優(yōu)選為(0.2-2.5)：5。

作為優(yōu)選，所述表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物可以通過透析進(jìn)行精制提純，透析選用半透膜截留分子量為12000-14000道爾頓，通過該過程脫除未接枝的表沒食子兒茶素沒食子酸酯。

作為優(yōu)選，步驟(2)中，利用得到的表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物制備穩(wěn)定化的魚油制劑，具體包括如下步驟：

(2-1)魚油與制備好的表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物進(jìn)行高速攪拌混合，制備得到粗乳液；

(2-2)將粗乳液進(jìn)行高壓均質(zhì)制備得到最終的穩(wěn)定化魚油制劑；

作為優(yōu)選，上述步驟(2-1)中，所述表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物可以采用表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物水溶液的方式與魚油混合，所述表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物水溶液的質(zhì)量百分比濃度為0.5-5％，進(jìn)一步優(yōu)選為1-2％。作為優(yōu)選，所述魚油與表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物的質(zhì)量比為1:(1-0.01)，優(yōu)選為1:(0.5-0.05)；進(jìn)一步優(yōu)選為1：(0.05-0.2)。

上述步驟(2-1)中，所述高速攪拌混合可以采用機(jī)械攪拌，攪拌速度一般為8000-15000rpm。攪拌時間為10-40分鐘。

作為優(yōu)選，所述高壓均質(zhì)是在50-80MPa條件下進(jìn)行。

本發(fā)明所用的魚油可從市場上購得，比如可以是市購的70％的EPA/DHA(20/50)等。

本發(fā)明還提供了一種由上述任一方法制備得到的表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物，可作為穩(wěn)定劑，比如抗氧化劑等使用。作為優(yōu)選，所述得到的表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物可作為魚油抗氧化劑使用。

本發(fā)明還提供了一種由上述任一方法制備得到的表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物穩(wěn)定化魚油制劑。所述制劑一般為乳液制劑；當(dāng)然也可為其他容易制得的制劑劑型，比如顆粒劑，丸劑等。本發(fā)明的反應(yīng)在室溫下進(jìn)行。

本發(fā)明相對于現(xiàn)有魚油制劑穩(wěn)定化方法具有如下優(yōu)點(diǎn)及效果：

(1)本發(fā)明的表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物有很好的抗氧化性能。

(2)本發(fā)明的表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物能夠很容易與魚油形成穩(wěn)定的乳液制劑。魚油制劑粒徑穩(wěn)定性和抗氧化穩(wěn)定性均明顯提高；特別是粒徑穩(wěn)定性更是顯著提高，根據(jù)實(shí)施例檢測結(jié)果，本發(fā)明制得的表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物魚油制劑的14天粒徑穩(wěn)定性是未改性的卵清蛋白的93倍。

(3)本發(fā)明的表沒食子兒茶素沒食子酸酯、卵清蛋白，原料來源廣泛、價格便宜、制作工藝簡便，適用于工業(yè)化生產(chǎn)應(yīng)用。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。

實(shí)施例1

將1克卵清蛋白溶解于100mL水中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入1毫升過氧化氫(10M)和0.25克L-抗壞血酸，25攝氏度反應(yīng)2小時后，加入表沒食子兒茶素沒食子酸酯(0.7mmol)再反應(yīng)24小時。反應(yīng)結(jié)束后透析(截留分子量：12000-14000道爾頓)除去未反應(yīng)的表沒食子兒茶素沒食子酸酯，冷凍干燥得到表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物(收率為78％)。然后將得到的表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物配制成1％水溶液，魚油與該水溶液以質(zhì)量比1:9進(jìn)行加料，在10000rpm轉(zhuǎn)速下高速混合10分鐘，形成粗乳液。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)行60MPa高壓均質(zhì)制備得到最終魚油乳液制劑。

所用的魚油從市場上購得，包括70％的EPA/DHA(20/50)。

實(shí)施例2

將1克卵清蛋白溶解于100mL水中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入1毫升過氧化氫(10M)和0.30克L-抗壞血酸，25攝氏度反應(yīng)2小時后，加入表沒食子兒茶素沒食子酸酯(0.8mmol)再反應(yīng)24小時。反應(yīng)結(jié)束后透析(截留分子量：12000-14000道爾頓)除去未反應(yīng)的表沒食子兒茶素沒食子酸酯，冷凍干燥得到表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物(收率為79％)。然后將得到的表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物配制成1.1％水溶液，魚油與該水溶液以質(zhì)量比1:9進(jìn)行加料，在10000rpm轉(zhuǎn)速下高速混合10分鐘，形成粗乳液。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)行60MPa高壓均質(zhì)制備得到最終魚油乳液制劑。

所用的魚油從市場上購得，包括70％的EPA/DHA(20/50)。

實(shí)施例3

將1克卵清蛋白溶解于100mL水中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入1毫升過氧化氫(10M)和0.20克L-抗壞血酸，25攝氏度反應(yīng)2小時后，加入表沒食子兒茶素沒食子酸酯(0.7mmol)再反應(yīng)24小時。反應(yīng)結(jié)束后透析(截留分子量：12000-14000道爾頓)除去未反應(yīng)的表沒食子兒茶素沒食子酸酯，冷凍干燥得到表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物(收率為75％)。然后將得到的表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物配制成1.2％水溶液，魚油與該水溶液以質(zhì)量比1:9進(jìn)行加料，在10000rpm轉(zhuǎn)速下高速混合10分鐘，形成粗乳液。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)行60MPa高壓均質(zhì)制備得到最終魚油乳液制劑。

所用的魚油從市場上購得，包括70％的EPA/DHA(20/50)。

性能測試?yán)?/p>

實(shí)施例1制備得到的表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物結(jié)構(gòu)測定數(shù)據(jù)：質(zhì)譜顯示表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物分子離子峰為45182.77，相對于卵清蛋白原料44561.32有顯著增加，證明了表沒食子兒茶素沒食子酸酯成功接枝。針對實(shí)施例1～3制備得到的表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物抗氧化活性測試：使用經(jīng)典ORAC方法對實(shí)施例1～3制備得到的表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物的抗氧化活性進(jìn)行測試，結(jié)果表明表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物的ORAC抗氧化活性分別是是未改性的卵清蛋白的12.7倍，13.5倍，11.5倍，抗氧化性能顯著提高。

魚油制劑穩(wěn)定性測試：針對實(shí)施例1-3制備得到的表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物穩(wěn)定化魚油乳液制劑，對形成魚油制劑粒徑和抗氧化穩(wěn)定性等指標(biāo)進(jìn)行測試，結(jié)果表明表沒食子兒茶素沒食子酸酯卵清蛋白共價物穩(wěn)定化魚油制劑的14天粒徑穩(wěn)定性分別為是未改性的卵清蛋白的93倍(實(shí)施例1)，95倍(實(shí)施例2)，93倍(實(shí)施例3)，氧化穩(wěn)定性分別是未修飾的卵清蛋白的3倍(實(shí)施例1)，4倍(實(shí)施例2)，3倍(實(shí)施例3)，制劑穩(wěn)定性顯著提高。