1.一種高效液相色譜梯度法同時(shí)測(cè)定萘普替尼光降解產(chǎn)物及其它有關(guān)物質(zhì)的方法,其特征在于,該檢測(cè)方法包括以下步驟:
(1)制備標(biāo)準(zhǔn)品溶液,以所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液在下述色譜條件下進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn),校定檢測(cè)系統(tǒng);
色譜條件:色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱,以體積比為82∶18的磷酸鹽緩沖液-甲醇為流動(dòng)相A,以體積比為40∶60的磷酸鹽緩沖液-甲醇為流動(dòng)相B,梯度洗脫,磷酸鹽緩沖液的濃度為0.04~0.1mol/L,pH值為7.0~7.8,柱溫為25~35℃,流速為0.9~1.1ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為247nm;
標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備:分別取起始原料、中間體1、中間體2、中間體3、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B和萘普替尼對(duì)照品加流動(dòng)相A制成每1ml中含0.0025~0.5mg的混合溶液;
精密量取10μl所述混合溶液注入液相色譜儀,記錄色譜圖,校定檢測(cè)系統(tǒng)至萘普替尼主峰與相鄰雜質(zhì)B的峰的分離度大于1.5,萘普替尼主峰的理論板數(shù)不低于10000,拖尾因子不大于1.5;
(2)制備供試品溶液和對(duì)照品溶液;
取萘普替尼待測(cè)樣品,加流動(dòng)相A制成濃度為0.5mg/ml的溶液,作為供試品溶液;取萘普替尼對(duì)照品,加流動(dòng)相A制成濃度為0.005mg/ml的溶液,作為對(duì)照品溶液;
(3)通過(guò)高效液相色譜測(cè)定待測(cè)樣品中雜質(zhì)B及相關(guān)有關(guān)物質(zhì)的含量;
以對(duì)照品溶液注入經(jīng)上述步驟(1)校定后的液相色譜儀,調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度,再將供試品溶液注入液相色譜儀,在步驟(1)所述的色譜條件下進(jìn)行高效液相色譜測(cè)定,記錄色譜圖至萘普替尼主峰保留時(shí)間的3~4倍;
(4)計(jì)算待測(cè)樣品中各雜質(zhì)的含量;
按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算,各雜質(zhì)峰面積之和不得超過(guò)1.0%。
2.權(quán)利要求1所述的方法,其中所述的梯度洗脫中,流動(dòng)相A比例的變化范圍為:于0~10分鐘,線性梯度洗脫,流動(dòng)相A的比例從75%變化為55%,流動(dòng)相B的比例從25%變化為45%;于10~20分鐘,等度洗脫,流動(dòng)相A的比例保持55%不變,流動(dòng)相B的比例保持45%不變;于20~30分鐘,線性梯度洗脫,流動(dòng)相A的比例從55%變化為0%,流動(dòng)相B的比例從45%變化為100%;于30~40分鐘,等度洗脫,流動(dòng)相A的比例保持0%不變,流動(dòng)相B的比例保持100%不變,于40~45分鐘,流動(dòng)相A和B回到初始比例,色譜柱重新平衡。
3.如權(quán)利要求1所述的方法,其中所述鹽選自磷酸二氫鈉。
4.如權(quán)利要求3所述的方法,其中所述的磷酸二氫鈉的濃度為0.05mol/L,pH值為7.5。
5.如權(quán)利要求1所述的方法,其色譜條件為:色譜柱為十八烷基硅烷鍵合柱(100×4.6mm,3.5μm),以體積比為82∶18的磷酸鹽緩沖液-甲醇為流動(dòng)相A,以體積比為40:60的磷酸鹽緩沖液-甲醇為流動(dòng)相B,梯度洗脫,柱溫為30℃,流速為1.0ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為247nm。
6.如權(quán)利要求5所述的方法,所述的色譜柱為Waters XBridge C18色譜柱。
7.如權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述萘普替尼待測(cè)樣品包括萘普替尼原料、萘普替尼粗品、萘普替尼片劑和萘普替尼膠囊。