本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)種植和植物化工領(lǐng)域，具體涉及一種天然殺菌除蟲劑。
背景技術(shù)：
：漆樹是指漆樹科(Anacardiaceae)漆樹屬(Toxico-dendron)的一類植物，隸屬亞熱帶區(qū)系，新生代第3紀古老孑遺樹種，是我國重要經(jīng)濟樹種。漆樹全屬20余種，主要分布亞洲東部和北美洲至中美洲，印度、朝鮮、日本也有分布。中國漆樹屬植物共有15種，在我國南部各省區(qū)均有分布。在云南的分布十分廣泛，云南漆樹的特點是，有從不過8米的小喬木到高達18米以上的大喬木的多個類型。奇數(shù)羽葉的小葉數(shù)目有少至1片的，也有多到21片的，以9~15片的類型居多；葉形偏小，多呈狹卵形。種實豐盛飽滿。除割漆之外，常有提蠟榨油的價值。漆樹的物候在云南各地也不一，前后相差2~3個節(jié)令。云南漆樹多變、高大的特點是與其生境分不開的。云南地形的84%是山地。從滇東北的海拔800~2000米,到滇西北的2100~2800米之間都有漆樹分布。大葉漆樹，拉丁名：Toxicodendronhookeri(SahnietBahadur)C.Y.WuetT.L.Mingvar.hookeri，小喬木。產(chǎn)云南西北部和西藏東南部，生于海拔1250-2600米的闊葉林中。多葉小漆樹，拉丁名：Toxicodendrondelavayi，小喬木。產(chǎn)于國內(nèi)云南，四川，生長于海拔1900-2400米的闊葉林中。小漆樹，拉丁名：Toxicodendrondelavayi(Franch.)F.A.Barkl.，小灌木。產(chǎn)云南中部至西北部、四川西南部。生長于海拔1100-2500米。漆葉為漆樹科漆樹屬植物漆樹的葉，漆葉可入藥，最早見于古方“漆葉青黏散”，《本草綱目》載其性溫味辛、有小毒、主治五尸勞疾、殺蟲。其在傳統(tǒng)中醫(yī)中為少常用藥，但在漆樹產(chǎn)區(qū)及民間應用廣泛，且確有療效。近代科學研究表明，漆葉的功效不可忽視，目前，在漆樹造林、生漆生產(chǎn)、漆酚漆酶類化合物的應用研究方面的報道很多，但對漆樹中漆葉的應用卻少有研究和報道，僅見少數(shù)植物學和生藥學方面的研究報道。根據(jù)西北大學晁菲對漆樹葉的研究表明，漆樹葉中主要含有漆酚類化合物，對漆葉中的漆酚類化合物進行了鑒定，初步確定了其中9個漆酚類化合物。在謝立璟、張麗霞等人的文獻“漆樹葉皮膚刺激性與致敏性的實驗研究”中，表明漆樹葉對實驗動物皮膚有輕度刺激性，無致敏性。通過文獻及專利檢索，對于用漆樹芽/葉/芽提取物/葉提取物/芽和葉提取物制備用于殺菌除蟲的產(chǎn)品目前還未見有文獻報道。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種利用漆樹葉或其提取物的天然殺菌除蟲劑，并加快漆樹葉在農(nóng)業(yè)種植過程中的殺菌和除蟲等領(lǐng)域應用，使漆樹資源得到高效開發(fā)利用，進而充分發(fā)揮其經(jīng)濟效益、社會效益和生態(tài)效益。本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：一種用于利用漆樹葉或其提取物的天然殺菌除蟲劑，包括以下步驟：（1）采摘漆樹嫩芽或樹葉并用清水洗凈、干燥至含水量為1-5%、粉碎至20-60目；（2）按g:g固液比1：20-100的比例在步驟（1）的原料中加入水和/或乙醇，混勻后在25-100℃、壓力0-0.3MPa、攪拌速度50-100r/min條件下處理1-48h，處理1-2次，合并后待用；（3）按油脂和乳化劑的質(zhì)量比為1：0.2-1的比例，將油脂和乳化劑混合，在40-80℃、攪拌速度50-100r/min條件下乳化處理0.5-2h，乳化均勻完全后待用，其中油脂與漆樹樹葉的質(zhì)量比為1-2:1；（4）在步驟（2）提取液和漆樹葉或芽一并加入步驟（3）的乳化后油脂中，攪拌0.5-2h，靜置2-8h后分相；（5）將步驟（4）分層液體的下層水相部分用分液漏斗分出并過濾后即得漆樹樹葉提取物。所述步驟（1）中的漆樹葉可為新鮮、無腐爛的原料。上述步驟中所述的漆樹葉可為一種或多種漆樹葉。上述步驟中所述的各種不同漆樹葉可以混合后粉碎、提取。本發(fā)明中所述的一種利用漆樹葉或其提取物的天然殺菌除蟲劑，目前在市面上還未有出現(xiàn)。本發(fā)明對現(xiàn)有技術(shù)和產(chǎn)品而言，提供了一種利用漆樹葉或其提取物的天然殺菌除蟲劑，進一步豐富了現(xiàn)有殺菌和除蟲產(chǎn)品，不但將漆樹樹葉加工為一種高附加值的產(chǎn)品，而且延長了漆樹的產(chǎn)業(yè)鏈?，F(xiàn)有殺菌除蟲劑的不足之處主要有：使用化學藥品的殺菌除蟲劑較多，藥液殘留量大、容易在動物體內(nèi)沉積，對水土、生態(tài)造成污染，害蟲易產(chǎn)生抗藥性，成本較高，并在噴施農(nóng)藥時對施藥人員產(chǎn)生一定刺激和健康損害。本發(fā)明產(chǎn)品的主要作用機理是對害蟲產(chǎn)生內(nèi)吸作用和拒食忌避作用，對細菌產(chǎn)生免疫作用，并對作物產(chǎn)生保護作用，從而達到殺菌除蟲的功效。本發(fā)明產(chǎn)品較現(xiàn)有產(chǎn)品的優(yōu)勢主要體現(xiàn)在：（1）純天然殺菌除蟲劑；（2）殺菌、除蟲效果好；（3）不易產(chǎn)生抗藥性；（4）幾乎不產(chǎn)生殘留；（5）不造成水土污染；（6）生產(chǎn)工藝簡單、成本低容易制備生產(chǎn)。下面以本發(fā)明的實施例為基礎(chǔ)詳細說明本發(fā)明，但本發(fā)明不局限于此。具體實施方式：下面結(jié)合實施例進一步描述本發(fā)明：實施例1，其步驟如下：（1）采摘漆樹樹葉并用清水清洗、干燥至含水量為小于4%、粉碎至20-30目；（2）按g:g固液比1：20的比例在步驟（1）的原料中加入水，混勻后在提取溫度25℃、壓力0.0MPa、攪拌速度50r/min條件下處理48h，提取處理2次，合并后待用；（3）按香果油和乳化劑月桂酸單甘油酯的質(zhì)量比為1：0.2的比例，將油脂和乳化劑混合，在溫度60℃、攪拌速度50r/min條件下乳化處理0.5h，乳化均勻完全后待用，其中香果油與漆樹樹葉的質(zhì)量比為1:1；（4）在步驟（2）提取液和漆樹葉一起加入步驟（3）的乳化后油脂中，攪拌0.5h，靜置2h后分相；（5）將步驟（4）分層液體的下層水相部分用分液漏斗分出并用100目濾網(wǎng)過濾后即得漆樹樹葉提取物；（6）將步驟（5）處理所得的濾液按濾液：水1：5比例稀釋，稀釋后混勻即得一種天然殺菌除蟲劑。為實驗實施例產(chǎn)品的殺菌和除蟲效能，將該混合液來防治青椒疫病、三七炭疽病、葉斑病、根腐和莖腐病，使藥液沿青椒和三七莖基部淋溶到根際周圍土壤里，并施以葉面噴施清液，青椒疫病防治率為45%，三七炭疽病、葉斑病、根腐和莖腐病防治率為60%。實施例2，其步驟如下：（1）采摘漆樹嫩芽或樹葉并用清水洗凈、采用烘箱干燥至含水量為3%左右、干燥溫度為60℃，并粉碎至20目左右；（2）按g:g固液比1：80的比例在步驟（1）的原料中加入水，混勻后在提取溫度70℃、壓力0.0MPa、攪拌速度100r/min條件下處理2h，提取處理2次，合并后待用；（3）按漆樹油和乳化劑蔗糖酯的質(zhì)量比為1：0.5的比例，將漆樹油和乳化劑混合，在溫度80℃、攪拌速度100r/min條件下乳化處理2h，乳化均勻完全后待用，其中油脂與漆樹樹葉的質(zhì)量比為2:1；（4）在步驟（2）提取液和漆樹葉或芽一并加入步驟（3）的乳化后油脂中，攪拌2h，靜置8h后分相；（5）將步驟（4）分層液體的下層水相部分用分液漏斗分出并用80目濾袋過濾后即得漆樹樹葉提取物；（6）將步驟（5）處理所得的濾液按濾液：水1：6比例稀釋，稀釋后混勻即得一種天然殺菌除蟲劑。為實驗實施例產(chǎn)品的殺菌和除蟲效能，試用于番茄、黃瓜灰霉病、白粉病、葉霉病防治上。在發(fā)病前或發(fā)病初期均勻噴霧一次，每隔8天用藥一次，總次數(shù)3次，病蟲害防治率可達65%。實施例3，其步驟如下：（1）采摘漆樹嫩芽或樹葉并用清水洗凈、用微波干燥至水份為2%，微波干燥條件為干燥時間為80s、干燥溫度為65℃，微波功率200W，再粉碎至40目左右；（2）按g:g固液比1：20的比例在步驟（1）的原料中加入乙醇，混勻后在提取溫度55℃、壓力0.1MPa、攪拌速度100r/min條件下提取處理1h，處理2次，合并后待用；（3）按茶果油和乳化劑丙二醇脂肪酸酯的質(zhì)量比為1：0.3的比例，將茶果油和乳化劑混合，在溫度70℃、攪拌速度50r/min條件下乳化處理1h，乳化均勻完全后待用，其中茶果油與漆樹樹葉的質(zhì)量比為1.5:1；（4）在步驟（2）提取液和漆樹葉或芽一并加入步驟（3）的乳化后油脂中，攪拌0.5h，靜置4h后分相；（5）將步驟（4）分層液體的下層水相部分用分液漏斗分出并用100目濾袋過濾后即得漆樹樹葉提取物；（6）將步驟（5）處理所得的濾液按濾液：水1：100比例稀釋，稀釋后混勻即得一種天然殺菌除蟲劑。為實驗實施例產(chǎn)品的殺菌和除蟲效能，試用于番茄、黃瓜灰霉病、葉霉病防治上。在發(fā)病前或發(fā)病初期均勻噴霧一次。每隔7天用藥一次，總次數(shù)3次，病蟲害防治率可達75%。實施例4，其步驟如下：（1）采摘大葉漆樹、小漆樹和多葉小漆樹嫩芽和樹葉（質(zhì)量比1:1:1）并用清水清洗、曬干至水分小于3%、粉碎至60目；（2）按g:g固液比1：100的比例在步驟（1）的原料中加入水和乙醇（質(zhì)量比2:1）的混合溶劑，混勻后在提取溫度50℃、壓力0.05MPa、攪拌速度50r/min條件下提取處理1h，處理1次，并合并后待用；（3）按桐油和乳化劑山梨糖醇脂的質(zhì)量比為1：0.2的比例，將油脂和乳化劑混合，在溫度80℃、攪拌速度80r/min條件下乳化處理0.5h，乳化均勻完全后待用，其中油脂與漆樹樹葉的質(zhì)量比為2:1；（4）在步驟（2）提取液和漆樹葉或芽一并加入步驟（3）的乳化后油脂中，攪拌0.5h，靜置6h后分相；（5）將步驟（4）分層液體的下層水相部分用分液漏斗分出并用100目濾布過濾后即得漆樹樹葉提取物；（6）將步驟（5）處理所得的濾液按濾液：水1：5比例稀釋，混合均勻后即得一種天然殺菌除蟲劑。為實驗實施例產(chǎn)品的殺菌和除蟲效能，試用于防治甘藍黑斑病、菜豆銹病及炭疽病防治上。在發(fā)病初期均勻噴霧一次，每隔12天用藥一次，總次數(shù)4次，病蟲害防治率可達65%。實施例5，其步驟如下：（1）采摘漆樹嫩芽或樹葉并用清水洗凈、曬干至水分小于3%、粉碎至60目；（2）按g:g固液比1：20的比例在步驟（1）的原料中加入提取溶劑水，混勻后在提取溫度90℃、壓力0.0MPa、攪拌速度100r/min條件下處理2h，處理2次，并合并后待用；（3）按柴油和乳化劑脂肪酸單甘油脂的質(zhì)量比為1：1的比例，將油脂和乳化劑混合，在溫度60℃、攪拌速度50r/min條件下乳化處理2h，乳化均勻完全后待用，其中油脂與漆樹樹葉的質(zhì)量比為2:1；（4）在步驟（2）提取液和漆樹葉或芽一并加入步驟（3）的乳化后油脂中，攪拌0.5h，靜置5h后分相；（5）將步驟（4）分層液體的下層水相部分用分液漏斗分出并用100目濾網(wǎng)真空抽濾過濾，真空度為-0.05MPa，過濾后即得漆樹樹葉提取物；（6）將步驟（5）處理所得的濾液按濾液：水1：40比例稀釋，稀釋后混勻即得一種天然殺菌除蟲劑。為實驗實施例產(chǎn)品的殺菌和除蟲效能，試用于生態(tài)茶葉葉斑病、小綠葉蟬、蚜蟲和紅蜘蛛病防治上。在發(fā)病前或發(fā)病初期均勻噴霧一次，每隔6天用藥一次，總次數(shù)6次，病蟲害防治率可達70%。為進一步說明實施例產(chǎn)品的殺菌、抑菌能力，分別對實施例1、2、3中所得漆葉殺菌產(chǎn)品進行抗菌性實驗，具體做法為：1、抗細菌性能（1）菌種活化以大腸桿菌、蠟狀芽孢桿菌為革蘭氏陰性菌，金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌為革蘭氏陽性菌，取凍干菌種管，在菌種上加入適當濃度的營養(yǎng)肉湯，待菌種融化分散后，將其接種于含10mL液體營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基試管內(nèi)，置于37°C、轉(zhuǎn)速為180rpm的搖床內(nèi)振蕩培養(yǎng)24h，使菌液達到一定的濃度。（2）菌懸液的制備用接種針挑取第一代培養(yǎng)的菌懸液，劃線接種于瓊脂培養(yǎng)基平板上，置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，即為第二代培養(yǎng)物。挑取上述第二代培養(yǎng)物中典型的菌落，劃線接種于瓊脂斜面培養(yǎng)基試管中，置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，即第三代培養(yǎng)物。取菌種的第三代培養(yǎng)物，用吸管吸取無菌水3mL-5mL加入斜面培養(yǎng)基試管中，反復吹洗，洗下菌落，然后用吸管將洗液移至另一無菌試管中，在手掌上振蕩至菌落無結(jié)團、分散均勻為止，得到細菌菌懸液，并將菌懸液稀釋成106CFU/mL-107CFU/mL作為試驗用菌懸液，將其置4°C冰箱冷藏備用。（3）抑菌圈的測定培養(yǎng)皿中倒入滅菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基10mL-I5mL，待溶液冷卻凝固。將0.1mL配置好的106-107CFU/mL菌懸液均勻涂抹于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上，待培養(yǎng)基表面干后用5mm的無菌打孔器打孔，分別將30μL實施例溶液注入含有菌懸液的培養(yǎng)皿。將接種完成后的培養(yǎng)基置于37°C恒溫培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)24h，測定抑菌圈的大小。2、抗真菌性能（1）菌種活化試驗菌為黑曲霉菌，將黑曲霉菌接種于瓊脂斜面培養(yǎng)基試管內(nèi)，置于28-30°C、恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)96-120h，使其產(chǎn)生一定量的孢子。（2）菌懸液的制備將培養(yǎng)96-120h的瓊脂斜面培養(yǎng)基試管中加入少量無菌水，用滅菌接種針輕柔刮取表面的新鮮霉菌孢子，將孢子懸液置于錐形瓶內(nèi)，注入洗脫液40mL。錐形瓶中加入小玻璃珠10粒與孢子混合，密封后置于振蕩器中不斷振蕩使孢子散開，然后用單層紗布棉過濾除去菌絲。將其裝入滅菌離心管中，用離心機分離沉淀孢子，去掉上層清液。再加入洗脫液40mL，重復離心操作3次。稀釋孢子懸液，并以計數(shù)板計數(shù)，制成106-107spores/mL濃度的霉菌孢子懸液。然后將盛有霉菌孢子懸液的錐形瓶放于80°C水浴鍋內(nèi)10min，以除去細菌營養(yǎng)體。將霉菌孢子懸液置于4°C冰箱冷藏備用。（3）抑菌圈的測定培養(yǎng)皿中倒入滅菌的瓊脂培養(yǎng)基10mL-I5mL，待溶液冷卻凝固。將0.1mL配置好的106-107CFU/mL菌懸液均勻涂抹于瓊脂培養(yǎng)基上，待培養(yǎng)基表面干后用5mm的無菌打孔器打孔，分別將30μL實施例溶液注入含有菌懸液的培養(yǎng)皿。將接種完成后的培養(yǎng)基置于28°C恒溫培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)48-72h，測定抑菌圈的大小。以上每組實驗做三次，取其平均值做為實驗結(jié)果。實施例1、2、3漆葉殺菌產(chǎn)品抗菌性實驗表實施例大腸桿菌（mm）蠟狀芽孢桿菌(mm)金黃色葡萄球菌(mm)枯草芽孢桿菌(mm)黑曲霉菌(mm)111.510.37.69.97.2212.311.08.911.38.3312.411.88.310.58.6如上表所示，實施例1、2、3漆葉殺菌產(chǎn)品抗菌性能較為優(yōu)異，不僅表現(xiàn)在對大腸桿菌、蠟狀芽孢桿菌等細菌的抗細菌能力較強，對于真菌中的黑曲霉菌的抑制效果也較為明顯。隨著配方和工藝的不同其抗菌性能有所差別。當前第1頁1 2 3