專利名稱：三種基于銪(III)與氯磺酰化四齒β-二酮配位體形成的熒光配合物及其應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種三種基于銪(III)與氯磺?；凝Xβ - 二酮配位體形成的熒光配合物及其應用，具體地說是三種可用于生物分子標記的三價銪離子與氯磺?；凝Xβ-二酮的熒光配合物的制備及其在時間分辨熒光生化檢測中的應用。
背景技術(shù)：
稀土離子(包括Eu3+、Tb3+、Sm3+、Dy3+)熒光配合物具有非常特殊的熒光性質(zhì)，如超長的熒光壽命，200納米以上的Mokes位移及尖銳的熒光發(fā)射光譜，從而被作為生物分子的熒光標記探針而廣泛地應用于時間分辨熒光生化分析技術(shù)領(lǐng)域。作為一種高靈敏度的生化分析技術(shù)，時間分辨熒光生化分析法如時間分辨熒光免疫分析法、時間分辨熒光核酸雜交分析法及時間分辨熒光生物成像分析法已在臨床醫(yī)學檢測、生命科學及環(huán)境科學等領(lǐng)域得到了許多成功地的應用。在時間分辨熒光生化分析技術(shù)中，最關(guān)鍵的步驟之一是在測定前需要對一些生物分子如抗體、抗原、蛋白質(zhì)及核酸等用稀土熒光配合物探針進行標記。到目前為止，可用于生物分子熒光標記的稀土配合物熒光探針主要包括三價銪離子與β-二酮類配位體的熒光配合物及三價銪及鋱離子與芳香胺類配位體的熒光配合物(文獻1 :I. Hemmila,V.-M. Mukkal a, Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. , 2001, 38,441 ；文獻 2 :J. L. Yuan, G.L.Wang, Trends Anal. Chem.，2006，25，490)。相對于三價稀土的芳香胺類配合物熒光標記探針來說，由于三價銪離子的二酮類配合物熒光標記探針具有發(fā)光效率更高，且合成比較簡單及成本低廉的優(yōu)點，這類探針的研制對于開拓時間分辨熒光生化分析技術(shù)的更廣泛應用具有十分重要的實際意義?；谏鲜鲈?，近年來幾種氯磺?；乃凝Xβ-二酮類配位體包括4，4’ - 二 (1 ”，1，，，1”，2 ”，2 ”，3 ”，3 ” -七氟-4 ”，6 ” -己二酮-6 ” -基)氯磺?；?鄰二苯基苯(簡稱 BHHCT)(文獻 3 J. L. Yuan, K. Matsumoto, H. Kimura, Anal. Chem.，1998，70，596)，4， 4，- 二 (1，，，1”，1”，2”，2”-五氟-3”，5”-戊二酮-5”-基)氯磺?；?鄰二苯基苯(簡稱 BPPCT)(文獻 4 :R. Connally, D. Veal, J. Piper, FEMS Microbiol. Ecol.，2002，41，239)， 4，4，-bis(l”，r，，r，-三氟-2”，4”_ 丁二酮-4”-基)氯磺?；?鄰二苯基苯(簡稱 BTBCT)(文獻 5 :F. B. Wu, C. Zhang, Anal. Biochem.，2002，311，57)，1，10-二 0”-氯磺酰基-1，，1”-聯(lián)苯-4，-基)-4，4，5，5，6，6，7，7_ 八氟癸烷-1，3，8，10-四酮(簡稱 BCD0T) (文獻 6 :J. L. Yuan, K. Matsumoto, Anal. Sci.，1996，12，695)，1，10-二(8，-氯磺?；?二苯并噻吩-2，-基)-4，4，5，5，6，6，7，7_八氟癸烷-1，3，8，10-四酮(簡稱BC0T)(文獻7 J. L. Yuan, K. Matsumoto, J. Pharm. Biomed. Anal.，1997，15，1397)及 1，10- 二(5，-氯磺?；?噻吩-2，-基)-4，4，5，5，6，6，7，7-八氟癸烷-1，3，8，10-四酮(簡稱 BCT0T)(文獻 8 F. B. Wu, S. Q. Han，C. Zhang, Y. F. He, Anal. Chem.，2002，74，5882)，被先后研制了出來。這幾種配位體不僅可與三價銪離子形成穩(wěn)定的強熒光性配合物，其氯磺?；€可與含有氨基的生物分子共價鍵合，進而對生物分子進行熒光標記，其中最具有代表性及應用價值，并且已經(jīng)被商品化的是BHHCT。申請人近年來的研究工作還表明，三價銪離子的BHHCT配合物(簡稱BHHCT-Eu3+)不僅在生物標記方面具有很好的直接應用價值，其在功能性納米稀土熒光材料的制備及復雜樣品的時間分辨熒光生物成像測定方面也具有很好的應用價值(文獻 9 :M. Q. Tan, Ζ. Q. Ye, G. L. Wang, J. L. Yuan, J. Mater. Chem.，2004，14,2896 ；文獻 10 J. Wu, Ζ. Q. Ye, G. L. Wang, D. Jin, J. L. Yuan, Y. F. Guan, J. Piper, J. Mater. Chem. ，2009,19,1258)。需要指出的是，雖然以BHHCT-Eu3+為代表的幾種四齒β - 二酮-銪(III)熒光配合物生物標記探針已經(jīng)被研制了出來，但現(xiàn)有的稀土熒光配合物生物標記探針種類仍然十分有限，商品化的探針試劑價格昂貴，很大程度上制約了時間分辨熒光生化分析技術(shù)的發(fā)展與應用。另外，如何通過對四齒二酮配位體的結(jié)構(gòu)優(yōu)化與改良來研制具有更好熒光性能的四齒β-二酮-銪(III)熒光配合物生物標記探針也是十分必要的。本發(fā)明在對配位體結(jié)構(gòu)設(shè)計的基礎(chǔ)上，合成出了三種新型氯磺?；乃凝X二酮-銪(III)熒光配合物生物標記探針，在利用探針對蛋白質(zhì)分子進行標記的基礎(chǔ)上，建立了該探針在時間分辨熒光免疫測定技術(shù)及時間分辨熒光生物成像測定技術(shù)中的應用方法。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供三種新型的三價銪離子與氯磺?；凝X二酮的熒光配合物生物標記探針，并將其用于蛋白質(zhì)等生物分子的熒光標記及時間分辨熒光生化測定。本發(fā)明的技術(shù)方案如下以三價銪離子與三種氯磺酰化四齒β - 二酮類配位體所形成的熒光配合物為生
物分子標記探針，其中所述三種氯磺?；凝X二酮類配位體的結(jié)構(gòu)為第一種當R 取 C3F7 =BHHBCB, BTBBCB0 為 1，2_ 二 (1”，1”，1 ”，2 ”，2 ”，3 ”，3，，-七氟-4”，6” -己二酮-6” -基-對芐基)-4-氯磺?；剑坏诙N當 R 取 C2F5 =BPPBCB ；BPPBCB 為 1，2_ 二(1”，1”，1”，2”，2” -五氟 _3”，
5 ” -戊二酮-5 ” -基-對芐基)-4-氯磺?；剑?br>
權(quán)利要求
1.三種基于銪(III)與氯磺?；凝Xβ-二酮配位體形成的熒光配合物，其特征在于 是以三價銪離子與三種氯磺?；凝Xβ - 二酮配位體所形成的熒光配合物，所述三種氯磺?；凝Xβ-
2.應用權(quán)利要求1所述的熒光配合物，其特征在于在？11值>8的弱堿性緩沖溶液中通過氯磺?；凝Xβ-二酮配位體與含有氨基的生物分子的共價結(jié)合反應而對生物分子進行標記，標記生物分子經(jīng)分離純化后進一步與三價銪離子反應得到銪(III)熒光配合物標記的生物分子，進而用于各種熒光測定。
3.一種根據(jù)權(quán)利要求2所述的應用，其特征在于，三價銪熒光配合物的生物標記探針試劑或含有其標記生物分子后的試劑盒。
全文摘要
本發(fā)明涉及三種基于銪(III)與氯磺?；凝Xβ-二酮配位體形成的熒光配合物及其應用。三價銪離子與三種氯磺?；凝Xβ-二酮類配位體1，2-二(1”，1”，1”，2”，2”，3”，3”-七氟-4”，6”-己二酮-6”-基-對芐基)-4-氯磺?；健?，2-二(1”，1”，1”，2”，2”-五氟-3”，5”-戊二酮-5”-基-對芐基)-4-氯磺?；郊?，2-二(1”，1”，1”-三氟-2”，4”-丁二酮-4”-基-對芐基)-4-氯磺?；剿纬傻臒晒馀浜衔?。三種氯磺?；凝Xβ-二酮類配位體結(jié)構(gòu)式為三種探針在弱堿性緩沖溶液中與含有氨基的蛋白質(zhì)、氨基酸、肽、核酸等生物分子共價鍵合而用于這些分子的熒光標記，用于時間分辨熒光免疫分析等生化測定。
文檔編號C09K11/06GK102391162SQ20111030015
公開日2012年3月28日 申請日期2011年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月28日
發(fā)明者葉志強, 張琳, 王桂蘭, 袁景利 申請人:大連理工大學