歐細(xì)辛抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法和醫(yī)藥用圖
【專利摘要】本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種維吾爾藥歐細(xì)辛抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法和其在制備預(yù)防及治療乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、腦膠質(zhì)瘤、肝癌等惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提取物通過如下方法獲得：維吾爾藥歐細(xì)辛經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比100：0-100:6的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，繼用體積比100:2-100：50的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，石油醚：丙酮=100:2-100：50洗脫液干燥后即得。
【專利說明】
歐細(xì)辛抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法和醫(yī)藥用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種維吾爾藥歐細(xì)辛抗腫瘤提取物及其組合物 的制備方法和其在制備預(yù)防及治療肝癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、宮頸癌、腦膠 質(zhì)瘤等惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 本品為木犀科植物細(xì)辛來源於馬兜鈴科細(xì)辛屬（Asarum)植物Asarum europaeum L，是中醫(yī)臨床常用的解表藥，有祛風(fēng)散寒、止痛通竅、止咳平喘和通利血脈等功效；始載於 《神農(nóng)本草經(jīng)》，已有兩千多年的應(yīng)用歷史，在張仲景的《傷寒論》中就有烏梅丸、小青龍湯、 當(dāng)歸四逆湯和麻黃附子細(xì)辛湯等含有細(xì)辛的常用方劑；臨床上可用於風(fēng)寒表證、各種疼痛 證、諸竅不通證和肺寒咳喘證。歐細(xì)辛是一味良藥，根莖入藥，用為解熱、利尿、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜 藥。治頭痛，有發(fā)汗、祛痰之效，是歷史的功臣，因其根細(xì)、氣香強(qiáng)烈而味辛得名。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供一種歐細(xì)辛提取物。
[0004] 本發(fā)明還提供了以歐細(xì)辛提取物為主要活性成分的組合物。
[0005] 本發(fā)明同時(shí)提供了歐細(xì)辛提取物及其組合物的制備和在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng) 用。
[0006] 本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 維吾爾藥歐細(xì)辛經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠 柱，用石油醚-丙酮混合溶劑（100:0-0:00)梯度洗脫（石油醚：丙酮，具體比例見表1)， 各石油醚-丙酮比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外抗腫瘤活性篩選體系測(cè)試 其抗腫瘤活性，意外地發(fā)現(xiàn)先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:0-100:5， 體積比，優(yōu)選100:0-100:1或100:3)洗脫，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮， 100:6-100:100,優(yōu)選100:6或100:10,體積比）洗脫，石油醚：丙酮=100:2-100:50洗脫 液干燥后，具有顯著地抗腫瘤活性。優(yōu)選地，先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮， 100:2,體積比）洗脫，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:3,體積比）洗脫，石 油醚：丙酮=100:3洗脫液干燥即得?？鼓[瘤活性的化合物，可以通過以上方法，得到富集， 從而與其他雜質(zhì)類成分分離開。該活性部位從未見文獻(xiàn)報(bào)道，其100:3洗脫液TLC分析表 征如圖1所示。色譜條為GF 254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1:1，香草 醛濃硫酸顯色。
[0008] 或先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6,體積比）洗脫，繼續(xù)用石油 醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫，石油醚：丙酮=100:10的洗脫液 干燥。更為優(yōu)選地是，先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6,體積比）洗脫，繼 續(xù)用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫，石油醚：丙酮=100:10 的洗脫液干燥即得。本發(fā)明的抗腫瘤活性的化合物，可以通過以上方法，得到富集，從而與 其他雜質(zhì)類成分分離開。該活性部位從未見文獻(xiàn)報(bào)道，其100:10洗脫液的TLC分析表征 如圖2所示。色譜條件為GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1:1，香草 醛-濃硫酸顯色。
[0009] 具體，發(fā)現(xiàn)過程如下：
[0010] 1、歐細(xì)辛超聲提取物的制備
[0011] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，得提取物 SN0075A4. 5751g ;再經(jīng) 100mL 水提取 15min，得提取物 SN0075B 0· 3555g，合并共 4. 9306g， 留樣 3. 0286g，剩余 I. 9020g。
[0012] 2、石油醚-丙酮混合溶劑梯度洗脫方法和結(jié)果
[0013] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，得提取物 SN0075A4. 5751g ;再經(jīng) 100mL 水提取 15min，得提取物 SN0075B 0· 3555g，合并共 4. 9306g， 留樣3.0286g。剩余1.9020g上柱，甲醇溶解，共用甲醇15ml。上硅膠柱色譜，拌樣硅膠2g， 空白硅膠l〇g，玻璃柱內(nèi)徑2cm，石油醚：丙酮系統(tǒng)梯度洗脫（條件見表1)，柱體積20ml，每 個(gè)梯度洗脫200ml，得到，各個(gè)濃度提取洗脫液的洗脫物，回收溶劑，即得，石油醚：丙酮梯 度洗脫提取物，收率見表1，TLC分析結(jié)果見圖3。色譜條件為GF 254硅膠板，展開系統(tǒng)是石油 醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1:1，香草醛-濃硫酸顯色。
[0014] 表 1
[0017] 3、抗腫瘤活性篩選方法和結(jié)果
[0018] 1)實(shí)驗(yàn)條件
[0019] a)細(xì)胞株信息
[0020] 人乳腺癌細(xì)胞株MCF7細(xì)胞購(gòu)于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心細(xì)胞庫(kù)。
[0021] b)藥品及試劑
[0022] 樣品無菌條件下，DMSO溶解配置成母液濃度為100mg/mL，使用時(shí)用RPMI-1640培 養(yǎng)液稀釋至所需濃度（DMSO彡1%。）。
[0023] RPMI Medium 1640培養(yǎng)基干粉購(gòu)于美國(guó)GIBCO公司。胎牛血清購(gòu)于北京元亨圣馬 生物技術(shù)研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴鹽（MTT)。
[0024] c)儀器
[0025] CO2培養(yǎng)箱（SANYO,日本）
[0026] 垂直層流潔凈工作臺(tái)（上海上凈凈化設(shè)備有限公司）
[0027] 倒置生物顯微鏡（重慶光電儀器有限公司）
[0028] 低/高速臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）
[0029] 電子天平（奧豪斯儀器有限公司）
[0030] 酶標(biāo)儀（伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司）
[0031] 立式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠）
[0032] 鼓風(fēng)干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）
[0033] PH 計(jì)（SART0RIUS，德國(guó)）
[0034] 2)實(shí)驗(yàn)方法和過程
[0035] 人乳腺癌細(xì)胞株MCF7細(xì)胞以4000/孔的密度鋪于96孔板，每孔IOOul，12h后使 用。各組分以DMSO溶解為lOOmg/mL儲(chǔ)存液，保存于-20°C待用。鋪板后12h，觀察細(xì)胞匯 合率約為40%，加藥，濃度均為100 μ g/mL，每個(gè)組分3個(gè)復(fù)孔。每板細(xì)胞設(shè)立二個(gè)對(duì)照組 (培養(yǎng)基+細(xì)胞；含0. 1% DMSO培養(yǎng)基+細(xì)胞），3個(gè)空白孔（只有培養(yǎng)基）。加入藥物24 小時(shí)后，加入20 μ 1四甲基偶氮唑鹽化學(xué)名為3-(4, 5-二甲基噻唑）-2, 5-二苯基四氮唑溴 鹽（3-(4, 5-dimethyl_2thiazolyl)-2, 5-diphenyl-tetrazolium bromide，MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4小時(shí)。完全棄去上清液，加入100 μ I DMS0,混勻使MTT完全溶解，去氣泡。490nm測(cè)定OD 值。
[0036]
[0037] 3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0038] 表 2
[0039]
[0044] 結(jié)果發(fā)現(xiàn)：
[0045] 本發(fā)明優(yōu)選如下技術(shù)方案：維吾爾藥歐細(xì)辛經(jīng)有機(jī)溶劑超聲提取，提取液濃縮后， 用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:2,體積 比）洗脫，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:3,體積比）洗脫，石油醚：丙酮 =100:3洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，得到高活性提取物，即為該抗腫瘤的提取物。該活 性部位從未見文獻(xiàn)報(bào)道，其TLC分析表征如圖1所示。
[0046] 或維吾爾藥歐細(xì)辛經(jīng)有機(jī)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的 硅膠柱，先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6,體積比）洗脫，繼用石油醚-丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :10,體積比）洗脫，石油醚：丙酮=100:10洗脫液經(jīng)回收 有機(jī)溶劑，干燥，得到高活性提取物，即為該抗腫瘤的提取物。該活性部位從未見文獻(xiàn)報(bào)道， 其TLC分析表征如圖2。
[0047] 4、抗腫瘤有效提取物的提取方法研究
[0048] 1)提取溶劑的種類研究
[0049] 分別用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、乙醇水混合溶劑等有 機(jī)溶劑提取，并測(cè)試提取物對(duì)MCF7細(xì)胞的抗腫瘤活性，結(jié)果如下：
[0050] 表 3
[0052] 研究結(jié)果表明：提取用有機(jī)溶劑可以為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水 混合溶劑、乙醇水混合溶劑。
[0053] 2)提取溶劑的用量研究
[0054] 分別用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/體積比）有機(jī)溶劑提取，并測(cè)試提取物 對(duì)C6細(xì)胞的抗腫瘤活性，結(jié)果如下：
[0055] 表 4

[0058] 提取物提取用有機(jī)溶劑用量為藥材重量的2-50倍（重量/體積比）。
[0059] 3)干燥方法的研究
[0060] 分別用真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風(fēng)干燥、離心干燥、旋蒸干燥法等方法，對(duì)得到 的抗腫瘤活性部位進(jìn)行干燥，以含水量、TLC、活性測(cè)試為指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)真空干燥法、冷凍干燥 法、鼓風(fēng)干燥、離心干燥、旋蒸干燥法適用于對(duì)MCF7細(xì)胞提取物進(jìn)行干燥，其中，最優(yōu)為真 空干燥法、冷凍干燥法。
[0061]表 5
L0063J 因此，既細(xì)羊沉胛熘提取物的制爸萬云艿：
[0064] 優(yōu)選地，維吾爾藥歐細(xì)辛經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后 的硅膠柱，先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:2,體積比）洗脫2-50倍柱體 積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:3,體積比）洗脫2-50倍柱體積，石油 醚：丙酮=100:2洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，即為該提取物。以上條件最優(yōu)為先用石油 醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:2,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-丙酮 混合溶劑（石油醚：丙酮，100:3,體積比）洗脫15倍柱體積。
[0065] 1)提取物提取用溶劑可以為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、 乙醇水混合溶劑，最優(yōu)條件為甲醇和95%乙醇。提取物提取用有機(jī)溶劑用量為藥材重量的 2-50倍（重量/體積比）。
[0066] 2)提取物干燥方法可以為真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風(fēng)干燥、離心干燥、旋蒸干 燥法等，最優(yōu)為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0067] 維吾爾藥歐細(xì)辛經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠 柱，先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6,體積比）洗脫2-50倍柱體積，繼用 石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫2-50倍柱體積，石油醚：丙 酮=100:10洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，即為該提取物。以上條件最優(yōu)為先用石油醚-丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫15倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶 劑（石油醚：丙酮，100:10,體積比）洗脫15倍柱體積。其中，
[0068] 1)提取物提取用溶劑可以為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、 乙醇水混合溶劑，最優(yōu)條件為甲醇和95%乙醇。提取物提取用有機(jī)溶劑用量為藥材重量的 2-50倍（重量/體積比）。
[0069] 2)提取物干燥方法可以為真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風(fēng)干燥、離心干燥、旋蒸干 燥法等，最優(yōu)為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0070] 5.歐細(xì)辛抗腫瘤有效提取物的抗腫瘤活性研究
[0071 ] 利用各種腫瘤細(xì)胞，如腦膠質(zhì)瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、肝 癌等惡性腫瘤細(xì)胞株，分別測(cè)試歐細(xì)辛抗腫瘤提取物的抗腫瘤活性，IC5。結(jié)果如下：
[0072]表 6
[0075] 因此，我們發(fā)現(xiàn)，歐細(xì)辛抗腫瘤提取物具備抗腫瘤活性，可望用于各種腫瘤如腦膠 質(zhì)瘤、肺癌、胃癌、腸癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、宮頸癌、肝癌等惡性腫瘤的預(yù)防及治療。
[0076] 6、歐細(xì)辛抗腫瘤有效提取物的組合物及其制備方法研究
[0077] 1)固體分散體
[0078] 處方
[0080] 制備方法：
[0081] 稱取歐細(xì)辛提取物和載體聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的質(zhì)量比 分別放入燒杯中，加入無水乙醇，磁力攪拌器攪拌至歐細(xì)辛提取物和載體完全溶解，轉(zhuǎn)入旋 蒸儀中出去有機(jī)溶劑，干燥，粉碎過80目篩，即得歐細(xì)辛提取物PVP包合物。
[0082] 2)環(huán)糊精包合物
[0083] 處方：
[0084]
[0085] 制備方法：
[0086] 將β -環(huán)糊精與1~5倍水研勻，加歐細(xì)辛提取物（水難溶性的應(yīng)先溶于少量有 機(jī)溶劑中）充分研磨至成糊狀物，低溫干燥即得。
[0087] 3)分散片處方：
[0090] 制備方法：
[0091 ] 1.歐細(xì)辛提取物淀粉分散體的制備，精密稱取歐細(xì)辛提取物提取物，加入適量的 十二烷基硫酸鈉，用70%的乙醇溶解加入等比例的可溶性淀粉混合均勻后，在70°C的溫度 下蒸干，粉碎，過100目篩；
[0092] 2.稱取處方量，歐細(xì)辛提取物淀粉分散體，交聯(lián)聚維酮，預(yù)膠化淀粉，用70 %乙 醇做濕潤(rùn)劑，邊加入邊攪拌，制成濕顆粒過14目篩，室溫下放置15min后，60°C烘箱烘干 45min，16目篩整粒，加入滑石粉和微分硅膠，混合均勻后，壓片。
[0093] 7、歐細(xì)辛抗腫瘤有效提取物的檢測(cè)方法研究
[0094] 我們發(fā)現(xiàn)，可以用薄層色譜的方法，很好地檢測(cè)和標(biāo)示歐細(xì)辛抗腫瘤有效提取物 的特征。見圖1，圖2。
[0095] 色譜條件：GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1: 1，石油醚：乙 酸乙酯：丙酮=1:1:1，顯色方法：香草醛-濃硫酸顯色。
【附圖說明】：
[0096] 圖1歐細(xì)辛MCF7抑制活性提取物的TLC色譜圖；
[0097] 圖2歐細(xì)辛MCF7抑制活性提取物的TLC色譜圖；
[0098] 圖3歐細(xì)辛提取物的化學(xué)組分的TLC色譜圖；
【具體實(shí)施方式】
[0099] 以下實(shí)施例表示本發(fā)明的實(shí)用性，本發(fā)明不受此限制。
[0100] 實(shí)施例1 :
[0101] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :2,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫15倍柱體積，石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮， 100 :3,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，真空干燥，即為該提取物，收率0. 045%。
[0102] 實(shí)施例2 :
[0103] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL乙醇超聲提取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :2,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫15倍柱體積，石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮， 100 :3,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收率0. 043%。
[0104] 實(shí)施例3 :
[0105] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL丙酮超聲提取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :2,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫15倍柱體積，石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮， 100 :3,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，鼓風(fēng)干燥，即為該提取物，收率0. 033%。
[0106] 實(shí)施例4 :
[0107] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL氯仿超聲提取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :2,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫15倍柱體積，石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮， 100 :3,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，離心干燥，即為該提取物，收率0. 039%。
[0108] 實(shí)施例5 :
[0109] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL乙酸乙酯超聲提取15min，再經(jīng)100mL水超聲提 取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚： 丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :2,體積比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶 劑（石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫15倍柱體積，石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙 酮，100 :3,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，旋蒸干燥，即為該提取物，收率0. 037%。
[0110] 實(shí)施例6:
[0111] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提 取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱 (2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :2,體積比）洗脫10倍 柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫15倍柱體積，石 油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，即為該 提取物，收率0.038%。
[0112] 實(shí)施例7:
[0113] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提 取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱 (2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :2,體積比）洗脫10倍 柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫15倍柱體積，石 油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，即為該 提取物，收率0.038%。
[0114] 實(shí)施例8:
[0115] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=90:10)超聲提 取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱 (2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :2,體積比）洗脫10倍 柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫15倍柱體積，石 油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，即為該 提取物，收率0.042%。
[0116] 實(shí)施例9:
[0117] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100 :10,體積比）洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有 機(jī)溶劑，真空干燥，即為該提取物，收率〇. 22%。
[0118] 實(shí)施例10 :
[0119] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL乙醇超聲提取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100 :10,體積比）洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有 機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收率〇. 2%。
[0120] 實(shí)施例11 :
[0121] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL丙酮超聲提取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100 :10,體積比）洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有 機(jī)溶劑，鼓風(fēng)干燥，即為該提取物，收率0. 14%。
[0122] 實(shí)施例12 :
[0123] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL氯仿超聲提取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100 :10,體積比）洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有 機(jī)溶劑，離心干燥，即為該提取物，收率〇. 17%。
[0124] 實(shí)施例13 :
[0125] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL乙酸乙酯超聲提取15min，再經(jīng)100mL水超聲提 取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚： 丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶 劑（石油醚：丙酮，100 :10,體積比）洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收 有機(jī)溶劑，旋蒸干燥，即為該提取物，收率〇. 18%。
[0126] 實(shí)施例14:
[0127] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提 取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱 (2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6,體積比）洗脫20倍 柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :10,體積比）洗脫30倍柱體積，石 油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收率0. 21 %。
[0128] 實(shí)施例15 :
[0129] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提 取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱 (2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6,體積比）洗脫20倍 柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :10,體積比）洗脫30倍柱體積，石 油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，真空干燥，即為該提取物，收率0. 2%。
[0130] 實(shí)施例16 :
[0131] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=90:10)超聲提 取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱 (2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:6,體積比）洗脫20倍 柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :10,體積比）洗脫30倍柱體積，石 油醚：丙酮100 :10洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收率0. 17%。
[0132] 實(shí)施例17 :
[0133] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :2,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮， 100 :3,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該提取物，收率0. 05%。
[0134] 實(shí)施例18 :
[0135] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL乙醇超聲提取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :2,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮， 100 :3,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，真空干燥，即為該提取物，收率0. 04%。
[0136] 實(shí)施例19 :
[0137] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL丙酮超聲提取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :2,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮， 100 :3,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，鼓風(fēng)干燥，即為該提取物，收率0. 034%。
[0138] 實(shí)施例20:
[0139] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL氯仿超聲提取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙 酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :2,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮， 100 :3,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，離心干燥，即為該提取物，收率0. 045%。
[0140] 實(shí)施例21 :
[0141] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL乙酸乙酯超聲提取15min，再經(jīng)100mL水超聲提 取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚： 丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :2,體積比）洗脫20倍柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶 劑（石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫30倍柱體積，石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙 酮，100 :3,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，旋蒸干燥，即為該提取物，收率0. 044%。
[0142] 實(shí)施例22 :
[0143] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提 取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱 (2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :2,體積比）洗脫20倍 柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫30倍柱體積，石 油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即 為該提取物，收率0.047%。
[0144] 實(shí)施例23 :
[0145] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提 取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱 (2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :2,體積比）洗脫20倍 柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫30倍柱體積，石 油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，真空干燥，即 為該提取物，收率0.045%。
[0146] 實(shí)施例24 :
[0147] 取維吾爾藥歐細(xì)辛20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=90:10)超聲提 取15min，再經(jīng)100mL水超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱 (2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :2,體積比）洗脫20倍 柱體積，繼用石油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫30倍柱體積，石 油醚：丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100 :3,體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即 為該提取物，收率0.04%。
[0148] 實(shí)施例25:固體分散體
[0149] 稱取歐細(xì)辛提取物和載體聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的質(zhì)量比 分別放入燒杯中，加入無水乙醇，磁力攪拌器攪拌至歐細(xì)辛提取物和載體完全溶解，轉(zhuǎn)入旋 蒸儀中除去有機(jī)溶劑，干燥，粉碎過80目篩，即得歐細(xì)辛提取物PVP包合物。
[0150] 實(shí)施例26:環(huán)糊精包合物
[0151] 將β -環(huán)糊精與1~5倍水研勻，加歐細(xì)辛提取物（水難溶性的應(yīng)先溶于少量有 機(jī)溶劑中）充分研磨至成糊狀物，低溫干燥即得。
[0152] 實(shí)施例27:分散片
[0153] 1.稱取干燥的歐細(xì)辛提取物，加入適量的十二烷基硫酸鈉，使用70的乙醇充分溶 解，加入水溶性淀粉與歐細(xì)辛提取物（1 :1)，攪拌混合均勻，在70°C下干燥，粉碎，過100目 篩，得歐細(xì)辛提取物分散體。
[0154] 2.精密稱取處方量，歐細(xì)辛提取物分散體，交聯(lián)聚維酮，可壓性淀粉，用70乙醇做 濕潤(rùn)劑，邊加入邊攪拌，14目篩制成濕顆粒，室溫下放置15min后，70°C烘箱烘干45min，16 目篩整粒，加入滑石粉和微分硅膠，混合均勻后，壓片。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種維吾爾藥歐細(xì)辛提取物，其特征為，維吾爾藥歐細(xì)辛經(jīng)溶劑超聲提取，提取 液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比100:0-100:5的石油醚-丙酮混 合溶劑洗脫，繼用體積比100:6-100:100的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，石油醚：丙酮 =100:6-100:100洗脫液干燥后即得。2. 如權(quán)利要求1所述的一種維吾爾藥歐細(xì)辛提取物，其特征為，先用體積比100 : 0-100:2的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，繼用體積比100:3的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫， 石油醚：丙酮=100:3洗脫液干燥后即得； 或先用體積比100:6的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，繼續(xù)用體積比100:10的石油 醚-丙酮混合溶劑洗脫，石油醚：丙酮=100:10的洗脫液干燥即得。3. 如權(quán)利要求1或2所述的一種維吾爾藥歐細(xì)辛提取物，其特征為，用體積比100:2 的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，繼續(xù)用100:3的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，石油醚：丙酮 =100:3洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥即為該提取物； 或先用體積比100:6的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，繼續(xù)用體積比100:10的石油 醚-丙酮混合溶劑洗脫，石油醚：丙酮=100:10洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥即為該提取 物。4. 如權(quán)利要求1-3任何一項(xiàng)所述的一種維吾爾藥歐細(xì)辛提取物，其特征為，提取用有 機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、或乙醇水混合溶劑。5. 如權(quán)利要求1-4任何一項(xiàng)所述的一種維吾爾藥歐細(xì)辛提取物，其特征為，石油醚-丙 酮混合溶劑的洗脫體積為2-50倍柱體積。6. 如權(quán)利要求1-4任何一項(xiàng)所述的一種維吾爾藥歐細(xì)辛提取物，其特征為，先用體積 比100:2的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫10倍柱體積，繼用體積比100:3的石油醚-丙酮混 合溶劑洗脫15倍柱體積； 或先用體積比100:6的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫15倍柱體積，繼用體積比100:10 的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫15倍柱體積。7. -種藥物組合物，其特征在于，包含權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述的歐細(xì)辛提取物和 藥學(xué)上可接受的載體。8. -種藥物制劑，其特征在于，包含權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述的歐細(xì)辛提取物或權(quán) 利要求6所述的藥物組合物。9. 權(quán)利要求1-6任何一項(xiàng)所述的歐細(xì)辛提取物或權(quán)利要求7所述的組合物或權(quán)利要 求8所述的藥物制劑在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述的腫瘤為腦膠質(zhì)瘤、肺癌、胃癌、結(jié) 腸癌、胰腺癌、宮頸癌、乳腺癌或肝癌。10. 權(quán)利要求1-6任何一項(xiàng)所述的維吾爾藥歐細(xì)辛提取物，其特征為，用TLC法檢測(cè)，其 色譜條件為：GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1:1，顯色方法：香草醛濃 硫酸加熱顯色。
【文檔編號(hào)】A61K36/63GK105982934SQ201510082074
【公開日】2016年10月5日
【申請(qǐng)日】2015年2月15日
【發(fā)明人】王金輝, 黃健, 張瑾
【申請(qǐng)人】沈陽藥科大學(xué)