本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種具有防治真菌性病害的粘帚霉(Gliocladium roseum)真菌孢子粉和具有防治細菌性病害的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)細菌芽孢粉復(fù)配的可濕性粉劑的方法。

背景技術(shù)：

由于長期使用化學(xué)肥料、化學(xué)農(nóng)藥，以及高強度復(fù)種、連作生產(chǎn)的耕作方式，導(dǎo)致我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中出現(xiàn)了諸如病蟲害抗性增強，土壤持續(xù)生產(chǎn)能力和肥料利用率降低，耕地質(zhì)量遭到破壞、有機質(zhì)不足、土壤板結(jié)、肥力下降，土傳病害和連作障礙頻發(fā)，農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全問題日益嚴重等一系列制約我國農(nóng)業(yè)發(fā)展的問題。而由具有生防功能的微生物菌種通過生物發(fā)酵技術(shù)和制劑加工技術(shù)制備的微生物肥料和微生物農(nóng)藥，由于具有防病、促生、修復(fù)土壤微生態(tài)、改良土壤結(jié)構(gòu)、解磷解鉀、提高肥料利用率等功能，可以有效的解決上述制約我國農(nóng)業(yè)發(fā)展的問題。

隨著生物發(fā)酵技術(shù)和制劑加工技術(shù)的發(fā)展，我國微生物肥料產(chǎn)業(yè)和微生物農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)也得到了迅猛發(fā)展，尤其是在最近的二三十年里，微生物肥料和微生物農(nóng)藥的產(chǎn)品種類、年生產(chǎn)量和生產(chǎn)企業(yè)數(shù)量都有大幅提高，在這兩個產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展的時，也存在防治病害相對單一、防治譜相對較窄、防病效果有待提高、菌種易退化、環(huán)境依賴性強等問題，目前在農(nóng)業(yè)部微生物肥料中心和農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所登記的微生物肥料和微生物農(nóng)藥中單一菌種、單一功能的產(chǎn)品占比超過80％，而本發(fā)明的可濕性粉劑由兩種不同防治機理的菌劑與潤濕劑、分散劑、紫外保護劑、載體加工而成，具有較好的懸浮分散性能和水溶性，既可以防治葉部病害也可以防治土壤中的病害，施用方法靈活多樣，可采用根部滴灌、沖施、灌根和地上部噴霧、噴淋等施用方法，對多種真菌和細菌病害均具有很好的防治效果。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種具有防治灰霉病、紋枯病、根腐病、真菌性葉斑病、菌核病等真菌性病害的粘帚霉真菌孢子粉和具有防治青枯病、軟腐病、潰瘍病、細菌性斑點病、細菌性角斑病等細菌性病害的枯草芽孢桿菌細菌芽孢粉復(fù)配的可濕性粉劑及其制備方法。

上述可濕性粉劑是由粘帚霉真菌孢子粉、枯草芽孢桿菌細菌芽孢粉、硅藻土、十二烷基苯磺酸鈉、木質(zhì)素磺酸鈉、羧甲基纖維素鈉、抗壞血酸混合加工而成，按重量份數(shù)計，各組分分別為：50-100份粘帚霉真菌孢子粉、50-100份枯草芽孢桿菌細菌芽孢粉、800-850份硅藻土、10-20份十二烷基苯磺酸鈉、10-50份木質(zhì)素磺酸鈉、10-50份羧甲基纖維素鈉、5-10份抗壞血酸。

所述可濕性粉劑的制備方法為：

步驟一、將濃度為5-10億cfu/克的粘帚霉真菌孢子粉(純度大于90％，含水量小于10％，厚垣孢子比例大于30％)、濃度為200-300億cfu/克的枯草芽孢桿菌細菌芽孢粉(純度大于90％，含水量小于10％)與硅藻土依次加入混合機中，混合0.5～1h后，再依次加入十二烷基苯磺酸鈉、木質(zhì)素磺酸鈉、羧甲基纖維素鈉、抗壞血酸，混合0.5～1h后得到均勻的混合物；

步驟二、將上一步的混合物轉(zhuǎn)入低溫氣流粉碎機，粉碎溫度控制在20℃以下，粉碎后過300目篩，即制得分散性和懸浮性良好的可濕性粉劑。

上述粉紅粘帚霉菌株(Gliocladium roseum)，編號為QGSS-C16，分離自山東壽光市東斟灌村番茄大棚土壤。該菌株已于2016年04月25日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號)，保藏登記號為CGMCC No.12243。菌株適合生長的培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基，適合生長的pH為6.0～6.8，適合生長的溫度為25～28℃。

上述枯草芽孢桿菌菌株(Bacillus subtilis)，編號為QGSS-05，分離自山東壽光三元朱村。該菌株已于2015年10月30日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號)，保藏登記號為CGMCC No.11563。菌株適合生長的培養(yǎng)基為NA培養(yǎng)基，適合生長的pH為7.0～7.2，適合生長的溫度為28～30℃。

本發(fā)明提供的具有防病促生的可濕性粉劑能快速、均勻的懸浮分散于水中，本發(fā)明的可濕性粉劑具有的特點及優(yōu)勢為：

(1)將互不拮抗的生防真菌與細菌復(fù)配，起到很好的增效作用，擴大了對病害的防治范圍，解決了單一生防因子防病譜窄的問題，保證了對不同類型病害的防治效果；

(2)施用方法靈活多樣，可采用根部滴灌、沖施、灌根和地上部噴霧、噴淋等施用方法；

(3)添加的粉紅粘帚霉和枯草芽孢桿菌均是從土壤中分離得到的具有較高生防活性的生防菌株，具有抗逆性強、營養(yǎng)要求簡單、易于在植物根際和葉面定殖、對多種作物的細菌性和真菌性病害具有較好防治效果等優(yōu)點；

(4)粘帚霉孢子粉中厚垣孢子的比例大于30％，大大提高了真菌孢子的存活時間，延長了貨架期；

(5)所用菌株均來源于土壤中，對作物、施用人員、環(huán)境安全性高。

具體實施方式

實施例1

步驟一、將濃度為10億cfu/克的粘帚霉真菌孢子粉100份、濃度為300億cfu/克的枯草芽孢桿菌細菌芽孢粉50份與硅藻土815份依次加入混合機中，混合0.5～1h后，再依次加入十二烷基苯磺酸鈉10份、木質(zhì)素磺酸鈉10份、羧甲基纖維素鈉10份、抗壞血酸5份，混合0.5～1h后得到均勻的混合物；

步驟二、將上一步的混合物轉(zhuǎn)入低溫氣流粉碎機，粉碎溫度控制在20℃以下，粉碎后過300目篩，即制得分散性和懸浮性良好的可濕性粉劑。

懸浮率按照農(nóng)藥懸浮率測定方法GB/T 14825-2006中的4.1進行測定，潤濕時間按照農(nóng)藥可濕性粉劑潤濕性測定方法GB/T 5451-2001進行測定，細度按照農(nóng)藥粉劑、可濕性粉劑細度測定方法GB/T 16150-1995中的2.2濕篩法進行測定，水分按照農(nóng)藥水分測定方法GB/T 1600-2001中2.2共沸蒸餾法進行測定，pH值按照農(nóng)藥pH值的測定方法GB/T 1601-1993進行測定。經(jīng)檢測該可濕性粉劑的懸浮率為78％，潤濕時間為83s，細度99％通過48μm篩，水分6.3％，pH6.9。

實施例2

步驟一、將濃度為10億cfu/克的粘帚霉真菌孢子粉50份、濃度為300億cfu/克的枯草芽孢桿菌細菌芽孢粉50份與硅藻土835份依次加入混合機中，混合0.5～1h后，再依次加入十二烷基苯磺酸鈉15份、木質(zhì)素磺酸鈉15份、羧甲基纖維素鈉25份、抗壞血酸10份，混合0.5～1h后得到均勻的混合物；

步驟二、將上一步的混合物轉(zhuǎn)入低溫氣流粉碎機，粉碎溫度控制在20℃以下，粉碎后過300目篩，即制得分散性和懸浮性良好的可濕性粉劑。

懸浮率按照農(nóng)藥懸浮率測定方法GB/T 14825-2006中的4.1進行測定，潤濕時間按照農(nóng)藥可濕性粉劑潤濕性測定方法GB/T 5451-2001進行測定，細度按照農(nóng)藥粉劑、可濕性粉劑細度測定方法GB/T 16150-1995中的2.2濕篩法進行測定，水分按照農(nóng)藥水分測定方法GB/T 1600-2001中2.2共沸蒸餾法進行測定，pH值按照農(nóng)藥pH值的測定方法GB/T 1601-1993進行測定。經(jīng)檢測該可濕性粉劑的懸浮率為75％，潤濕時間為80s，細度99％通過48μm篩，水分6.8％，pH6.7。

實施例3

步驟一、將濃度為5億cfu/克的粘帚霉真菌孢子粉100份、濃度為200億cfu/克的枯草芽孢桿菌細菌芽孢粉100份與硅藻土815份依次加入混合機中，混合0.5～1h后，再依次加入十二烷基苯磺酸鈉20重量份、木質(zhì)素磺酸鈉20重量份、羧甲基纖維素鈉50重量份、抗壞血酸10重量份，混合0.5～1h后得到均勻的混合物；

步驟二、將上一步的混合物轉(zhuǎn)入低溫氣流粉碎機，粉碎溫度控制在20℃以下，粉碎后過300目篩，即制得分散性和懸浮性良好的可濕性粉劑。

懸浮率按照農(nóng)藥懸浮率測定方法GB/T 14825-2006中的4.1進行測定，潤濕時間按照農(nóng)藥可濕性粉劑潤濕性測定方法GB/T 5451-2001進行測定，細度按照農(nóng)藥粉劑、可濕性粉劑細度測定方法GB/T 16150-1995中的2.2濕篩法進行測定，水分按照農(nóng)藥水分測定方法GB/T 1600-2001中2.2共沸蒸餾法進行測定，pH值按照農(nóng)藥pH值的測定方法GB/T 1601-1993進行測定。經(jīng)檢測該可濕性粉劑的懸浮率為80％，潤濕時間為75s，細度99％通過48μm篩，水分6.1％，pH6.5。

實施例4

可濕性粉劑防治番茄灰霉病的田間實驗：

2015年4月2日北京昌平百善鎮(zhèn)獅子營村日光溫室大棚，試驗地前茬種植番茄，有灰霉病的發(fā)生。該實驗的目的是防治番茄灰霉病的發(fā)生。將實施例1、2、3中制備的可濕性粉劑500倍液進行葉面噴施作為實驗處理，噴施化學(xué)農(nóng)藥50％異菌脲可濕性粉劑1000倍液作陽性對照，噴施清水作空白對照，每個處理設(shè)3次重復(fù)，每重復(fù)的小區(qū)面積為30平方米，在番茄開花后開始噴施，每隔7天噴施1次，連續(xù)噴施3次，最后1次噴施后間隔7天調(diào)查發(fā)病情況。按生產(chǎn)常規(guī)管理方式進行田間管理，在發(fā)病前對將要調(diào)查的植株用系紅繩的方法做好標(biāo)記，每重復(fù)調(diào)查20株，調(diào)查番茄灰霉病病情指數(shù)，記錄番茄的總?cè)~數(shù)、各級病葉數(shù)，計算病情指數(shù)和防治效果。每次采果后記錄各小區(qū)產(chǎn)量，在番茄收獲末期，計算各小區(qū)總產(chǎn)量并折合為畝產(chǎn)量。

病情指數(shù)分級標(biāo)準(zhǔn)：0級，無病斑；

1級，病斑面積占整個葉面積的5％以下；

3級，病斑面積占整個葉面積的6％-10％；

5級，病斑面積占整個葉面積的11％-25％；

7級，病斑面積占整個葉面積的26％-50％；

9級，病斑面積占整個葉面積的50％以上。

病情指數(shù)(％)＝∑(各級病葉數(shù)×相對級數(shù)值)/(調(diào)查總?cè)~數(shù)×最高病級值)×100。

防治效果(％)＝(空白對照區(qū)病情指數(shù)-處理區(qū)病情指數(shù))/空白對照區(qū)病情指數(shù)×100。

表1可濕性粉劑對灰霉病的防治效果及對番茄產(chǎn)量的影響

實施例5

可濕性粉劑防治辣椒青枯病的田間實驗：

2015年3月22日河北廊坊廣陽區(qū)炊莊村日光溫室大棚，試驗地塊連續(xù)三茬種植相同品種辣椒，有青枯病發(fā)生，存在連作障礙問題。

該實驗的目的是防治辣椒青枯病的發(fā)生。將實施例1、2、3中制備的可濕性粉劑500倍液進行灌根作為實驗處理，3％中生菌素濕性粉劑600倍液灌根作陽性對照，灌清水作空白對照，每個處理設(shè)3次重復(fù)，每重復(fù)的小區(qū)面積為30平方米，在青枯病發(fā)病前用藥，每隔7天灌根1次，連續(xù)灌4次，最后1次灌根后間隔7天調(diào)查發(fā)病情況。按生產(chǎn)常規(guī)管理方式進行田間管理，在發(fā)病前對將要調(diào)查的植株用系紅繩的方法做好標(biāo)記，每重復(fù)調(diào)查40株，調(diào)查辣椒死亡株數(shù)，計算死亡率和防治效果，每次采果后記錄各小區(qū)產(chǎn)量，在辣椒收獲末期，計算各小區(qū)總產(chǎn)量并折合為畝產(chǎn)量。

表2可濕性粉劑對辣椒青枯病的防治效果及對辣椒產(chǎn)量的影響

從溫室試驗實施例4、5可以看出，本發(fā)明制備的可濕性粉劑對灰霉病真菌性病害和青枯病細菌性病害均具有很好的防治效果，并且植株長勢比常規(guī)化學(xué)藥劑對照明顯旺盛，可使番茄最低增產(chǎn)14.36％，辣椒最低增產(chǎn)11.95％。