抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體結合納米膠束及其制備與應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領域，具體涉及抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體結合納米膠束及其制備與應用。
【背景技術】
[0002]乳腺癌是發(fā)生在乳腺導管上皮的女性常見惡性腫瘤。發(fā)病率為(11-80)/10萬，病死率為(0.7-26.6)/10萬，占全身各種惡性腫瘤的7%-10%。乳腺癌在全世界均有發(fā)病，在許多西方國家的婦科腫瘤中發(fā)病率最高。乳腺癌已嚴重危害中國婦女的身心健康，近20年來其發(fā)病率呈明顯上升的趨勢，在中國大城市女性的腫瘤發(fā)病率中已占據(jù)前2位。
[0003]目前乳腺癌的治療主要采用手術治療，同時輔以放療、內分泌治療和化療等治療方法。對于有些乳腺癌癥狀手術治療不能完全根除癌細胞，而放療、內分泌治療和化療等輔助方法又不能區(qū)分癌細胞與正常細胞，結果往往導致手術效果不佳或產(chǎn)生嚴重的副作用。所以提高乳腺癌治療的靶向擇是提高療效的關鍵。近年來隨著研究進展，以抗體為導向的靶向治療發(fā)展迅速，已成為國際生物技術領域當前開發(fā)的熱點。
[0004]研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌細胞表面的人表皮生長因子受體2 (HER2)蛋白與乳腺癌關系密切，大約有20%?30%的乳腺癌患者為HER2陽性，HER2促進了癌細胞分裂生長，腫瘤分化差，容易發(fā)生淋巴結轉移，治療效果不佳，HER2過度表達的腫瘤患者較無過度表達的無病生存期短。赫賽汀(Herceptin，)是由Genentech公司研發(fā)的一種措抗HER-2陽性的乳腺癌的單克隆人源化抗體，用以防止乳腺癌復發(fā)或擴散，是用于治療乳腺癌轉移的重要選擇藥物。
[0005]自赫賽汀問世以來，赫賽汀與紫杉醇類的聯(lián)合方案已成為HER2陽性轉移性乳腺癌患者標準的一線治療方案。研究表明赫賽汀聯(lián)合紫杉醇組患者乳腺癌復發(fā)風險較單純化療組下降52% (P〈0.0001)，死亡風險下降33% (P〈0.05)，研究者還對赫賽汀與紫杉醇的給藥順序進行了評估。結果顯示，赫賽汀與紫杉醇聯(lián)合應用比二者序貫應用使復發(fā)風險降低36% (P〈0.05)。
[0006]納米生物技術是國際生物技術領域的前沿和熱點問題，在醫(yī)藥衛(wèi)生領域有著廣泛的應用和明確的產(chǎn)業(yè)化前景，特別是納米藥物載體。這種技術是以納米顆粒作為藥物載體，將藥物等治療分子包裹在納米顆粒之中或吸附在其表面，同時也在顆粒表面偶聯(lián)特異性的靶向分子，如單克隆抗體等，通過靶向分子與細胞表面特異性受體結合，在細胞攝取作用下進入細胞內，實現(xiàn)安全有效的靶向性藥物和基因治療。目前美國生物科學公司已研制出了一種紫杉醇白蛋白納米懸浮液(AB1-007)，已經(jīng)在歐美上市并應用于臨床。雖然臨床研究結果顯示，AB1-007所引起的毒副反應明顯輕于同劑量的注射液，但ABI — 007還是會引起骨髓抑制，粒細胞減少等副反應。因此，對紫杉醇納米制劑做更進一步的改進，開發(fā)一種具有靶向治療效果的紫杉醇納米制劑將可提高靶細胞的藥物濃集、增加藥物療效具有更重要意義和廣泛的臨床應用前景。
[0007]傳統(tǒng)的治療模式(手術、放療、化療)依然是腫瘤治療的主要手段。然而，臨床絕大多數(shù)抗癌制劑仍不能區(qū)分癌細胞與正常細胞，結果導致了系統(tǒng)性的毒性與嚴重副作用。所以提高藥物的腫瘤選擇性，減少其在非靶向部位的聚集是提高抗腫瘤藥物療效的關鍵。靶向抗腫瘤納米藥物的研究正日益受到人們的普遍關注和重視。納米技術和納米生物學研究的進一步深入已對醫(yī)藥業(yè)產(chǎn)生了巨大的影響，特別是納米藥物載體在藥物傳遞系統(tǒng)(DDS)可發(fā)揮重要作用。目前研究的熱點和已有較好基礎及做出實質性成果的是藥物納米載體和納米顆?；蜣D移技術。這種技術是以納米顆粒作為藥物和基因轉移載體，將藥物、DNA和RNA等基因治療分子包裹在納米顆粒之中或吸附在其表面，同時也在顆粒表面偶聯(lián)特異性的靶向分子，如特異性配體、單克隆抗體等，通過靶向分子與細胞表面特異性受體結合，在細胞攝取作用下進入細胞內，實現(xiàn)安全有效的靶向性藥物和基因治療。聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物是一類新型的納米載體，它同時具有親水性基團及疏水性基團，在水中溶解后自發(fā)形成高分子膠束，并完成對藥物的增溶和包裹它具有親水性外殼及疏水性內核，適合于攜帶不同性質的藥物，且可使藥物能逃避單核巨噬細胞吞噬。因此，推進靶向治療的有效靶點的研究發(fā)現(xiàn)具有重要意義，結合納米技術研究新一代治療藥物與治療方法，具有重大的科學意義與社會意義。

【發(fā)明內容】

[0008]本發(fā)明的目的是提供抗人表皮生長因子受體2 (HER2)單克隆抗體結合納米膠束及其制備與應用。
[0009]本發(fā)明的另一目的是提供包裹紫杉醇的抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體結合免疫膠束及其制備與應用。
[0010]本發(fā)明一方面提供了一種抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體結合納米膠束，該納米膠束是將抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體與羰基化聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物連接后形成。該納米膠束為具有親水端和疏水端的兩親性納米膠束。
[0011]較佳的，上述納米膠束中，抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體與羰基化聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物的摩爾比為I =500-1:10000。
[0012]上述羰基化聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物即為CT-P123。
[0013]本發(fā)明第二方面，提供了抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體結合納米膠束的制備方法，步驟如下:
[0014]I)羧基化嵌段聚合物P123 (CT-P123)的合成與表征；
[0015]2) CT-P123與抗HER2單克隆抗體的連接。
[0016]本發(fā)明第三方面，提供了抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體結合納米膠束用作藥物載體。
[0017]本發(fā)明的抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體結合納米膠束可以用作藥物分子載體，使得被包裹的藥物分子能夠更加準確地識別靶位，因此在提高藥物分子治療效果的同時，也降低了藥物分子的毒副作用。
[0018]本發(fā)明第四方面，提供了一種包裹紫杉醇的抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體結合免疫膠束，該免疫膠束是以上述抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體納米膠束作為載體，在該載體分子中包裹有紫杉醇。
[0019]較佳的，上述免疫膠束中，抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體納米膠束與紫杉醇的質量比為40:1-400:1。
[0020]本發(fā)明第五方面，提供了包裹紫杉醇的抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體結合免疫膠束的制備方法，步驟如下:采用星點法將紫杉醇包裹進抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體納米膠束中。
[0021]本發(fā)明第六方面，提供了包裹紫杉醇的抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體結合免疫膠束在制備治療乳腺癌藥物中的應用。
[0022]本發(fā)明中包裹了紫杉醇的抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體結合免疫膠束既能使藥物送到一定的靶位，發(fā)揮紫杉醇與抗HER2抗體的抗腫瘤作用，使腫瘤細胞凋亡,并延長藥物在腫瘤部位的作用時間；顯示出更優(yōu)越的抗腫瘤活性和更小的毒副作用?？笻ER2抗體即能專一性的識別乳腺癌細胞表面HER2蛋白，又可發(fā)揮抑制腫瘤生長作用，將廣譜抗癌藥紫杉醇包裹于結合了抗HER2抗體的兩親納米膠束中，既降低溶解紫杉醇帶來的過敏反應并降低其毒性，又能使藥物送到一定的靶位，同時發(fā)揮化療藥物與單抗藥物的抗腫瘤作用，使腫瘤細胞凋亡，顯示出優(yōu)越的抗腫瘤活性和更小的毒副作用。
【附圖說明】
[0023]圖1抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體結合免疫膠束的制備方法流程圖
【具體實施方式】
[0024]本發(fā)明首先合成羧基化聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物CT-P123作為納米載體，然后將CT-P123與抗HER2鼠源性抗體相連接，最后采用星點設計法將紫杉醇包裹于結合了該抗體的兩親納米膠束中獲得免疫膠束。
[0025]下面結合實施例進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明