一種動膠菌樣申氏菌及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種動膠菌樣申氏菌，其分類命名為動膠菌樣申氏菌(Shinella zoogloeoides)，在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為：CGMCC No.9280，保藏日期為2014年06月09日。本發(fā)明還提供了該菌種的應(yīng)用。本發(fā)明動膠菌樣申氏菌B230對鐵皮石斛白絹病菌、鐵皮石斛根腐病、鐵皮石斛灰霉病、楊樹大斑潰瘍病等多種病原真菌具有很好的抑制作用，該拮抗細菌對其他植物病害也有很好的防治效果；具有繁殖速度快；能夠人工培養(yǎng)，易于操作，便于生產(chǎn)應(yīng)用；抗逆能力強等優(yōu)點，尤其是對真菌引起的鐵皮石斛白絹病的防治具有重要意義；培養(yǎng)條件簡單、容易保存，易于工業(yè)化生產(chǎn)，具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。
CGMCC No9280
2014.06.09
【專利說明】一種動膠菌樣申氏菌及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物保護領(lǐng)域，尤其涉及一種動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides) B230及其在防治鐵皮石斛白絹病中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 近年來，隨著公眾對食品和環(huán)境中化學農(nóng)藥安全性的普遍關(guān)注，以及一些危險性 化學農(nóng)藥的禁用，促使人們尋求安全有效的植物病害控制新途徑，利用有益微生物防治植 物病害日趨受到重視。它是向被打破了的植物自然生態(tài)系中引入對植物有益的外源拮抗 菌、或通過調(diào)節(jié)環(huán)境促使自然的有益微生物群體增長，并表現(xiàn)出生防活性，通過微生物之間 的相互作用達到防病目的。目前，植物病害的生防已成為各國研究重點。
[0003] 自然界潛在的微生物資源種類豐富，在微生物農(nóng)藥的產(chǎn)品開發(fā)方面有明顯優(yōu)勢， 因此世界各國都投入大量的人力和財力，研究、開發(fā)具有自主知識產(chǎn)權(quán)的新型微生物農(nóng)藥， 并以此帶動其他高科技產(chǎn)業(yè)的全面發(fā)展。我國也把微生物農(nóng)藥的研制和開發(fā)列為國家重點 科技攻關(guān)和1?新技術(shù)發(fā)展計劃。
[0004] 鐵皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo)屬國家二級保護植物，是中 藥石斛中珍貴品種之一，因表皮呈鐵綠色而得名；其主要成分具有獨特的保健與藥用價值， 被道家養(yǎng)生經(jīng)典著作《道臧》譽為"中華九大仙草之首"。在我國，自然分布于浙江、安徽、福 建、湖南、廣西、四川和云南等地人跡稀少的、懸崖峭壁背陰處的石縫里，終年飽受云霧雨露 滋潤，生長期為3-5年，自然產(chǎn)量極少。
[0005] 但是，盡十多年來，隨著鐵皮石斛人工栽培面積不斷擴大，鐵皮石斛白絹病 (Sclerotium delfphninii)發(fā)生較普遍，造成根部腐爛，葉片變黃、脫落，最后導致全株死 亡，經(jīng)濟損失巨大，為此，鐵皮石斛白絹病的防治具有現(xiàn)實意義。
[0006] 從保護生態(tài)環(huán)境和食品安全的角度出發(fā)，鐵皮石斛需要有機栽培；因此研制對人 體安全的微生物制劑來控制鐵皮石斛病害，達到安全食用的目的，也符合生物農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)的 發(fā)展。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 發(fā)明目的：為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的第一目的在于提供一種對鐵皮石 斛白絹病菌具有拮抗作用的動膠菌樣申氏菌。
[0008] 本發(fā)明的第二目的在于提供動膠菌樣申氏菌在防治鐵皮石斛白絹病中的應(yīng)用。
[0009] 技術(shù)方案：為了解決上述第一目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：一種動膠菌樣 申氏菌，其分類命名為動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides),在中國微生物菌種保藏 管理委員會普通微生物中心（簡稱CGMCC)保藏，保藏單位地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1 號院3號，中國科學院微生物研究所，郵政編碼為100101，其保藏編號為：CGMCC No. 9280， 保藏日期為2014年06月09日。
[0010] 為了解決上述的第二目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：所述的動膠菌樣申氏菌 (Shinella zoogloeoides)B230在防治鐵皮石斛白絹病中的應(yīng)用。
[0011] 具體應(yīng)用為：將動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230接種于液體發(fā)酵 培養(yǎng)基中，在28°C -35°C下發(fā)酵培養(yǎng)48-72小時，得到的發(fā)酵液作為防治鐵皮石斛白絹病菌 的菌劑。
[0012] 本發(fā)明中所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為：1000mL蒸餾水，牛肉膏2-5g，蛋白胨5-10g， 氯化鈉 4-5g，pH6.5-7.5。
[0013] 本發(fā)明中所述的動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230的形態(tài)學和生理 活性特征如下：
[0014] 所述動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng) 基平板上菌落較大，淺黃色，表面隆起，菌落有波紋，邊緣較規(guī)則，菌體桿狀，兩端鈍圓， 大小為1. 90-5. 11X0. 49-0. 71 μ m，平均3. 32X0. 58μπι;芽孢兩端生，橢圓形，大小為 0· 64-0. 92 X 0· 51-0. 66 μ m，平均 0· 70 X 0· 55 μ m。
[0015] 革蘭氏陰性桿菌，好氧；在固體培養(yǎng)基中呈黃褐色、表面光滑的圓形小菌落；在液 體培養(yǎng)基中有自絮凝現(xiàn)象；對氨芐青霉素、卡那霉素、壯觀霉素有抗性，對氯霉素、四環(huán)素、 頭孢敏感。
[0016] 動膠菌樣申氏菌的16SrDNA序列如SEQ ID No. 1所示。將所測16SrDNA序列通過 BLAST比對，鑒定為動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)。
[0017] 有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點是：
[0018] (1)動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230對多種植物病原菌具有 抑制作用，在拮抗細菌對植物病害生物防治中起到非常重要的作用，例如種類和數(shù)量眾 多；對病原菌的作用方式多樣化；繁殖速度快；能夠人工培養(yǎng)，易于操作，便于生產(chǎn)應(yīng)用； 抗逆能力強等優(yōu)點，尤其是對真菌引起的鐵皮石斛白絹病、鐵皮石斛根腐病Fusarium pro 1 iferatum)、鐵皮石斛灰霉病的防治效果佳。
[0019] (2)動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230培養(yǎng)條件簡單、容易保存，易 于工業(yè)化生產(chǎn)，具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0020] 圖la為本發(fā)明中動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230的形態(tài)圖；
[0021] 圖lb為本發(fā)明中動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230芽孢形態(tài)圖（在 兩端折光體）；
[0022] 圖2a為本發(fā)明中動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230對鐵皮石斛白 絹病菌（Sclerotium delfphninii)的抑制作用；
[0023] 圖2b為本發(fā)明中動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230對鐵皮石斛根 腐病菌（Fusarium proliferatum)的抑制作用；
[0024] 圖2c為本發(fā)明中動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230對鐵皮石斛灰 霉病菌（Botrytis cinerea)的抑制作用；
[0025] 圖2d為本發(fā)明中動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230對草莓根腐病 菌（Fusarium oxsporum)的抑制作用；
[0026] 圖2e為本發(fā)明中動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230對楊樹大斑病 菌（Dothichiza populea)的抑制作用；
[0027] 圖2f為本發(fā)明中動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230對小麥赤霉病 菌（Fusarium asiaticum)的抑制作用；
[0028] 圖3a為本發(fā)明中采用動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230對鐵皮石 斛白絹病的防治試驗。
[0029] 圖3b為本發(fā)明中未采用動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230菌液處 理鐵皮石斛（對照）。

【具體實施方式】
[0030] 下面結(jié)合實驗例詳細闡述本發(fā)明動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230 的應(yīng)用。
[0031] 實驗例1 :動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230對鐵皮石斛白絹病菌 (Sclerotium delfphninii)、鐵皮石斛根腐病菌（Fusarium proliferatum)、鐵皮石斛灰 霉菌（Botrytis cinerea)、草莓根腐病（Fusarium oxsporum)、楊樹大斑病菌（Dothichiza populea)、小麥赤霉病菌（Fusarium asiaticum)的平板抑菌作用。
[0032] 將用LB斜面活化的動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230菌株劃線接 種于90mm PDA平板一側(cè)，再將鐵皮石斛灰霉菌、鐵皮石斛根腐病菌、鐵皮石斛白絹病菌、草 莓根腐病、小麥赤霉病菌和楊樹大斑病菌的PDA平板培養(yǎng)物用直徑5mm打孔器打取同質(zhì)同 量的菌塊，接種于平板另一側(cè)。30±1°C培養(yǎng)15天和30天，觀察抑菌能力，并記錄抑制帶的 寬度（如表1)，實驗效果如圖2a至圖2f所示。試驗結(jié)果表明，動膠菌樣申氏菌B230對6 種病原菌均有較好的拮抗作用，以占據(jù)培養(yǎng)皿的直徑判斷抑制效果，用B230細菌的PDA圓 塊作為對照（表2)。
[0033] 表1 B230對鐵皮石斛白絹病菌等6種其他病原菌15天和30天的抑制作用
[0034]

【權(quán)利要求】
1. 一種動膠菌樣申氏菌，其分類命名為動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)，保 藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCC No. 9280,保藏 日期為2014年06月09日。
2. 權(quán)利要求1所述的動膠菌樣申氏菌在防治鐵皮石斛白絹病中的應(yīng)用。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于：將動膠菌樣申氏菌（Shinella zoogloeoides)接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在28°C -35°C下發(fā)酵培養(yǎng)48-72小時，得到的發(fā)酵液 作為防治鐵皮石斛白絹病菌的菌劑。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為：1000mL蒸餾 水，牛肉膏2-5g，蛋白胨5-10g，氯化鈉4-5g，ρΗ6· 5-7. 5。
5. 權(quán)利要求1所述的動膠菌樣申氏菌在防治鐵皮石斛根腐病中的應(yīng)用。
6. 權(quán)利要求1所述的動膠菌樣申氏菌在防治鐵皮石斛灰霉病中的應(yīng)用。
7. 權(quán)利要求1所述的動膠菌樣申氏菌在防治草莓根腐病中的應(yīng)用。
8. 權(quán)利要求1所述的動膠菌樣申氏菌在防治楊樹大斑病中的應(yīng)用。
9. 權(quán)利要求1所述的動膠菌樣申氏菌在防治小麥赤霉病中的應(yīng)用。
【文檔編號】C12R1/01GK104232513SQ201410398237
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年8月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月13日
【發(fā)明者】趙楠, 劉玉華, 趙桂華 申請人:江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學院