專利名稱：一種惡性乳腺疾病篩查尿檢試劑及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的乳腺惡性腫瘤篩査尿檢試劑。
背景技術(shù)：
乳腺惡性疾病主要是指乳腺癌及其癌前病變。關(guān)于乳腺癌癌前病變的 概念，迄今為止并不十分明確。以往，通過臨床前瞻性研究，發(fā)5見乳腺增 生癥患者其后發(fā)生乳腺癌的比率較一般婦女高，從而認(rèn)為乳腺增生癥屬于 乳腺癌癌前病變。然而近年來，國內(nèi)外學(xué)者大多認(rèn)為單純的乳腺增生癥并 不發(fā)生癌變，主要是在導(dǎo)管上皮高度增生及非典型增生的基礎(chǔ)上發(fā)生癌 變，因此，將上皮高度增生及非典型增生視為癌前病變。但也有人認(rèn)為凡 患有良性乳腺病有上皮增生者，不論其是否有非典型病變，因其可使患乳 腺癌危險(xiǎn)性升高，均應(yīng)予以嚴(yán)格監(jiān)控。盡管有學(xué)者至今認(rèn)為，沒有足夠的、 過硬的證據(jù)表明上皮非典型增生就是癌前病變或癌變的信號(hào)，但有一點(diǎn)認(rèn) 識(shí)是共同的，那就是應(yīng)將患非典型增生的婦女作為高危人群來長期監(jiān)控。 另外，也有一些學(xué)者認(rèn)為導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀瘤及乳腺大囊腫亦有較高的癌變 率。因此，可以認(rèn)為乳腺癌癌前病變是指乳腺小葉或?qū)Ч芟到y(tǒng)上皮細(xì)胞的 高度增生及非典型增生性病變。
癌癥的早期篩查是目前降低癌癥發(fā)病率和死亡率的一個(gè)非常重要的 手段。乳腺惡性腫瘤是目前女性惡性腫瘤中最常見之一，是我國目前女性 中發(fā)病率最高的癌癥之一，也是歐美國家高發(fā)癌癥之一，目前常見的檢測 方法包括各種腫瘤標(biāo)志物，紅外線、X光等。腫瘤標(biāo)志物需要到醫(yī)院抽血，
需要專門的設(shè)備進(jìn)行檢測，紅外線和x光也同樣如此。目前的篩查方法很
多，但都涉及各種儀器設(shè)備，方法復(fù)雜，費(fèi)用高。尿中腫瘤標(biāo)志物的檢測
一直是國際上研究的熱點(diǎn)。尿中腫瘤標(biāo)志物主要包括兩大類特異性蛋白 質(zhì)和核酸及氨基酸代謝產(chǎn)物。美國近期發(fā)現(xiàn)在乳腺癌病人的尿中可檢測到 一種特異性的蛋白質(zhì)，可用于乳腺癌的早期診斷。目前國際上對惡性腫瘤 篩査試劑的要求還沒有一個(gè)明確的標(biāo)準(zhǔn)，爭論也比較多，因?yàn)樘岣哽`敏度 必降低特異性，二者是一對矛盾，在腫瘤學(xué)者認(rèn)為，寧可高一點(diǎn)作j陽性率 (高的靈敏度)，也不能錯(cuò)過一個(gè)癌癥病人，但在一般人眼中包括現(xiàn)在其 他學(xué)科的學(xué)者認(rèn)為，盡可能高的準(zhǔn)確性(高的特異性)是關(guān)鍵指^^，這樣 可以盡可能減少被測者的心理負(fù)擔(dān)。
因此，癌癥篩查試劑，篩査不是診斷，它可以大大提高一般人群的篩 査主動(dòng)性，提高一般人群的篩査率，可以預(yù)期的降低癌癥的發(fā)病率和死亡率。
尿檢試劑則可以在非常簡陋的條件下即可進(jìn)行檢測，方法簡單易操 作，是可以大范圍推廣的篩査方法。目前含汞檢測試劑的相關(guān)技術(shù)專利主
要包括歐洲的EP0341803 A reagent composition for cancer diagnosis which is composed of a mercurous salt and a mercuric salt. Preferably the mercurous salt is Hg2(N03)2 and the mercuric salt is mercuric sulfate or， its hydrate or mercuric oxide。 該發(fā)明主要公 布的是用汞鹽和亞汞鹽溶于混合酸中，所得尿檢試劑主要用于一般癌癥的 診斷和檢査，該專利的主要問題在于試劑的穩(wěn)定性只有三個(gè)月左右， 一般 人群中檢査的陽性率偏高；中國專利96109181. 9，公開了本發(fā)明^^及一種 新的腫瘤普查篩檢用尿檢測試劑，特別是癌癥快速尿檢試劑，它是硝酸和 硫酸的混合酸溶液，其中含有硝酸亞汞和硝酸汞，還含有硝酸鎳和/或醋 酸鎳，以及a—亞硝基—3—萘酚，Hg2+、 Hg2+、 N產(chǎn)和a—亞硝基—3
—萘酚四種組分的重量比為Hg2+ : Hg22+ : Ni2+ : a —亞硝基一e —萘
酚=1 1.5 : 1.2 1.8 : 0. 2 0.4 : 0.05 0. 1，該試劑用于腫瘤普査篩
檢快速、簡便、價(jià)廉，特異性、靈敏度高，假陽性率、假陰性率明顯降低， 還能作為被測者肝膽功能是否異常的定性檢測參考。均己經(jīng)提出了比較實(shí)
用的尿檢試劑配方及相關(guān)原理。但其主要不足之處是穩(wěn)定性較差，放置
3個(gè)月后，顯色效果比新鮮配制的試劑明顯降低。其次，由于此類試劑僅
僅是一種定性試驗(yàn)，用于臨床早期診斷還有很多不確定性，另外，目前此 類試劑主要還是用于大范圍的篩査，范圍廣，而針對性不足。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)和配方的缺陷和不足，本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種 用于乳腺惡性疾病篩査的尿檢試劑，用于乳腺癌前病變和腫瘤的篩查。癌 前病變是可以逆轉(zhuǎn)的，通過這種篩查，可以提示被測者及時(shí)調(diào)整自己的生 活方式，定期檢查。本發(fā)明的另一技術(shù)方案是提供了該尿檢試劑的制備方 法。
本發(fā)明提供了一種用于乳腺惡性疾病篩查的尿檢試劑，它是由硝酸亞
汞和硝酸汞，以及a—亞硝基一e—萘酚，氨基安替比林溶于硝酸和硫 酸的混合酸溶液中制備而成，其中，HgS0"硝酸汞和a—亞硝基一p — 萘酚、4-氨基安替比林四種組分的重量比為HgS04: Hg2(N03)2.2H20 : 4-
氨基安替比林a —亞硝基一 e —萘酚=1 : 1.7 2 : o.ooi o.oo2:
0. 0008 0. 002。
它是由硝酸亞汞和硝酸汞，以及a—亞硝基一P—萘酚，氨基安替比林組成，其中，HgSO,、硝酸汞和a—亞硝基一e—萘酚、4-氨基安替 比林四種組分的重量比為.-HgS04: Hg2(N03)2.2H20 : 4-氨基安替比林a
一亞硝基一 后—萘酚=1: i. 74 : o. 0012 : o. ooos。
本發(fā)明還提供了一種制備乳腺惡性疾細(xì)篩査的尿檢試劑的方法，它包
括如下步驟
a、 按重量配比稱取HgS04、硝酸汞和a—亞硝基一p—萘酚、4-氨 基安替比林；
b、 取HgS04溶于硫酸溶液，為A液；
c、 取Hg2(N03)2.2H20溶于硝酸溶液，為B液；
d、 取a —亞硝基一3 —萘酚溶于硝酸溶液，為C液；
e、 取4-氨基安替比林溶于硝酸溶液，為D液；
f、 將上述四種液體混合，即得到本發(fā)明尿檢試劑。
其中，HgS04溶于6N的硫酸溶液中；Hg2(N0》2.2H20溶于12N的硝酸 溶液中；a—亞硝基一e—萘酚溶于6N的硝酸溶液中；4-氨基安替比林 溶于6N的硝酸溶液中。
本發(fā)明還提供了該尿檢試劑在用于制備乳腺惡性疾病篩查的試劑中 的應(yīng)用。
在惡性乳腺腫瘤的篩查中，此類試劑還達(dá)不到具體到哪一個(gè)病種的篩 查效果，此類試劑的一個(gè)重要作用就是提示作用，通過這種篩查提示被測 者目前的身體狀況，及時(shí)進(jìn)行相應(yīng)的檢查、調(diào)整和治療。在其他該類尿檢 試劑專利中，均提到將此類試劑作為診斷試劑，但根據(jù)臨床應(yīng)用實(shí)踐發(fā)現(xiàn)， 由于該試劑本身的特點(diǎn)，是不能作為診斷試劑的。但是用在篩查方面卻是 大有可為，在乳腺疾病中，如果用此試劑進(jìn)行篩査，發(fā)現(xiàn)陽性提示被測者 及時(shí)到醫(yī)院進(jìn)行進(jìn)一步的檢查，同時(shí)調(diào)整自己的生活方式，是可以真正做 到預(yù)防的，這樣就可以真正起到降低女性乳腺腫瘤發(fā)病率和死亡率的效 果，大大提高女性的生活質(zhì)量。
靈敏度=陽性檢出數(shù)/被檢腫瘤病人總數(shù)=80. 8%
特異性=陰性檢出數(shù)/被檢人群總數(shù)=96. 7%
綜上，本發(fā)明在用4-氨基安替比林代替Ni1^，起到了更好的效果 首先是進(jìn)一步提高了試劑的穩(wěn)定性，可以在任意環(huán)境中存放兩年以上而不 影響試劑的準(zhǔn)確性；其次，該試劑在乳腺惡性疾病的診斷上比所述的兩個(gè) 專利申請更有優(yōu)勢。與現(xiàn)有公開的技術(shù)相比，本發(fā)明中提供的乳腺惡性疾 病尿檢篩查試劑在乳腺腫瘤中同時(shí)具有良好的靈敏度和特異性，實(shí)際的穩(wěn) 定性大大提高，顏色反應(yīng)不僅僅發(fā)生在沉淀中，上清液也會(huì)有明顯的顏色顯示。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例l本發(fā)明尿檢試劑的制備
稱取160克HgS04溶于1000毫升6N的硫酸溶液，為A液；
稱取300克Hg2 (N03) 2. 2H20溶于500毫升12N的硝酸溶液，為B液；
稱取1克a —亞硝基一 p —萘酚溶于50毫升6N的硝酸溶液，為C
液；
稱取1克4-氨基安替比林溶于50毫升6N的硝酸溶液，為D液； 將上述四種液體按下述體積比仔細(xì)混合，即得到符合要求的乳腺惡性 疾病篩查試劑
VA:VB:VC:VD=7.0:2.9:0.06:0.04相當(dāng)于重量比為HgS04 、 Hg2(N03)2.6H20和a—亞硝基一e—萘酚、4-氨基安替比林=1: 1.8: 0.0012: 0.0008。
實(shí)施例2 本發(fā)明尿檢試劑的制備
配制原料液體與實(shí)施例1相同，混合比例如下
VA:VB:VC:VD=7.8:2. 1:0.04:0.06相當(dāng)于重量比為 HgS04 、 Hg2(N03)2. 6H20和a 一亞硝基一 后 一萘酚、4-氨基安替比林=1. 2: 1. 44: 0.0008: 0.0012
實(shí)施例3本發(fā)明尿檢試劑的制備
配制原料液體的方法與實(shí)施例1相同，混合比例如下重量比為-HgS04、Hg2(N03)2. 6H20和a —亞硝基—P 一萘酚、4_氨基安替比林=1: 1. 7: 0.0008: 0.001。
實(shí)施例4本發(fā)明尿檢試劑的制備
配制原料液體的方法與實(shí)施例1相同，混合比例如下重量比為-
HgS04、 Hg2(N03)2. 6H20和a—亞硝基一 ^ 一萘酚、4-氨基安替比林=1: 2: 0.002: 0.002。
實(shí)施例5本發(fā)明尿檢試劑的制備
配制原料液體的方法與實(shí)施例1相同，混合比例如下重量比為 HgS04、Hg2(N03)2. 6&0和a —亞硝基一 3 —萘酚、4-氨基安替比林=1:1. 74: 0,0008: 0.0012。
以下通過具體篩查試驗(yàn)證明本發(fā)明的有益效果。
試驗(yàn)例1本發(fā)明尿檢試劑的檢驗(yàn)性能對照試驗(yàn)
將實(shí)施例1-5制備的本發(fā)明篩查尿檢試劑進(jìn)行試驗(yàn)，其中，對比試
劑如下
對比試劑1:與本發(fā)明尿檢試劑相比，該試劑中沒有加入4-氨基安替比林。具體配比如下
稱取160克HgS04溶于1000毫升6N的硫酸溶液，為Al液；
稱取300克Hg2 (N03) 2. 6H20溶于500毫升12N的硝酸溶液，為Bl液;
稱取2克a -亞硝基一 P —萘酚溶于50毫升6N的硝酸溶液，為Cl
液；
將上述三種液體按下述體積比仔細(xì)混合，即得到符合要求的乳腺惡 性疾病篩査試劑^
VA1:VB1:VC1 =7.5:2.5:0.01。
對比試劑2:與本發(fā)明尿檢試劑相比，該試劑中使用的化2+，且不含
a—亞硝基一 P—萘酚，具體配比如下
稱取140 180克HgS04溶于1000毫升6N的硫酸溶液，為A2液； 稱取300 320克Hg"N03)2. 6H20溶于500毫升12N的硝酸溶液，為
B2液；
稱取5克硝酸鎳，溶于50毫升12N的硝酸溶液，為C2液； 將上述三種液體按下述體積比仔細(xì)混合，即得到符合要求的乳腺惡 性疾病篩查試劑
VA2:VB2:VC2 =7.0:2.9:0. 1。
對比試劑3:申請?zhí)?6109181.9說明書中公開的檢測試 f!j，該試 劑中含Ni2+:
稱取140-180克HgS04溶于1000毫升6N的硫酸溶液，為A3液； 稱取320-380克Hg2(N03)2. 2H20溶于500毫升12N的硝酸溶液，為B3
液；
稱取1. 5-3克Ni (N03) 2 *6H20溶于50毫升12N的硝酸溶液，為C3液； 稱取1. 2-2克a —亞硝基一 e —萘酚溶于50毫升6N的硝酸溶液， 為D3液；
將上述四種液體按下述體積比仔細(xì)混合，即得到符合要求的乳腺惡 性疾病篩查試劑
VA3:VB3:VC3:VD3=7. 5:2. 4:0. 05:0. 05。 對比試劑4:'
按本發(fā)明實(shí)施例1的方法制備，與本發(fā)明相比，在含有與本發(fā)明相 同的四種試劑基礎(chǔ)上，還加入了其它離子，比如鈷離子、鎳離子、銅離 子中的一種或至少兩種混合。本對比試劑4中加入的是鈷離子2克硝酸 鈷/1000毫升。
使用方法取尿液3毫升，加入本試劑0.5毫升，搖勻后靜置2分 鐘，觀察沉淀及上清液顏色，與比色板對照，紅色或褐紅色為陽性，淡黃色或白色為陰性。
上述試劑進(jìn)行試驗(yàn)對比，結(jié)果如下
本發(fā)明試劑與對比試劑檢驗(yàn)性能對照表
項(xiàng)目名稱外觀靈敏 度特異 性增生類疾病 的陽性率穩(wěn)定性
實(shí)施例1略帶黃色73%97%38%三年
實(shí)施例2略帶黃色70%98%德三年
實(shí)施例3略帶黃色81%92%35%三年
實(shí)施例4略帶黃色90%89%41%三年
實(shí)施例5略帶黃色81%95%37%三年
對比試劑1無色70%92%28%二年
對比試劑2無色72%80%24%三個(gè)月
對比試劑3無色71%92%31%二年
對比試劑4無色69%89%28%三個(gè)月
注總檢查病例數(shù)452人，乳腺增生病人75人，乳腺癌病人41 例， 一般女性人群336人
上述試驗(yàn)采用外觀、靈敏度、特異性、穩(wěn)定性等指標(biāo)判定制備的檢測 試劑的質(zhì)量。由于靈敏度與特異性是一對矛盾體，提高靈敏度會(huì)降低特異 性。而本發(fā)明試劑能同時(shí)提高靈敏度和特異性，輔以穩(wěn)定性和外^1為指標(biāo) 判斷，明顯優(yōu)于現(xiàn)有的檢測試劑。具體結(jié)果如下
1、 在本發(fā)明使用原料限定范圍內(nèi)，均能達(dá)到本發(fā)明的目的，良好的 靈敏度和特異性的試劑。同時(shí)實(shí)施例5在實(shí)施例1-5中，是效果最佳的，
證明實(shí)施例5是本發(fā)明的最佳選擇。
2、 本發(fā)明試劑與對比試劑1、 2對比說明，本發(fā)明試劑中使用的4-氨基安替比林、a—亞硝基一(3—萘酚均是達(dá)到本發(fā)明目的必備的。
3、 本發(fā)明試劑與對比試劑3對比說明，本發(fā)明試劑與對比專利試劑 比較，靈敏度和特異性綜合比較顯著優(yōu)于對比試劑3，而穩(wěn)定性明顯優(yōu)于 對比試劑3，說明本發(fā)明試劑產(chǎn)生的效果不僅僅是簡單的原料的等同替 換，而且達(dá)到了意想不到的效果。
4、 與對比試劑4對比說明，本發(fā)明四個(gè)原料的選擇配伍適當(dāng)，當(dāng)加 入其它離子后，會(huì)影響本發(fā)明檢測試劑的功效。
綜上，本發(fā)明試劑能同時(shí)提高靈敏度、特異性，明顯優(yōu)于現(xiàn)有的檢 測試劑。
為了進(jìn)一步說明本發(fā)明的優(yōu)越性，將實(shí)施例1制備的配方進(jìn)行了臨 床試驗(yàn)，具體結(jié)果如下
采用實(shí)施例1的配方，我們在湖北省腫瘤醫(yī)院進(jìn)行的臨床驗(yàn)證試驗(yàn)， 共檢測各類已確診的乳腺惡性腫瘤患者41例，陽性共計(jì)30例，陽性率 73%;我們在湖北省婦幼醫(yī)院共計(jì)檢測了 75例乳腺疾病病人尿樣，其中乳腺纖維瘤18例，陽性病例7例，陽性率38.9%;增生類疾病17例，陽 性病例6例，陽性率35.3%。其它乳腺疾病(包括膿腫、乳頭狀瘤、囊腫、 管狀腺瘤等)40例，陽性病例ll例，陽性率27.5%。
癌癥尿檢篩査試劑的早期研究主要集中在診斷試劑方向，f旦在研究 深入后發(fā)現(xiàn)，通過尿液檢測腫瘤標(biāo)志物雖然有較高的臨床符合率(陽性正 確率)，但在臨床診斷應(yīng)用中與目前臨床應(yīng)用的各種血液中腫瘤fe^志物的 檢測診斷相比，不具有優(yōu)勢；但在一般人群的惡性腫瘤篩查中卻具有明顯 優(yōu)勢，由于檢測方法的簡便性和易操作性，可以進(jìn)行大范圍的惡性腫瘤的 早期篩査，篩査不是診斷，但卻有極好的提示作用。上述臨床試驗(yàn)研究證 明，本試劑在篩査中具有良好的靈敏度和特異性，幾種試劑相比較，本發(fā) 明的試劑在人群普査中，具有適中的靈敏度和特異性，較高的靈敏度可以 提高對癌癥檢出的正確率，較高的特異性可以降低普查中的假陽性率，由 于本發(fā)明試劑在乳腺增生疾病檢測中也有較高的陽性率，因此特別適合女 性人群乳腺惡性腫瘤的早期篩查試劑。
權(quán)利要求
1、一種用于乳腺惡性疾病篩查的尿檢試劑，其特征在于它是由硝酸亞汞和硝酸汞，以及α-亞硝基-β-萘酚，4-氨基安替比林溶于硝酸和硫酸的混合酸溶液中制備而成，其中，HgSO4、硝酸汞和α-亞硝基-β-萘酚、4-氨基安替比林四種組分的重量比為HgSO4∶Hg2(NO3)2.2H2O∶4-氨基安替比林∶α-亞硝基-β-萘酚＝1∶1.7～2∶0.001～0.002∶0.0008～0.002。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于乳腺惡性疾病篩查的尿檢試劑，其特 征在于它是由硝酸亞汞和硝酸汞，以及a—亞硝基一(3—萘酚，4-氨基安 替比林組成，其中，HgS04、硝酸汞和a—亞硝基一(3—萘酚、4-氨基安替 比林四種組分的重量比為HgS04 : Hg2(N03)2.2H20 : 4-氨基安替比林a—亞硝基一卩一萘酚=1: 1.74 : o扁2 : o.ooos。
3、 一種制備權(quán)利要求1所述的用于乳腺惡性疾病篩查的尿檢試劑的方法，它包括如下步驟a、 按重量配比稱取HgS04、硝酸汞和a—亞硝基一p —萘酚、4-氨基 安替比林；b、 取HgS04溶于硫酸溶液，為A液；C、取Hg2(N03)2.2H20溶于硝酸溶液，為B液；d、 取a—亞硝基一(3—萘酚溶于硝酸溶液，為C液；e、 取4-氨基安替比林溶于硝酸溶液，為D液；f、 將上述四種液體混合，即得本發(fā)明尿檢試劑。
4、 權(quán)利要求1所述的尿檢試劑在制備用于乳腺惡性疾病篩查試劑中 的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明主要公開一種新的用于乳腺惡性疾病篩查用尿檢試劑，其主要組成包含有硝酸和硫酸的混合酸溶液，其中含有硝酸亞汞和硝酸汞，以及α-亞硝基-β-萘酚，4-氨基安替比林，HgSO₄、Hg₂(NO₃)₂.2H₂O和α-亞硝基-β-萘酚、4-氨基安替比林四種組分的重量比為HgSO₄∶Hg₂(NO₃)₂.2H₂O∶4-氨基安替比林∶α-亞硝基-β-萘酚＝1∶1.7～2∶0.001～0.002∶0.0008～0.002，該試劑用于乳腺惡性腫瘤篩查快速、簡便、價(jià)廉，有利于女性癌癥的早診早治。
文檔編號(hào)G01N21/78GK101319998SQ20071004924
公開日2008年12月10日 申請日期2007年6月5日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月5日
發(fā)明者史宗潔, 皮勇建, 惠 黃 申請人:皮勇建