專利名稱：普羅布考單酯在治療心血管疾病和炎性疾病中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本申請是中國專利申請98807171.1(申請日1998年5月14日，發(fā)明名稱普羅布考單酯在治療心血管疾病和炎性疾病中的應(yīng)用)的分案申請。
本發(fā)明涉及抑制VCAM-1的組合物及方法，特別是治療包括動脈粥樣硬化的心血管疾病或炎性疾病的組合物和方法，包括給藥有效量的普羅布考酯。
背景技術(shù)：
目前，心血管疾病在美國是主要的死亡原因。現(xiàn)在約90％的心血管疾病診斷為動脈粥樣硬化。心血管疾病與若干致病因素有關(guān)，包括高膽固醇血癥、高脂血癥和VCAM-1在血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)。
高膽固醇血癥和高脂血癥高膽固醇血癥是引起心血管疾病的一種重要的危險因素。血清脂蛋白是脂類循環(huán)的載體。根據(jù)其密度，脂蛋白分成四類乳糜微粒、極低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。乳靡微粒主要參與飲食中甘油三酯和膽固醇從小腸到脂肪組織和肝的運(yùn)輸。VLDL把內(nèi)源性合成的甘油三酯從肝轉(zhuǎn)運(yùn)到脂肪和其它組織。LDL把膽固醇運(yùn)輸?shù)街車M織并調(diào)節(jié)這些組織中內(nèi)源性膽固醇的含量。HDL把膽固醇從周圍組織轉(zhuǎn)運(yùn)到肝。動脈壁膽固醇幾乎完全來自LDL。Brown和Goldstein，生物化學(xué)年評(Ann.Rev.Biochem).52期，223頁(1983)；Miller，醫(yī)學(xué)年評(Ann.Rev.Med).31期，97頁(1980)。對于LDL含量低的患者，極少發(fā)展成動脈粥樣硬化。
高膽固醇水平與許多疾病有關(guān)，包括心瓣再狹窄、心絞痛、腦動脈粥樣硬化和黃瘤。因此希望提供一種方法來降低患者血漿膽固醇水平，或者降低發(fā)展成與高膽固醇水平有關(guān)的心瓣再狹窄、心絞痛、腦動脈粥樣硬化、黃瘤以及其它疾病的危險性。
如果已經(jīng)確定高膽固醇血癥是由高含量LDL(高脂血癥)引起的，則可嘗試飲食療法來降低LDL的含量。通常用于降低LDL含量的幾類藥物包括膽汁酸螯合劑、煙酸(尼克酸)和3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A(HMG CoA)還原酶抑制劑。普羅布考及貝特類(fibrate)衍生物有時用作輔助治療，通常與其它藥物一起聯(lián)合用藥。HMG CoA還原酶抑制劑被稱之為他汀類(statins)或伐他汀類(vastatins)。他汀類是目前用于治療高膽固醇血癥的最有效的上市藥物，其包括普伐他汀(Pravchol，Bristol Myers Squibb)、阿托伐他汀(atrovastatin)(Warner Lambert/Pfizer)、辛伐他汀(Zocor，Merck)、洛伐他汀(Mevacor，Merck)和氟伐他汀(Lescol)。
對于許多患者，注意飲食以及應(yīng)用一種降血脂試劑就足夠了。然而，對于LDL膽固醇的起始含量高于200mg/dl的患者來說，需要通過治療將LDL含量降低50％或更多。雖然應(yīng)用單一試劑也可能偶爾把LDL降低到此程度，但更通常地只降低了20-30％。因此，對于LDL膽固醇含量為200-400mg/dl的雜合家族性高膽固醇血癥患者，為了達(dá)到LDL膽固醇含量低于100mg/ml，需要聯(lián)合應(yīng)用兩種或有時甚至是三種降血脂藥物。膽汁酸螯合劑樹脂和煙酸聯(lián)合應(yīng)用，可以將LDL含量降低45-55％；膽汁螯合劑樹脂和他汀聯(lián)合，可以降低約50-60％；煙酸和他汀聯(lián)合，可以降低約50％；聯(lián)合應(yīng)用膽汁酸螯合劑樹脂、他汀和煙酸三種藥物治療，可以降低多達(dá)70％。
有證據(jù)表明低密度脂蛋白(LDL)的致動脈粥樣硬化作用部分是通過其氧化修飾作用引起。普羅布考顯示有強(qiáng)烈的抗氧化特性，并可以阻斷LDL的氧化修飾。與這些發(fā)現(xiàn)一致，在LDL受體缺乏的兔中，普羅布考顯示事實(shí)上減慢了動脈粥樣硬化進(jìn)程，這些論述參見Carew等，美國國家科學(xué)院院報(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A)847725-7729(1987)。非常相似地，由于普羅布考的高脂溶性并通過脂蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)，因此它是有效的，可以保護(hù)脂蛋白免受氧化損害。
普羅布考在化學(xué)上與廣泛應(yīng)用的食品添加劑2，[3]-叔丁基-4-羥基苯甲醚(BHA)和2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)有關(guān)。其化學(xué)全名為4，4′-(異亞丙基二硫)雙(2，6-二叔丁基苯酚)。
目前，普羅布考主要用于降低高膽固醇血癥患者的血清膽固醇含量。普羅布考通常以片劑形式給藥，以商標(biāo)LorelcoTM獲得。不幸的是，普羅布考幾乎不溶于水，因此不能靜脈注射。事實(shí)上，由于普羅布考與用于細(xì)胞培養(yǎng)的緩沖液和基質(zhì)混溶性差，在體外，細(xì)胞很難吸收普羅布考。固體普羅布考很難吸收到血液中，并且以基本上未加改變的形式排泄。并且，對于不同的病人，普羅布考片劑的吸收速率有顯著差異，吸收量也不同。在一項(xiàng)研究中(Heeg等，單次和多次口服劑量后人血漿中普羅布考的濃度，La Nouvelle Presse Medicale，92990-2994(1980))，發(fā)現(xiàn)病人與病人之間，普羅布考的血清峰值濃度的差異因子多達(dá)20個。在另一項(xiàng)研究中，Kazuya等，脂類研究雜志(J.Lipid.Res)32；197-204(1991)發(fā)現(xiàn)當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞用50μM普羅布考培養(yǎng)24小時后，只有低于約1μg普羅布考/106細(xì)胞混合。
Parthasarathy的美國5,262,439號專利公開了可溶性普羅布考類似物，其中用酯基替換普羅布考的一個或兩個羥基從而賦予該化合物水溶性。在一個實(shí)施方案中，該水溶性衍生物選自普羅布考的琥珀酸酯、戊二酸酯、己二酸酯、辛二酸酯、癸二酸酯、壬二酸酯或者順丁烯二酸酯的單酯或雙酯。在另一個實(shí)施方案中，普羅布考衍生物為單酯或雙酯，其中的酯含有烷基或烯基，這些烷基或烯基含有的官能團(tuán)選自羧酸基、氨基、氨基鹽、酰胺、酰胺和醛基。
一系列法國專利公開了某些普羅布考衍生物是降膽固醇試劑和降血脂試劑Fr2168137(雙4-羥基苯基硫代烷基酯)；Fr2140771(普羅布考的1，2，3，4-四氫化萘基苯氧基烷酸酯)；Fr2140769(普羅布考的苯并呋喃基氧烷酸衍生物)；Fr2134810(雙-(3-烷基-5-叔烷基-4-噻唑-5-羧基)苯硫基)烷；FR2133024(雙-(4-煙酰氧基苯硫基))丙烷；和Fr2130975(雙(4-苯氧基烷酰氧基)-苯硫基)烷)。
美國5,155,250號專利公開了2，6-二烷基-4-甲硅烷苯酚是抗動脈粥樣硬化試劑。在1995年6月15日公開的WO95/15760號PCT出版物中公開了同樣的化合物作為降血清膽固醇試劑。美國5,608,095號專利公開了烷基化的4-甲硅烷基苯酚可抑制LDL的過氧化，降低血漿膽固醇含量和抑制VCAM-1的表達(dá)，因此用于治療動脈粥樣硬化。
VCAM-1的表達(dá)對于心血管疾病以及各種炎性疾病包括自身免疫障礙和細(xì)菌及病毒感染來說，內(nèi)皮上附著白細(xì)胞是基本的早期事件。當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞表面的誘導(dǎo)粘附分子受體與免疫細(xì)胞表面的反受體相互作用時，內(nèi)皮上開始募集白細(xì)胞。通過選擇性表達(dá)特異性粘附分子例如血管細(xì)胞粘附分子-1(VCAM-1)、細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)和E-選擇蛋白(ELAM)，血管內(nèi)皮細(xì)胞可以確定募集哪種類型的白細(xì)胞(單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和嗜中性白細(xì)胞)。動脈粥樣硬化損害的最早期階段，存在局部的VCAM-1的內(nèi)皮表達(dá)以及表達(dá)整聯(lián)蛋白反受體VLA-4的單核白細(xì)胞的選擇性募集。由于VLA-4在單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞表面而不是在嗜中性白細(xì)胞表面的選擇性表達(dá)，因此對于介導(dǎo)單核白細(xì)胞的選擇性粘附來說，VCAM-1是非常重要的。VCAM-1作為介體參與慢性炎癥，其中的慢性炎癥如哮喘、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和自身免疫性糖尿病。例如，哮喘病人的VCAM-1和ICAM-1的表達(dá)增加。Pilewski，J.M.，等，美國呼吸細(xì)胞分子生物學(xué)雜志(Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.)12，1-3(1995)；Ohkawara，Y.，等，美國呼吸細(xì)胞分子生物學(xué)雜志(Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.)12，4-12(1995)。另外，在卵白蛋白敏感的過敏性氣道反應(yīng)大鼠模型中，阻滯VCAM-1和ICAM-1的整聯(lián)蛋白受體(分別為VLA-4和LFA-1)抑制了早期和晚期反應(yīng)。Rabb，11.A.，等，美國呼吸護(hù)理醫(yī)學(xué)雜志(Am.J.Respir.Care Med.)149，1186-1191(1994)。在類風(fēng)濕性滑膜的微脈管系統(tǒng)中，內(nèi)皮粘附分子包括VCAM-1的表達(dá)也增加了。Koch，A.E.等，實(shí)驗(yàn)研究(Lab.Invest.)64，313-322(1991)；Morales-Ducret，J等，免疫學(xué)(Immunol).149，1421-1431(1992)。指向VCAM-1或其反受體VIA-4的中性抗體可以延遲自發(fā)地發(fā)展成糖尿病小鼠模型(NOD小鼠)的糖尿病的發(fā)生。Yang，X.D.等，美國國家科學(xué)院院報(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)90，10494-10498(1993)；Burkly，L.C.等，糖尿病(Diabetes)43，523-534(1994)；Baron，J.L.等，臨床研究雜志(J.Clin.Invest)93，1700-1708(1994)。在同種異體移植排斥的動物模型中，VCAM-1的單克隆抗體也具有有益的效果，這表明抑制VCAM-1的表達(dá)可能具有防止移植排斥的用途。Oroez，C.G.等，免疫學(xué)快報(Immunol Lett.)32，7-12(1992)。
細(xì)胞以膜結(jié)合形式和可溶性形式表達(dá)VCAM-1。VCAM-1的可溶性形式顯示在體外誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞的趨化性，在鼠角膜中可刺激血管生成反應(yīng)。Koch，A.F.等，自然(Nature)，376，517-519(1995)。可溶性VCAM-1的表達(dá)的抑制制劑具有潛在的治療價值，可以用于治療具有強(qiáng)烈血管生成成分的疾病包括腫瘤生長和轉(zhuǎn)移。Folkman，J.，和Shing，Y.，生物化學(xué)(Biol.Chem.)10931-10934(1992)。
經(jīng)脂多糖(LPS)和細(xì)胞因子如白介素-1(IL-1)和腫瘤壞死因子(TNF-α)活化后，VCAM-1在培養(yǎng)的人血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)。這些因子是非選擇性地活化細(xì)胞粘附分子的表達(dá)。
白細(xì)胞接著轉(zhuǎn)變成泡沫巨噬細(xì)胞(foamy macrophages)，這導(dǎo)致各種各樣的炎癥細(xì)胞因子、生長因子和化學(xué)引誘劑的合成，從而助長了白細(xì)胞繁殖和血小板募集、平滑肌細(xì)胞增生、內(nèi)皮細(xì)胞活化和成熟的動脈粥樣硬化斑所特有的細(xì)胞外基質(zhì)合成。
控制表達(dá)的人VCAM-1基因表面調(diào)節(jié)元件的分子分析表明轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子核因子-kB(NF-kB)或NF-kB樣結(jié)合蛋白對于VCAM-1基因表達(dá)的氧化還原敏感性調(diào)節(jié)有重要作用。轉(zhuǎn)錄因子是蛋白質(zhì)，這些蛋白質(zhì)通過與稱作“增強(qiáng)子元件”的特異性DNA序列結(jié)合來活化(或抑制)細(xì)胞核中的基因表達(dá)，其中所述的增強(qiáng)子元件通常在該基因區(qū)域附近，該基因稱為“啟動子”，在此RNA的合成開始啟動。
已經(jīng)克隆出VCAM-1和ICAM-1的啟動子并描繪了其特性。例如，這兩種啟動子均含有多種可與轉(zhuǎn)錄因子NF-kB結(jié)合的DNA序列元件。Iademarco，M.F.等，生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem)267，16323-16329(1992)。
核因子-kB是一種普遍表達(dá)的多亞單位轉(zhuǎn)錄因子，其通過一大組不同種類的炎癥試劑在若干細(xì)胞類型中活化，所述的炎癥試劑例如TNFa、IL-1B、細(xì)菌內(nèi)毒素和RNA病毒。在將炎癥或其它應(yīng)激信號傳遞到核調(diào)節(jié)器方面，該因子起關(guān)鍵作用。盡管活化NF-kB的精確的生物化學(xué)信號是未知的，但該轉(zhuǎn)錄因子可能把許多動脈粥樣硬化的危險因子和“病原”信號例如高血脂癥、吸煙、高血壓和糖尿病并入通常的分子途徑。
多種信號對血管內(nèi)皮細(xì)胞中NF-kB的活化可以被抗氧化劑特異性地抑制，其中的抗氧化劑例如N-乙酰基半胱氨酸和吡咯烷二硫氨基甲酸酯。這樣得到一個假說即通過不明確的氧化還原機(jī)理活化NF-kB，氧自由基起重要作用。由于NF-kB樣增強(qiáng)子元件也通過氧化還原敏感性方式調(diào)節(jié)VCAM-1啟動子的轉(zhuǎn)錄，因此假想認(rèn)為動脈粥樣硬化損害的氧化應(yīng)激可能對于通過這種氧化還原敏感性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白來調(diào)節(jié)VCAM-1基因表達(dá)起重要作用。美國5,380,747號專利(PCT/US93/10496)首次公開了通過給藥一組二硫氨基甲酸酯(包括吡咯烷二硫氨基甲酸酯)可以抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞中VCAM-1的表達(dá)。因此，這些二硫氨基甲酸酯可以用于治療心血管疾病，并且顯示能明顯地降低動脈粥樣硬化損害在高膽固醇血癥兔中的存在。
已經(jīng)有假說認(rèn)為活性氧物質(zhì)把低密度脂蛋白(LDL)修飾成LDL氧化修飾物(ox-LDL)，這是啟動和傳播動脈粥樣硬化的中心事件。Steinberg等，新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志(N.Engl.J.Med.)1989；320915-924。LDL氧化物是一種復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，至少由若干化學(xué)上不同的氧化物質(zhì)組成，單獨(dú)每一種物質(zhì)或它們聯(lián)合可以調(diào)節(jié)細(xì)胞因子活化的粘附分子基因表達(dá)。脂肪酸氫過氧化物例如亞油酸氫過氧化物(13-HPODE)通過脂肪氧合酶從游離脂肪酸中產(chǎn)生，其是LDL氧化物的一個重要成分。
已經(jīng)提出通過細(xì)胞脂肪氧合酶系統(tǒng)的作用產(chǎn)生一代氧化脂類，該氧化脂類再接著轉(zhuǎn)變成LDL。然后通過過渡金屬和/或氫硫基化合物的催化，基質(zhì)中LDL發(fā)生鏈增長反應(yīng)。以前的研究指出培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞的脂肪酸修飾可改變它們對氧化劑損傷的敏感性。PCT/US95/05880公開了多不飽和脂肪酸及其氫過氧化物誘導(dǎo)人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞中VCAM-1的表達(dá)，但不誘導(dǎo)ICAM-1或E-選擇蛋白的表達(dá)，其機(jī)理并不是細(xì)胞因子或其它非細(xì)胞因子信號介導(dǎo)的。這是對于VCAM-1介導(dǎo)的免疫反應(yīng)的重要且以前未知的生物學(xué)途徑的一個基本發(fā)現(xiàn)。PCT/US95/05880還報道了二硫氨基甲酸酯(包括吡咯烷二硫氨基甲酸酯)能抑制多不飽和脂肪酸及其氫過氧化物對VCAM-1的誘導(dǎo)。
由于心血管疾病目前是美國主要的死亡原因，因此需要提供治療這類疾病的新療法。一個目標(biāo)就是提供一種新的試劑，它可以同時治療高膽固醇血癥、高脂血癥和抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞中VCAM-1的表達(dá)。
因此，本發(fā)明的一個目的是提供一種方法和組合物用于抑制VCAM-1的表達(dá)，特別是用于治療心血管疾病的方法。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種治療心血管疾病的方法和組合物，它可以同時治療高膽固醇血癥、高脂血癥以及抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞中VCAM-1的表達(dá)。

發(fā)明內(nèi)容
據(jù)發(fā)現(xiàn)普羅布考的單酯能夠有效地同時降低膽固醇、降低LDL和抑制VCAM-1的表達(dá)，因此這些化合物可以用作復(fù)合心血管試劑。由于該化合物同時顯示三種重要的心血管保護(hù)活性，病人可以服用一種藥物而不是服用多種藥物來達(dá)到同樣的效果。這可以提高治療和病人順應(yīng)的一致性。
令人驚奇地發(fā)現(xiàn)雖然已知強(qiáng)效的抗氧化劑普羅布考本身并不顯著地影響VCAM-1的表達(dá)，普羅布考的二酯和他汀類也并不顯著地影響VCAM-1的表達(dá)，但是普羅布考單酯抑制VCAM-1的表達(dá)，普羅布考單酯抑制VCAM-1的表達(dá)。
另外還發(fā)現(xiàn)普羅布考的單琥珀酸酯只在較小程度上降低兔的HDL，但不影響小鼠和猴的HDL。相反，普羅布考只是在較小程度上降低LDL，但顯著降低HDL。他汀類降低LDL，可能影響或不影響HDL。
另外還發(fā)現(xiàn)普羅布考的單酯，特別是普羅布考的單琥珀酸酯(此后稱之為“MSE”)選擇性地抑制人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞中TNF誘導(dǎo)的VCAM-1和MCP-1的基因表達(dá)，但對ICAM-1的基因表達(dá)沒有影響。MSE不影響NF-kB的活化。本文中用MSE作為普羅布考單酯的例子。用MSE作為例子僅僅是為了討論方便，其并不能限制本發(fā)明的范圍。
由于發(fā)現(xiàn)普羅布考單酯特別是普羅布考單琥珀酸酯能阻滯內(nèi)皮細(xì)胞表面粘附分子VCAM-1的誘導(dǎo)表達(dá)，因此它們可以用于治療由VCAM-1介導(dǎo)的任何疾病，包括動脈粥樣硬化、血管成形術(shù)后再狹窄、冠狀動脈疾病、心絞痛和其它心血管疾病，以及由VCAM-1介導(dǎo)的非心血管炎性疾病。這些化合物還可以用于治療心臟移植排斥反應(yīng)。
此處記載的化合物即可用于心血管疾病的主要藥物治療，又可用于輔助藥物治療。這些化合物用于例如冠狀疾病包括動脈粥樣硬化、血管成形術(shù)后再狹窄、冠狀動脈疾病和心絞痛的主要治療?？梢越o藥這些化合物以治療外科手術(shù)或血管成形術(shù)治療的小血管疾病，或者不能選擇外科手術(shù)治療的其它血管性疾病。這些化合物還可以在血管再造治療之前用于穩(wěn)定病人。
當(dāng)適當(dāng)應(yīng)用時，此處描述的本發(fā)明還可能通過形成和引起已有的損害的消退而防止新?lián)p害，從而在醫(yī)學(xué)上“治愈”動脈粥樣硬化。
在一個供選擇的實(shí)施方案中，此處公開的化合物可用于治療VCAM-1介導(dǎo)的炎性皮膚疾病，特別是VCAM-1介導(dǎo)的人內(nèi)皮細(xì)胞疾病，其包括但不限于哮喘、牛皮癬、濕疹性皮炎、卡波濟(jì)氏肉瘤、多發(fā)性硬化以及平滑肌細(xì)胞的增生性疾病。
在另一個實(shí)施方案中，可選擇此處公開的化合物來治療由單核白細(xì)胞介導(dǎo)的抗炎性疾病。


圖1是普羅布考單琥珀酸酯和普羅布考在濃度為2.5μM、5μM、10μM和100μM時對HAEC細(xì)胞中VCAM-1表達(dá)的作用進(jìn)行比較的柱形圖。
圖2是普羅布考單琥珀酸酯和普羅布考在濃度為2.5μM、5μM、10μM和100μM時對HAEC細(xì)胞中ICAM-1表達(dá)的作用進(jìn)行比較的柱形圖。
圖3是10μM的普羅布考單琥珀酸酯、50μM的普羅布考和TNF對人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞(HAEC)中MCP-1表達(dá)的作用進(jìn)行比較的柱形圖。
圖4表示普羅布考單琥珀酸酯(10和25μM)和普羅布考(50μM)對HAEC中基因表達(dá)的作用。
圖5是普羅布考單琥珀酸酯和普羅布考對脂類喂食兔血漿中膽固醇含量的作用的柱形圖。
圖6是經(jīng)三星期服藥后，兔血漿中普羅布考和普羅布考單琥珀酸酯濃度進(jìn)行比較的柱形圖。
圖7表示在六星期期間，普羅布考單琥珀酸酯對高膽固醇血癥兔模型中總血清膽固醇的作用圖。
圖8是六星期后普羅布考單琥珀酸酯對脂類喂食兔中總膽固醇、LDLc、VLDLc，ILDLc，HDLc和TG的作用柱形圖。
圖9是未處理的脂類喂食兔和用普羅布考單琥珀酸酯處理的脂類喂食兔中損害覆蓋的主動脈表面積百分比圖。
圖10是普羅布考單琥珀酸酯的血漿含量(微摩爾)作為治療天數(shù)的函數(shù)圖。
圖11是口服普羅布考單琥珀酸酯的ApoE-KO小鼠和對照組中兩星期后總膽固醇、VLDL、IDL、LDL、HDL和甘油三酯進(jìn)行對比的柱形圖，單位mg/ml。
圖12是在服用普羅布考單琥珀酸酯期間及服用后高膽固醇血癥猴子LDL血清含量隨時間天數(shù)的降低圖。
圖13是高膽固醇血癥猴子中普羅布考單琥珀酸酯對血清LDL的作用的柱形圖。
圖14表示大鼠兩星期口服普羅布考單琥珀酸酯1000mg/kg/d對總蛋白、鈣、磷酸酯、葡萄糖、血液尿素氮和膽固醇的影響和對照組相比較的柱形圖(以任意單位)。
圖15表示大鼠兩星期口服普羅布考單琥珀酸酯1000mg/kg/d對白蛋白、肌酸酐、尿酸和總膽紅素的影響和對照組相比較的柱形圖(以任意單位)。
具體實(shí)施例方式
I定義此處所用的術(shù)語“普羅布考單酯”包括(i)美國5,262,439號專利記載的任何一種普羅布考單酯，例如，羧酸酯和二羧酸酯及其鹽；(ii)比普羅布考具有更高水溶性并且能降低血漿膽固醇、降低LDL以及抑制VCAM-1表達(dá)的任意一種普羅布考單酯，此處將詳細(xì)描述。在一個實(shí)施方案中，普羅布考單酯包括普羅布考的二羧酸酯，包括但不限于琥珀酸、戊二酸、己二酸、辛二酸、癸二酸、壬二酸和順丁烯二酸的酯類。在另一個實(shí)施方案中，酯基包括能使該化合物比普羅布考水溶性增加的官能團(tuán)，包括但不限于飽和及不飽和二羧酸及其鹽、氨基羧酸及其鹽、含醛的羧酸及其鹽、氨基、氨基鹽、酰胺、醛基及其鹽。還有一個實(shí)施方案中，酯基具有的官能團(tuán)選自磺酸、磺酸酯、磷酸、磷酸酯、環(huán)磷酸酯、多羥基烷基、糖基、C(O)-間隔基-SO3H，其中間隔基為-(CH2)n-、-(CH2)n-CO-、-(CH2)n-N-、-(CH2)n-O-、(CH2)n-S-、-(CH2O)-、-(OCH2)-、-(SCH2)-、-(CH2S-)、-(芳基-O-)-、-(O-芳基)-、-(烷基-O)-、-(O-烷基)-；n為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；C(O)-間隔基-SO3M，其中M為金屬，用于形成可藥用鹽，例如鈉或鉀，C(O)-間隔基-PO3H2，C(O)-間隔基PO3M2，C(O)-間隔基-PO3HM、C(O)-間隔基-PO4H、C(O)-間隔基-PO4M、SO3M、-PO3H2、-PO3M2、-PO3HM、環(huán)磷酸酯、多羥基烷基、糖基、C(O)-間隔基-[O(C1-3烷基)p]n，其中n定義如上，p為1、2或3，-[O(C1-3烷基)p]n、羧基低級烷基、低級烷基羰基低級烷基、N，N-二烷基氨基低級烷基、吡咯基低級烷基、咪唑基低級烷基、嗎啉基低級烷基、吡啶烷基低級烷基、噻唑啉基低級烷基、哌啶基低級烷基、嗎啉基低級羥烷基、N-吡咯基、哌嗪基低級烷基、N-烷基哌嗪基低級烷基、三唑基低級烷基、四唑基低級烷基、四唑基氨基低級烷基或噻唑基低級烷基。
術(shù)語“可藥用衍生物”指活性化合物的衍生物，其給藥至受藥者后能夠直接或間接提供母體化合物或者它本身顯示活性。
術(shù)語“生理學(xué)上可裂解的離去基團(tuán)”指在體內(nèi)能夠從所連分子裂解的基團(tuán)，包括但不限于有機(jī)或無機(jī)陰離子、可藥用陽離子、?；?包括但不限于(烷基)C(O))，包括乙酰基、丙酰基和丁?；?、烷基、磷酸酯、硫酸酯和磺酸酯。
應(yīng)該選擇具有適當(dāng)親脂性的普羅布考單酯以定位于作用部位用于治療動脈粥樣硬化和其它心血管及炎癥性疾病。該化合物不應(yīng)該劃分在低翻轉(zhuǎn)的區(qū)域例如脂肪沉積區(qū)域。在治療心血管疾病一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，充血性心力衰竭或腎機(jī)能不全不應(yīng)該顯著影響該化合物的藥代動力學(xué)。
可以通過任何合適方式給藥該活性化合物或這些化合物的混合物，這些給藥方式包括但不限于系統(tǒng)給藥包括口服或靜脈給藥，或者局部給藥包括透皮給藥。通常的劑量范圍為0.1-500mg/kg體重，給藥方案從每兩天一次到每天兩次至數(shù)次。給藥時間在每日劑量只給藥1-2次時為2-6個月。
在心血管治療中，還可以應(yīng)用灌注罐導(dǎo)管沿著或代替冠狀動脈或其它動脈成形術(shù)直接將這些化合物給藥至血管壁。作為一個實(shí)施例，2-5mL含有約1-500mM該化合物或化合物混合物的可藥用溶液在1-5個大氣壓下給藥。此后，在接一來的六個月期間，在心狹窄的最大危險期間，活性化合物通過其它合適途徑和給藥方案給藥。
用活性化合物進(jìn)行相對短期治療在不能用血管成形術(shù)或外科手術(shù)治療的冠狀動脈疾病損害中用于引起受損血管“皺縮”。短期治療的非限制性實(shí)施例為2-6個月，劑量范圍是0.5-500mg/kg體重(如果給藥間隔時間為每兩天一次至每天三次)。
可以應(yīng)用長期治療以防止高危病人中早期損害的發(fā)展。長期治療可以延續(xù)數(shù)年，劑量范圍是0.5-500mg/kg體重，給藥間隔為每兩天一次至每天三次。
活性化合物還可以剛好在冠狀動脈成形術(shù)之前和成形術(shù)之后立即給藥，用于減少或消除那些導(dǎo)致臨床上顯著再狹窄的異常增生及炎癥反應(yīng)。
活性化合物可以與其它用于治療心血管疾病的藥物聯(lián)合給藥，聯(lián)合的藥物包括血小板聚集抑制劑例如阿斯匹林，抗血栓試劑例如芐丙酮香豆素鈉，鈣通道拮抗劑例如維拉帕米、地爾硫卓和硝苯地平；血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑例如卡托普利和恩那普利，和β-阻滯劑例如普奈洛爾、特布洛爾(terbutalol)和拉貝洛爾。本發(fā)明的化合物還可以與非甾體抗炎藥聯(lián)合用藥例如布洛芬、吲哚美鋅、非諾洛芬、甲酚那酸、氟芬那酸、舒林酸。本發(fā)明化合物還可以與皮質(zhì)類固醇聯(lián)合給藥。
在小鼠模型中，經(jīng)皮下植入丸劑給藥的MSE(150mg/kg/天釋放丸劑)阻滯肺中LPS-誘導(dǎo)的VCAM-1和MCP-1的基因表達(dá)。
在新西蘭白兔模型中，口服MSE(150mg/kg/天)6星期可降低總血漿、含ApO-B的和HDL膽固醇含量。對血漿膽固醇的影響還伴隨明顯抑制動脈粥樣硬化損害形成、巨噬細(xì)胞聚集以及VCAM-1的表達(dá)。
在膽固醇喂食C57黑色和apoE-剔除的小鼠模型中，口服MSE兩星期可選擇性降低含apoB的脂蛋白，但對HDL沒有影響。在高膽固醇血癥獼猴模型中，口服MSE兩星期可降低總血漿和LDL膽固醇，而不影響HDL。
在細(xì)菌埃姆斯試驗(yàn)中，MSE不是誘變劑。大鼠以1000mg/kg/天劑量口服MSE兩星期后并不導(dǎo)致死亡，對血清電解質(zhì)和血細(xì)胞比容值也沒有影響?？梢杂^測到血清LDH、堿性磷酸酯酶、SGOT和SGPT有升高，但與未處理組沒有統(tǒng)計學(xué)差異，也不伴隨肝形態(tài)學(xué)或組織學(xué)變化。
如果是局部用藥用于治療皮膚炎癥疾病，所選擇的化合物應(yīng)該制成皮膚能吸收的形式，從而有足夠的量在病變部位提供治療作用。普羅布考單酯必須是生理學(xué)上可接受的。通常來說，治療指數(shù)至少為2優(yōu)選至少5或10的化合物是可以接受的。治療指數(shù)定義為EC50/IC50，其中EC50是抑制VCAM-1表達(dá)50％時的化合物濃度，IC50為對靶細(xì)胞50％毒性時的化合物濃度?？梢酝ㄟ^直接細(xì)胞計數(shù)、錐蟲藍(lán)排斥或各種代謝活性研究如加入3H-胸腺嘧啶核甙來測定細(xì)胞毒性，這些是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)。
下面通過實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明，這些實(shí)施例用MSE作為模型化合物。這僅僅是用于舉例說明，并不能限制本發(fā)明的范圍。通過與此基本上相類似的方式，此處定義的任何其它普羅布考單酯均可用來治療心血管疾病和炎癥性疾病。
實(shí)施例1人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞中VCAM-1的表達(dá)圖1是普羅布考單琥珀酸酯和普羅布考在濃度為2.5μM、5μM、10μM和100μM時在體外對人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞中VCAM-1表達(dá)的作用以單獨(dú)TNF誘導(dǎo)的VCAM-1表達(dá)百分比形式進(jìn)行比較的柱形圖。在組織培養(yǎng)孵育箱中，這些細(xì)胞在37℃下在細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)16小時。培養(yǎng)16小時后，洗滌細(xì)胞，用VCAM-1的抗體孵化。應(yīng)用VCAM-1抗體的辣根過氧化物酶綴合抗體進(jìn)行比色ELISA分析來確定結(jié)合到細(xì)胞的抗體量。結(jié)果顯示，在這些條件下，MSE抑制VCAM-1的表達(dá)，而沒有觀測到普羅布考對VCAM有作用。
實(shí)施例2人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞中ICAM-1的表達(dá)圖2是普羅布考單琥珀酸酯和普羅布考在濃度為2.5μM、5μM、10μM和100μM時在體外對人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞中ICAM-1表達(dá)的作用以單獨(dú)TNF誘導(dǎo)的ICAM-1表達(dá)的百分比形式進(jìn)行比較的柱形圖。在組織培養(yǎng)孵化箱中，這些細(xì)胞在37℃下在細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)16小時。培養(yǎng)16小時后，洗滌細(xì)胞，用ICAM-1的抗體孵化。應(yīng)用ICAM-1抗體的辣根過氧化物酶綴合抗體進(jìn)行比色ELISA分析來確定結(jié)合到細(xì)胞的抗體量。結(jié)果顯示，在這些條件下，MSE只對ICAM表達(dá)有微弱作用，且該作用的濃度依賴性不強(qiáng)；而普羅布考對ICAM表達(dá)沒有作用。
實(shí)施例3人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞中MCP-1的表達(dá)圖3是10μM的普羅布考單琥珀酸酯、50μM的普羅布考和TNF對人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞(HAEC)中MCP-1表達(dá)的作用進(jìn)行比較的柱形圖。這些細(xì)胞單獨(dú)用TNF或者用TNF和10微摩爾普羅布考單琥珀酸酯聯(lián)合處理四小時。收集細(xì)胞培養(yǎng)基，應(yīng)用基于顏色的ELISA分析來定量MCP-1的含量。結(jié)果顯示普羅布考單酯比普羅布考本身在更大程度上抑制MCP-1的表達(dá)。MCP-1是一種化學(xué)引誘蛋白，能在動脈粥樣硬化損害部位募集單核細(xì)胞。
實(shí)施例4體外人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞中普羅布考單琥珀酸酯對基因表達(dá)的影響圖4表示RNA中VCAM-1和MCP-1基因表達(dá)的RNA印跡分析，其中的RNA是從LPS-攻擊的ApoE剔除小鼠肺中分離得到。小鼠皮下給藥MSE、普羅布考和安慰劑400mg，為90天釋放丸劑。1星期后，這些動物腹膜內(nèi)注射1mg/kgLPS。兩小時后處死這些動物，冷凍肺用于RNA分離。通過變性1.0％瓊脂糖膠電泳對該RNA按照大小進(jìn)行分級分離，將其轉(zhuǎn)移到尼龍膜，用小鼠JE-特異性32P標(biāo)記的cDNA探針進(jìn)行雜交，然后脫膜，先用小鼠VCAM-1特異性cDNA再用雞β-肌動蛋白特異性cDNA探針進(jìn)行雜交。
實(shí)施例5脂類喂食兔中普羅布考單琥珀酸酯對血漿膽固醇的影響圖5是普羅布考單琥珀酸酯和普羅布考對脂類喂食兔中血漿總膽固醇和脂蛋白膽固醇含量的作用的柱形圖。用含有0.5％重量比的MSE或普羅布考的高脂食物(0.5％膽固醇和3％椰子油)喂食兔三星期。對照組用不含藥物的同樣食物喂食。用快速液相色譜從總血漿中分離脂蛋白部分，并分析膽固醇含量。MSE導(dǎo)致所有類型脂蛋白有統(tǒng)計學(xué)上明顯的降低，而普羅布考只導(dǎo)致HDL膽固醇的降低(p＜0.05)。
實(shí)施例6兔喂食高膽固醇3星期后，MSE和普羅布考血藥濃度的比較在高脂類食物(0.5％膽固醇和3％椰子油)中，MSE或普羅布考以0.5％重量比濃度對兔給藥3星期。用乙醚從血漿中提取出藥物，用高壓液相色譜進(jìn)行分析。結(jié)果顯示MSE和普羅布考的血漿含量類似，盡管如上面實(shí)施例所示，這些化合物對血漿膽固醇和脂蛋白含量的作用有顯著性差異。
實(shí)施例7 MSE對NF-kB活化的影響單獨(dú)用TNF或者用TNF組合25微摩爾MSE或PDTC處理人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞1小時、2小時或4小時。洗滌細(xì)胞，制備細(xì)胞核提取物，通過VCAM-1啟動子探針進(jìn)行凝膠移位分析。結(jié)果證明MSE不影響NF-kB的活化，而PDTC抑制NF-kB的活化。
實(shí)施例8用膽固醇喂食兔6星期后，MSE對膽固醇含量的影響用高脂肪高膽固醇(0.5％)食物或者用該食物結(jié)合0.5重量/重量(約150mg/kg/天)的AGE-3或普羅布考喂食新西蘭白兔6星期。圖8是六星期后普羅布考單琥珀酸酯對脂類喂食兔的總膽固醇、LDLc、VLDLc，ILDLc，HDLc和甘油三酯(TG)的作用柱形圖。6星期后，用快速液相色譜從總血漿中分離出脂蛋白，分析膽固醇和甘油三酯的含量。如實(shí)施例8所示，與用普羅布考處理時相比，用AGE-3處理時總膽固醇以及VLDL和IDL中的膽固醇降低得更多。
實(shí)施例9高膽固醇血癥中AGE-3對動脈粥樣硬化進(jìn)程的影響處死如實(shí)施例8中描述的兔，獲得主動脈。主動脈用蘇丹IV著色，分析著色的程度。圖9是未處理的脂類喂食兔和用MSE處理的脂類喂食兔的損害覆蓋的主動脈表面積百分比圖。接受AGE-3的兔的主動脈染色較輕，這表明用普羅布考單琥珀酸酯處理的兔中動脈粥樣硬化降低。
用VCAM-1或Ram-11抗原對對這些主動脈切片進(jìn)行免疫染色用于VCAM-1表達(dá)或巨噬細(xì)胞聚集。用AGE-3處理明顯降低VCAM-1的表達(dá)和巨嗜細(xì)胞聚集(即約大于75％)。在類似的實(shí)驗(yàn)中，對于降低VCAM-1的表達(dá)和巨嗜細(xì)胞的聚集方面，同樣劑量普羅布考的效果差得多(小于25％)。
實(shí)施例10高膽固醇血癥猴中AGE-3可逆地降低LDL通過喂食高脂類膽固醇食物使獼猴患有高膽固醇血癥，然后再給藥AGE-3。然后用AGE-3對猴口服給藥2星期(100mg/kg/天)。在此期間，猴血清LDL膽固醇降低的百分比范圍為4-60％。然后終止給藥，在第29天時檢查血清膽固醇含量。膽固醇含量恢復(fù)到處理前的水平，并維持在該水平。
實(shí)施例10圖10是普羅布考單琥珀酸酯(微摩爾)的血漿含量作為治療天數(shù)的函數(shù)圖。如圖所示，MSE的血漿含量基本上維持恒定。
實(shí)施例11圖11是口服普羅布考單琥珀酸酯(150mg/kg/天)兩星期后的ApoE-KO小鼠和對照組中總膽固醇、VLDL、IDL、LDL、HDL和甘油三酯(單位mg/ml)進(jìn)行對比的柱形圖。
實(shí)施例12圖12是在服用普羅布考單琥珀酸酯期間及服用該藥物后高膽固醇血癥猴子LDL血漿含量隨時間天數(shù)的可逆性降低圖。
實(shí)施例13圖13是高膽固醇血癥猴中普羅布考單琥珀酸酯對血清LDL的作用的柱形圖。
實(shí)施例14圖14表示大鼠兩星期口服普羅布考單琥珀酸酯1000mg/kg/d對總蛋白、鈣、磷酸酯、葡萄糖、血液尿素氮和膽固醇的影響和對照組相比較的柱形圖(以任意單位)。
實(shí)施例15圖15表示大鼠兩星期口服普羅布考單琥珀酸酯1000mg/kg/d對白蛋白、肌酸酐、尿酸和總膽紅素的影響和對照組相比較的柱形圖(以任意單位)。
應(yīng)該注意關(guān)于對總膽固醇和LDL的影響，小鼠和兔以及猴相比，MSE和普羅布考的作用是有區(qū)別的。MSE降低膽固醇和LDL的作用，在兔和猴中比在小鼠中的效果明顯強(qiáng)得多。在小鼠中，MSE與普羅布考具有相同的效果，即如果對這兩個因素有作用的話也只有很小的作用。然而，在所有測試的動物種類中，MSE可以抑制VCAM-1的表達(dá)。
III藥物組合物人、馬、犬、牛和其它動物尤其是哺乳動物，只要其患有此處所述的任意一種疾病包括VCAM-1介導(dǎo)的心血管疾病和炎性疾病，就可以通過對患者給藥在可藥用載體或稀釋劑中有效量的一種或多種上面確定的化合物或者其可藥用衍生物或鹽來進(jìn)行治療。這些活性物質(zhì)可以通過任何合適的途徑給藥，例如口服、非腸道給藥、靜脈給藥、真皮內(nèi)給藥、皮下或局部給藥。
此處所用的術(shù)語可藥用鹽或配合物是指能保持所需生物學(xué)活性的上述已確定化合物的鹽或配合物，它們顯示最小量的不需要的毒理學(xué)效應(yīng)。這些鹽的非限制性實(shí)施例為(a)無機(jī)酸(例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸和硝酸等)的酸加成鹽，有機(jī)酸(例如乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、蘋果酸、抗壞血酸、苯甲酸、鞣酸、雙羥萘酸、海藻酸、聚谷氨酸、萘磺酸、萘二磺酸、聚半乳糖醛酸)的加成鹽；(b)與多價金屬陽離子(例如鋅離子、鈣離子、鉍離子、鋇離子、鎂離子、鋁離子、銅離子、鈷離子、鎳離子、鎘離子、鈉離子和鉀離子等)形成的堿加成鹽；或者與有機(jī)陽離子形成的堿加成鹽，其中的有機(jī)陽離子為N，N-二芐基乙二胺、D-氨基葡萄糖、銨、四乙基銨或乙二胺；或(c)(a)和(b)的組合物；例如鞣酸鋅鹽等。
活性化合物包含在可藥用載體或稀釋劑中，其量足以對患者給藥治療上的有效量而不引起治療病人嚴(yán)重的毒性效應(yīng)。對于所有上面提出的疾病，優(yōu)選的活性化合物劑量范圍約0.1-500mg/kg，優(yōu)選1-100mg/kg/天。根據(jù)母體化合物的給藥劑量，可以計算出可藥用衍生物的有效劑量范圍。如果衍生物本身顯示活性，可以應(yīng)用衍生物的重量按照上面方法估算出有效劑量，或者通過本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的其它方式估算出有效量。
對于全身給藥，該化合物可以以任意適合的單位劑型合宜地給藥，包括但不限于含1-3000mg、優(yōu)選5-500mg活性成分/單位劑型。通常25-250mg的口服劑量是適宜的。給藥活性成分應(yīng)該使活性化合物的峰值血漿濃度達(dá)到約0.1-100mM、優(yōu)選約1-10mM。這是可以達(dá)到的，例如通過靜脈注射任選地在生理鹽水中或水介質(zhì)中的活性成分溶液或制劑，或者以活性成分的大丸劑給藥。
藥物組合物中活性化合物的濃度將依據(jù)藥物的吸收、分布、失活和排泄速率以及本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的其它因素而定。應(yīng)該注意根據(jù)所需減輕疾病的嚴(yán)重性的不同，劑量值也可以發(fā)生變化。還應(yīng)該理解對于任何具體的對象，根據(jù)個體需要和給藥人員或監(jiān)督給藥人員的職業(yè)判斷，應(yīng)該隨時調(diào)整具體的劑量范圍，此處舉出的濃度范圍僅僅是舉例性的，并不能限制所要求保護(hù)組合物的范圍或?qū)嵺`?；钚猿煞挚梢砸淮涡越o藥，也可以分成若干小劑量在不同時間間隔給藥。
口服組合物通常含有惰性稀釋劑或可食用載體。它們可以裝入明膠膠囊中或壓成片劑。為了口服治療給藥的目的，活性化合物可以與輔料混合，用作片劑、錠劑或膠囊。還可以含有藥學(xué)上相容的粘合劑和/或輔藥作為組合物的一部分。
片劑、丸劑、膠囊和錠劑等可以含有任意的下列成分或與之類似的化合物粘合劑如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；輔料例如淀粉或乳糖；崩解劑例如海藻酸、初生凝膠(Primogel)或玉米淀粉；潤滑劑例如硬脂酸鎂或氫化植物油；助流劑例如膠體二氧化硅；甜味劑例如蔗糖或糖精；或者矯味劑例如薄荷油、水楊酸甲酯或橙味調(diào)味劑(orange flavoring)。當(dāng)劑量單位形式為膠囊時，除了含有上面所述物質(zhì)外，它還可以含有液體載體例如脂肪油。另外，劑量單位形式可以含有其它各種能改變劑量單位物理形式的物質(zhì)例如糖、蟲膠或其它腸溶試劑的包衣。
活性化合物或其可藥用鹽或衍生物可以作為酏劑、混懸劑、糖漿劑、糯米紙囊劑或口香糖劑等形式給藥。除含有活性成分外，糖漿劑還可以含有作為甜味劑的蔗糖以及某些防腐劑、染料、著色劑和調(diào)味劑。
該活性化合物或其可藥用衍生物或其鹽還可以與不能削弱其所需要作用的其它活性成分聯(lián)合給藥，或者與增強(qiáng)其所需要作用的物質(zhì)聯(lián)合給藥，例如抗生素、抗真菌劑、抗炎藥或抗病毒化合物?；钚曰衔镞€可以聯(lián)合的試劑有降血酯試劑例如普羅布考和煙酸；血小板聚集抑制劑例如阿斯匹林；抗血栓試劑例如芐丙酮香豆素鈉；鈣通道阻滯劑例如維拉帕米、地爾硫卓和硝苯地平；血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑例如卡拖普利和恩那普利，和β-阻滯劑例如普萘洛爾、特布洛爾(terbutalol)和拉貝洛爾。這些化合物還可以與非甾體抗炎藥聯(lián)合給藥例如布洛酚、吲哚鎂辛、阿斯匹林、非諾洛酚、甲滅酸、氟滅酸、舒林酸。該化合物還可以與皮質(zhì)類固醇聯(lián)合給藥。
非腸道給藥、真皮內(nèi)給藥、皮下或局部給藥用的溶液或混懸液可以包括下列成分無菌的稀釋劑例如注射用水、生理鹽水溶液、不揮發(fā)油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑；抗菌劑例如苯甲醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯；抗氧化劑例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑例如乙二胺四乙酸；緩沖劑例如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；還有用來調(diào)整緊張性的試劑例如氯化鈉或葡萄糖。非腸道給藥制劑可以裝入安瓿、一次性注射器或者由玻璃或塑料制成的多劑量小瓶中。
局部用藥的合適賦形劑或載體是已知的，包括洗劑、混懸劑、軟膏、膏霜、凝膠、酊劑、噴霧劑、粉劑、糊劑、緩釋透皮片、用于哮喘的氣霧劑和用藥于直腸、陰道、鼻或口腔粘膜的栓劑。
可以應(yīng)用增稠劑、軟化劑和穩(wěn)定劑來制備局部用藥組合物。增稠劑的例子包括凡士林、蜂蠟、黃原膠或聚乙二醇，濕潤劑例如山梨醇；軟化劑例如礦物油、羊毛脂及其衍生物或角鯊烯。許多溶液劑和軟膏劑可以從市場上購到。
可加入天然或人工矯味劑或甜味劑以增強(qiáng)對粘膜表面產(chǎn)生局部作用的局部用藥制劑的氣味?？梢约尤攵栊匀玖匣蝾伭?，特別是設(shè)計用藥于口腔粘膜表面的制劑時可以這樣做。
活性化合物可與載體一起制備，所述載體可以保護(hù)化合物不致于快速釋放，例如控釋制劑，包括植入劑和微膠囊給藥系統(tǒng)?？梢詰?yīng)用生物降解性、生物相容性聚合物例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸。這些制劑的許多制備方法已被專利公開或者是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所熟知的。
如果靜脈給藥，優(yōu)選的載體是生理鹽水或磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。
該活性化合物還可以通過透皮片給藥。制備透皮片的方法對本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員是已知的。例如參見Brown，L.，和Langer，R.，藥物的透皮釋放，醫(yī)學(xué)年評(Transdermal Delievery of Drugs，AnnualReview of Medicine)39221-229(1988)，在此引入作為參考。
在另一個實(shí)施方案中，活性化合物與載體一起制備，所述載體可以保護(hù)化合物不致于在體內(nèi)快速消除，例如控釋制劑包括植入劑和微囊給藥系統(tǒng)。還可應(yīng)用生物降解性、生物相容性聚合物例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸。這些制劑的制備方法對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。這些物質(zhì)還可以購自Alza公司和Nova Pharmaceuticals Inc。脂質(zhì)體混懸劑也可以作為可藥用載體。這些可以通過本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的方法制備，例如按照美國4,522,811號專利記載的方法(該專利全文在此引入作為參考)。例如脂質(zhì)體制劑可以這樣制備把合適的脂類(例如硬脂酰磷脂酰基乙醇胺、硬脂?；字；憠A、二十烷?；字；憠A和膽固醇)溶于無機(jī)溶劑中，然后蒸發(fā)掉溶劑，在容器表面留下一層干燥的脂類薄膜。然后把活性化合物或其單磷酸酯、雙磷酸酯和/或三磷酸酯衍生物的水溶液加入到該容器中。用手旋轉(zhuǎn)容器使脂類物質(zhì)脫離容器壁以及分散脂類聚合體，這樣形成脂質(zhì)體懸浮液。
本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員根據(jù)前述的內(nèi)容可以很明顯地對本發(fā)明作出修飾和改變。所有這些修飾和改變的方案均落入本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.普羅布考單酯或其可藥用鹽在制備用于治療VCAM-1介導(dǎo)的疾病的藥物中的用途。
2.普羅布考單酯或其可藥用鹽在制備用于抑制VCAM-1的藥物中的用途。
3.權(quán)利要求1的用途，其中單酯的酯基團(tuán)包括選自以下的官能團(tuán)飽和及不飽和二羧酸及其鹽、氨基羧酸及其鹽、含醛的羧酸及其鹽。
4.權(quán)利要求1的用途，其中單酯是普羅布考單琥珀酸酯。
5.權(quán)利要求2的用途，其中單酯是普羅布考單琥珀酸酯。
6.權(quán)利要求1的用途，其中單酯是普羅布考單戊二酸酯。
7.權(quán)利要求2的用途，其中單酯是普羅布考單戊二酸酯。
8.權(quán)利要求1的用途，其中單酯是普羅布考單己二酸酯。
9.權(quán)利要求2的用途，其中單酯是普羅布考單己二酸酯。
10.權(quán)利要求1的用途，其中單酯是普羅布考單辛二酸酯。
11.權(quán)利要求2的用途，其中單酯是普羅布考單辛二酸酯。
12.權(quán)利要求1的用途，其中單酯是普羅布考單癸二酸酯。
13.權(quán)利要求2的用途，其中單酯是普羅布考單癸二酸酯。
14.權(quán)利要求1的用途，其中單酯是普羅布考單壬二酸酯。
15.權(quán)利要求2的用途，其中單酯是普羅布考單壬二酸酯。
16.權(quán)利要求1的用途，其中疾病是動脈粥樣硬化。
17.權(quán)利要求1的用途，其中疾病是血管成形術(shù)后再狹窄。
18.權(quán)利要求1的用途，其中疾病是冠狀動脈疾病損害。
19.權(quán)利要求1的用途，其中疾病是心絞痛。
20.權(quán)利要求1的用途，其中疾病是小動脈疾病。
21.權(quán)利要求1的用途，其中疾病是炎性疾病。
22.權(quán)利要求21的用途，其中炎性疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、哮喘、皮膚炎、多發(fā)性硬化或牛皮癬。
23.權(quán)利要求1-22任一項(xiàng)的用途，其中藥物適于口服。
24.權(quán)利要求1-22任一項(xiàng)的用途，其中藥物適于局部給藥。
25.權(quán)利要求1-22任一項(xiàng)的用途，其中藥物適于靜脈給藥。
26.權(quán)利要求1-22任一項(xiàng)的用途，其中藥物適于皮下給藥。
27.權(quán)利要求1-22任一項(xiàng)的用途，其中藥物適于非腸道給藥。
28.權(quán)利要求1-22任一項(xiàng)的用途，其中藥物適于真皮內(nèi)給藥。
29.權(quán)利要求1-22任一項(xiàng)的用途，其中藥物適于透皮給藥。
30.權(quán)利要求1-22任一項(xiàng)的用途，其中藥物為人用藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及抑制VCAM－1的組合物及方法，特別是治療包括動脈粥樣硬化的心血管疾病或炎性疾病的組合物和方法，包括給藥有效量的普羅布考酯。
文檔編號A01N37/02GK1496739SQ0315306
公開日2004年5月19日 申請日期1998年5月14日 優(yōu)先權(quán)日1997年5月14日
發(fā)明者帕特利夏·K·索默斯, 帕特利夏 K 索默斯 申請人:阿特羅吉尼克斯公司, 帕特利夏·K·索默斯