專利名稱：便于乳腺上皮細胞分離鑒定的試劑盒的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及一種試驗中使用的試劑盒。
背景技術：
乳腺上皮細胞是泌乳生物學以及乳腺醫(yī)學中常用的細胞類型，設計一種快速穩(wěn)定 的分離培養(yǎng)并快速鑒定乳腺上皮細胞的試劑盒是必要的。在現(xiàn)階段在進行乳腺上皮細胞分 離鑒定時，需要進行試劑的配制和準備，對于實驗人員來說配制和準備試劑增加了實驗過 程中的復雜性。并且因為制作實驗試劑的過程中熟練程度和認知水平的不同，可能配制出 的試劑也并不相同，從而最終得到的結果穩(wěn)定性和可靠性也不同。

實用新型內(nèi)容本實用新型為了解決在進行乳腺上皮細胞分離鑒定試驗的過程中配制和準備試 劑所帶來的實驗過程復雜化的問題，以及所制備出的試劑本身給實驗結果帶來的穩(wěn)定性和 可靠性不高的缺點，而提出了一種便于乳腺上皮細胞分離鑒定的試劑盒。便于乳腺上皮細胞分離鑒定的試劑盒由外包裝盒、七個試劑瓶和銅網(wǎng)組成，所述 的七個試劑瓶分別為消化液試劑瓶、DMEM/F12基礎培養(yǎng)液試劑瓶、D-Hank’ s溶液試劑瓶、 胰蛋白酶消化液試劑瓶，BSA試劑瓶、TBST試劑瓶和熒光標記的角蛋白18抗體試劑瓶，其 中D-Hank’ s溶液試劑瓶和TBST試劑瓶的頂蓋均為沖洗蓋，所述的沖洗蓋是由上部錐形 管和下部圓柱形蓋壁構成一個整體沖洗蓋，下部圓柱形蓋壁內(nèi)側設置有瓶體連接的連接機 構，上部錐形管的頂端設置有沖洗口，瓶體和沖洗蓋內(nèi)部構成一個儲液腔，消化液試劑瓶、 DMEM/F12基礎培養(yǎng)液試劑瓶、胰蛋白酶消化液試劑瓶，BSA試劑瓶和熒光標記的角蛋白18 抗體試劑瓶的頂蓋均為密封蓋；所述的七個試劑瓶和銅網(wǎng)位于外包裝盒內(nèi)。乳腺上皮細胞分離鑒定試劑盒中的試劑進行消化法快速分離獲得乳腺上皮細胞， 并通過進行細胞培養(yǎng)及純化，并鑒定乳腺上皮細胞純度。較傳統(tǒng)方法有效率高、結果穩(wěn)定可 靠等優(yōu)勢。用于實驗室快速穩(wěn)定地從哺乳動物乳腺組織中分離得到高純度乳腺上皮細胞， 操作簡便的試劑盒。

圖1是本實用新型的結構示意圖。
具體實施方式
具體實施方式
一 結合圖1說明本實施方式，本實施方式由外包裝盒9、七個 試劑瓶和銅網(wǎng)8組成，所述的七個試劑瓶分別為消化液試劑瓶1、DMEM/F12基礎培養(yǎng)液試劑 瓶2、D-Hank’S溶液試劑瓶3、胰蛋白酶消化液試劑瓶4，BSA試劑瓶5、TBST試劑瓶6和熒 光標記的角蛋白18抗體試劑瓶7，其中D-Hank’s溶液試劑瓶3和TBST試劑瓶6的頂蓋均 為沖洗蓋，所述的沖洗蓋是由上部錐形管和下部圓柱形蓋壁構成一個整體沖洗蓋，下部圓柱形蓋壁內(nèi)側設置有瓶體連接的連接機構，上部錐形管的頂端設置有沖洗口，瓶體和沖洗 蓋內(nèi)部構成一個儲液腔，消化液試劑瓶1、DMEM/F12基礎培養(yǎng)液試劑瓶2、胰蛋白酶消化液 試劑瓶4，BSA試劑瓶5和熒光標記的角蛋白18抗體試劑瓶7的頂蓋均為密封蓋；所述的七 個試劑瓶和銅網(wǎng)8位于外包裝盒9內(nèi)。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一不同點在于銅網(wǎng)8為200至 600目的銅網(wǎng)，其它組成和連接方式與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三 本實施方式與具體實施方式
二不同點在于銅網(wǎng)8為400目 的銅網(wǎng)，其它組成和連接方式與具體實施方式
二相同。
具體實施方式
四 本實施方式與具體實施方式
一不同點在于七個試劑瓶的 瓶口向上放置。其它組成和連接方式與具體實施方式
一相同。便于乳腺上皮細胞分離鑒定的試劑盒的操作步驟(1)新鮮獲得的哺乳動物乳腺組織用氟康唑注射液(或75%的無水乙醇)清洗乳腺 組織2次，再用D-Hank’ s溶液試劑瓶3對哺乳動物乳腺組織清洗3次。(2)將清洗后的乳腺組織剔除脂肪組織，留下富含乳腺上皮細胞的實體組織，然后 將實體組織盡量剪碎成約Imm3的小塊。(3)將剪碎后的乳腺組織小塊用D-Hank’ s溶液試劑瓶3清洗干凈。(4)清洗后的乳腺組織小塊通過胰蛋白酶消化液試劑瓶4中的消化液進行消化。(5)消化后的組織經(jīng)400目銅網(wǎng)過濾，濾液進行離心后收集沉淀，此沉淀即為乳腺 上皮細胞。(6)收獲的乳腺上皮細胞經(jīng)DMEM/F12基礎培養(yǎng)液試劑瓶2中的DMEM/F12基礎培 養(yǎng)液懸浮，使細胞分散均勻后，接種在細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中，置于37°C、5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(7)乳腺上皮細胞純化待細胞充分貼壁后，再用D-Hank’ s溶液試劑瓶3對其清 洗3次，胰蛋白酶消化液試劑瓶4中的加胰蛋白酶消化液，37°C消化，置于倒置顯微鏡下觀 察，待成纖維細胞細胞質回縮，細胞間隙增大，脫離瓶壁時，立即加DMEM/F12基礎培養(yǎng)液試 劑瓶2中的DMEM/F12培養(yǎng)液終止消化，將液體傾出。然后在培養(yǎng)物中加入胰蛋白酶消化液 試劑瓶4中的胰蛋白酶消化液，37°C繼續(xù)消化5min，吸管輕輕吹打懸浮細胞，離心，重懸細 胞，以適當密度接種于培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)經(jīng)過3次選擇傳代，即可得到純化的乳腺上皮細 胞。(8)乳腺上皮細胞鑒定取一塊潔凈的蓋玻片，放入6孔板中接種細胞，制作乳腺 上皮細胞爬片。待細胞長成80%匯合單層時，倒掉培養(yǎng)液，用預冷的TBST試劑瓶6沖洗細 胞2次。用Iml甲醇于4°C固定lOmin。再用TBST試劑瓶6沖洗細胞3次，每次5min。用 BSA試劑瓶5中的BSA封閉液37°C封閉60min。去除封閉液，用熒光標記的角蛋白18抗體 試劑瓶7中的熒光標記的角蛋白18抗體溶液作用60min。去除抗體，用TBST試劑瓶6沖 洗細胞3次，每次5min。封片后用激光掃描共聚焦顯微鏡或熒光顯微鏡觀察細胞角蛋白18 的特異性表達來鑒定乳腺上皮細胞，有熒光信號的細胞為乳腺上皮細胞。本實用新型內(nèi)容不僅限于上述各實施方式的內(nèi)容，其中一個或幾個具體實施方式的組合同樣也可以實現(xiàn)發(fā)明的目的。
權利要求便于乳腺上皮細胞分離鑒定的試劑盒，其特征在于它由外包裝盒(9)、七個試劑瓶和銅網(wǎng)(8)組成，所述的七個試劑瓶分別為消化液試劑瓶(1)、DMEM/F12基礎培養(yǎng)液試劑瓶(2)、 D Hank’s溶液試劑瓶(3)、胰蛋白酶消化液試劑瓶(4)，BSA試劑瓶(5)、TBST試劑瓶(6)和熒光標記的角蛋白18抗體試劑瓶(7)，其中D Hank’s溶液試劑瓶(3)和TBST試劑瓶(6)的頂蓋均為沖洗蓋，所述的沖洗蓋是由上部錐形管和下部圓柱形蓋壁構成一個整體的沖洗蓋，下部圓柱形蓋壁內(nèi)側設置有與瓶體連接的連接機構，上部錐形管的頂端設置有沖洗口，瓶體和沖洗蓋內(nèi)部構成一個儲液腔；消化液試劑瓶(1)、DMEM/F12基礎培養(yǎng)液試劑瓶(2)、胰蛋白酶消化液試劑瓶(4)，BSA試劑瓶(5)和熒光標記的角蛋白18抗體試劑瓶(7)的頂蓋均為密封蓋；所述的七個試劑瓶和銅網(wǎng)(8)位于外包裝盒(9)內(nèi)。
2.根據(jù)權利要求1所述的便于乳腺上皮細胞分離鑒定的試劑盒，其特征在于銅網(wǎng)(8) 為200至600目的銅網(wǎng)。
3.根據(jù)權利要求2所述的便于乳腺上皮細胞分離鑒定的試劑盒，其特征在于銅網(wǎng)(8) 為400目的銅網(wǎng)。
4.根據(jù)權利要求1所述的便于乳腺上皮細胞分離鑒定的試劑盒，其特征在于七個試劑 瓶的瓶口向上放置。
專利摘要便于乳腺上皮細胞分離鑒定的試劑盒，它涉及試驗中使用的試劑盒。它解決了在進行乳腺上皮細胞分離鑒定試驗的過程中配制和準備試劑所帶來的實驗過程復雜化的問題，以及所制備出的試劑本身給實驗結果帶來的穩(wěn)定性和可靠性不高的缺點。它由外包裝盒、七個試劑瓶和銅網(wǎng)組成，七個試劑瓶分別為消化液試劑瓶、DMEM/F12基礎培養(yǎng)液試劑瓶、D-Hank’s溶液試劑瓶、胰蛋白酶消化液試劑瓶，BSA試劑瓶、TBST試劑瓶和熒光標記的角蛋白18抗體試劑瓶，其中D-Hank’s溶液試劑瓶和TBST試劑瓶的頂蓋為沖洗蓋，其他的頂蓋為密封蓋；所述的七個試劑瓶和銅網(wǎng)位于外包裝盒內(nèi)。乳腺上皮細胞分離鑒定試劑盒中的試劑進行消化法快速分離獲得乳腺上皮細胞，并通過進行細胞培養(yǎng)及純化，并鑒定其純度。
文檔編號C12M1/00GK201762308SQ2010202093
公開日2011年3月16日 申請日期2010年5月31日 優(yōu)先權日2010年5月31日
發(fā)明者侯曉明, 李慶章, 林葉 申請人:東北農(nóng)業(yè)大學