專利名稱：一種用于挑取小鼠干細胞單克隆的口吸器的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及一種用于挑取干細胞單克隆的口吸器。
背景技術：
生命科學是20世紀發(fā)展最為迅速的學科之一，已成為自然科學中最為引人注目 的領域。干細胞研究是21世紀生命科學領域的一大熱門課題，研究的熱點首推胚胎干細胞 (Embryonic Stem cells，ES細胞)。1999年末美國《kience》將人類胚胎干細胞研究成 果評為當年世界十大科技進展之首，2000年，((Time))周刊將其列為20世紀末世界十大科 技成就之首，并認為胚胎干細胞和人類基因組將同時成為新世紀最具發(fā)展和應用前景的領 域。干細胞如此受到重視是基于其研究對人類生命健康有重大意義。胚胎干細胞(Embryonic Stem Cells, ES細胞)是從附植前早期胚胎內細胞團 (ICM)或附植后原始生殖細胞(Primordial Germ Cells,PGCs)分離克隆出來的一種具無限 增殖能力和全向分化能力的細胞，即這些細胞可以通過細胞分裂維持自身細胞群的大小， 同時又可以在一定條件下進一步分化成為各種不同的組織細胞，從而構成機體各種復雜的 組織器官，并具有形成嵌合體的能力(包括生殖系嵌合體)。ES細胞是研究動物胚胎早期 發(fā)生、細胞分化、基因調控等發(fā)育生物學基本問題的理想模型，也是組織工程、藥理學和臨 床醫(yī)學研究的重要工具。目前，實驗室內獨立制備ES細胞面臨諸多的技術難點，其中之一 是內細胞團形成單克隆的挑取。

實用新型內容本實用新型是為了解決在制備ES細胞的過程中難以完成挑取ES細胞單克隆的問 題，從而提供一種用于挑取小鼠干細胞單克隆的口吸器。一種用于挑取小鼠干細胞單克隆的口吸器，它包括一號橡膠導管、塑料導管、二號 橡膠導管和玻璃針頭，所述一號橡膠導管的一端是口吸端，所述一號橡膠導管的另一端與 塑料導管的一端連通，所述塑料導管的另一端與二號橡膠導管的一端連通，二號橡膠導管 的另一端與玻璃針頭的基體連通，玻璃針頭的針尖是小鼠干細胞單克隆的挑取端；所述塑 料導管內填充脫脂棉。本實用新型在使用時，將玻璃針頭的針尖伸入小鼠干細胞團內實現克隆的挑取。 本實用新型操作簡單，吸取成功率較高。

圖1是本實用新型的結構示意圖；圖2是具體實施方式
三的結構示意圖。
具體實施方式
具體實施方式
一、結合圖1說明本具體實施方式
，一種用于挑取小鼠干細胞單克 隆的口吸器，它包括一號橡膠導管1、塑料導管2、二號橡膠導管3和玻璃針頭4，所述一號橡膠導管1的一端是口吸端，所述一號橡膠導管1的另一端與塑料導管2的一端連通，所述 塑料導管2的另一端與二號橡膠導管3的一端連通，二號橡膠導管3的另一端與玻璃針頭 4的基體41連通，玻璃針頭4的針尖42是小鼠干細胞單克隆的挑取端；所述塑料導管2內 填充脫脂棉。本實施方式中，玻璃針頭4的針尖在制備過程中，在酒精燈外焰燒2-3秒，使其開 口端平滑，避免劃傷細胞。進行小鼠胚胎干細胞(ES)單克隆挑取方法包括以下操作1、飼養(yǎng)單層的制備(1)將冷凍后的MEF(小鼠胚胎成纖維細胞制作的飼養(yǎng)層細胞)進行解凍并培養(yǎng)至 80% 90% (鋪滿培養(yǎng)皿底部)，換成含10 μ g/ml絲裂霉素C的培養(yǎng)液，在培養(yǎng)箱中作用 2 5小時。(2)事先用明膠覆蓋培養(yǎng)板孔0. 5小時，使用前吸去明膠。去除飼養(yǎng)層細胞培養(yǎng)液 中的絲裂霉素C，胰酶消化，IOOOrp離心5分鐘，并接種到預先用明膠鋪底的培養(yǎng)板孔中，在 溫度為37°C、濃度為5%的(X)2下，飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2、小鼠胚胎干細胞分離(一)實驗用胚胎的獲得(1)下午15:00挑選10只雌性昆明小鼠，并腹腔注射PMSG10IU/只，4 后腹腔注 射HCG10IU/只，同時與雄鼠1 1合籠，次日晨8:00左右檢查陰栓并標記為0. 5dPc。(2) 3. 5天后將小鼠頸椎脫白法處死，然后打開腹腔，暴露子宮，顯微鏡下利用操作 液(PBI)沖洗子宮，獲得囊胚。(二)分離方法(1)將囊腔充分擴展的胚胎在PH為2的酸液中處理30s左右，去掉透明帶，在無 鈣鎂離子的磷酸鹽緩沖液(PBS)中清洗，然后將去透明帶的囊胚移植到制備好的飼養(yǎng)單層 上，換上ES培養(yǎng)基。(2)48小時左右胚胎貼壁，滋養(yǎng)層細胞舒展開并貼附著培養(yǎng)皿表面生長，內細胞團 位于滋養(yǎng)層細胞層的中央部位，向上隆起生長。(3)繼續(xù)培養(yǎng)2至4天，內細胞團繼續(xù)增大，觀察到內細胞團明顯隆起生長時利用 口吸管將其挑出。(4)用末端口徑比內細胞團塊稍大的自制口吸器的毛細針挑起內細胞團，吸至消 化液小滴內。(5)將內細胞團逐一吸至消化液小滴，在室溫下作用1至3分鐘。改用末端口徑比 內細胞團小的自制口吸器的毛細針，輕輕吸吹內細胞團塊，使之分散至3至4個細胞在一起 的小團塊。(6)將分散的內細胞團小塊吸至新制備的添加ES培養(yǎng)基的飼養(yǎng)單層上進行培養(yǎng)， 3-4天可獲得小鼠胚胎干細胞(ES)克隆。
具體實施方式
二、本具體實施方式
與具體實施方式
一所述的一種用于挑取小鼠干 細胞單克隆的口吸器的區(qū)別在于，它還包括吸嘴5，所述吸嘴5為一段塑料管，所述吸嘴5與 一號橡膠導管1的口吸端連通。
具體實施方式
三、結合圖2說明本具體實施方式
，本具體實施方式
與具體實施方式
一或二所述的一種用于挑取小鼠干細胞單克隆的口吸器的區(qū)別在于，玻璃針頭4的針尖 42與玻璃針頭4的基體41之間的角度為90° 180°。本實施方式更方便深入到培養(yǎng)皿中吸取內細胞團形成的克隆。
具體實施方式
四、本具體實施方式
與具體實施方式
一所述的一種用于挑取小鼠干 細胞單克隆的口吸器的區(qū)別在于，玻璃針頭4的針尖42與玻璃針頭4的基體41之間的角 度為120°。
權利要求1.一種用于挑取小鼠干細胞單克隆的口吸器，其特征是它包括一號橡膠導管(1)、塑 料導管O)、二號橡膠導管C3)和玻璃針頭G)，所述一號橡膠導管(1)的一端是口吸端，所 述一號橡膠導管(1)的另一端與塑料導管O)的一端連通，所述塑料導管O)的另一端與 二號橡膠導管(3)的一端連通，二號橡膠導管(3)的另一端與玻璃針頭(4)的基體連 通，玻璃針頭(4)的針尖0 是小鼠干細胞單克隆的挑取端；所述塑料導管O)內填充脫 月旨棉。
2.根據權利要求1所述的一種用于挑取小鼠干細胞單克隆的口吸器，其特征在于它還 包括吸嘴(5)，所述吸嘴(5)為一段塑料管，所述吸嘴(5)與一號橡膠導管(1)的口吸端連通。
3.根據權利要求1或2所述的一種用于挑取小鼠干細胞單克隆的口吸器，其特征在于 玻璃針頭的針尖G2)與玻璃針頭的基體Gl)之間的角度為90° 180°。
4.根據權利要求3所述的一種用于挑取小鼠干細胞單克隆的口吸器，其特征在于玻璃 針頭的針尖G2)與玻璃針頭的基體Gl)之間的角度為120°。
專利摘要一種用于挑取小鼠干細胞單克隆的口吸器，涉及一種用于挑取干細胞單克隆的口吸器，解決了在獨立制備ES細胞的過程中難以完成挑取ES細胞單克隆的問題。它的一號橡膠導管的一端是口吸端，一號橡膠導管的另一端與塑料導管的一端連通，所述塑料導管的另一端與二號橡膠導管的一端連通，二號橡膠導管的另一端與玻璃針頭的基體連通，玻璃針頭的針尖是小鼠干細胞單克隆的挑取端；塑料導管內填充脫脂棉。本實用新型適用于制備小鼠干細胞單克隆。
文檔編號C12M1/26GK201908091SQ20102069350
公開日2011年7月27日 申請日期2010年12月31日 優(yōu)先權日2010年12月31日
發(fā)明者梁洋 申請人:東北林業(yè)大學