專利名稱：檢測(cè)呋喃它酮代謝物的磁顆?；瘜W(xué)發(fā)光試劑盒及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒及其測(cè)試方法，特別是檢測(cè)雞肉、蜂蜜、蝦等樣本中呋喃它酮代謝物殘留量的磁顆?；瘜W(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
硝基呋喃類藥物是人工合成的廣譜抗生素，它有非常好的抗菌作用和藥動(dòng)力學(xué)的特性，曾經(jīng)被廣泛應(yīng)用作為家畜、家禽、人工養(yǎng)殖水產(chǎn)品的促生長(zhǎng)添加劑。但通過(guò)長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，硝基呋喃類藥物和代謝物均可以使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生癌變和基因突變，并由此推斷，人類長(zhǎng)期使用該類藥物或長(zhǎng)期食用添加該類促生長(zhǎng)添加劑的家禽、家畜、人工養(yǎng)殖水產(chǎn)品，同樣也可以發(fā)生癌變和基因突變。所以此類藥物禁止在治療和飼料中使用。由于呋喃它酮在體內(nèi)很快就能被代謝，而在組織中結(jié)合的代謝產(chǎn)物則能存留較長(zhǎng)的一段時(shí)間，所以在分析此類藥物的殘留時(shí)要經(jīng)常分析其代謝后的產(chǎn)物，檢測(cè)監(jiān)管部門就以檢測(cè)代謝產(chǎn)物為手段達(dá)到檢測(cè)呋喃它酮?dú)埩舻哪康?。目前，呋喃它酮代謝物殘留量的常規(guī)檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法(HPLC)Jf 相色譜-質(zhì)譜法(LC-MS)和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)等。1、高效液相色譜法(HPLC)具有檢測(cè)精度高、假陽(yáng)性率低的特點(diǎn)。HPLC法的主要缺點(diǎn)是儀器價(jià)格昂貴，操作比較繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，檢測(cè)費(fèi)用昂貴，對(duì)檢測(cè)人員專業(yè)要求較高，樣本前處理較復(fù)雜。2、液相色譜-質(zhì)譜法(LC-MQ，樣品不需要衍生化處理，可對(duì)尿液、血液、肝臟、毛發(fā)和眼球樣品進(jìn)行檢測(cè)。LC-MS/MS聯(lián)用，可進(jìn)一步提高信噪比，所以可用于對(duì)陽(yáng)性結(jié)果的確認(rèn)手段。但是，無(wú)論LC-MS還是LC-MS/MS，都未能解決儀器造價(jià)昂貴，操作步驟繁瑣，樣本前處理復(fù)雜，對(duì)操作人員專業(yè)素養(yǎng)要求高等問題。3、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)是20世紀(jì)70年代出現(xiàn)，用于微量物質(zhì)的檢測(cè)，最早應(yīng)用于傳染病、腫瘤標(biāo)志物、激素水平等臨床檢測(cè)，90年代開始在我國(guó)食品安全檢測(cè)領(lǐng)域推廣應(yīng)用，目前依托ELISA技術(shù)的試劑盒、試紙條已經(jīng)成為食品安全快速檢測(cè)領(lǐng)域的主導(dǎo)產(chǎn)品， 同時(shí)也是我公司研發(fā)和銷售的主要產(chǎn)品類型。酶聯(lián)免疫檢測(cè)法基于抗原-抗體的特異性反應(yīng)，檢測(cè)靈敏度較高、特異性較好，技術(shù)操作簡(jiǎn)易，容易掌握，確實(shí)解決了大量的以前難以解決的許多微量小分子物質(zhì)如抗生素、激素、農(nóng)藥殘留等的定性、定量分析工作，對(duì)食品安全快速檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展起到了積極的促進(jìn)作用。但是，ELISA方法存在許多自身無(wú)法克服的缺陷，主要表現(xiàn)在1)非均相反應(yīng)檢測(cè)過(guò)程中為分離游離物與結(jié)合物，需要多步洗板過(guò)程，耗時(shí)費(fèi)力，難以提高操作的自動(dòng)化程度。2)酶催化反應(yīng)借助酶催化底物顯色，測(cè)定反應(yīng)液吸光度值。反應(yīng)的時(shí)間與溫度對(duì)酶活力存在較大影響，試劑穩(wěn)定性差
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種呋喃它酮代謝物檢測(cè)試劑盒，采用該試劑盒進(jìn)行呋喃它酮代謝物的檢測(cè)時(shí)不僅具備較高的靈敏度，特異性，而且具有較高的反應(yīng)速度。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種呋喃它酮代謝物的測(cè)試方法，該方法操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，特異性好。實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種呋喃它酮代謝物檢測(cè)試劑盒，其包含的主要試劑有發(fā)光標(biāo)記物、熒光素標(biāo)記物、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、分離試劑。所述的分離試劑是包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠。所述的順磁性納米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH2活性基團(tuán)的微珠，用于包被羊抗FITC單克隆抗體，其內(nèi)芯是!^e3O4或Y -Fe2O3，使得微珠具有順磁性。所述的發(fā)光標(biāo)記物是異魯米諾衍生物標(biāo)記的呋喃它酮代謝物半抗原。所述的異魯米諾衍生物是ABEI、AHEI或ABEN。所述的試劑盒還包括標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和濃縮洗液。所述的熒光素標(biāo)記物是FITC標(biāo)記的呋喃它酮代謝物單克隆抗體。本發(fā)明還提供一種利用試劑盒檢測(cè)呋喃它酮代謝物的方法，包括下列步驟1)分別吸取20 μ 1-100 μ 1標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，然后加入20 μ 1-100 μ 1發(fā)光標(biāo)記物，再加20 μ 1-100 μ 1熒光素標(biāo)記物，充分混勻后，37°C溫育15min ；2)加入包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠80-150 μ 1，混勻后在37°C 溫育5min ；3)用磁分離架分離5min，棄上清后用清洗液300-500 μ 1沖洗復(fù)合物沉淀；4)上述清洗步驟重復(fù)2-4次；5) 4)所得分離好的復(fù)合物直接放入測(cè)量暗箱，加入激發(fā)底物1和激發(fā)底物2，延遲 3-5s后檢測(cè)發(fā)出的相對(duì)光強(qiáng)度(RLU)，樣本中的含量與RLU成一定比例關(guān)系，可以通過(guò)RLU 集合標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算呋喃它酮代謝物的濃度。所述的發(fā)光底物的主要成分是NaOH和Η202。本發(fā)明中分析測(cè)試方法所用的分析儀是包括電源電路、自動(dòng)注射泵1和2、測(cè)量室、發(fā)光室、光電倍增管計(jì)數(shù)器和輸出系統(tǒng)，同時(shí)還配置有計(jì)算機(jī)與中文界面的Windows控制軟件，可進(jìn)行資料錄入、結(jié)果匯總、質(zhì)量控制、結(jié)果儲(chǔ)存和結(jié)果查詢等功能，可完成多種分析模式的編程，定量或定性報(bào)告結(jié)果，自動(dòng)生成并儲(chǔ)存、更新功能，兩點(diǎn)自動(dòng)修正標(biāo)準(zhǔn)曲線， 所采用的系統(tǒng)是CI-2008系統(tǒng)。本發(fā)明所述的分離試劑是包被羊抗FITC單克隆抗體，其表面基團(tuán)的含量是 0. 1-0. 3eqm/g,其保存于 pH7. 1-7. 5，含有 3-5 % 酪蛋白，0. 1-0. 3 % 吐溫-20,0. 02-0. 04 % 硫柳汞防腐劑，0. 03-0. 05mol/LTRIS緩沖液中。所述的FITC是異硫氰酸熒光素。所述百分
含量為質(zhì)量百分含量。所述的發(fā)光標(biāo)記物是異魯米諾衍生物ABEI、AHEI或ABEN標(biāo)記的呋喃它酮代謝物半抗原，其保存于ρΗ7· 2-7. 6，含0. 1-0. 3%吐溫-20，0. 02-0. 04% NaN3的TRIS緩沖液中。 所述百分含量是質(zhì)量百分含量。所述的熒光素標(biāo)記物是FITC標(biāo)記的呋喃它酮代謝物單克隆抗體，其保存于 ρΗ7· 2-7. 6，含8-10%卵清蛋白，0. 02-0. 04%硫柳汞防腐劑，0. 1-0. 2mol/LPBS緩沖液。所述百分含量為質(zhì)量百分含量。呋喃它酮代謝物標(biāo)準(zhǔn)品溶液(Ong/ml，0.Olng/ml，0. 03ng/m, 0. 09ng/ml， 0. 27ng/ml，0. 81ng/ml)，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液為 ρΗ7· 2-7. 6,0. 03-0. 05 % 硫柳汞防腐劑， 0. 05-0. lmol/L TRIS緩沖液。所述百分含量為質(zhì)量百分含量。呋喃它酮代謝物質(zhì)控品溶液濃度分別為0. 02ng/ml，0. 5ng/ml，質(zhì)控品稀釋液 PH7. 2-7. 4,0. 03-0. 05%硫柳汞防腐劑，0. 05-0. lmol/LTRIS緩沖液。所述百分含量為質(zhì)量
百分含量。 所述的濃縮洗液為PH7. 0-7. 4，0. 2-0. 4 %吐溫-20，0. 2-0. 4 %疊氮化鈉 0. 1-0. 2mol/L PBS緩沖液。所述百分含量為質(zhì)量百分含量。本發(fā)明的有益效果如下1)本發(fā)明試劑盒可特異性檢測(cè)呋喃它酮代謝物，對(duì)其他藥物無(wú)交叉。2)本發(fā)明試劑盒的靈敏度較高，對(duì)呋喃它酮代謝物的檢測(cè)靈敏度可達(dá) 0.01ng/mlo3)本發(fā)明試劑盒的檢測(cè)快捷，檢測(cè)時(shí)間低于20min。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1試劑盒具體組分的制備1、發(fā)光標(biāo)記物的制備a)呋喃它酮半抗原的合成將呋喃它酮代謝物用琥珀酸酐進(jìn)行?；磻?yīng)，把呋喃它酮代謝物分子結(jié)構(gòu)上的醇羥基?；蔀楹?個(gè)碳的羧基間接臂的呋喃它酮代謝物半抗原。b)發(fā)光標(biāo)記物制備取4. 5mmol/L ABEI，溶于4ml蒸餾水中，5. Ommol/L N-羥基琥珀酰亞胺溶于0. 5ml N，N-二甲基甲酰胺中，二者充分混勻后室溫反應(yīng)3-4h。取上述制備的呋喃它酮代謝物半抗原15mg，用pH7. 4PBS調(diào)節(jié)體積到1. 5ml，然后加入上述活化的ABEI溶液，充分混勻后室溫反應(yīng)過(guò)夜，過(guò)G-25凝膠柱純化。2、熒光標(biāo)記物制備a)免疫原的制備將呋喃它酮代謝物半抗原與卵清蛋白采用混合酸酐法進(jìn)行偶聯(lián)得到免疫原。b)呋喃它酮單克隆抗體的制備動(dòng)物免疫以免疫原對(duì)Balb/c小鼠進(jìn)行免疫，免疫劑量為150 μ g/只，使其產(chǎn)生抗血清。細(xì)胞融合和克隆化取免疫Balb/c小鼠脾細(xì)胞，按9 1比例與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，得到單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。細(xì)胞凍存和復(fù)蘇將雜交瘤細(xì)胞用凍存液制成IX IO6個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，在液氮中長(zhǎng)期保存。復(fù)蘇時(shí)取出凍存管，立即放入37°C水浴中速融，離心去除凍存液后，移入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)。單克隆抗體的制備與純化將Balb/c小鼠腹腔注入滅菌石蠟油0. 5ml/只，7天后腹腔注射雜交瘤細(xì)胞5 X IO5個(gè)/只，7天后采集腹水。用辛酸-飽和硫酸銨法進(jìn)行純化，得到單克隆抗體。C)熒光標(biāo)記物制備用0. 025mol/L, pH9. 0的碳酸鹽緩沖液將呋喃它酮代謝物單克隆抗體稀釋成
質(zhì)量百分比濃度；根據(jù)欲標(biāo)記的蛋白質(zhì)總量，按每毫克免疫球蛋白加O.OlmgFITC，用分析天平準(zhǔn)確稱取所需的FITC粉末。用同一緩沖液將FITC配成0. lmg/ml的溶液，按上述抗體溶液體積的3-5倍，混入FITC稀釋液；在4°C避光條件下電磁攪拌、標(biāo)記30-4 ；將標(biāo)記溶液3000r/min，室溫離心20min，除去其中少量的沉淀物，裝入透析袋中，再pH7. 4的PBS緩沖液透析2-3天，期間至少更換透析液3次；取透析過(guò)夜的標(biāo)記物，通過(guò)kphadexG-25或 G-50柱，分離游離熒光素，收集標(biāo)記的熒光標(biāo)記物進(jìn)行鑒定，分裝，貯存于4°C冰箱中。3、分離試劑制備a)磁珠活化表面-COOH基團(tuán)的磁珠(購(gòu)于DYNAL，粒徑為2. 8 μ m)，其含量是0. 15eq/g;取 100 μ 1 磁珠，用 100 μ 1 25mmol/L, ρΗ5· 0,0. 05% Tween_20MES 溶液洗滌兩次，磁分離后移除上清；使用前，用4°C貯存的25mmol/L MES溶液分別配置50mmol/L的EDC、NHS溶液；分別加入50 μ 1新配置的EDC和NHS溶液到裝有磁珠的離心管中，渦旋混勻，室溫活化30min ； 離心管置于磁分離架上磁分離鈿in，移除上清，加入100μ l，25mmol/L，pH5. 0，MES清洗2-3 次后即可得表面羧基活化的磁珠。b)磁珠偶聯(lián)羊抗FITC單克隆抗體將50-100μ g羊抗FITC單克隆抗體溶解到60μ l，25mmol/L，pH5. OMES中，用所述MES溶液調(diào)節(jié)總體積至100 μ 1，輕柔混勻磁珠與羊抗FITC單克隆抗體；室溫條件下至少偶聯(lián)30min或4°C偶聯(lián)2h，該期間可利用渦旋儀使磁珠保持混勻狀態(tài)；離心管置于磁分離架上磁分離3-5min，移除上清；為了淬滅未反應(yīng)的-C00H，可加入100 μ 1，pH7. 4，TRIS反應(yīng) 15min 或 100μ 1，ρΗ8· 0，含有 50mmol/L 乙醇胺的 PBS 封閉磁珠；用 100 μ 1,0. 1-0. 3% BSA, 0. 1% Tween-20的PBS或TRIS清洗封閉好的磁珠3_5次；最后將磁珠復(fù)溶于含0. 1-0. 5% BSA, 0. 01-0. 1% Tween-20,0. 02% NaN3 的 PBS 或 TRIS 緩沖液中，2_8°C保藏。實(shí)施例二試劑盒的組建組建檢測(cè)呋喃它酮代謝物的磁顆?；瘜W(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，使其含有下列組分FITC標(biāo)記的呋喃它酮代謝物單克隆抗體的熒光標(biāo)記物ABEI標(biāo)記的呋喃它酮代謝物半抗原的發(fā)光標(biāo)記物表面包被羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米磁珠的分離試劑呋喃它酮代謝物標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0ng/ml，0.01ng/ml，0. 03ng/m, 0. 09ng/ml， 0. 27ng/ml,0. 81ng/ml)，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液為pH7. 4，含有0. 05%硫柳汞防腐劑，0. Imol/ LTRIS緩沖液。所述百分含量為質(zhì)量百分含量。呋喃它酮代謝物質(zhì)控品溶液濃度分別為0. 02ng/ml，0. 5ng/ml，質(zhì)控品稀釋為 PH7. 4，含有0. 05%硫柳汞防腐劑，0. lmol/LTRIS緩沖液。所述百分含量為質(zhì)量百分含量。濃縮洗液為pH7. 2,0. 4%吐溫-20，0. 3%疊氮化鈉，0. lmol/L PBS緩沖液。所述百
分含量為質(zhì)量百分含量。實(shí)施例三實(shí)際樣品中呋喃它酮代謝物的檢測(cè)1、樣本前處理
(一 )肌肉、肝臟等組織前處理方法用均質(zhì)器均質(zhì)樣本；稱取1. 0士0. 05g均質(zhì)后的組織樣本(肝樣/肉樣)，分別加入 4ml去離子水、0. 5ml IM鹽酸溶液和100 μ 1衍生化試劑，用振蕩器充分振蕩^iiin ；在37°C 過(guò)夜孵育(大約16h)；分別加入5ml 0. IM磷酸氫二鉀溶液、0.細(xì)1 IM氫氧化鈉溶液和5ml 乙酸乙酯，用振蕩器劇烈振蕩30s ；3000g以上，室溫Q0-25°C )離心IOmin ；取2. 5ml乙酸乙酯相至IOml干燥玻璃試管中，于50 60°C水浴氮?dú)饬飨麓蹈桑患尤隝ml正己烷(或正庚烷)，用渦旋儀渦動(dòng)30s，再加入Iml復(fù)溶工作液，用渦旋儀渦動(dòng)Imin充分混勻；3000g以上，室溫O0-25°C )離心IOmin ；除去上層有機(jī)相，取下層水相50 μ 1用于分析。樣本稀釋倍數(shù)2。( 二)蜂蜜前處理方法稱取1.0士0.05g蜂蜜至50ml聚苯乙烯離心管中；加入去離子水，用振蕩器振蕩至蜂蜜全部溶解；加入o. 5ml IM鹽酸溶液和100 μ 1衍生化試劑，用振蕩器充分振蕩；在 37°C過(guò)夜孵育(大約16h)；分別加入5ml 0. IM磷酸氫二鉀溶液、0.細(xì)1 IM氫氧化鈉溶液和 5ml乙酸乙酯，用振蕩器劇烈振蕩30s ；3000g以上，室溫O0_25°C )離心IOmin ；取2. 5ml 乙酸乙酯相至IOml干燥玻璃試管中，于50 60°C水浴氮?dú)饬飨麓蹈?；加入Iml正己烷(或正庚烷)，用渦旋儀渦動(dòng)30s，再加入Iml復(fù)溶工作液，用渦旋儀渦動(dòng)Imin充分混勻；3000g 以上，室溫O0-25°C)離心IOmin ；除去上層有機(jī)相，取下層水相50 μ 1用于分析，樣本稀釋倍數(shù)2。(三)水產(chǎn)(魚蝦等)組織前處理方法用均質(zhì)器均質(zhì)樣本；稱取1. 0士0. 05g均質(zhì)后的組織樣本，加入去離子水、 0. 5ml IM鹽酸溶液和100 μ 1衍生化試劑，用振蕩器充分振蕩aiiin ；在37°C過(guò)夜孵育(大約 16h);分別加入5ml 0. IM磷酸氫二鉀溶液、0.細(xì)1 IM氫氧化鈉溶液和5ml乙酸乙酯，用振蕩器劇烈振蕩30s ；3000g以上，室溫(20-250C )離心IOmin ；取2. 5ml乙酸乙酯相至IOml干燥玻璃試管中，于50 60°C水浴氮?dú)饬飨麓蹈桑患尤隝ml正己烷(或正庚烷)，用渦旋儀渦動(dòng)30s，再加入Iml復(fù)溶工作液，用渦旋儀渦動(dòng)Imin充分混勻；3000g以上，室溫O0_25°C ) 離心IOmin ；除去上層有機(jī)相，取下層水相50μ 1用于分析，樣本稀釋倍數(shù)2。2、用試劑盒檢測(cè)與結(jié)果分析分別吸取20 μ 1-100 μ 1標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，然后加入20 μ 1-100 μ 1發(fā)光標(biāo)記物，再加 20μ 1-100μ 1熒光素標(biāo)記物，充分混勻后，37°C溫育15min ；加入包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠80-150 μ 1，混勻后在37°C溫育5min ；用磁分離架分離5min，棄上清后用清洗液300-500 μ 1沖洗復(fù)合物沉淀；所得分離好的復(fù)合物直接放入測(cè)量暗箱，加入激發(fā)底物1和激發(fā)底物2，延遲3- 后檢測(cè)發(fā)出的相對(duì)光強(qiáng)度(RLU)，樣本中呋喃它酮代謝物的含量與RLU成一定比例關(guān)系，可以通過(guò)RLU結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算呋喃它酮代謝物的濃度。激發(fā)底物1是NaOH，激發(fā)底物2是H202。底物裝載前，用蒸餾水清洗底物泵10_20 遍，排空管道內(nèi)殘存的水跡后，再將相應(yīng)的底物直接放入儀器內(nèi)，將泵管插入底物瓶中；用底物沖洗管道5次，并測(cè)定底物的RLU值，正常情況下，底物的RLU值不應(yīng)超過(guò)1200。若超過(guò)1200，需重新用蒸餾水對(duì)管道和底物泵進(jìn)行更多次清洗，直至空白值降至合理范圍內(nèi)。若超過(guò)三天不做實(shí)驗(yàn)，需卸載底物瓶，并蓋上蓋子，以防蒸發(fā)。隨后用蒸餾水清洗管道，并排空，以免強(qiáng)堿溶液腐蝕底物泵。
本發(fā)明采用6個(gè)呋喃它酮代謝物標(biāo)準(zhǔn)品(Ong/ml，0. Olng/ml，0. 03ng/ml， 0. 09ng/ml,0. 27ng/ml,0. 81ng/ml)進(jìn)行曲線測(cè)繪。儀器根據(jù)所述方法檢測(cè)得到一條RLU 值與呋喃它酮代謝物濃度相關(guān)的定標(biāo)曲線，相對(duì)應(yīng)每一個(gè)樣品中的濃度則可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本中呋喃它酮代謝物的殘留量。實(shí)施例四試劑盒質(zhì)量的測(cè)定1、試劑盒的靈敏度試劑盒靈敏度的定義為測(cè)定20次零標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)定的平均值加上3倍標(biāo)準(zhǔn)差。該試劑盒的靈敏度為0. Olng/ml。2、樣本的準(zhǔn)確度和精密度準(zhǔn)確度是指測(cè)定值與真值間的符合程度，試劑盒準(zhǔn)確度常用回收率表示。精密度又稱可重復(fù)性，常用變異系數(shù)表示。按照實(shí)施例三的樣本提取方法，以0. 03ng/g(ml)、0. 6ng/g(ml)兩個(gè)濃度的呋喃它酮代謝物對(duì)雞肉、蜂蜜、蝦樣本進(jìn)行添加回收，每種樣本每個(gè)濃度各4個(gè)平行，用三批試劑盒進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算樣本的平均回收率及精密度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見下表。表1準(zhǔn)確度和精密度測(cè)定ng/g (ml)
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)呋喃它酮代謝物的磁顆粒化學(xué)發(fā)光試劑盒，包括的試劑有發(fā)光標(biāo)記物、 熒光素標(biāo)記物、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、分離試劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的分離試劑是包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于所述的順磁性納米微珠是里面包覆有 Fe3O4或γ -Fe2O3，表面含有_0H、-COOH或-NH2活性基團(tuán)的微珠。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于所述的發(fā)光標(biāo)記物是異魯米諾衍生物標(biāo)記的呋喃它酮代謝物半抗原。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于所述的異魯米諾發(fā)光標(biāo)記物是ABEI、 AHEI 或 ABEN。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于所述的試劑盒還包括標(biāo)準(zhǔn)液、 質(zhì)控品和濃縮洗液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一所述的試劑盒，其特征在于所述的熒光素標(biāo)記物是FITC標(biāo)記的呋喃它酮代謝物單克隆抗體。
8.一種利用權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的試劑盒檢測(cè)呋喃它酮代謝物的方法，包括下列步驟1)分別吸取20μ 1-100 μ 1標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，然后加入20 μ 1-100 μ 1發(fā)光標(biāo)記物，再加 20 μ 1-100 μ 1熒光素標(biāo)記物，充分混勻后，37°C溫育15min ；2)加入包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠80-150μ1，混勻后在37°C溫育 5min ；3)用磁分離架分離5min，棄上清后用清洗液300-500μ 1沖洗復(fù)合物沉淀；4)上述清洗步驟重復(fù)2-4次；5)4)所得分離好的復(fù)合物直接放入測(cè)量暗箱，加入激發(fā)底物1和激發(fā)底物2，延遲3- 后檢測(cè)發(fā)出的相對(duì)光強(qiáng)度(RLU)，樣本中呋喃它酮代謝物的含量與RLU成一定比例關(guān)系，可以通過(guò)RLU集合標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算呋喃它酮代謝物的濃度。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)呋喃它酮代謝物的磁顆?；瘜W(xué)發(fā)光試劑盒，包括的試劑有發(fā)光標(biāo)記物、熒光素標(biāo)記物、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、分離試劑。發(fā)光標(biāo)記物是異魯米諾發(fā)光標(biāo)記物標(biāo)記的呋喃它酮代謝物半抗原，熒光標(biāo)記物是指熒光素或其衍生物標(biāo)記的呋喃它酮代謝物單克隆抗體，分離試劑是指包被有羊抗FITC單克隆抗體的順磁性納米微珠。本發(fā)明還涉及一種采用所述的試劑盒檢測(cè)動(dòng)物源性食品中呋喃它酮代謝物的方法，本方法對(duì)呋喃它酮代謝物檢測(cè)具備較高的靈敏度、特異性和較快的檢測(cè)速度。
文檔編號(hào)G01N33/52GK102539763SQ20101058924
公開日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2010年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月15日
發(fā)明者萬(wàn)宇平, 何麗霞, 何方洋, 馮才偉, 馮靜, 劉平, 張?zhí)m娟 申請(qǐng)人:北京勤邦生物技術(shù)有限公司