專利名稱：：一種乙酰酯酶及其編碼基因的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種酶及其編碼基因，特別涉及一種乙酰酯酶及其編碼基因。
背景技術(shù)：
：木聚糖是半纖維素的主要組成成份，廣泛分布于高等植物的細(xì)胞壁中，是自然界中一種巨大的可再生生物資源，也是最容易提取、降解和利用的一類半纖維素，對木聚糖的徹底降解以實現(xiàn)生物轉(zhuǎn)化需要一個完善的木聚糖酶系。由于木聚糖是一種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的非均一多糖，主鏈和側(cè)鏈糖基上有多種取代基團(tuán)，主要是乙酰基、葡萄糖醛?；桶⒗酋；?可進(jìn)一步與香豆酸、阿魏酸等酚酸相連)等。使得木聚糖的生物降解需要一個復(fù)雜的酶系統(tǒng)中不同組分的相互協(xié)作，使菌體產(chǎn)生的木聚糖酶是一組酶，而非一種酶，在木聚糖的生物降解中具有不同催化功能的酶之間的協(xié)同增效作用是十分明顯的。一個完善的木聚糖酶系統(tǒng)應(yīng)該具有降解某種木聚糖所需要的各種酶。國內(nèi)外研究較多是水解木聚糖主鏈的e-l,4-內(nèi)切木聚糖酶、e-木糖苷酶等，對于木聚糖乙酰酯酶的研究，尤其是耐熱木聚糖乙酰酯酶的研究很少。木聚糖乙酰酯酶(acetylxylanesterases,EC3.1.1.72)作用于木糖殘基C-2和C-3位上的乙酰取代基團(tuán)。從嗜熱厭氧桿菌(77zew2oa"aeraZ^Wm'wmsp.JW/SL-YS485)中分離到木聚糖乙酰酯酶I和II。酶I在細(xì)胞外作用于木聚糖上的乙酰取代基團(tuán)，酶II在細(xì)胞內(nèi)作用于寡聚木聚糖上的乙酰取代基團(tuán)。木聚糖乙酰酯酶可以消除乙酰基團(tuán)對內(nèi)切木聚糖酶作用的空間阻礙作用，增強(qiáng)內(nèi)切木聚糖酶對木聚糖的親和能力。因此，有人預(yù)料乙酰酯酶對于紙漿漂白、飼料加工、燃料生產(chǎn)、食品工業(yè)等中是一種重要的酶，其中可以利用它們的修飾乙?；嗵浅蔀橐捉到庑问降哪芰?。關(guān)于木聚糖乙酰酯酶基因最新的專利和文獻(xiàn)報道。如S.克里斯戈等人報道了一種具有乙酰酯酶活性的酶及其基因(第9419276LX號，申請日期1994.07.13);AkihikoKosugi等人報道了C7oWn^wmce〃w/ovora"s的木聚糖乙酰酯酶(ApplEnvironMicrobiol.2002Dec;68(12):6399-402.);HarrisonMJ等報道了7Hc/zoc^marease/(Glycobiology.2002Apr;12(4):291曙8,)的木聚糖乙酰酯酶(FEMSMicrobiologyLetters,190:57-62，2000);DegrassiG等人報道了Ba"7/wpmw7ws中的木聚糖乙酰酯酶(Microbiology.2000Jul;146(Pt7):1585-91.)。在木聚糖乙酰酯酶研究方面，涉及的菌種有C7o^7V/^m為了有效地發(fā)揮乙酰酯酶的作用，國內(nèi)已開展了耐堿乙酰酯酶的研究，但尚未見到嗜熱菌耐熱乙酰酯酶的研究報道。目前乙酰酯酶作為一種工業(yè)酶制劑在國內(nèi)尚屬空白，乙酰酯酶的最適溫度高和高溫條件下熱穩(wěn)定性好是工業(yè)化應(yīng)用乙酰酯酶的理想特征。在國內(nèi)的研究中耐熱性最高的乙酰酯酶最適溫度不超過6(TC，還不能滿足應(yīng)用的需要，因而開展嗜熱菌耐熱乙酰酯酶的研究具有十分重要的意義。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個目的是提供一種具有在高溫高pH條件下保持高活性的酶，其基因組中許多編碼具有工業(yè)應(yīng)用價值的酶比常溫菌的酶有更好的熱穩(wěn)定性，更適用于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明的另一個目的是提供一種基因，其能編碼一種乙酰酯酶。本發(fā)明的另一目的是提供一種能表達(dá)乙酰酯酶的重組質(zhì)粒。本發(fā)明的再一目的是提供一種能產(chǎn)生乙酰酯酶的重組菌。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案本發(fā)明提出一種編碼乙酰酯酶的基因，其該基因具有選自于下列a)、b)或C)的核苷酸序列a)SEQIDNO:1所示的核苷酸序列；b)由于遺傳密碼的簡并性，不同于SEQIDNO:l但編碼的氨基酸序列與SEQIDNO:1所編碼的氨基酸序列相同的核苷酸序列；c)在嚴(yán)格雜交條件下與上述a)或b)中的序列雜交，并且編碼具有活性的乙酰酯酶的核苷酸序列。本發(fā)明還提供一種乙酰酯酶，該酶具有選自于下列d)、e)或f)的氨基酸序列d)上述a)、b)或c)所述的核苷酸序列編碼的氨基酸序列；e)SEQIDNO:2所示的氨基酸序列；f)上述e)中缺失、替換或插入一個或多個氨基酸后的氨基酸序列，并且具有該序列的蛋白質(zhì)有乙酰酯酶的活性。作為本發(fā)明的一種優(yōu)選，上述的乙酰酯酶的反應(yīng)溫度為6(TC,反應(yīng)pH值為7.2。上述乙酰酯酶具有與SEQIDNO:2所示的氨基酸序列至少70%的同源性，同時具有該序列的蛋白質(zhì)具有乙酰酯酶的活性。上述乙酰酯酶具有與SEQIDNO:2所示的氨基酸序列至少90%的同源性，同時具有該序列的蛋白質(zhì)具有乙酰酯酶的活性。上述具有SEQIDNO:2所示的氨基酸序列中缺失、替換、或插入的多個氨基酸序列為2-100個。上述具有SEQIDNO:2所示的氨基酸序列中缺失、替換、或插入的多個氨基酸序列為2-10個。本發(fā)明還提供一種表達(dá)乙酰酯酶的重組質(zhì)粒，其至少包括權(quán)利要求1所述編碼乙酰酯酶的基因。上述的一種表達(dá)乙酰酯酶的重組質(zhì)粒的載體為pET-28a(+)。本發(fā)明還提供一種產(chǎn)生權(quán)利要求2或3所述的乙酰酯酶的重組菌，該重組菌內(nèi)導(dǎo)入了權(quán)利要求1所述的編碼乙酰酯酶的基因。上述的一種產(chǎn)生乙酰酯酶的重組菌為大腸桿菌。上述的一種產(chǎn)生乙酰酯酶的大腸桿菌為大腸桿菌BL21菌株。應(yīng)當(dāng)指出的是，上述提到的術(shù)語"嚴(yán)格條件"在本說明書中的含義是指在該條件下形成了所謂特異雜交而沒有形成非特異的雜交。例如，該嚴(yán)格條件可以是，相互之間的同源性不小于70%的DNA之間可以雜交而低于上述數(shù)值的DNA之間不能雜交，優(yōu)選的是同源性不少于90%的DNA之間可以雜交。相對于Southern雜交中普通洗滌條件而言，可以例如為如下的雜交條件將雜交膜置于預(yù)雜交液(0.25mol/L磷酸鈉緩沖液，pH7.0,7°/。SDS)中，5(TC預(yù)雜交30min;棄預(yù)雜交液，加入雜交液(0.25mol/L磷酸鈉緩沖液，pH7.0,7%SDS，同位素標(biāo)記的核苷酸片段)，5(TC雜交12hr;棄雜交液，加入洗膜液I(2XSSC禾f!0.1WSDS)，50'C洗膜2次，每次30min;加入洗膜液II(0.5XSSC和0.1o/oSDS)，50'C洗膜30min。所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員應(yīng)該知道，本發(fā)明的編碼乙酰酯酶的DNA序列，還包括編碼對SEQIDNO:1所示核苷酸序列所表達(dá)的酶分子的氨基酸序列進(jìn)行一個或多個氨基酸替換、插入或缺失并仍具有該酶活性的蛋白質(zhì)的核苷酸序列。另外，對本發(fā)明的乙酰酯酶基因所表達(dá)的酶分子的氨基酸進(jìn)行一個或多個氨基酸替換、插入或缺失所得到的蛋白質(zhì)，也能達(dá)到本發(fā)明的目的。因而本發(fā)明還包括與SEQIDNO:2所示的氨基酸序列具有至少70%的同源性，優(yōu)選具有至少90%的同源性，但同時具有乙酰酯酶活性的蛋白質(zhì)。上面使用的術(shù)語"多個"可以是小于100的數(shù)目，優(yōu)選為小于10的數(shù)目。和已知的乙酰酯酶相比，本發(fā)明提出的乙酰酯酶是一種新型的乙酰酯酶，通過對本發(fā)明提出的乙酰酯酶基因推導(dǎo)的氨基酸序列比較分析，本發(fā)明的乙酰酯酶與其它已報道的酶的氨基酸序列相比，絕大多數(shù)相似性均小于41%。相似性高于41%的乙酰酯酶都未做功能鑒定，主要來源于GeoZa"'〃i^他ara^2ermo//n7wsr-6(ABI49936.1)。由此可見，本發(fā)明的乙酰酯酶與其它已報道的乙酰酯酶的氨基酸序列相比后，相似性大于41%的己發(fā)現(xiàn)菌株中，基本上都是進(jìn)行序列比對的研究，沒有發(fā)現(xiàn)對相應(yīng)菌株的乙酰酯酶基因的功能進(jìn)行鑒定的相關(guān)文獻(xiàn)。通過酶的氨基酸序列相似性，該發(fā)明的乙酰酯酶為木聚糖乙酰酯酶，具有將乙?；揪厶敲撘阴；饔?。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用上述技術(shù)方案的有益效果在于-本發(fā)明的乙酰酯酶不同于已報道的乙酰酯酶，該酶具有在高溫高pH條件下保持高活性的特征，其最適反應(yīng)溫度為6(TC;最適反應(yīng)pH7.2。而乙酰酯酶的最適溫度高和高溫條件下熱穩(wěn)定性好正是工業(yè)化應(yīng)用乙酰酯酶的理想特征。而己知的耐熱性最高的乙酰酯酶最適溫度不超過6(TC，還不能滿足應(yīng)用的需要。本發(fā)明的乙酰酯酶對于食品工業(yè)，主要在水果和蔬菜加工中如果汁生產(chǎn)、造酒或果膠提取中是一種重要的酶，其中可以利用它們的修飾乙?；嗵浅蔀橐捉到庑问降哪芰ΑDl是本發(fā)明實施例中的乙酰酯酶基因重組質(zhì)粒的構(gòu)建模式圖；圖2表示本發(fā)明乙酰酯酶SDS-PAGE電泳圖；圖3表示本發(fā)明乙酰酯酶在不同溫度下的比活力；圖4表示本發(fā)明乙酰酯酶在不同pH值下的比活力。具體實施例方式下面通過具體實施例并結(jié)合附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。以下各實施例僅僅是用于說明而不是限制本發(fā)明。實施例一1.嗜熱脫氮芽孢桿菌NG80-2(CGMCCNo.1228)總DNA的提取研究證明，由嗜熱脫氮芽孢桿菌(Geo&"7/wsAw附o&w'/nycara)NG80-2基因組能夠分離出編碼乙酰酯酶的基因。因此，在本實施例中，采用從中國天津大港油田官69-8區(qū)塊油井地層水分離獲得的嗜熱脫氮芽孢桿菌NG80-2，取其過夜培養(yǎng)的新鮮培養(yǎng)物3ml，離心收集菌體，菌體懸于250微升50mMTris緩沖液中(pH8.0)，加入10微升0.4MEDTA(pH8.0)，混勻后37。C保溫20min，之后加入30微升20mg/ml溶菌酶，混勻后37t:再保溫20min，再加入5微升20mg/ml蛋白酶K，溫柔混勻后，再加入20微升10°/。SDS，5(TC保溫至溶液澄清，加入5pL10mg/mLRNase，65t:水浴30minlh，分別用等體積酚:氯仿:異戊醇抽提兩次，氯仿:異戊醇抽提一次，最后一次的上清溶液，加入2.5倍體積預(yù)冷的無水乙醇，回收DNA，用70%乙醇洗，沉淀溶于100微升TE緩沖液(pH8.0，10mMTris，lmMEDTA)，加入10mg/mlRNase2微升，65-C保溫30min，分別用酚氯仿:異戊醇、氯仿:異戊醇各抽提一次，上清液加入2.5倍體積預(yù)冷的無水乙醇，回收DNA，用70%乙醇洗，真空干燥，沉淀溶于100微升TE緩沖液。DNA溶液的紫外分光光度計測定結(jié)果為A260/A280-1.95，A260=0.73。2.本發(fā)明乙酰酯酶基因的克隆和篩選取前面所述的總DNA溶液1微升(約O.lmg)作為模板，以下列寡核苷酸序列作為引物，并按下述設(shè)定的PCR循環(huán)參數(shù)進(jìn)行25個循環(huán)PCR。設(shè)定的PCR循環(huán)參數(shù)如下95。C,5min;95°C，30s;50°C,45s;72°C,2min;72°C,lOmin;引物序列如下上游引物5，-CATGCCATGGCTAGATTGGAAATGATTG國3，下游弓I物5'-CGCGGATCCATCCATCGTCTGCAACTGTAAT-3'上述PCR產(chǎn)物用和雙酶切，經(jīng)0.8%的瓊脂糖凝膠電泳，切膠回收0.6kb酶切產(chǎn)物片斷。與經(jīng)同樣限制型內(nèi)切酶酶解并切膠回收的質(zhì)粒pET-28a(+)連接，轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌DH5a后，涂于含50pg/mlKan(卡那霉素)的LB固體培養(yǎng)基上。37。C培養(yǎng)12小時，挑取單克隆轉(zhuǎn)接到20mlLB培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)(50|ig/mlKan)，37"C培養(yǎng)12小時后，提取質(zhì)粒鑒定，插入有SEQIDNO:1的DNA序列的pET-28a(+)質(zhì)粒為重組質(zhì)粒pLW1316(見圖1)，將重組質(zhì)粒pLW1316轉(zhuǎn)入表達(dá)宿主大腸桿菌BL21(該菌株可向天津開發(fā)區(qū)厚普生物技術(shù)開發(fā)有限公司訂購，貨號為69387-3)中，得到含有該重組質(zhì)粒的重組菌株為H1614，此重組質(zhì)粒pLW1316可高頻轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21表達(dá)乙酰酯酶活性和抗卡那霉素性能。采用Sanger法對此DNA片段進(jìn)行了測序，測序結(jié)果顯示插入片段含有一個長627BP的開放閱讀框架，編碼一個由208個氨基酸組成的蛋白質(zhì)，氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。實施例二乙酰酯酶的純化和特性將上述重組菌H1614單克隆接入20ml含50pg/mlKan的LB培養(yǎng)基中，37°C，180rpm/min培養(yǎng)12小時，然后將培養(yǎng)物按1%(v/v)接種量接入200ml含50嗎/mlKan的LB培養(yǎng)基(共10個搖瓶)，37°C，250rpm/min培養(yǎng)OD,為0.60.8之間時，加入IPTG至終濃度為0.02mM,37°C,180rpm/min誘導(dǎo)3小時。離心收集菌體，懸于含50mMTris-HCl，300mMNaCl，10mMimidazole(pH8.0)緩沖液中，利用超聲波破碎細(xì)胞，離心上清液為乙酰酯酶的粗提液。此上清液經(jīng)螯合瓊脂糖凝膠(ChelatingSepharose)鎳親合柱層析純化，得到的酶制劑在SDS-PAGE上顯示一條帶(見圖2)。利用己知的蛋白質(zhì)化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)方法測定此乙酰酯酶的基本特性。用SDS-PAGE測得的重組酶的分子量與理論上推算的分子量(23815道爾頓)相似；等電點沉淀法測得的重組酶的等電點pl為5.33。實施例三1.測定本發(fā)明乙酰酯酶在不同溫度下的比活力對上述實施例二中制得的乙酰酯酶進(jìn)行最適反應(yīng)溫度的測定，具體方法為配制200u1反應(yīng)體系，底物p-nitropheylacetate的終濃度為lOOmM，一定濃度的乙酰酯酶，用50mMpH7.2的Tris-HCl補至200ul?；靹?，分別于45°。至75'C水浴中反應(yīng)20分鐘后，加入5(^1lMNaHC03終止反應(yīng)。然后在405nm處測定產(chǎn)物p-nitrophenol的生成。以每分鐘生成l^imolp-nitrophenol所需酶量定義為1個酶活力單位(U)。測定結(jié)果參見圖3。從該圖中可以看出，該乙酰酯酶的最適反應(yīng)溫度約為60'C。2.測定本發(fā)明乙酰酯酶在不同pH下的比活力對上述實施例二中制得的乙酰酯酶進(jìn)行最適pH值的測定，具體方法為配制200P1反應(yīng)體系，底物p-nitropheylacetate的終濃度為lOOmM，一定濃度的乙酰酯酶，用pH5.0至pH9.8的緩沖液(配方見表1)補至20(HU?；靹?，在6(TC水浴中反應(yīng)20分鐘后，加入5(Hd1MNaHC03終止反應(yīng)。然后在405nm處測定產(chǎn)物p-nitrophenol的生成。測定結(jié)果參見圖4，從該圖中可以看出，該乙酰酯酶在PH值6.09.0范圍內(nèi)保持較高活性，最適PH值約為7.2。表1乙酰酯酶酶活測定中所用的緩沖液<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>3.測定本發(fā)明乙酰酯酶受不同離子的影響對上述實施例二中制得的乙酰酯酶進(jìn)行不同離子影響的測定，具體方法為配制200^1反應(yīng)體系，底物p-nitropheylacetate的終濃度為100mM，分別加入FeCl3、FeS04、CuS04、MgCl2、CoCl2、ZnS04、MnCl2、AgN03、CaCl2、EDTA至ImM或SDS至0.05%，一定濃度的乙酰酯酶，用50mMpH7.2的Tris-HCl補至200|il?；靹?，在6(TC水浴中反應(yīng)20分鐘后，加入50|il1MNaHC03終止反應(yīng)。然后在405nm處測定產(chǎn)物p-nitrophenol的生成。測定結(jié)果參見表2。表2不同離子對該乙酰酯酶活力的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>雖然本發(fā)明已以較佳實施例披露如上，然其并非用以限定本發(fā)明，任何所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，可做些許的更動與改進(jìn)，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍當(dāng)視權(quán)利要求所界定者為準(zhǔn)。序歹lJ表<110>天津生物芯片技術(shù)有限責(zé)任公司〈120〉一種乙酰酯酶及其編碼基因<130>7P13008<160>2<170〉Patentlnversion3.3<210>1<211〉627<212>隱<213>乙酰酯酶核苷酸序列〈■>160120180240300360420480540600627atgtctagattggaaatgatttcgatgatggaccaaatccgcgggaaaggtgacctttttgaagctgtcaaattacagggacctctttagatgaagatgagCt3tg8Ctgg33ga33ggCgttatgtc犯tgtgccatcactagactgggagcaacctggaatggaagcatcctgcttttgttaaaat3ctcgtttcagattattacagttgcagacgattgaacatgttgagacgcctcggtttatacgtt朋aggtgccatgattgggcgtcatatgggc3tgaaattggc肪tcatactgcttgcaagagatggagctgttgtcttccgtccacccttttcggctataagatgattgtgtcgattatattgttcagaccatgatggatttggggatcgttgcggttgcaaggatatgggatt犯gcaaggtggtcgcc3t33cgtag3tat3tttgsgaagat3agg幼ceitcccg犯3ttgtacgtattcgcatgctagactggaacggatgcaatga/ttgccatcttgactataatgaaactgtgctcttaatactgatgcg3gacccgcaatcat3t朋aagttcgcaaacgatccaagctaatttgtC3ccatcagcgag<210>2〈211〉208〈212〉PRT〈213>乙酰酯酶的氨基酸序列〈400〉2MetSerArgLeuGluMetlieGluHisValGluThrProArgLysVal151015ValAlalieThrPheAspAspGlyProAsnProValTyrThrLeuLys202530ValLeuAspliePheGluLyslieAlaGlyLysValThrPhePheMet354045lieGlyArgHisMetGluGluHisProGlulieValGluAlaValLys505560LeuGinGlyHisGlulieGlyAsnHisThrTyrSerHisAlaArgLeu65707580ThrSerLeuAspGluAspAspCysLeuGinGluMetGluArgThrAsp859095AlaMetlieAlaAlaMetThrGlyArgLysAlaValValPheArgPro訓(xùn)105110ProTyrLeuAspTyrAsnGluThrValMetSerMetCysHisHisPhe115120125GlyTyrLysMetlieGlyAlaLeuAsnThrAspAlaLeuAspTrpGlu130135140GinProGlyValAspTyrlieValGinLysThrArgAsnHislieLys145150155160AsnGlySerlieLeuLeuPheHisAspGlyPheGlyAspArgSerGin165170175ThrlieGinAlaValLyslieLeuValSerGluLeuArgLeuGinGly180185190TyrGluPheValThrlieSerGluLeuLeuGinLeuGinThrMetAsp19520020權(quán)利要求1.一種編碼乙酰酯酶的基因，其特征在于所述基因具有選自于下列a)、b)或c)的核苷酸序列a)SEQIDNO1所示的核苷酸序列；b)由于遺傳密碼的簡并性，不同于SEQIDNO1但編碼的氨基酸序列與SEQIDNO1所編碼的氨基酸序列相同的核苷酸序列；c)在嚴(yán)格雜交條件下與上述a)或b)中的序列雜交，并且編碼具有活性的乙酰酯酶的核苷酸序列。2、—種乙酰酯酶，其特征在于所述乙酰酯酶具有選自于下列d)、e)或f)的氨基酸序列d)上述a)、b)或c)所述的核苷酸序列編碼的氨基酸序列；e)SEQIDNO:2所示的氨基酸序列；f)上述e)中缺失、替換或插入一個或多個氨基酸后的氨基酸序列，并且具有該序列的蛋白質(zhì)有乙酰酯酶的活性。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述一種乙酰酯酶，其特征在于，所述乙酰酯酶的反應(yīng)溫度為6(TC，反應(yīng)pH值為7.2。4、根據(jù)權(quán)利要求2或3所述一種乙酰酯酶，其特征在于，所述乙酰酯酶具有與SEQIDNO:2所示的氨基酸序列至少70°/。的同源性，同時具有該序列的蛋白質(zhì)具有乙酰酯酶的活性。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述一種乙酰酯酶，其特征在于，所述乙酰酯酶具有與SEQIDNO:2所示的氨基酸序列至少90%的同源性，同時具有該序列的蛋白質(zhì)具有乙酰酯酶的活性。6、根據(jù)權(quán)利要求2或3所述一種乙酰酯酶，其特征在于，所述具有SEQIDNO:2所示的氨基酸序列中缺失、替換、或插入的多個氨基酸序列為2-100個。7、根據(jù)權(quán)利要求2或3所述一種乙酰酯酶，其特征在于，所述具有SEQIDNO:2所示的氨基酸序列中缺失、替換、或插入的多個氨基酸序列為2-10個。8、一種表達(dá)乙酰酯酶的重組質(zhì)粒，其特征在于，其至少包括權(quán)利要求l所述編碼乙酰酯酶的基因。9、根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種表達(dá)乙酰酯酶的重組質(zhì)粒，其特征在于，所述重組質(zhì)粒的載體為pET-28a(+)。10、一種產(chǎn)生權(quán)利要求2或3所述的乙酰酯酶的重組菌，其特征在于，該重組菌內(nèi)導(dǎo)入了權(quán)利要求1所述的編碼乙酰酯酶的基因。11、根據(jù)權(quán)利要求10所述的一種產(chǎn)生乙酰酯酶的重組菌，其特征在于，所述重組菌為大腸桿菌。12、根據(jù)權(quán)利要求11所述的一種產(chǎn)生乙酰酯酶的重組菌，其特征在于，所述大腸桿菌為大腸桿菌BL21菌株。全文摘要本發(fā)明涉及一種酶及其編碼基因，特別涉及一種乙酰酯酶及其編碼基因。本發(fā)明的公開了一種基因，其能編碼一種乙酰酯酶，并提供了一種能表達(dá)乙酰酯酶的重組質(zhì)粒和能產(chǎn)生乙酰酯酶的重組菌。該酶具有在高溫高pH條件下保持高活性，其基因組中許多編碼具有工業(yè)應(yīng)用價值的酶比常溫菌的酶有更好的熱穩(wěn)定性，更適用于工業(yè)化生產(chǎn)，可廣泛作用于降解修飾乙?；嗵?，在木質(zhì)素降解中起重要的作用。文檔編號C12N15/55GK101392263SQ20071015127公開日2009年3月25日申請日期2007年9月18日優(yōu)先權(quán)日2007年9月18日發(fā)明者露馮,劉雪倩,磊王申請人:天津生物芯片技術(shù)有限責(zé)任公司