1.一種重組Neu蛋白檢測副豬嗜血桿菌抗體的間接ELISA方法，其特征在于：采用重組表達純化的副豬嗜血桿菌神經(jīng)氨酸酶蛋白作為包被抗原。
2.一種重組Neu蛋白檢測副豬嗜血桿菌抗體的間接ELISA試劑盒，其特征在于：采用重組表達純化的副豬嗜血桿菌神經(jīng)氨酸酶蛋白作為包被抗原。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組Neu蛋白檢測副豬嗜血桿菌抗體的間接ELISA方法，其特征在于：所述副豬嗜血桿菌神經(jīng)氨酸酶蛋白的表達方式如下：
S1：以HPS 5型毒株為模板，通過PCR擴增獲得Neu全基因，其Neu全基因編碼為：NeuFP: ACGAATTCATGAAAAGAAGATTATCTAA，NeuRP: GCGTCGACTTACCAAGTATAACTGATATCTAC，并將其克隆至pMD18-T載體；
S2：再以pMD18-Neu基因為模板，重新設(shè)計引物，其引物編碼為：NeuFp: GCGAATTCATGGGTATTGCAGCAACCA，NeuRP: GCGTCGACTTACCAAGTATAACTGATATCTAC，擴增得到HPS Neu蛋白的部分編碼區(qū)，將其克隆至原核表達載體pET-28a(+)中，構(gòu)建得到重組原核表達質(zhì)粒pET-Neu；
S3：誘導(dǎo)培養(yǎng)500ml pET-Neu的轉(zhuǎn)化菌Rosetta(DE3)，離心收菌、超聲波裂解，并對包涵體進行提取；
S4：用SDS-PAGE對表達的Neu重組蛋白進行純度檢測，重組Neu蛋白的含量以Bradford檢測法采用分光光度計測定。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組Neu蛋白檢測副豬嗜血桿菌抗體的間接ELISA方法，其特征在于：間接ELISA方法的具體步驟如下：
S1：用0.05 mol/L pH 9.6碳酸鹽緩沖液將制備的包被抗原稀釋至25ng/100μl至400ng/100μl，包被酶標板， 每孔100uL，輕振酶標板，使抗原在孔底均勻鋪開，37℃作用2 h，轉(zhuǎn)入4℃過夜吸附；
S2：次日用PBST洗滌液洗滌3～5次，每次5 min，拍干；
S3：然后用0.15% BSA封閉，每孔200uL，37 ℃作用1h，再用洗滌液洗板3～5次；
S4：加入用PBS稀釋的待檢血清，每孔100uL，同時設(shè)立陰陽性對照孔，37 ℃作用1h，洗板同上；
S5：加入稀釋的SPA-HRP，23 ℃作用1h，洗板同上；
S6：加入新鮮配制的OPD-H2O2 底物顯色液，37 ℃避光顯色20min；
S7：加入2mol/LH2SO4 終止液，每孔50uL終止反應(yīng)；
S8：在酶標免疫測定儀上測定490nm波長下的OD值。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組Neu蛋白檢測副豬嗜血桿菌抗體的間接ELISA方法，其特征在于：間接ELISA方法的具體步驟如下：
S1：用0.05 mol/L pH 9.6碳酸鹽緩沖液將制備的包被抗原稀釋至25ng/100μl至400ng/100μl，包被酶標板， 每孔100uL，輕振酶標板，使抗原在孔底均勻鋪開，37℃作用2 h，轉(zhuǎn)入4℃過夜吸附；
S2：次日用PBST洗滌液洗滌3～5次，每次5 min，拍干；
S3：然后用0.15% BSA封閉，每孔200uL，37 ℃作用1h，再用洗滌液洗板3～5次；
S4：封閉后加樣，每孔加入用PBS稀釋的待檢血清100uL，同時設(shè)立陰陽性對照孔，37 ℃作用1h，洗板同上；
S5：加入稀釋的SPA-HRP，23 ℃作用1h，洗板同上；
S6：加入新鮮配制的OPD-H2O2 底物顯色液，37 ℃避光顯色20min；
S7：加入2mol/LH2SO4 終止液，每孔50uL終止反應(yīng)；
S8：在酶標免疫測定儀上測定450nm波長下的OD值。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組Neu蛋白檢測副豬嗜血桿菌抗體的間接ELISA方法，其特征在于：所述S1：中的包被抗原濃度為：100ng/100μl至400ng/100μl。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組Neu蛋白檢測副豬嗜血桿菌抗體的間接ELISA方法，其特征在于：所述S4：中的血清的稀釋比例為：1: 10至1:160。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組Neu蛋白檢測副豬嗜血桿菌抗體的間接ELISA方法，其特征在于：間接ELISA方法的具體步驟如下：
S1：將用包被液稀釋的抗原加入酶標板內(nèi)，100ng/100μl每孔, 37℃作用1小時后，置4℃冰箱24h；
S2：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗3次，每次3分鐘，最后用吸水紙拍干；
S3：各孔加入封閉液（50g/L脫脂奶粉溶液）200μl,37℃作用2小時；
S4：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗2次，每次3分鐘，最后用吸水紙拍干；
S5：加入待檢血清，將待檢血清用E.coli裂解上清稀釋，室溫感作30分鐘，再以保溫液作適當(dāng)稀釋，血清濃度為1:160，每孔100μl，37℃作用1小時；
S6：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗2次，每次3分鐘，最后用吸水紙拍干；
S7：加入酶標二抗，用保溫液將酶標二抗按工作濃度稀釋（1:15000），每孔100ul，37℃作用1h；
S8：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗2次，每次3分鐘，最后用吸水紙拍干；
S9：加底物，每孔100u1，37℃閉光作用10分鐘；
S10：每孔加入50ul終止液終止反應(yīng)并用酶標儀測定OD450值；
S11：判定結(jié)果，當(dāng)OD450nm≥0.3808時判為陽性，反之則為陰性。