一種淫羊藿總黃酮中乙酸乙酯、正丁醇溶劑殘留量的測(cè)量方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種淫羊藿總黃酮中乙酸乙酯、正丁醇溶劑殘留量的測(cè)量方法，該方法建立氣相色譜法來測(cè)定淫羊藿總黃酮中有機(jī)溶劑乙酸乙酯和正丁醇?xì)埩袅?該方法中以甲醇為溶劑，異戊醇為內(nèi)標(biāo),本發(fā)明采用毛細(xì)管氣相色譜法，以甲醇為溶劑，異戊醇為內(nèi)標(biāo)，對(duì)淫羊藿總黃酮中的乙酸乙酯和正丁醇?xì)埩袅窟M(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，該方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高，準(zhǔn)確度好，可作為淫羊藿總黃酮提取物中有機(jī)溶劑殘留量的測(cè)定方法。
【專利說明】
—種淫羊藿總黃酮中乙酸乙酯、正丁醇溶劑殘留量的測(cè)量
方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種淫羊藿總黃酮中乙酸乙酯、正丁醇溶劑殘留量的測(cè)量方法，屬于生物醫(yī)藥檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]淫羊藿為小檗科植物淫羊藿E P imed i umb rev 1- c O rnuMaX i m、箭葉淫羊藿 Epimedium.sagittatum(Seb.etZucc.)M a X i m、柔毛淫羊藿 Epimedium pu-bescens Maxim或朝鮮淫羊藿E pimedium koreanum Nakai的干燥葉,其主要有效成分為總黃酮，淫羊藿苷，多糖等，淫羊藿總黃酮在提取純化的工藝中使用了乙酸乙酯和正丁醇兩種有機(jī)溶劑，為保證用藥的安全性，有必要對(duì)乙酸乙酯、正丁醇有機(jī)溶劑殘留量進(jìn)行研究和控制。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是:提供一種淫羊藿總黃酮中乙酸乙酯、正丁醇溶劑殘留量的測(cè)量方法，該方法簡(jiǎn)單可行，檢測(cè)精度高，符合相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，以克服現(xiàn)有技術(shù)的不足。
[0004]本發(fā)明的技術(shù)方案
一種淫羊藿總黃酮中乙酸乙酯、正丁醇溶劑殘留量的測(cè)量方法，該方法建立氣相色譜法來測(cè)定淫羊藿總黃酮中有機(jī)溶劑乙酸乙酯和正丁醇?xì)埩袅?，該方法中以甲醇為溶劑，異戊醇為?nèi)標(biāo)。
[0005]前述的一種淫羊藿總黃酮中乙酸乙酯、正丁醇溶劑殘留量的測(cè)量方法中，具體方法為采用毛細(xì)管氣相色譜法，以S E 5 4毛細(xì)管柱為色譜柱，程序升溫，氮?dú)鉃檩d氣，進(jìn)樣口溫度為2 3 (TC，F(xiàn) I D檢測(cè)器溫度為2 4 (TC。
[0006]由于采用上述技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用毛細(xì)管氣相色譜法，以甲醇為溶劑，異戊醇為內(nèi)標(biāo)，對(duì)淫羊藿總黃酮中的乙酸乙酯和正丁醇?xì)埩袅窟M(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，該方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高，準(zhǔn)確度好，可作為淫羊藿總黃酮提取物中有機(jī)溶劑殘留量的測(cè)定方法。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0007]附圖1為淫羊藿總黃酮在對(duì)照組溶液的氣相色譜圖；
附圖2為淫羊藿總黃酮在正丁醇溶液的氣相色譜圖；
附圖3為淫羊藿總黃酮在陰性對(duì)照溶液的氣相色譜圖；
附圖4為樣品中溶劑殘留量測(cè)定結(jié)果示意圖；
附圖5為正丁醇回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果示意圖；
附圖6為樣品中溶劑殘留量測(cè)定結(jié)果示意圖。

【具體實(shí)施方式】
[0008]下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不作為對(duì)本發(fā)明的任何限制。
[0009]本發(fā)明的實(shí)施例:
I儀器與試劑
1.1儀器
GC -1 4 B氣相色譜儀(日本島津)，氫火焰離子檢測(cè)器、WML色譜工作站(南寧威瑪龍色譜科技公司)，超聲波清洗機(jī)(2 5 O W，2 9?3 4 k H z，北京醫(yī)療設(shè)備二廠)及微量進(jìn)樣器(上海安亭微量進(jìn)樣器廠)。
[0010]1.2 試劑
正丁醇、乙酸乙酯、異戊醇均為色譜純，甲醇為分析純；淫羊藿總黃酮(批號(hào)20100912,20100916 ,20100921)由貴陽醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院分析化學(xué)教研室提供。
[0011]2 方法與結(jié)果
2.1色譜條件
S E - 5 4 毛細(xì)管柱(3 O m X O 5 3 mm, I μ m);進(jìn)樣口溫度 2 3 (TC，F(xiàn) ID檢測(cè)器溫度2 4 (TC，高純氮?dú)庾鳛檩d氣，柱前壓為2 5 k P a，分流比10:1 ;氫氣
5O m I / m i η，空氣流速4 5 O m I / m i η ;采用程序升溫，起始溫度3 5 °C (室溫
35 0C以下進(jìn)行)維持3mi η,以2°C/mi η速率升溫至5 O °C,維持2 m i η，進(jìn)樣量1.0 μ I，理論塔板數(shù)按乙酸乙酯計(jì)不低于3 O O O，按正丁醇計(jì)不低于6 0 0 0。
[0012]2.2 溶液的配制
2.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
吸取乙酸乙酯、正丁醇適量，加甲醇制成每I m I中含乙酸乙酯0.0 8 O 3mg，正丁醇0.0 8 I I m g的儲(chǔ)備液，分別吸取儲(chǔ)備液0.2、0.6、1.0、1.2、2.0m1，置于I O m I量瓶中，再吸取內(nèi)標(biāo)溶液0.1 m I至各量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，SP得系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。
[0013]2.2.2 內(nèi)標(biāo)溶液的配制
稱取異戊醇0.0 I 8 2 g，置5 Om I量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。
[0014]2.2.3 供試品溶液的配制
精密稱取三批淫羊藿總黃酮約3 O m g，置I Oml量瓶中，精密吸取內(nèi)標(biāo)溶液0.1m I，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
2.2.4陰性對(duì)照溶液的制備
稱取未經(jīng)乙酸乙酯、正丁醇純化的淫羊藿總黃酮3 Omg，置I Om I量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻使溶解，即得。
[0015]2.3 專屬性試驗(yàn)
精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各I μ I，并按照“2.1”色譜條件下進(jìn)樣分析，結(jié)果見附圖1、2和3，表明陰性對(duì)照溶液在4?I 2mi η處干擾很低，不影響目標(biāo)物的定量，且內(nèi)標(biāo)物與各待測(cè)物峰分離理想。
[0016]2.4 線性關(guān)系考察分別精密吸取各標(biāo)準(zhǔn)溶液I μ I，進(jìn)樣分析，記錄峰面積，以待測(cè)成分的濃度為橫坐標(biāo)(X)，待測(cè)成分與內(nèi)標(biāo)物峰面積比為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行回歸分析，得回歸方程，乙酸乙酯:Υ=0.0 O 2 3 X+ 0.0 7 3 9 ( r = 0.9 9 9 1,1.606 ?
I6.0 6 m g / L);正丁醇:Υ=0.0 O 3 2 X + 0.0 2 7 I ( r =0.9 9 9 3,1.622?16.2 2mg / L),結(jié)果表明，各待測(cè)物線性關(guān)系良好。
[0017]2.5 最低檢出限
將標(biāo)準(zhǔn)溶液逐步稀釋，測(cè)得溶液中乙酸乙酯和正丁醇的最低檢出限分別為0.5mg/L和0.3mg/L，分別為供試品溶液的0.0 I 5 %和0.0 I I %( S / N = 3 )。
[0018]2.6 最低定量限
將標(biāo)準(zhǔn)溶液逐步稀釋，測(cè)得溶液中乙酸乙酯和正丁醇的最低定量限分別為1.7mg/L和1.0mg/L，分別為供試品溶液的0.0 5%和0.0 37%(S/N=10)。
[0019]2.7 精密度試驗(yàn)
取標(biāo)準(zhǔn)溶液(乙酸乙酯4.8 I 8 m g / L、正丁醇4.8 6 6 m g / L、異戊醇
3.6 4 Omg / L)連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算待測(cè)成分與內(nèi)標(biāo)的峰面積比，結(jié)果乙酸乙酯、正丁醇的R S D分別為4.6 %、3.2 %。
[0020]2.8 供試品穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密稱定淫羊藿總黃酮3 O m g，置I Oml量瓶中，精密吸取內(nèi)標(biāo)溶液0.1ml,加甲醇溶解至刻度，分別于O、1、2、5、8 h進(jìn)樣分析，結(jié)果各組分含量的R S D分別為乙酸乙酯3.6 %，正丁醇3.9%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。
[0021]2.9 重復(fù)性試驗(yàn)
取淫羊藿總黃酮樣品按照供試品溶液方法制備，一式6份進(jìn)樣測(cè)定，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算正丁醇、乙酸乙酯含量，結(jié)果6份中乙酸乙酯和正丁醇的平均含量分別為0.0 6 I %和
0.0 6 6 %，R S D分別為3.7%和4.9 %，表明該方法重復(fù)性好。
[0022]2.1 O 加樣回收率試驗(yàn)
精密稱定淫羊藿總黃酮3 O mg，分別加入對(duì)照品溶液(乙酸乙酯4.8 I Smg /L、正丁醇4.866mg/L)lml、2ml、3ml ,按擬定方法測(cè)量含量,計(jì)算回收率，結(jié)果見附圖4、附圖5。
[0023]2.1 I 樣品測(cè)定
取三個(gè)批號(hào)的淫羊藿總黃酮樣品各3 O mg，精密稱定置I Om I量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)溶液0.1 m I，加甲醇定容，搖勻，精密吸取I μ I進(jìn)樣分析，結(jié)果見附圖6。
[0024]3.討論
由于淫羊藿總黃酮易溶于甲醇，且甲醇沸點(diǎn)與乙酸乙酯相比較小，在氣相色譜中分離良好，所以選擇甲醇為樣品溶劑。氣相色譜法含量測(cè)定有內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法，內(nèi)標(biāo)法較為常用，在實(shí)驗(yàn)中可減少進(jìn)樣量、色譜條件及操作對(duì)結(jié)果的影響，準(zhǔn)確度、精確度較高，較外標(biāo)法更適合微量組分的含量測(cè)定。所以實(shí)驗(yàn)決定采用內(nèi)標(biāo)法測(cè)定目標(biāo)溶劑殘留量。在內(nèi)標(biāo)物選擇時(shí)，本研究選取N，N 二甲基乙酰胺、異丙醇和異戊醇分別與目標(biāo)溶劑同時(shí)進(jìn)樣，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，異丙醇與目標(biāo)溶劑峰之間有干擾，N，N 二甲基乙酰胺則有拖尾現(xiàn)象且出峰時(shí)間較晚，而異戊醇出峰時(shí)間及分離度較好，因此，選用異戊醇為內(nèi)標(biāo)溶液，甲醇為溶解介質(zhì)效果好。
[0025]實(shí)驗(yàn)中考察了不同柱溫對(duì)樣品溶液中乙酸乙酯、正丁醇和異戊醇出峰時(shí)間的影響，綜合檢驗(yàn)靈敏度、測(cè)定誤差及供試品分析時(shí)間等因素，本研究選擇程序升溫法，起始溫度3 5 °C維持3 m i η (室溫3 5 °C以下)，以2 °C / m i η速率升溫至5 O °C，維持2 m
in，結(jié)果良好，溶劑殘留測(cè)定結(jié)果表明三批樣品中乙酸乙酯、正丁醇?xì)埩艟∮谥袊?guó)藥典2 O I O版二部附錄珊P附表I中有機(jī)溶劑殘留的限度，符合藥典規(guī)定。
【權(quán)利要求】
1.一種淫羊藿總黃酮中乙酸乙酯、正丁醇溶劑殘留量的測(cè)量方法，其特征在于:該方法建立氣相色譜法來測(cè)定淫羊藿總黃酮中有機(jī)溶劑乙酸乙酯和正丁醇?xì)埩袅?，該方法中以甲醇為溶劑，異戊醇為?nèi)標(biāo)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種淫羊藿總黃酮中乙酸乙酯、正丁醇溶劑殘留量的測(cè)量方法，其特征在于:具體方法為采用毛細(xì)管氣相色譜法，以S E 5 4毛細(xì)管柱為色譜柱，程序升溫，氮?dú)鉃檩d氣，進(jìn)樣口溫度為2 3 (TC，F(xiàn) I D檢測(cè)器溫度為2 4 (TC。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104458952SQ201410740031
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年12月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月8日
【發(fā)明者】敖云霞 申請(qǐng)人:敖云霞