本發(fā)明涉及食品檢測技術領域，具體為一種乳品中呋喃它酮代謝物的檢測方法及試紙條。
背景技術：
呋喃它酮又稱痢特靈，為硝基呋喃類藥物，是一種人工合成的抗菌藥，呈黃色粉末或結晶性粉末，分子量為225.16，熔點245-258攝氏度，遇堿分解，在強光下顏色逐漸變深，最早發(fā)現(xiàn)5-硝基呋喃的抗菌活性為1944年在美國和德國進行的生物合成和微生物學實驗中，隨后呋喃它酮等同系物相繼上市，并發(fā)現(xiàn)此藥藥效穩(wěn)定抑制或殺滅多種革蘭氏陽性和陰性細菌，對某些原蟲、真菌有一定作用，因其藥效高價格便宜，廣泛應用于醫(yī)藥和畜牧等行業(yè)。
AOZ，化學名：3-氨基-2-惡唑烷酮，是呋喃它酮在生物體內主要的代謝殘留物，經胃酸生成的分解物羥乙基肼為劇毒類物質，對人體有致癌危險，因此自1995年起，歐盟、日本。美國等發(fā)達國家開始禁止此類抗菌劑在食用的畜禽及水產動物中使用，并嚴格執(zhí)行對輸入的食用魚、蝦及禽類進行殘留檢測，中國農業(yè)部自2002年2月發(fā)布相關文件中，也對呋喃它酮的用途及添加用量做了相關限制。
因此，為了提高食品的安全性，對食品中的呋喃它酮代謝物需要進行檢測，而現(xiàn)有的呋喃它酮代謝物的檢測方法，要么就是價格昂貴，要么就是操作過程繁瑣，檢測時間長，不能打動現(xiàn)場檢測的目的，遠遠達不到企業(yè)和機構的要求。
技術實現(xiàn)要素：
（一）解決的技術問題
針對現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供了一種乳品中呋喃它酮代謝物的檢測方法及試紙條，解決了現(xiàn)有乳品中呋喃它酮代謝物的檢測方法價格貴、過程繁瑣和檢測時間長的問題。
（二）技術方案
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：一種乳品中呋喃它酮代謝物的檢測方法，包括以下步驟：
一、制作試驗用試劑：量取9毫升濃度為2mol/L的濃鹽酸，加去離子水定容至120毫升，稱取10克磷酸氫二鉀，加400毫升去離子水溶解并定容至400毫升，向400毫升磷酸氫二鉀溶液中加入80克氯化鈉，充分溶解備用，稱取3.5克氫氧化鈉，用去離子水溶解并定容至100毫升；
二、準確稱取150-200毫升的乳品樣品于250毫升的離心管中，并向離心管中依次加入10毫升去離子水，2毫升的2mol/L的濃鹽酸和60毫升鄰硝基苯甲醛，充分渦動至乳品分散，然后放置在溫度為36度的恒溫箱孵育一小時，然后再向乳品溶液中依次加入8毫升緩沖溶液、100毫升氫氧化鈉溶液和8毫升甲酸乙酯溶液，在室溫中，劇烈晃動2分鐘，然后加入2毫升正乙烷，充分渦動15秒，再加入2毫升樣品稀釋液，低速渦動5分鐘，濾去上層正乙烷及中間雜質，取150毫升樣品溶液進行檢測，此液為A液；
三、準確稱取50-100毫升的紅糖漿樣品于250毫升的離心管中，并向離心管中依次加入10毫升去離子水，2毫升的2mol/L的濃鹽酸和60毫升鄰硝基苯甲醛，充分渦動至紅糖漿分散，然后放置在溫度為36度的恒溫箱孵育一小時，然后再向紅糖漿溶液中依次加入8毫升緩沖溶液、100毫升氫氧化鈉溶液和8毫升甲酸乙酯溶液，在室溫中，劇烈晃動2分鐘，然后加入2毫升正乙烷，充分渦動15秒，再加入2毫升樣品稀釋液，低速渦動5分鐘，濾去上層正乙烷及中間雜質，取150毫升樣品溶液進行檢測，此液為B液；
四、S1、將所需的酶標板條插入酶標板架上，未使用的酶標板條用自封袋密封后，立即保存于3-7攝氏度環(huán)境中，并記錄下各標準樣品的位置；
S2、將100微升各標準樣品溶液分別加入對應的標準樣品孔中；
S3、在每個板孔中加入100微升呋喃它酮代謝物酶結合物；
S4、蓋好蓋板膜，輕輕振蕩酶標版約十秒鐘，充分混勻，23-28攝氏度的室溫下避光反應45分鐘；
S5、揭開蓋板膜，倒掉板孔中溶液，在每孔加入3毫升洗滌工作液，浸泡30分鐘，依次重復操作兩次；
S6、倒掉板孔中溶液，將酶標板倒置于吸水紙上，吸干，立即在每孔中加入10毫升A液和10毫升B液，進行充分混合，混合液在3分鐘內使用，避免使用金屬器皿盛裝；
S7、蓋好蓋板膜，輕輕振蕩酶標板十秒鐘，充分混勻，23-28攝氏度的室溫下避光反應30分鐘；
S8、揭開蓋板膜，在各板孔中加入2毫升終止液，輕輕振蕩十秒鐘，充分混勻，用酶標儀在雙波長400納米、600納米下檢測吸光度，結果在終止后5分鐘內讀?。?/p>
S9、將各樣品的平均吸光度值，除以零標（濃度為0ppb的樣品）吸光度值，乘以100，可以得到各樣品對應的吸光度的百分比；將樣品吸光度的百分比帶入標準曲線（標準曲線公式為樣品的吸光度*100/零標的吸光度），可得出樣品對應的濃度，再乘以相應樣品的稀釋倍數(shù)，方得樣品中實際藥物含量。
優(yōu)選的，所述各試劑在使用前必須充分混勻，并且在實驗前，應先開啟生化培養(yǎng)箱至所需溫度，并檢查生化培養(yǎng)箱溫度是否正常。
優(yōu)選的，所述提取藥物時，渦動或振蕩應盡量充分，加入樣品是稀溶液后，應低速渦動2分鐘，以上操作將直接影響盛裝和檢測結果。
優(yōu)選的，所述混合試劑時，應避免出現(xiàn)氣泡，未用完的微孔板條應密封，置于2-8攝氏度保存。
優(yōu)選的，所述試紙條包括紙條本體，所述紙條本體的一端固定連接有接觸條，所述紙條本體的外壁上設置有防腐層。
（三）有益效果
本發(fā)明提供了一種乳品中呋喃它酮代謝物的檢測方法及試紙條。具備以下有益效果：
（1）、本發(fā)明通過利用呋喃它酮代謝物聯(lián)免試劑盒的特異性是通過與相應的物質進行交叉反應試驗來確定的，通過吸光度的大小來確定乳品中的呋喃它酮的含量，本發(fā)明所使用的檢測方法，操作簡單，價格便宜，且檢測時間短，能夠滿足企業(yè)和機構的要求。
附圖說明
圖1為本發(fā)明試紙條結構示意圖。
圖中：1紙條本體、2接觸條、3防腐層。
具體實施方式
下面將結合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā)明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。
如圖1所示，本發(fā)明提供一種技術方案：一種乳品中呋喃它酮代謝物的檢測方法，包括以下步驟：
一、制作試驗用試劑：量取9毫升濃度為2mol/L的濃鹽酸，加去離子水定容至120毫升，稱取10克磷酸氫二鉀，加400毫升去離子水溶解并定容至400毫升，向400毫升磷酸氫二鉀溶液中加入80克氯化鈉，充分溶解備用，稱取3.5克氫氧化鈉，用去離子水溶解并定容至100毫升，各試劑在使用前必須充分混勻，并且在實驗前，應先開啟生化培養(yǎng)箱至所需溫度，并檢查生化培養(yǎng)箱溫度是否正常；
二、準確稱取150-200毫升的乳品樣品于250毫升的離心管中，并向離心管中依次加入10毫升去離子水，2毫升的2mol/L的濃鹽酸和60毫升鄰硝基苯甲醛，充分渦動至乳品分散，然后放置在溫度為36度的恒溫箱孵育一小時，然后再向乳品溶液中依次加入8毫升緩沖溶液、100毫升氫氧化鈉溶液和8毫升甲酸乙酯溶液，在室溫中，劇烈晃動2分鐘，然后加入2毫升正乙烷，充分渦動15秒，再加入2毫升樣品稀釋液，低速渦動5分鐘，濾去上層正乙烷及中間雜質，取150毫升樣品溶液進行檢測，此液為A液；
三、準確稱取50-100毫升的紅糖漿樣品于250毫升的離心管中，并向離心管中依次加入10毫升去離子水，2毫升的2mol/L的濃鹽酸和60毫升鄰硝基苯甲醛，充分渦動至紅糖漿分散，然后放置在溫度為36度的恒溫箱孵育一小時，然后再向紅糖漿溶液中依次加入8毫升緩沖溶液、100毫升氫氧化鈉溶液和8毫升甲酸乙酯溶液，在室溫中，劇烈晃動2分鐘，然后加入2毫升正乙烷，充分渦動15秒，再加入2毫升樣品稀釋液，低速渦動5分鐘，濾去上層正乙烷及中間雜質，取150毫升樣品溶液進行檢測，此液為B液，提取藥物時，渦動或振蕩應盡量充分，加入樣品是稀溶液后，應低速渦動2分鐘，以上操作將直接影響盛裝和檢測結果；
四、S1、將所需的酶標板條插入酶標板架上，未使用的酶標板條用自封袋密封后，立即保存于3-7攝氏度環(huán)境中，并記錄下各標準樣品的位置；
S2、將100微升各標準樣品溶液分別加入對應的標準樣品孔中；
S3、在每個板孔中加入100微升呋喃它酮代謝物酶結合物；
S4、蓋好蓋板膜，輕輕振蕩酶標版約十秒鐘，充分混勻，23-28攝氏度的室溫下避光反應45分鐘；
S5、揭開蓋板膜，倒掉板孔中溶液，在每孔加入3毫升洗滌工作液，浸泡30分鐘，依次重復操作兩次；
S6、倒掉板孔中溶液，將酶標板倒置于吸水紙上，吸干，立即在每孔中加入10毫升A液和10毫升B液，進行充分混合，混合液在3分鐘內使用，混合試劑時，應避免出現(xiàn)氣泡，未用完的微孔板條應密封，置于2-8攝氏度保存，避免使用金屬器皿盛裝；
S7、蓋好蓋板膜，輕輕振蕩酶標板十秒鐘，充分混勻，23-28攝氏度的室溫下避光反應30分鐘；
S8、揭開蓋板膜，在各板孔中加入2毫升終止液，輕輕振蕩十秒鐘，充分混勻，用酶標儀在雙波長400納米、600納米下檢測吸光度，結果在終止后5分鐘內讀??；
S9、將各樣品的平均吸光度值，除以零標（濃度為0ppb的樣品）吸光度值，乘以100，可以得到各樣品對應的吸光度的百分比；將樣品吸光度的百分比帶入標準曲線（標準曲線公式為樣品的吸光度*100/零標的吸光度），可得出樣品對應的濃度，再乘以相應樣品的稀釋倍數(shù)，方得樣品中實際藥物含量，乳品中呋喃它酮代謝物的檢測試紙條，包括紙條本體1，紙條本體1的一端固定連接有接觸條2，紙條本體1的外壁上設置有防腐層3。
綜上可得，本發(fā)明通過利用呋喃它酮代謝物聯(lián)免試劑盒的特異性是通過與相應的物質進行交叉反應試驗來確定的，通過吸光度的大小來確定乳品中的呋喃它酮的含量，本發(fā)明所使用的檢測方法，操作簡單，價格便宜，且檢測時間短，能夠滿足企業(yè)和機構的要求。
需要說明的是，在本文中，諸如第一和第二等之類的關系術語僅僅用來將一個實體或者操作與另一個實體或操作區(qū)分開來，而不一定要求或者暗示這些實體或操作之間存在任何這種實際的關系或者順序。而且，術語“包括”、“包含”或者其任何其他變體意在涵蓋非排他性的包含，從而使得包括一系列要素的過程、方法、物品或者設備不僅包括那些要素，而且還包括沒有明確列出的其他要素，或者是還包括為這種過程、方法、物品或者設備所固有的要素。在沒有更多限制的情況下，由語句“包括一個……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的過程、方法、物品或者設備中還存在另外的相同要素。
盡管已經示出和描述了本發(fā)明的實施例，對于本領域的普通技術人員而言，可以理解在不脫離本發(fā)明的原理和精神的情況下可以對這些實施例進行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由所附權利要求及其等同物限定。