1.一種乳品中呋喃它酮代謝物的檢測方法,其特征在于:包括以下步驟:
制作試驗(yàn)用試劑:量取9毫升濃度為2mol/L的濃鹽酸,加去離子水定容至120毫升,稱取10克磷酸氫二鉀,加400毫升去離子水溶解并定容至400毫升,向400毫升磷酸氫二鉀溶液中加入80克氯化鈉,充分溶解備用,稱取3.5克氫氧化鈉,用去離子水溶解并定容至100毫升;
準(zhǔn)確稱取150-200毫升的乳品樣品于250毫升的離心管中,并向離心管中依次加入10毫升去離子水,2毫升的2mol/L的濃鹽酸和60毫升鄰硝基苯甲醛,充分渦動至乳品分散,然后放置在溫度為36度的恒溫箱孵育一小時(shí),然后再向乳品溶液中依次加入8毫升緩沖溶液、100毫升氫氧化鈉溶液和8毫升甲酸乙酯溶液,在室溫中,劇烈晃動2分鐘,然后加入2毫升正乙烷,充分渦動15秒,再加入2毫升樣品稀釋液,低速渦動5分鐘,濾去上層正乙烷及中間雜質(zhì),取150毫升樣品溶液進(jìn)行檢測,此液為A液;
準(zhǔn)確稱取50-100毫升的紅糖漿樣品于250毫升的離心管中,并向離心管中依次加入10毫升去離子水,2毫升的2mol/L的濃鹽酸和60毫升鄰硝基苯甲醛,充分渦動至紅糖漿分散,然后放置在溫度為36度的恒溫箱孵育一小時(shí),然后再向紅糖漿溶液中依次加入8毫升緩沖溶液、100毫升氫氧化鈉溶液和8毫升甲酸乙酯溶液,在室溫中,劇烈晃動2分鐘,然后加入2毫升正乙烷,充分渦動15秒,再加入2毫升樣品稀釋液,低速渦動5分鐘,濾去上層正乙烷及中間雜質(zhì),取150毫升樣品溶液進(jìn)行檢測,此液為B液;
S1、將所需的酶標(biāo)板條插入酶標(biāo)板架上,未使用的酶標(biāo)板條用自封袋密封后,立即保存于3-7攝氏度環(huán)境中,并記錄下各標(biāo)準(zhǔn)樣品的位置;
S2、將100微升各標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液分別加入對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)樣品孔中;
S3、在每個(gè)板孔中加入100微升呋喃它酮代謝物酶結(jié)合物;
S4、蓋好蓋板膜,輕輕振蕩酶標(biāo)版約十秒鐘,充分混勻,23-28攝氏度的室溫下避光反應(yīng)45分鐘;
S5、揭開蓋板膜,倒掉板孔中溶液,在每孔加入3毫升洗滌工作液,浸泡30分鐘,依次重復(fù)操作兩次;
S6、倒掉板孔中溶液,將酶標(biāo)板倒置于吸水紙上,吸干,立即在每孔中加入10毫升A液和10毫升B液,進(jìn)行充分混合,混合液在3分鐘內(nèi)使用,避免使用金屬器皿盛裝;
S7、蓋好蓋板膜,輕輕振蕩酶標(biāo)板十秒鐘,充分混勻,23-28攝氏度的室溫下避光反應(yīng)30分鐘;
S8、揭開蓋板膜,在各板孔中加入2毫升終止液,輕輕振蕩十秒鐘,充分混勻,用酶標(biāo)儀在雙波長400納米、600納米下檢測吸光度,結(jié)果在終止后5分鐘內(nèi)讀??;
S9、將各樣品的平均吸光度值,除以零標(biāo)(濃度為0ppb的樣品)吸光度值,乘以100,可以得到各樣品對應(yīng)的吸光度的百分比;將樣品吸光度的百分比帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線(標(biāo)準(zhǔn)曲線公式為樣品的吸光度*100/零標(biāo)的吸光度),可得出樣品對應(yīng)的濃度,再乘以相應(yīng)樣品的稀釋倍數(shù),方得樣品中實(shí)際藥物含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種乳品中呋喃它酮代謝物的檢測方法,其特征在于:各試劑在使用前必須充分混勻,并且在實(shí)驗(yàn)前,應(yīng)先開啟生化培養(yǎng)箱至所需溫度,并檢查生化培養(yǎng)箱溫度是否正常。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種乳品中呋喃它酮代謝物的檢測方法,其特征在于:提取藥物時(shí),渦動或振蕩應(yīng)盡量充分,加入樣品是稀溶液后,應(yīng)低速渦動2分鐘,以上操作將直接影響盛裝和檢測結(jié)果。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種乳品中呋喃它酮代謝物的檢測方法,其特征在于:混合試劑時(shí),應(yīng)避免出現(xiàn)氣泡,未用完的微孔板條應(yīng)密封,置于2-8攝氏度保存。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種乳品中呋喃它酮代謝物的檢測方法,其特征在于:該檢測方法用試劑條包括紙條本體(1),所述紙條本體(1)的一端固定連接有接觸條(2),所述紙條本體(1)的外壁上設(shè)置有防腐層(3)。