專利名稱：一種4-氨基丁酸縮合菊酸半抗原的合成方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種4-氨基丁酸縮合菊酸半抗原的合成方法，屬于生物化工技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
菊酸，英文名稱Chrysanthemic Acid，分子式為C10H16O2，是合成含菊酸類擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥的中間體。擬除蟲(chóng)菊酯是一類在天然除蟲(chóng)菊酯化學(xué)結(jié)構(gòu)研究基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的仿生藥物。天然除蟲(chóng)菊的應(yīng)用已有悠久的歷史，由于其具有擊倒力強(qiáng)，殺蟲(chóng)作用快，廣譜性，易降解，對(duì)高等動(dòng)物及鳥(niǎo)類低毒性，使用安全，對(duì)環(huán)境污染小等特點(diǎn)，被廣泛用于茶園、果園、農(nóng)田等害蟲(chóng)的防治。隨著國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的提高，我國(guó)貿(mào)易的國(guó)際化，綠色壁壘森嚴(yán)，我國(guó)農(nóng)副產(chǎn)品特別是茶葉、水果中的農(nóng)藥殘留問(wèn)題成為出口貿(mào)易的主要障礙，要求開(kāi)發(fā)應(yīng)用快速殘留檢測(cè)技術(shù)來(lái)加強(qiáng)產(chǎn)地農(nóng)副產(chǎn)品中多種農(nóng)藥殘留的監(jiān)控。而傳統(tǒng)的農(nóng)藥殘留分析主要依靠氣相色譜、液相色譜、氣質(zhì)聯(lián)用、液質(zhì)聯(lián)用等，這些方法需要有昂貴的儀器，而且需要經(jīng)過(guò)繁瑣的前處理，很難達(dá)到快速簡(jiǎn)便的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)要求。因此，有必要研究更有效快捷的檢測(cè)方法，即擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥多殘留檢測(cè)技術(shù)。這就需要有中間體菊酸的衍生物。有報(bào)道曾有用中間體菊酸直接做為半抗原，效果有待提高，也有報(bào)道如果在特征基團(tuán)的末端接上四到六個(gè)的碳鏈，會(huì)提高免疫得到的抗體的效價(jià)，本發(fā)明是在菊酸的末端羧基上接上4-氨基丁酸，使特征基團(tuán)更好的暴露出來(lái)，從而提高多殘留抗體的效價(jià)。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種擬除蟲(chóng)菊酯中間體菊酸衍生物4-氨基丁酸縮合菊酸半抗原的合成方法，以便于含菊酸擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥的酶聯(lián)免疫檢測(cè)，為今后人們的研究提供了方便的途徑。
本發(fā)明的技術(shù)方案以菊酸和4-氨基丁酸為原料，通過(guò)兩步反應(yīng)，合成4-氨基丁酸縮合菊酸半抗原。其反應(yīng)方程式為
工藝步驟為 (1)在一裝有攪拌器的小型反應(yīng)瓶中把0.01mol菊酸溶于3mL N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入少量正丁胺，攪拌30min后加入0.01mol氯甲酸異丁酯，溫度降至0℃，反應(yīng)1h，稱為反應(yīng)液A；另外稱取0.01mol 4-氨基丁酸溶于5mLpH 9.6的碳酸鹽緩沖溶液中，稱為溶液B；然后在0℃的條件下把反應(yīng)液A緩慢滴加到溶液B中，反應(yīng)1.5小時(shí)，稱為反應(yīng)液C； (2)薄層層析法檢測(cè)終點(diǎn)硅膠薄板下端1cm處作一水平線，吸取反應(yīng)液C 1μL點(diǎn)于線上，點(diǎn)樣結(jié)束后吹干，將薄板放入層析缸中，層析液為甲醇和丙酮，甲醇/丙酮體積比為1∶1，展開(kāi)至薄板3/4處，取板，吹干溶劑；將薄板置于紫外分析儀中，在254nm波長(zhǎng)觀察，在Rf為0.4處觀察到顯色點(diǎn)作為反應(yīng)終點(diǎn)。
(3)提純濕法真充硅膠柱，然后用體積比為1∶1的甲醇和丙酮混合液平衡，流量為五個(gè)柱體積后，流速穩(wěn)定，梯度洗脫，洗脫劑依次為甲醇/丙酮體積比為1∶1，6∶4，7∶3，每個(gè)梯度的洗脫劑用量分別為7倍，9倍，5倍柱體積，每收集完一個(gè)梯度的洗脫液后換一次洗脫劑，檢測(cè)在甲醇/丙酮體積比為1∶1的展開(kāi)劑下展開(kāi)，在紫外分析儀254nm波長(zhǎng)觀察，Rf為0.45處觀察到顯色點(diǎn)的組分，然后脫溶劑，即得成品。
本發(fā)明的有益效果本發(fā)明成功合成了擬除蟲(chóng)菊酯的中間體菊酸的衍生物4-氨基丁酸縮合菊酸半抗原，合成步驟簡(jiǎn)潔，經(jīng)過(guò)后處理，純度高達(dá)98％以上，完全可以用作標(biāo)準(zhǔn)品，為以后人們對(duì)含菊酸類擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥多殘留的酶聯(lián)免疫檢測(cè)研究提供了方便的途徑，可以滿足國(guó)內(nèi)外對(duì)其研究的需要。



圖14-氨基丁酸縮合菊酸半抗原的正負(fù)離子掃描圖。
圖24-氨基丁酸縮合菊酸半抗原的正負(fù)離子質(zhì)譜圖。

具體實(shí)施例方式 實(shí)施例1 (1)在一裝有攪拌器的小型反應(yīng)瓶中把1.68g(0.01mol)菊酸溶于3mL DMF(N，N-二甲基甲酰胺)中，然后加入少量正丁胺，攪拌30min后加入1.3658g氯甲酸異丁酯(0.01mol)，溫度降至0℃，反應(yīng)1h，稱為反應(yīng)液A；另外稱取1.03g4-氨基丁酸(0.01mol)溶于5mL pH9.6的碳酸鹽緩沖溶液中，稱為溶液B；然后在0℃的條件下把反應(yīng)液A緩慢滴加到溶有4-氨基丁酸的碳酸鹽緩沖溶液B中，反應(yīng)1.5小時(shí)，稱為反應(yīng)液C。
(2)薄層層析法檢測(cè)終點(diǎn)硅膠薄板下端1cm處作一水平線，吸取反應(yīng)液C 1μL點(diǎn)于線上，點(diǎn)樣結(jié)束后吹干，將薄板放入層析缸中，層析液為甲醇和丙酮，甲醇/丙酮體積比為1∶1，展開(kāi)至薄板3/4處，取板，吹干溶劑；將薄板置于紫外分析儀中，在254nm波長(zhǎng)觀察，在Rf為0.4處觀察到顯色點(diǎn)作為反應(yīng)終點(diǎn)。
(3)提純濕法真充硅膠柱，然后用體積比為1∶1的甲醇和丙酮混合液平衡，流量為五個(gè)柱體積后，流速穩(wěn)定，梯度洗脫，洗脫劑依次為甲醇/丙酮體積比為1∶1，6∶4，7∶3，每個(gè)梯度的洗脫劑用量分別為7倍，9倍，5倍柱體積，每收集完一個(gè)梯度的洗脫液后換一次洗脫劑，檢測(cè)在甲醇/丙酮體積比為1∶1的展開(kāi)劑下展開(kāi)，在紫外分析儀254nm波長(zhǎng)觀察，Rf為0.45處觀察到顯色點(diǎn)的組分，然后脫溶劑，即得成品。
權(quán)利要求
1.一種菊酸的衍生物4-氨基丁酸縮合菊酸半抗原的合成方法，其特征是以菊酸和4-氨基丁酸為原料，通過(guò)兩步反應(yīng)，合成4-氨基丁酸縮合菊酸半抗原；
(1)在一裝有攪拌器的小型反應(yīng)瓶中把0.01mol菊酸溶于3mL N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入少量正丁胺，攪拌30min后加入0.01mol氯甲酸異丁酯，溫度降至0℃，反應(yīng)1h，稱為反應(yīng)液A；另外稱取0.01mol 4-氨基丁酸溶于5mLpH9.6的碳酸鹽緩沖溶液中，稱為溶液B；然后在0℃的條件下把反應(yīng)液A緩慢滴加到溶液B中，反應(yīng)1.5小時(shí)，稱為反應(yīng)液C；
(2)薄層層析法檢測(cè)終點(diǎn)硅膠薄板下端1cm處作一水平線，吸取反應(yīng)液C 1μL點(diǎn)于線上，點(diǎn)樣結(jié)束后吹干，將薄板放入層析缸中，層析液為甲醇和丙酮，甲醇/丙酮體積比為1∶1，展開(kāi)至薄板3/4處，取板，吹干溶劑；將薄板置于紫外分析儀中，在254nm波長(zhǎng)觀察，在Rf為0.4處觀察到顯色點(diǎn)作為反應(yīng)終點(diǎn)；
(3)提純濕法真充硅膠柱，然后用體積比為1∶1的甲醇和丙酮混合液平衡，流量為五個(gè)柱體積后，流速穩(wěn)定，梯度洗脫，洗脫劑依次為甲醇/丙酮體積比為1∶1，6∶4，7∶3，每個(gè)梯度的洗脫劑用量分別為7倍，9倍，5倍柱體積，每收集完一個(gè)梯度的洗脫液后換一次洗脫劑，檢測(cè)在甲醇/丙酮體積比為1∶1的展開(kāi)劑下展開(kāi)，在紫外分析儀254nm波長(zhǎng)觀察，Rf為0.45處觀察到顯色點(diǎn)的組分，然后脫溶劑，即得成品。
全文摘要
一種4-氨基丁酸縮合菊酸半抗原的合成方法，屬于生物化工技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明以菊酸和4-氨基丁酸為原料，通過(guò)兩步反應(yīng)，合成菊酸的衍生物4-氨基丁酸縮合菊酸半抗原。本發(fā)明成功合成了菊酸的衍生物4-氨基丁酸縮合菊酸半抗原，合成步驟簡(jiǎn)潔，經(jīng)過(guò)后處理，純度高達(dá)98％以上，完全可以用作標(biāo)準(zhǔn)品，為以后人們對(duì)含菊酸擬除蟲(chóng)菊酯的酶聯(lián)免疫檢測(cè)研究提供了方便的途徑，可以滿足國(guó)內(nèi)外對(duì)其研究的需要。
文檔編號(hào)C07C233/63GK101219965SQ20081001904
公開(kāi)日2008年7月16日 申請(qǐng)日期2008年1月11日 優(yōu)先權(quán)日2008年1月11日
發(fā)明者胥傳來(lái), 郝曉蕾, 殷祥剛, 冀寶慶 申請(qǐng)人:江南大學(xué)