專利名稱：用二價錳離子溶液穩(wěn)定或再活化肌酸酐傳感器的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及穩(wěn)定或再活化肌酸酐傳感器的方法，所述肌酸酐傳感器包含作為生物活性分子的肌酸酐酶，以及穩(wěn)定的傳感器和包含作為生物活性分子的肌酸酐酶的傳感器膜。本發(fā)明還涉及實行此方法的儀器。
背景技術(shù)：
用于測定生理樣品參數(shù)的傳感器廣泛應(yīng)用在化學(xué)、生物學(xué)和生理學(xué)各個領(lǐng)域。可利用含有合適的一種或多種酶的傳感器測定可被生物活性分子，如酶，降解的物質(zhì)的存在和其濃度。這些傳感器常指生物傳感器。已知生物傳感器應(yīng)用電化學(xué)和光度測定原理。在生理液體樣品，例如全血、血清或尿中，肌酸酐的測定對于評價腎功能是重要的。磷酸肌酸儲存于脊椎動物的肌肉中，并且提供能量儲備。其不可逆地轉(zhuǎn)化為肌酸酐(一種降解產(chǎn)物)和高能磷酸基(phosphate group)。在正常肌肉功能范圍內(nèi)，大約每天有磷酸肌酸的總量1-2%轉(zhuǎn)化為肌酸酐。肌酸酐釋放入血液，并且由腎清除。因此，在健康個體中，肌酸酐的水平在約35至約75 μ M相對恒定。如果血液中肌酸酐的水平增加，其可能為某種腎機能障礙的標(biāo)志。在這種情況下，肌酸酐的水平可增加至高達(dá)2，000 μ M0肌酸酐可通過包含各種酶的生物傳感器測量，所述酶例如肌酸酐亞胺水解酶(通過NH3測量)或肌酸酐酰胺水解酶。肌酸酐酰胺水解酶也指“肌酸酐酶”。在肌酸酐酶存在下，在生理液體中的肌酸酐水平通過導(dǎo)致H2O2形成的酶反應(yīng)級聯(lián)測定，其可依次通過電流計的或光度計的方法檢測。在一些系統(tǒng)中，還可使用酶(如過氧物酶)或指示劑(如發(fā)光團)。酶的反應(yīng)級聯(lián)包含肌酸酐酶(EC 3. 5. 2. 10)，肌酸酰胺水解酶(EC3. 5. 3. 3_ “肌酸酶”)，和肌氨酸氧化酶(EC I. 5. 3. I)，見下列反應(yīng)
權(quán)利要求
1.穩(wěn)定或再活化肌酸酐傳感器的方法，所述肌酸酐傳感器包含作為生物活性分子的肌酸酐酶，所述方法包括將肌酸酐酶暴露于足以增加傳感器的穩(wěn)定性或活性的量的二價錳離子溶液中，其中所述溶液包含濃度范圍在2-25 μ M的二價錳離子，且其中將肌酸酐酶暴露于二價錳離子溶液長達(dá)傳感器工作壽命的至少50%。
2.如權(quán)利要求I的方法，其中所述溶液包含濃度范圍在2-10μ M的二價錳離子。
3.如權(quán)利要求I的方法，其中所述溶液包含濃度范圍在5-10μ M的二價錳離子。
4.如權(quán)利要求1-3任一項的方法，其中通過將包含二價錳離子的溶液傳送至肌酸酐酶，使肌酸酐酶暴露于所述量的二價錳離子。
5.如權(quán)利要求1-4任一項的方法，其中所述溶液通過以下制備在肌酸酐酶暴露于溶液之前，使合適的液體通過濾器，所述濾器包含持續(xù)一段時間釋放二價錳離子的組合物。
6.如權(quán)利要求1-4任一項的方法，其中所述量的二價錳離子通過以下制備為溶液將合適的液體與存在于傳感器的組合物接觸，所述存在于傳感器的組合物在持續(xù)的一段時間內(nèi)釋放二價錳離子，然后將肌酸酐酶暴露于溶液中。
7.如權(quán)利要求5和6中任意一項的方法，其中所述組合物包含二價錳離子的微溶性鹽。
8.如權(quán)利要求7的方法，其中二價錳離子的微溶性鹽選自碳酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、草酸鹽、正磷酸鹽、硒化物、硫化物、氫氧化物、草酸鹽、正磷酸鹽或亞硒酸鹽和其混合物。
9.如權(quán)利要求8的方法，其中微溶性鹽選自碳酸鹽，檸檬酸鹽，酒石酸鹽。
10.如權(quán)利要求1-9任一項的方法，其中肌酸酐酶還暴露于包含陽離子絡(luò)合試劑的溶液中。
11.如權(quán)利要求10的方法，其中陽離子絡(luò)合物試劑為乙二胺四乙酸(EDTA)。
12.如權(quán)利要求10和11中任意一項的方法，其中陽離子絡(luò)合試劑的濃度在1_4μM的范圍內(nèi)。
全文摘要
本發(fā)明提供用于穩(wěn)定肌酸酐傳感器的方法，所述肌酸酐傳感器包含作為生物活性分子的肌酸酐酶。通過將肌酸酐酶暴露于足量的，濃度范圍在0.01至150μm的二價錳離子以穩(wěn)定肌酸酐酶。通過將傳感器暴露于含有二價錳離子的溶液，或通過在傳感器中引入提供持續(xù)釋放的二價錳離子的組合物，從而可獲得穩(wěn)定肌酸酐傳感器的效果。
文檔編號C12Q1/34GK102608176SQ20121001897
公開日2012年7月25日 申請日期2006年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月17日
發(fā)明者托馬斯.杰爾, 蒂娜.克里斯滕森, 詹斯.奧斯特加德 申請人:雷迪奧米特醫(yī)學(xué)公司