專利名稱：抗人血管內皮生長因子受體2的重組嵌合抗體的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及免疫學技術領域，特別是嵌合抗體及其用途，具體的說是一種抗人血 管內皮生長因子受體2的重組嵌合抗體及其制備方法和用途。
背景技術：
近幾年免疫靶向療法在臨床診療中顯示出較好的前景，血管生成和血管相關疾病 (包括腫瘤)主要依靠血管生長因子(VEGF)和血管生長抑制因子的調控，其中最密切的是 血管內皮生長因子及其受體(VEGFR)，特別是血管內皮生長因子及其受體2(VEGFR-2)。若 有理想的靶向藥物識別VEGR/VEGFR通道，則可起到診療疾病的作用。由于抗體的高度特異性，利用抗體將藥物導向靶點細胞是一種理想的途徑，當前 單克隆抗體藥物或抗體偶聯(lián)藥物已成為制藥行業(yè)中增長最快、獲利最大的市場之一。以細胞工程技術和基因工程技術為主體的抗體工程技術在制備治療性抗體藥物 是今年來的研究熱點，其在感染、心血管疾病、自身免疫性疾病、腫瘤治療中有巨大的潛力 與應用前景?？贵w藥物作用靶點的選擇性、抗體藥物的人源化、小型化和高效化也是今后的 研究重點。由于鼠源單克隆抗體的臨床應用的產生人抗鼠抗體反應(HAMA)和過敏反應，減 低了藥物的療效，因而運用基因工程技術將鼠源抗體進行改造，降低HAMA反應，同時仍然 保留了抗體的特異性和親和力，利用真核表達系統(tǒng)進行表達IgG全抗體，使目標抗體結構 更接近天然，更具有使用價值。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的之一在于提供一種抗人血管內皮生長因子受體2的重組嵌合抗體 及其編碼基因。本發(fā)明所述的一種抗人血管內皮生長因子受體2的重組嵌合抗體，包含(1)抗人血管內皮生長因子受體2鼠源抗體的輕鏈可變區(qū)和人免疫球蛋白IgG的 κ輕鏈恒定區(qū)組成的嵌合輕鏈，所述的嵌合輕鏈含有SEQ NOl所示的氨基酸序列，SEQ NOl 氨基酸序列如下SEQ NOl
權利要求
1.抗人血管內皮生長因子受體2的重組嵌合抗體，其特征在于包含(1)抗人血管內皮生長因子受體2鼠源抗體的輕鏈可變區(qū)和人免疫球蛋白IgG的κ輕 鏈恒定區(qū)組成的嵌合輕鏈，所述的嵌合輕鏈含有SEQ NOl所示的氨基酸序列，SEQ NOl氨基 酸序列如下
2.如權利要求1所述的重組嵌合抗體，其特征在于編碼嵌合輕鏈的氨基酸序列的DNA 核苷酸序列。
3.如權利要求1所述的重組嵌合抗體，其特征在于編碼嵌合重鏈的氨基酸序列的DNA 核苷酸序列。
4.如權利要求1所述的重組嵌合抗體，其特征在于包含權利要求2和3所述的DNA的 表達載體。
5.如權利要求1所述的重組嵌合抗體，其特征在于用權利要求4所述的DNA載體轉 染的中國倉鼠卵巢癌細胞CH0。
6.一種如權利要求1所述抗人血管內皮生長因子受體2的重組嵌合抗體的制備方法， 包括利用5’RACE反轉錄技術和聚合酶鏈反應，從分泌抗人血管內皮生長因子受體2抗體的 鼠雜交瘤細胞中分別擴增抗體的輕鏈和重鏈可變區(qū)基因，再提取人免疫球蛋白IgGl的輕 鏈和重鏈恒定區(qū)的基因，利用重疊聚合酶鏈反應Overlap技術將鼠輕鏈和重鏈可變區(qū)基因 分別與人IgGl的輕鏈和重鏈恒定區(qū)的基因嵌合重組，將嵌合后抗體的輕鏈和重鏈連接到 真核細胞內部核糖體插入位點IRES的前后，再連接到巨細胞病毒啟動子PCMV和腺病毒聚 合腺苷酸SV40Poly A之間，最終構建成逆轉錄病毒重組載體pMSCV-antiVEGFR2-IgG，轉染 中國倉鼠卵巢癌細胞CH0，篩選并制備抗抗人血管內皮生長因子受體2的重組嵌合IgG抗 體，所述分泌抗人血管內皮生長因子受體2抗體的鼠雜交瘤細胞株D3-D3已被已于2010年 8月5日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC C201076。
7.權利要求1所述抗人血管內皮生長因子受體2的重組嵌合抗體的用途，其特征在于 用于制備抑制或中和人血管內皮生長因子受體2活性的藥物。
8.—種藥物組合物，其特征在于該組合物含有如權利要求1所述的重組嵌合抗體和 藥物學上可接受的載體。
9.如權利要求8所述的藥物組合物的用途，其特征在于用于制備抑制或中和人血管 內皮生長因子受體2活性的藥物在制備診斷性試劑和腫瘤血管靶向治療中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及抗人血管內皮生長因子受體2的重組嵌合抗體，制備方法及其應用，從鼠雜交瘤細胞中分別擴增抗體的輕鏈和重鏈可變區(qū)基因，將鼠輕鏈和重鏈可變區(qū)基因分別與人IgG1的輕鏈和重鏈恒定區(qū)的基因嵌合重組，將嵌合后抗體的輕鏈和重鏈構建成逆轉錄病毒重組載體pMSCV-antiVEGFR2-IgG，轉染中國倉鼠卵巢癌細胞CHO，篩選并制備抗人血管內皮生長因子受體2的重組嵌合IgG抗體，所述鼠雜交瘤細胞株D3-D3已于2010年8月5日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC C201076；所述的抗VEGFR-2嵌合IgG1抗體涉及在抗VEGFR-2的診斷性試劑、腫瘤血管抑制治療的抗體靶向藥物。
文檔編號C12P21/02GK102093479SQ201010564660
公開日2011年6月15日 申請日期2010年11月29日 優(yōu)先權日2010年11月29日
發(fā)明者侯宗柳, 劉運洪, 孟明耀, 龐偉, 朱曉云, 解燕華, 魏傳鈺 申請人:侯宗柳