4?酰胺基苯并咪唑吖啶類化合物及其制備方法和用圖
【專利摘要】本發(fā)明提供了4?酰胺基苯并咪唑吖啶類化合物及其制備方法和用途,其中,該化合物為具有式I所示結構式的4?酰胺基苯并咪唑吖啶類化合物或具有式I所示結構式的4?酰胺基苯并咪唑吖啶類化合物的藥學上可接受的鹽、酯或者溶劑合物,其中,R1為不同位置取代的H、OH、OC2H5、OCH2CH2CH3、OCH(CH3)2、OCH(CH3)CH2CH3、OC(CH3)3、OCH2CH2CH2CH3、F、Cl、Br、CF3、NH2、NO2、COOH、NHCOCH3、OCH3、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH3CHCH3、CH3CHCH2CH3、(CH3)3C、CH2CH2CH2CH3,R2為不同位置取代的?NH?,NHCH2、NHCH2CH2、NHCH2CH2CH2、NHCONH、NHCOCH2NH、NHCOCH2NH、或OCH2。本發(fā)明的該化合物能夠有效抑制拓撲異構酶、抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)酶、抑制真核生物腫瘤細胞增殖、預防或治療腫瘤。
【專利說明】
4-酰胺基苯并咪唑吖啶類化合物及其制備方法和用途
技術領域
[0001 ]本發(fā)明涉及醫(yī)藥領域,具體地,涉及4-酰胺基苯并咪唑吖啶類化合物及其制備方 法和用途化合物及其制備方法和用途。
【背景技術】
[0002] 癌癥嚴重影響人類的健康,是繼心腦血管疾病后第二大高致死率的疾病。腫瘤細 胞由于存在著大量的DNA復制轉錄及損傷修復,且拓撲異構酶(Topo)及聚腺苷二磷酸核糖 聚合酶(PARP)均高表達,因此抑制Τορο介導的DNA復制、PARP介導的DNA修復,可以使腫瘤細 胞的復制受阻、DNA修復抑制,導致細胞損傷積累,造成合成致死。目前這兩個靶點藥物的聯(lián) 合用藥在抗腫瘤藥物研究中已取得較好的臨床效果,但聯(lián)合用藥具有耗時長,具有藥物-藥 物相互作用等缺點,因此設計并合成可同時抑制Τορο與PARP活性的化合物具有重要的理論 意義和應用價值。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003] 本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。為此,本發(fā)明的 一個目的在于提出一種能夠有效抑制拓撲異構酶、抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP) 酶、抑制真核生物腫瘤細胞增殖、預防和/或治療腫瘤的手段。
[0004] 本發(fā)明是基于發(fā)明人的下列發(fā)現(xiàn)而完成的:由于Τορο與PARP-1都是良好的抗腫瘤 靶點,二者的抑制劑具有協(xié)同效應,通過PARP-1抑制劑抑制Τορο抑制劑造成的DNA損傷修復 達到合成致死效應,并且在聯(lián)合用藥上已有不少案例進入臨床,所以選取Τορο及PARP-1兩 個靶點作為雙靶點抑制劑進行合成。而吖啶與苯并咪唑自身都具有良好的生物活性,也已 經(jīng)被廣泛用于各類藥物中,在Τορο及PARP-1抑制劑上也有相應衍生物進入臨床,因此設計 吖啶與4-酰胺基苯并咪挫通過合適的連接鏈連接,以達到雙祀點抑制劑的目的。目前設計 出的一系列4-酰胺基苯并咪唑吖啶類化合物未有文獻報道。
[0005] 更具體地,本發(fā)明提供了一種化合物,其特征在于,所述化合物為具有式I所示結 構式的苯并咪唑吖啶類化合物或具有式I所示結構的苯并咪唑吖啶類化合物的藥學上可接 受的鹽、酯或者溶劑合物,
[0007]其中,
[0008] 以選自吖啶基 1位、2位、3位或4位取代的H、OH、0CH3、OCH2CH3、OCH2CH2CH3、OCH (CH3) 2、0CH( CH3) CH2CH3、0C (CH3) 3、OCH2CH2CH2CH3、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH3CHCH3、 CH3CHCH2CH3、( CH3) 3C或CH2CH2CH2CH3、F、Cl、Br、CF3、NH2、NO2、C00H、NHCOCH3 中的一種,R2為苯 基 2位、3 位或 4 位取代的-NH-、NHCH2、NHCH2CH2、NHCH2CH2CH2、NHCONH、NHCOCH2NH、NHCOCH2NH、 或 0CH2〇
[0009] 其中,所述化合物的RdPR2基選自:
[0010] R2 為 4-NH 且 Ri 為Η;
[0011] R2 為 4-ΝΗ 且 Ri 為 2-0CH3;
[0012] R2 為 4-NH 且 Ri 為 4-0CH3;
[0013] R2 為 4-NH 且 Ri 為 2-Bu;
[0014] R2 為 4-NH 且 Ri 為 2-CH3;
[0015] R2 為 4-NH 且 Ri 為 4-CH3;
[0016] R2 為 3-NH 且 Ri 為Η;
[0017] R2 為 3-ΝΗ 且 Ri 為 2-0CH3;
[0018] R2 為 3-NH 且 Ri 為 4-0CH3;
[0019] R2 為 3-NH 且 Ri 為 2-Bu;
[0020] R2 為 3-NH 且 Ri 為 2-CH3;
[0021] R2 為 3-NH 且 Ri 為 4-CH3;
[0022] R2 為 3-NH 且 Ri 為 2-C2H5;
[0023] R2 為 2-NH 且 Ri 為Η;或
[0024] R2 為 2-ΝΗ 且 Ri 為 2-0CH3 中的一種。
[0025]上述化合物結構式如下所示:
[0027] 本發(fā)明的另一個方面提供了前述化合物的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:
[0028] (1)以式II所示化合物與式III所示化合物反應,獲得式IV所示化合物;
[0029] (2)以式IV所示化合物與三氯氧磷反應,獲得式V所示化合物;
[0030] (3)以式VI所示化合物與式VII所示化合物反應,獲得式VIII所示化合物;
[0031] (4)以式V所示化合物與式VIII所示化合物反應,獲得式I所示化合物,
[0033] 其中,
[0034] 以選自吖啶基 1位、2位、3位或4位取代的H、OH、0CH3、OCH2CH3、OCH2CH2CH3、OCH (CH3) 2、0CH( CH3) CH2CH3、0C (CH3) 3、OCH2CH2CH2CH3、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH3CHCH3、 CH3CHCH2CH3、( CH3) 3C或CH2CH2CH2CH3、F、Cl、Br、CF3、NH2、NO2、C00H、NHCOCH3 中的一種,R2為苯 基 2位、3 位或 4 位取代的-NH-、NHCH2、NHCH2CH2、NHCH2CH2CH2、NHCONH、NHCOCH2NH、NHCOCH2NH、 或 0CH2〇
[0035] 其中,
[0036] 在步驟(1)中,以銅為催化劑、碳酸鉀作為堿,二甲基甲酰胺為溶劑;
[0037] 在步驟(3)中,以氧氣為氧化劑,二甲基甲酰胺為溶劑;
[0038]在步驟(4)中,以苯酚為溶劑。
[0039] 其中,
[0040] 在步驟(1)中,反應溫度為125_130°C,式II所示化合物與式III所示化合物的摩爾 比為1:1.2,溶劑為無水二甲基甲酰胺,反應時間為4-12小時;
[00411 在步驟(2)中,反應溫度為80-150°C,反應時間為3-12小時;
[0042] 在步驟(3)中,反應溫度為80-150°C,反應時間為10-15小時;
[0043] 在步驟(4)中,反應溫度為100_180°C,反應時間為2-6小時。
[0044] 本發(fā)明再一個方面提供了前述的化合物在制備藥物中的用途,所述藥物用于:
[0045] 1)抑制拓撲異構酶;
[0046] 2)抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)酶;通過抑制PARP酶與拓撲異構酶形成合 成致死效應,誘導腫瘤細胞凋亡;此外,PARP抑制劑也能緩解帕金森癥、老年癡呆癥、中風等 神經(jīng)退行性疾病的癥狀。
[0047] 3)抑制真核生物腫瘤細胞增殖;或
[0048] 4)預防和/或治療腫瘤。
[0049] 其中,真核生物腫瘤細胞為癌細胞、白血病癌細胞、乳腺癌細胞、肝癌細胞、胰腺癌 細胞、肺癌細胞、腦癌細胞、卵巢癌細胞、子宮癌細胞、睪丸癌細胞、皮膚癌細胞、胃癌細胞、 鼻咽癌細胞、結腸癌細胞、膀胱癌細胞或直腸癌細胞,
[0050] 所述白血病癌細胞優(yōu)選人慢性髓原白血病細胞,所述乳腺癌細胞優(yōu)選人乳腺癌細 胞;
[0051 ]腫瘤選自白血病、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、腦癌、卵巢癌、子宮癌、睪丸癌、皮膚 癌、胃癌、鼻咽癌、結腸癌、膀胱癌或直腸癌。
【附圖說明】
[0052] 圖la-lb顯示了典型化合物7與PARP-1(PDB ID:4R6E)分子模擬對接結果圖,
[0053] 其中,
[0054] 圖la-2b為化合物7與PARP-1相互作用,TYR907與化合物苯并咪唑上的兩個環(huán)及連 接鏈上的苯環(huán)均有:π-π相互作用,GLU763與連接鏈上的苯環(huán)有JT-JT相互作用。此外,氨基酸殘 基SER904、GLY863、ASP766也與化合物有著氫鍵相互作用。
[0055] 圖2a-2b顯示了典型化合物4與Topo II與DNA復合物(PDB ID:5EIX)分子模擬對接 結果圖,
[0056] 其中,
[0057] 圖2a_2b為化合物4與Topo II與DNA復合物相互作用,吖啶環(huán)嵌插入DNA結構并與 DNA形成強的相互作用,與連接鏈上的苯環(huán)一起共形成了 10個JT-JT相互作用。Topo II與化合 物上的酰胺鍵也形成了 3個氫鍵。
[0058]圖3顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個實施例,化合物1-15抑制拓撲異構酶ΙΙα的凝膠電泳 檢測結果圖。
【具體實施方式】
[0059] 下面詳細描述本發(fā)明的實施例。下面描述的實施例是示例性的,僅用于解釋本發(fā) 明,而不能理解為對本發(fā)明的限制。實施例中未注明具體技術或條件的,按照本領域內(nèi)的文 獻所描述的技術或條件或者按照產(chǎn)品說明書進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者,均 為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0060] 在本文中,"實施例沖斤示化合物"在本文中有時也稱為"化合物Ν",在本文中Ν為1-15的任意整數(shù),例如"實施例3所示化合物"在本文中也可以稱為"化合物3"。
[0061 ]拓撲酶活性及PARP酶活性。目前設計出的一系列4-酰胺基苯并咪唑吖啶類化合物 未有文獻報道。
[0062]在本發(fā)明的一個方面,本發(fā)明提供了 4-酰胺基苯并咪唑吖啶類化合物及其制備方 法和用途,其中,該化合物為具有式I所示結構式的4-酰胺基苯并咪唑吖啶類化合物或具有 式I所示結構式的4-酰胺基苯并咪唑吖啶類化合物的藥學上可接受的鹽、酯或者溶劑合物,
[0064] 其中,
[0065] 以選自吖啶基 1位、2位、3位或4位取代的H、OH、0CH3、OCH2CH3、OCH2CH2CH3、0CH (CH3) 2、OCH( CH3) CH2CH3、OC (CH3) 3、OCH2CH2CH2CH3、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH3CHCH 3、 CH3CHCH2CH3、( CH3) 3C或CH2CH2CH2CH3、F、Cl、Br、CF3、NH2、N〇2、COOH、NHCOCH3 中的一種,R2為苯 基 2位、3 位或 4 位取代的-NH-、NHCH2、NHCH2CH2、NHCH2CH2CH2、NHCONH、NHCOCH2NH、NHCOCH2NH、 或 0CH2〇
[0066] 本發(fā)明的化合物能夠有效抑制拓撲異構酶、抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP) 酶、抑制真核生物腫瘤細胞增殖、預防或治療腫瘤。
[0067] 本發(fā)明提供的化合物經(jīng)過多種腫瘤細胞系測試(包括肝癌細胞,白血病細胞等)以 及DNA連接,拓撲異構酶測試,PARP酶測試,證明本發(fā)明的化合物是一種潛在的具有DNA連接 以及對拓撲異構酶及PARP酶有抑制活性的抗腫瘤藥物。本發(fā)明提供的化合物原料易得,制 備方法簡單,實驗證明其有良好的抗癌效果,在抗腫瘤藥物設計研發(fā)領域有著良好的應用 前景。
[0068] 發(fā)明人發(fā)現(xiàn),利用本發(fā)明的方法能夠快速有效地制備獲得前面所述的化合物,且 該方法操作簡單、方便快捷、適于規(guī)?;a(chǎn)。
[0069] 在本發(fā)明的再一方面,本發(fā)明提供了前面所述化合物在制備藥物中的用途。根據(jù) 本發(fā)明的實施例,所述藥物用于抑制拓撲異構酶、抑制PARP酶、抑制真核生物腫瘤細胞增 殖、預防和/或治療腫瘤。
[0070] 在本發(fā)明的又一方面,本發(fā)明提供了一種藥物。根據(jù)本發(fā)明的實施例,該藥物含有 前面所述的化合物。發(fā)明人發(fā)現(xiàn),本發(fā)明的藥物能夠有效抑制拓撲異構酶、抑制PARP酶、抑 制真核生物腫瘤細胞增殖、預防和/或治療腫瘤。
[0071] 需要說明的是,本發(fā)明的上述藥物可通過注射、噴射、滴鼻、滴眼、滲透、吸收、物理 或化學介導的方法導入機體,如肌肉、皮內(nèi)、皮下、靜脈、粘膜組織;也可被其他物質(zhì)混合或 包裹后導入機體。需要的時候,在上述藥物中還可以加入一種或多種藥學上可接受的載體。 所述載體包括藥學領域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進 劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等。另外,本發(fā)明的藥物可以制成注射液、片劑、粉劑、顆 粒劑、膠囊、口服液、膏劑、霜劑等多種形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學領域的常 規(guī)方法制備。
[0072]根據(jù)本發(fā)明的實施例,所述藥物用于:1)抑制拓撲異構酶;2)抑制PARP酶;3)抑制 真核生物腫瘤細胞增殖;4)預防和/或治療腫瘤。
[0073] 根據(jù)本發(fā)明的實施例,所述拓撲異構酶為拓撲異構酶ΙΙα,所述PARP酶為PARP-1。
[0074] 根據(jù)本發(fā)明的實施例,所述真核生物為哺乳動物;所述腫瘤細胞為癌細胞;所述癌 細胞為白血病癌細胞、乳腺癌細胞、肝癌細胞、胰腺癌細胞、肺癌細胞、腦癌細胞、卵巢癌細 胞、子宮癌細胞、睪丸癌細胞、皮膚癌細胞、胃癌細胞、鼻咽癌細胞、結腸癌細胞、膀胱癌細胞 或直腸癌細胞,其中,所述白血病癌細胞優(yōu)選人慢性髓原白血病細胞,所述乳腺癌細胞優(yōu)選 人乳腺癌細胞。
[0075] 在本發(fā)明的另一方面,本發(fā)明提供了一種制備前面所述化合物的方法。根據(jù)本發(fā) 明的實施例,該方法包括以下步驟:
[0076]代表性化合物制備方法:
[0077]化合物V的制備:
[0078]向一個100mL圓底燒瓶中加入不同取代基的苯胺(1 . OOmmol),鄰氯苯甲酸 (3 · OOmmo 1),Cu粉(Ο · 50mmo 1)以及碳酸鉀(3 · OOmmo 1),加入30mL DMF溶解,在 130 °C 下反應 6h JLC檢測反應,反應完全后將反應液冷卻,娃藻土過濾銅粉,將濾液加入100mL水中,用濃 鹽酸調(diào)節(jié)pH直至pH = 7,此時有大量固體析出,過濾得到產(chǎn)物的粗產(chǎn)品,烘箱干燥除水后加 入至100mL圓底燒瓶中,加入20mL三氯氧磷回流反應4h。停止加熱使反應液冷卻,將反應液 逐滴滴入冰水中,劇烈攪拌,然后用NaOH調(diào)節(jié)pH至pH=7,析出產(chǎn)物,將產(chǎn)物用柱色譜分離得 到不同取代基的9-氯吖啶。
[0079]化合物VI的制備:
[0080]向一個100mL的圓底燒瓶中加入2-氨基3-硝基苯甲酸(5g,27.5mmol),加入氯化亞 砜30mL,80 °C反應兩個小時,反應液由黃色變?yōu)殚偌t色后將反應液冷卻,逐滴滴入冰水浴的 氨水中,析出橘紅色固體,抽濾,干燥,得到2-氨基3-硝基苯甲酰胺。將產(chǎn)物收集,加入至 100mL的圓底燒瓶中,用無水乙醇溶解,加入雷尼鎳,再加入80 %水合肼15mL,加熱至80 °C回 流反應12h,反應完全后用硅藻土過濾雷尼鎳,柱色譜分離得到純品2,3_二氨基苯甲酰胺 (3g,19.9mmol),產(chǎn)率 72%〇 [0081 ] 化合物VIII的制備:
[0082]向一個100mL的圓底燒瓶中加入2,3-二氨基苯甲酰胺(0.9g,6mmo 1),加入相應取 代基的硝基苯甲醛(1.18,6.6臟〇1),加入乙酸銨(1.48,18臟〇1),加入3〇1111^?溶解,敞口反 應12h,TLC監(jiān)測反應,反應完全后停止加熱,待反應液冷卻后將其逐滴滴加到50mL水中,析 出沉淀,過濾并收集沉淀,烘干,得到不同硝基取代的粗產(chǎn)品。將粗產(chǎn)品加入100mL的圓底燒 瓶中,用無水乙醇溶解,加入雷尼鎳,再加入80 %水合肼15mL,加熱至80°C回流反應12h,TLC 監(jiān)測反應,反應完全后用硅藻土過濾雷尼鎳,柱色譜分離得到純品苯并咪唑甲酰胺?;衔?I的制備:
[0083] 向一個50mL的圓底燒瓶中加入1-苯胺苯并咪唑甲酰胺(100mg,0.40mmol),不同取 代基的9-氯吖啶(0.44mmol),過量苯酚作為溶劑,用氬氣保護,先升溫至60°C使苯酚融化后 開始攪拌,維持〇.5h后升溫至120°C反應2h,將產(chǎn)物逐滴滴入乙酸乙酯中,析出固體,過濾收 集固體,得到粗產(chǎn)品。將粗產(chǎn)品繼續(xù)用新的乙酸乙酯攪拌24h,過濾收集,反復兩次,抽濾干 燥得到純產(chǎn)品。
[0084] 實施例1:2-[4_(吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺的制備 [0085] 將9-氯卩丫啶(lmmol)與2-(4-氨基苯基)苯并咪唑4-甲酰胺(1 · 2mmol)加入到1 · 5g 苯酚中,氬氣保護,先升溫至60°C使苯酚融化,開始攪拌,后于120°C下攪拌2小時,將反應液 緩慢滴入50mL乙酸乙酯中,產(chǎn)生大量沉淀,抽濾,用新的乙酸乙酯再攪拌洗滌除去苯酚,得 到2-[ 4-(吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺。產(chǎn)率60 %。
[0086]化合物結構確認數(shù)據(jù)為:
[0087] 咕匪1?(40010^,0150)37.369(七,1!1,了 = 8.2!^),7.519(七,2!1,了 = 8.2!^),7.617 (d,2H,J = 8.4Hz) ,7.76(d,2H,J = 8.4Hz),7.89(d,lH,J = 8.4Hz),8.039(t,2H,J = 8.4Hz), 8.372(m,3H),11,691(s,1H),13.747(s , 1H) ; 13C NMR(100MHz,DMS0, ppm):166.745, 155.295,151.648,140.691,135.946,128.911,127.416,124.676,124.517,123.501, 122.933,122.690,119.910,115.122.
[0088] 實施例2:2-[4_(2-甲氧基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺的制備
[0089] 將2-甲氧基9-氯吖啶(lmmol)與2-(4-氨基苯基)苯并咪唑4-甲酰胺(1.2mmol)加 入到1.5g苯酚中,氬氣保護,先升溫至60°C使苯酚融化,開始攪拌,后于120°C下攪拌2小時, 將反應液緩慢滴入50mL乙酸乙酯中,產(chǎn)生大量沉淀,抽濾,用新的乙酸乙酯再攪拌洗滌除去 苯酚,得到2-[4-(2_甲氧基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺。產(chǎn)率55%。
[0090] 化合物結構確認數(shù)據(jù)為:
[0091] 咕匪R(400MHz,DMS0)S3.765(s,3H),7.359(t, 1H, J = 8Hz),7.481(d,lH,J = 8Hz),7.556(d,2H ,J = 8.4Hz),7.751-7.797(m,3H),7.878(d,lH ,J = 8Hz),7.990(t,lH ,J = 8Hz),8.157-8.180(m,3H),8.364(d,2H),9.305(s,lH),11.425(s,1H) 13C 匪R(100MHz, DMS0,ppm):166.740,156.366,152.976,151.729,144.235,139.785,136.620,134.999, 129.130,128.756,126.785,126.034,124.826,124.098,123.452,122.861,122.649, 121.950,120.265,116.909,115.149,103.742,56.322.
[0092] 實施例3:2-[4_(4-甲氧基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺的制備
[0093] 將3-甲氧基9-氯吖啶(lmmol)與2-(4-氨基苯基)苯并咪唑4-甲酰胺(1.2mmol)加 入到1.5g苯酚中,氬氣保護,先升溫至60°C使苯酚融化,開始攪拌,后于120°C下攪拌2小時, 將反應液緩慢滴入50mL乙酸乙酯中,產(chǎn)生大量沉淀,抽濾,用新的乙酸乙酯再攪拌洗滌除去 苯酚,得到2-[ 4-( 3-甲氧基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺。產(chǎn)率58 %。
[0094]化合物結構確認數(shù)據(jù)為:
[0095] 4^^(40010^,01^0)33.765(8,311),7.379(111,210,7.449-7.632(111,310,7.774-7.853(m,4H),7.879-7.956(m,2H),8.021-8.395(m,2H),8.480(d,lH,J=8Hz),9.248(s, 1H) 13C NMR(100MHz,DMS0,ppm):166.739,155.508,151.571,149.039,140.460,135.754, 132.578,128.933,126.209,124.985,124.597,123.555,123.040,120.690,117.478, 115.884,115.424,113.682,57.423.
[0096] 實施例4:2_[ 4-( 2-丁基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺的制備
[0097] 將2-丁基9-氯吖啶(lmmol)與2-(4-氨基苯基)苯并咪唑4-甲酰胺(1.2mmol)加入 至|J 1.5g苯酚中,氬氣保護,先升溫至60°C使苯酚融化,開始攪拌,后于120°C下攪拌2小時,將 反應液緩慢滴入50mL乙酸乙酯中,產(chǎn)生大量沉淀,抽濾,用新的乙酸乙酯再攪拌洗滌除去苯 酚,得到2_[4-(2-丁基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺。產(chǎn)率54%。
[0098]化合物結構確認數(shù)據(jù)為:
[0099] 4 MMR(400MHz,DMS0)S0.753(m,2H),1.202(m,3H),1.471(m,2H),2.642(m,2H) 7·367(m,lH),7.530-7.603(m,2H),7.761-8.086(m,7H),8.379(m,2H),9.334(s,1H), 11·509(s,lH),13.633(s,lH),14.835(s,lH);13C 匪R(100MHz,DMS0,ppm):166.605, 154.849,151.264,142.478,140.159,139.276,138.812,137.430,135.595,131.124, 131.033,126.488,126.017,125.639,124.565,124.295,123.519,123.028,122.949, 119.804,119.736,114.580,114.374,34.984,32.607,21.873,13.975
[0100] 實施例5:2-[4-(2-甲基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺的制備
[0101] 將2-甲基9-氯吖啶(lmmol)與2-(4-氨基苯基)苯并咪唑4-甲酰胺(1.2mmol)加入 至|J 1.5g苯酚中,氬氣保護,先升溫至60°C使苯酚融化,開始攪拌,后于120°C下攪拌2小時,將 反應液緩慢滴入50mL乙酸乙酯中,產(chǎn)生大量沉淀,抽濾,用新的乙酸乙酯再攪拌洗滌除去苯 酚,得到2-[4-(2-甲基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺。產(chǎn)率48%。
[0102]化合物結構確認數(shù)據(jù)為:
[0103] 咕 NMR(400MHz,DMS0)δ2.854(s,3H) ,7.413-7.466(m,2H) ,7.531 (t,1H,J = 8.8Hz),7.598(d,2H,J = 8.8Hz),7.95(d,2H,J = 8Hz),7.785-7.922(m,2H),8.053(t,lH,J = 7.6Hz),8.273(d,lH,J = 8.8Hz),8.332-8.384(m,3H),8.586(d,lHJ = 8.8Hz),9.188(s, 1H)13C NMR(100MHz,DMS0,ppm):166.761,151.522,141.072,139.807,136.588,135.817, 129.077,128.519,126.072,124.904,124.476,124.370,124.292,123.642,123.190, 122.618,120.834,116.079,115.538,115.165,18.965.
[0104] 實施例6:2-[ 4-( 4-甲基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺的制備
[0105] 將3-甲基9-氯吖啶(lmmol)與2-(4-氨基苯基)苯并咪唑4-甲酰胺(1.2mmol)加入 至|J 1.5g苯酚中,氬氣保護,先升溫至60°C使苯酚融化,開始攪拌,后于120°C下攪拌2小時,將 反應液緩慢滴入50mL乙酸乙酯中,產(chǎn)生大量沉淀,抽濾,用新的乙酸乙酯再攪拌洗滌除去苯 酚,得到2-[4-(3-甲基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺。產(chǎn)率45%。
[0106] 化合物結構確認數(shù)據(jù)為:
[0107] 4^^(40010^,01^0)32.856(8,311),7.391-7.608(111,411),7.802(111,110,7.885-7.954(m,2H) ,8.057(t,lH,J = 8Hz),8.275((1, lH,J = 8.4Hz) ,8.329-8 ·384(ι?,2H) ,8.577 (d,1H)13C 匪R(100MHz,DMS0,ppm):166.048,150.809,140.359,139.094,135.875, 135.104,128.364,127.806,125.358,124.191,123.763,123.656,123.579,122.928, 122.476,121.905,120.121,115.366,114.825,114.452,18.252.
[0108] 實施例7:2_[ 3-(吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺的制備
[0109] 將9-氯卩丫啶(lmmol)與2-(3-氨基苯基)苯并咪唑4-甲酰胺(1 · 2mmol)加入到1 · 5g 苯酚中,氬氣保護,先升溫至60°C使苯酚融化,開始攪拌,后于120°C下攪拌2小時,將反應液 緩慢滴入50mL乙酸乙酯中,產(chǎn)生大量沉淀,抽濾,用新的乙酸乙酯再攪拌洗滌除去苯酚,得 到2-[ 3-(吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺。產(chǎn)率60 %。
[0110]化合物結構確認數(shù)據(jù)為:
[0111] 咕 M!R(400MHz,DMS0)S7.365(t,lH,J = 8.4Hz),7.478-7.560(m,3H),7.677-7.889(m,4H),8.034(t,2H ,J = 8.4Hz),8.144(d,2H ,J = 8.4Hz),8.291-8.354(m,3H),8.423 (s,1H),9.261(s,1H),11.689(s,1H),13.706(s,1H); 13C NMR(100MHz,DMS0,ppm):166.616, 155.621,151.362,142.547,140.652,135.909,131.293,131.104,129.799,126.425, 126.291,125.814,124.546,123.580,123.066,119.850,115.705,114.581
[0112] 實施例8:2-[3_(2-甲氧基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺的制備
[0113] 將2-甲氧基9-氯吖啶(lmmol)與2-(3-氨基苯基)苯并咪唑4-甲酰胺(1.2mmol)加 入到1.5g苯酚中,氬氣保護,先升溫至60°C使苯酚融化,開始攪拌,后于120°C下攪拌2小時, 將反應液緩慢滴入50mL乙酸乙酯中,產(chǎn)生大量沉淀,抽濾,用新的乙酸乙酯再攪拌洗滌除去 苯酚,得到2-[3-(2-甲氧基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺。產(chǎn)率55%。
[0114]化合物結構確認數(shù)據(jù)為:
[0115] 4 MMR(400MHz,DMS0)S3.756(s,3H),7.367(t,lH,J = 8Hz),7.44h7.522(m,2H), 7.673-7.890(m,6H),7.986(t,lH,J = 8.4Hz),8.123-8.190(m,3H),8.250(d,lH,J = 8Hz), 8.386(s,lH),9.236(s,lH),11.379(s,lH),13.654(s,lH) ;13C 匪R(100MHz,DMS0,ppm): 166.740,151.417,151.255,142.534,141.076,138.907,135.732,134.786,133.856, 131.019,130.819,126.203,124.750,124.256,123.744,123.386,122.732,120.725, 116.278,114.391.
[0116] 實施例9:2-[ 3-( 4-甲氧基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺的制備
[0117] 將3-甲氧基9-氯吖啶(lmmol)與2-(3-氨基苯基)苯并咪唑4-甲酰胺(1.2mmol)加 入到1.5g苯酚中,氬氣保護,先升溫至60°C使苯酚融化,開始攪拌,后于120°C下攪拌2小時, 將反應液緩慢滴入50mL乙酸乙酯中,產(chǎn)生大量沉淀,抽濾,用新的乙酸乙酯再攪拌洗滌除去 苯酚,得到2-[ 3-( 3-甲氧基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺。產(chǎn)率50 %。
[0118] 化合物結構確認數(shù)據(jù)為:
[0119] ΧΗ NMR(400MHz,DMS0)53.765(s,3H),7.379(m,2H),7.449-7.632(m,3H),7.774-7.853(m,4H),7.879-7.956(m,2H),8.021-8.395(m,2H),8.480(d,lH,J=8Hz),9.248(s, 1H) 13C NMR(100MHz,DMS0,ppm):166.669,154.776,153.165,151.593,148.983,140.611, 134.901,132.590,131.152,130.926,130.116,129.990,126.313,125.436,124.909, 124.219,123.785,123.506,122.958,121.981,120.537,117.662,115.973,115.575, 115.203,113.116,57.218.
[0120] 實施例10:2-[3_(2-丁基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺的制備
[0121] 將2-丁基9-氯吖啶(lmmol)與2-(3-氨基苯基)苯并咪唑4-甲酰胺(1.2mmol)加入 至|J 1.5g苯酚中,氬氣保護,先升溫至60°C使苯酚融化,開始攪拌,后于120°C下攪拌2小時,將 反應液緩慢滴入50mL乙酸乙酯中,產(chǎn)生大量沉淀,抽濾,用新的乙酸乙酯再攪拌洗滌除去苯 酚,得到2-[3-(2-丁基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺。產(chǎn)率55%。
[0122] 化合物結構確認數(shù)據(jù)為:
[0123] 4 MMR(400MHz,DMS0)S0.709(m,3H),1·109(m,2H),1.393-1.468(m,2H),2.603 (m,2H),7.361(t,lH),7.516-7.692(m,2H),7.712-7.925(m,5H),8.030-8.165(m,4H), 8.307(d,lH,J = 8Hz),8.387(s,lH),8.410(s,lH),9.216(s,lH) ,11.571 (s,lH) ;13C NMR (100MHz,DMS0,ppm):166.656,154.899,151.315,142.529,140.209,139.327,138.864, 137.482,135.647,131.175,131.085,126.537,126.069,124.618,124.344,123.570, 123.079,122.998,119.855,119787,114.631,114.425,35·034,32.656,21.923,14.025.
[0124] 實施例11:2_[ 3-( 2-甲基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺的制備
[0125] 將2-甲基9-氯吖啶(lmmol)與2-(3-氨基苯基)苯并咪唑4-甲酰胺(1.2mmol)加入 至|J 1.5g苯酚中,氬氣保護,先升溫至60°C使苯酚融化,開始攪拌,后于120°C下攪拌2小時,將 反應液緩慢滴入50mL乙酸乙酯中,產(chǎn)生大量沉淀,抽濾,用新的乙酸乙酯再攪拌洗滌除去苯 酚,得到2-[3-(3_甲基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺。產(chǎn)率51 %。
[0126] 化合物結構確認數(shù)據(jù)為:
[0127] 4 MMR(400MHz,DMS0)S2.842(s,3H) ,7.343-7 ·433(ι?,2H) ,7.488-7 ·505(ι?,2H), 7.670(t,lH,J = 8Hz) ,7.744-7.888(m,2H) ,8.018(t,lH,J = 8Hz) ,8.255-8.320(m,3H), 8.389(s,lH),8.550(d,lH,J = 8Hz),9.243(s,lH),11.716(s,1H);13C NMR(100MHz,DMS0, ppm):166·660,154·757,151·349,142·503,140·484,138·930,138·047,135·608,134·586, 130.964,126.362,125.708,124.572,124.394,123.616,123.132,122.983,119.944, 119.723,115.013,114.331,21.635.
[0128] 實施例12:2_[ 3-(4-甲基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺的制備
[0129] 將3-甲基9-氯吖啶(lmmol)與3-(4-氨基苯基)苯并咪唑4-甲酰胺(1.2mmol)加入 到1.5g苯酚中,氬氣保護,先升溫至60°C使苯酚融化,開始攪拌,后于120°C下攪拌2小時,將 反應液緩慢滴入50mL乙酸乙酯中,產(chǎn)生大量沉淀,抽濾,用新的乙酸乙酯再攪拌洗滌除去苯 酚,得到2-[3-(3-甲基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺。產(chǎn)率58%。
[0130] 化合物結構確認數(shù)據(jù)為:
[0131] 4 MMR(400MHz,DMS0)S2·842(s,3H),7·343-7·433(m,2H),7·488-7·505(m,2H), 7.670(t,lH,J = 8Hz) ,7.744-7.888(m,2H),8.018(t,lH,J = 8Hz) ,8.255-8.320(m,3H), 8.389(s,lH),8.550(d,lH,J = 8Hz),9.243(s,lH),11.716(s,1H);13C NMR(100MHz,DMS0, ppm):166·660,154·757,151·349,142·503,140·484,138·930,138·047,135·608,134·586, 130.964,126.362,125.708,124.572,124.394,123.616,123.132,122.983,119.944, 119.723,115.013,114.331,18.962.
[0132] 實施例13:2-[3_(4-乙基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺的制備
[0133] 將3-乙基9-氯吖啶(lmmol)與3-(4-氨基苯基)苯并咪唑4-甲酰胺(1.2mmol)加入 至|J 1.5g苯酚中,氬氣保護,先升溫至60°C使苯酚融化,開始攪拌,后于120°C下攪拌2小時,將 反應液緩慢滴入50mL乙酸乙酯中,產(chǎn)生大量沉淀,抽濾,用新的乙酸乙酯再攪拌洗滌除去苯 酚,得到2-[3-(3-乙基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺。產(chǎn)率53%。
[0134] 化合物結構確認數(shù)據(jù)為:
[0135] 4 MMR(400MHz,DMS0)S1·189-1·227(m,2H),1·362-1·379(m,2H),7·389-7.462 (m,3H),7.547(m,lH),7.642-7.700(m,lH),7.774-7.820(m,lH),7.901(m,2H),8.000-8.018(m,lH) ,8.138(m,lH) ,8.335(m, 2H), 8.451 (s , 1H), 8.689(d, 1H ,J = 8Hz), 9.154(s, 1H),11.921(s,1H),13.043(s,1H);13C 匪R(100MHz,DMS0,ppm):166.740,151.417, 151.255,142.534,141.076,138.907,135.732,134.786,133.846,131.019,130.809, 126.103,124.650,124.256,123.744,123.386,122.722,120.725,116.278,114.391, 24.199,14.426.
[0136] 實施例14:2-[2_(吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺的制備
[0137] 將9-氯卩丫啶(lmmol)與2-(2-氨基苯基)苯并咪唑4-甲酰胺(1 · 2mmol)加入到1 · 5g 苯酚中,氬氣保護,先升溫至60°C使苯酚融化,開始攪拌,后于120°C下攪拌2小時,將反應液 緩慢滴入50mL乙酸乙酯中,產(chǎn)生大量沉淀,抽濾,用新的乙酸乙酯再攪拌洗滌除去苯酚,得 到2-[2-(吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺。產(chǎn)率52%。
[0138] 化合物結構確認數(shù)據(jù)為:
[0139] 4 MMR(400MHz,DMS0)S7·283-7·322(m,2H),7·451(m,1H),7·552-7·700(m,5H), 7.748-7.769(m,2H),7.896-7.936(m,2H),8.189-8.212(m,2H),8.486(s,1H),14.315(s, 1H);
[0140] 實施例15:2_[ 2-( 2-甲氧基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺的制備
[0141 ] 將2-甲氧基9-氯吖啶(lmmol)與2-(2-氨基苯基)苯并咪唑4-甲酰胺(1.2mmol)加 入到1.5g苯酚中,氬氣保護,先升溫至60°C使苯酚融化,開始攪拌,后于120°C下攪拌2小時, 將反應液緩慢滴入50mL乙酸乙酯中,產(chǎn)生大量沉淀,抽濾,用新的乙酸乙酯再攪拌洗滌除去 苯酚,得到2-[2-(2-甲氧基吖啶-9-氨基)苯基]苯并咪唑-4-甲酰胺。產(chǎn)率57%。
[0142] 化合物結構確認數(shù)據(jù)為:
[0143] ΧΗ NMR(400MHz,DMS0)57.276-7.324(m,2H),7.437-7.473(m,lH),7.555(m,2H), 7.607-7702(m,4H),7.762(d,lH,J=8Hz),7·901-7.939(m,3H),8.193-8.223(m,2H),8.470 (s,lH);
[0144] 實施例16 :MTT法細胞增殖抑制活性篩選
[0145] 通過MTT法,采用人慢性粒細胞白血病(CML)細胞系K562及乳腺癌細胞系MCF-7,檢 測實施例1-15制備獲得的化合物細胞增殖抑制活性。其中,實驗所用的K562為懸浮細胞,用 含體積分數(shù)為10%胎牛血清的RPM-1640培養(yǎng)液,于37°C、體積分數(shù)為5%的C0 2條件下常規(guī) 培養(yǎng);MCF-7為貼壁生長細胞,用含體積分數(shù)為10 %的胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液,于37 °C、體積 分數(shù)為5 %的C02條件下常規(guī)培養(yǎng)。
[0146] 具體操作如下:
[0147] 取對數(shù)生長期的K562細胞及MCF-7細胞,將其lOOOrpm離心5分鐘,吸走上清液,將 其用培養(yǎng)基稀釋為密度為〇. 6 X 105個/mL到1 X 105個/mL的溶液,混勻接種到96孔板中,每孔 l〇〇yL,孔板邊緣用滅菌PBS填充。由于細胞會沉降,所以接種過程中要反復多次混勻,或是 將混勻后的細胞懸液分裝至EP管再接種。
[0148] 對于懸浮細胞K562,可以直接按所需檢測的藥物梯度濃度加藥,對于貼壁細胞 MCF-7,則需間隔半天時間,即前一天下午鋪板,第二天上午進行加藥。加藥時按照lmL培養(yǎng) 基中含有1〇μL化合物的DMS0溶液,設置5個復孔,并且設置空白組(不加入培養(yǎng)基),陽性藥 對照組(加入陽性藥物),正常細胞組(不加藥物),陰性對照組(加入1 %的DMS0溶液)。貼壁 細胞加藥時,將96孔板中的培養(yǎng)基上清液吸去,加入含有指定濃度藥物的新培養(yǎng)基,確保藥 物濃度精確可信。并且過程中由于加藥需要時間,不可直接將96孔板上的培養(yǎng)基上清液都 吸去,應該吸去一部分后進行加藥,然后在吸取一部分繼續(xù)進行加藥。
[0149] 加完藥物后在37 °C的含有5 %體積分數(shù)的二氧化碳的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h,完畢后往 每個孔內(nèi)加入l〇yL MTT,繼續(xù)培養(yǎng)4h。最后終止培養(yǎng),吸去上清液,每孔加入100yL DMS0溶 解甲瓚,在酶標儀上490nm處檢測各孔吸光值0D。根據(jù)0D值計算出細胞增殖抑制率IR:
[0150] IR( % ) = (0D對照一0D待測化合物)/(0D對照一0D空白)X 100%
[0151] 實驗結果見表1.
[0152] 表1合成的化合物的體外細胞增殖抑制活性
[0155] 注:IC5Q表示半數(shù)抑制濃度。
[0156] 從表1中可以看出,由總體上來看,化合物對K562的抑制效果要優(yōu)于MCF-7,并且部 分化合物對K562的IC5Q達到nM級別,最好的化合物是7,IC 5Q為407nM,而在MCF-7上則最好的 化合物是12,只能達到3.6μΜ級別。對于K562:由1,7,14可以看出,苯并咪唑環(huán)與吖啶環(huán)的距 離對化合物的活性有較大影響,其中7的活性最好,14次之,1最差,推測是與化合物上的電 子云密度有關,7構型的電子云密度與DNA結合最為緊密,抑制了 Τορο與DNA結合。由化合物 2,3,8,9可以看出,吖啶環(huán)上的取代基的位置對其活性影響并不大。由化合物2,5,8,11可以 看出,吖啶環(huán)上增加帶負電荷的基團對活性的降低較為明顯,推測應為帶負電荷的基團與 DNA自身負電荷相斥,不利于化合物嵌入DNA結構,所以導致活性降低。而由4-6,10-13可以 看出,吖啶環(huán)上取代基的鏈長對活性的影響不大,總體來說鏈長越短活性越好。
[0157] 對于MCF-7 :由1,7,14可知,其連接基團離苯并咪唑的距離影響化合物的活性,離 苯并咪唑越遠,其抑制活性越好。由化合物1,2,4,7,8,10可以看出,吖啶環(huán)上取代基的長短 也會影響活性,取代基越長,化合物活性越差,推測是由于化合物的位阻導致的。由化合物 3,6,9,12,13可以看出取代基在吖啶環(huán)4位時比在吖啶環(huán)2位時活性要好,印證了之前的結 果。與此同時,對比這幾個化合物結果,吖啶環(huán)上取代基的位置對活性影響較小,而取代基 的長短對化合物活性影響較大,不含取代基時化合物的活性相對較好。體外細胞實驗表明, 同時抑制Τορο和PARP-1的活性,能更有效地抑制腫瘤細胞的生長,體現(xiàn)雙靶點的協(xié)同效應。 與此同時,我們發(fā)現(xiàn),化合物中12在MCF-7中IC 5Q能夠達到3.6μΜ,相比已經(jīng)上市的Olaprib在 120h時對MCF-7半抑制濃度5.8μΜ,可以證明本發(fā)明化合物設計的合理性及可行性,以及雙 靶點抑制劑的優(yōu)越性。
[0158] 實施例17:拓撲異構酶實驗
[0159] 利用化合物1-15進行拓撲異構酶試驗,具體操作如下:
[0160] 首先先將合成的化合物用DMS0配制成5mM的濃度,往八聯(lián)管內(nèi)加入0.4yL的化合物 DMS0溶液、陽性對照藥及DMS0,置于4 °C冰盒中保存?zhèn)溆?。接著往EP管中依次加入340yL蒸餾 水,40yL 10XΤορο II Reaction Buffer,20yLpBR322DNA,混勻后取20yL加入作為空白對 照的八聯(lián)管中,然后按照每20yL加入1個活性單位的量向EP管中加入相應活性單位的Topo IIα,混勻后加入到各個加藥的八聯(lián)管及陰性對照中,每管20μL,在37°C培養(yǎng)箱中孵育 15min。孵育結束后取出,加入4yL的6 X Loading Buffer終止反應。在事先配好的0.8%的瓊 脂糖凝膠上上樣,80V電壓下電泳30min。電泳結束后取出凝膠,在EB溶液(2.5yg/mL)中染色 15min,接著用清水漂洗5min,在凝膠成像系統(tǒng)中拍照記錄實驗結果。
[0161] 為了檢驗合成的一系列化合物的活性并且分析化合物設計的合理性,本文檢驗了 化合物1-15的Topo抑制活性,如圖3所示。其中Blank代表只加了 pBR322DNA的空白對照組, Topo II代表加入了Topo IIa+pBR322DNA的陰性對照組,Etopo代表加入了Etopo+Topo ΙΙα +PBR322DNA的陽性對照組,化合物1-15代表了加入不同藥物及Topo Ila+PBR322DNA。可以 看出,大部分設計的化合物均具有Topo ΙΙα的抑制活性。
[0162] 實施例18:PARP酶實驗
[0163] 利用化合物1-15進行PARP-1試驗,具體操作如下:
[0164] 首先先將1 XPAPR buffer加入含有組蛋白的96孔板中50yL/well,孵化30min后輕 拍除去buffer。接著把不同梯度濃度的抑制劑加入96孔板中,每孔15yL,每個梯度作5個復 孔。接著把稀釋好的PARP-HSA加入到孔中,每孔10yL,室溫孵育lOmin。按每孔用量10XPARP Cocktail2·5μL ;10X受損DNA2·5μL;lXPARPbuffer20μL加入EP管內(nèi),混合搖勻,然后將 配好的混合液加入到孔中,每孔25yL,室溫孵育60min。接著用1 XPBS+0. l%Triton X-100 每孔200yL將孔清洗兩次,接著用1 X PBS繼續(xù)清洗兩次,最后除去孔內(nèi)所有液體。接著往孔 內(nèi)加入Strep-HRP,每孔50yL,孵育60min。繼續(xù)用 1 XPBS+0 · 1 %Triton X-100每孔200yL將 孔清洗兩次,接著用1 X 繼續(xù)清洗兩次,最后除去孔內(nèi)所有液體。最后用TACS-Sapphire 加入孔內(nèi),每孔50yL,避光室溫孵育15min,對體系進行染色。最后加入0.2M HC1每孔50yL終 止反應,用酶標儀在450nm下測定吸光度0D。抑制率IR:
[0165] IR( % ) = (0D對照一0D待測化合物)/(0D對照一0D空白)X 100%
[0166] 實驗結果見表2.
[0167] 表2合成的化合物對PARP1的體外抑制活性
[0170] 注:IC5Q表示半數(shù)抑制濃度。
[0171] 結果表明,化合物1-15對PARP-1有著良好的抑制活性,大部分處于納摩爾級別?;?合物1,7,14可以看出,連接鏈苯環(huán)上的取代基的位置對靶點的抑制活性有一定的影響,對 位的取代基的活性最好。由分子對接可以看出,這跟PARP的空腔結構有關,連接鏈的基團離 苯并咪唑結構越近,其藥效也就越差。此外,由3,4,5,8,9,11,12可知,在吖啶環(huán)4號位取代 時比吖啶環(huán)2號位取代時活性要好,這也印證了分子對接的結果,取代基遠離連接鏈能夠使 苯并咪唑環(huán)更容易進入PARP-1空腔形成配位作用達到抑制效果。由2,4,8,10可知,吖啶環(huán) 上的取代基的疏水性對化合物活性也有影響,吖啶環(huán)上的含有親水性取代基時,化合物的 活性會下降,說明遠離苯并咪唑側的藥效團應該為疏水基團。由4,5,6,10,11,12,13可知, 在同為烷基鏈取代的情況下,烷基鏈越長,則活性越差,說明空間位阻也會對化合物活性有 影響。對比之前工作CN201410095626中的化合物21,如表2底部所示,可以看到甲酰胺基團 是PARP-1的關鍵藥效團。
[0172] 在本說明書的描述中,參考術語"一個實施例"、"一些實施例"、"示例"、"具體示 例"、或"一些示例"等的描述意指結合該實施例或示例描述的具體特征、結構、材料或者特 點包含于本發(fā)明的至少一個實施例或示例中。在本說明書中,對上述術語的示意性表述不 必須針對的是相同的實施例或示例。而且,描述的具體特征、結構、材料或者特點可以在任 一個或多個實施例或示例中以合適的方式結合。此外,在不相互矛盾的情況下,本領域的技 術人員可以將本說明書中描述的不同實施例或示例以及不同實施例或示例的特征進行結 合和組合。
[0173] 盡管上面已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實施例,可以理解的是,上述實施例是示例 性的,不能理解為對本發(fā)明的限制,本領域的普通技術人員在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以對上述 實施例進行變化、修改、替換和變型。
【主權項】
1. 一種4-酰胺基苯并咪唑吖啶類化合物,其特征在于,所述化合物為具有式I所示結構 式的苯并咪唑吖啶類化合物或具有式I所示結構的苯并咪唑吖啶類化合物的藥學上可接受 的鹽、酯或者溶劑合物,其中, Ri選自吖啶基 1 位、2位、3位或4位取代的H、OH、OCH3、OCH2CH3、OCH 2CH2CH3、OCH(CH3) 2、OCH (CH3) CH2CH3、OC (CH3) 3、OCH2CH2CH2CH3、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH3CHCH3、CH3CHCH2CH3、( CH3) 3C 或CH2CH2CH2CH 3、F、Cl、Br、CF3、NH2、N02、COOH、NHC0CH 3 中的一種,R2為苯基2位、3位或4 位取代 的-NH-、NHCH2、NHCH2CH2、NHCH2CH2CH2、NHC0NH、NHCOCH2NH、NHC0CH 2NH、或 0CH2 〇2. 如權利要求1所述的4-酰胺基苯并咪唑吖啶類化合物,其特征在于,所述化合物的心 和R2基選自: R2為4-NH且心為出 R2 為 4-NH 且 Ri 為 2-0CH3; R2 為 4-NH 且 Ri 為 4-0CH3; R2 為 4-NH 且 Ri 為 2-Bu; R2為4-NH且心為2-〇13; R2 為 4-NH 且 Ri 為 4-CH3; R2為3-NH且心為出 R2 為 3-NH 且 Ri 為 2-0CH3; R2 為 3-NH 且 Ri 為 4-0CH3; R2為3-NH且心為2-811; R2為3-NH且心為2-〇13; R2為3-NH且心為4-〇13; R2 為 3-NH 且心為2-(:2115; R2為2-NH且心為出或 R2為2-NH且心為2-0〇13中的一種。3. -種權利要求1-2任一項所述化合物的制備方法,其特征在于,包括以下步驟: (1) 以式II所示化合物與式III所示化合物反應,獲得式IV所示化合物; (2) 以式IV所示化合物與三氯氧磷反應,獲得式V所示化合物; (3) 以式VI所示化合物與式VII所示化合物反應,獲得式VIII所示化合物; (4) 以式卩所示化合物與式VIII所示化合物反應,獲得式I所示化合物, 其中,Ri選自吖啶基 1 位、2位、3位或4位取代的H、OH、OCH3、OCH2CH3、OCH 2CH2CH3、OCH(CH3) 2、OCH (CH3) CH2CH3、OC (CH3) 3、OCH2CH2CH2CH3、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH3CHCH3、CH3CHCH2CH3、( CH3) 3C 或CH2CH2CH2CH 3、F、Cl、Br、CF3、NH2、N〇2、COOH、NHC0CH3 中的一種,R2為苯基2位、3位或4 位取代 的-NH-、NHCH2、NHCH2CH2、NHCH2CH2CH2、NHC0NH、NHCOCH2NH、NHC0CH 2NH、或 0CH2 〇4. 根據(jù)權利要求3所述的方法,其特征在于, 在步驟(1)中,以銅為催化劑、碳酸鉀作為堿,二甲基甲酰胺為溶劑; 在步驟(3)中,以氧氣為氧化劑,二甲基甲酰胺為溶劑; 在步驟(4)中,以苯酚為溶劑。5. 根據(jù)權利要求3所述的方法,其特征在于, 在步驟(1)中,反應溫度為125-130°C,式II所示化合物與式III所示化合物的摩爾比為 1:1.2,溶劑為無水二甲基甲酰胺,反應時間為4-12小時; 在步驟(2)中,反應溫度為80-150°C,反應時間為3-12小時; 在步驟(3)中,反應溫度為80-150°C,反應時間為10-15小時; 在步驟(4)中,反應溫度為100-180°C,反應時間為2-6小時。6. 權利要求1-2任一項所述的化合物在制備藥物中的用途,所述藥物用于: 1) 抑制拓撲異構酶; 2) 抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)酶;治療和預防神經(jīng)退行性疾病,優(yōu)選地,用于 誘導腫瘤細胞凋亡;緩解帕金森癥、老年癡呆癥或中風的癥狀。 3) 抑制真核生物腫瘤細胞增殖;或 4) 預防和/或治療腫瘤。7. 根據(jù)權利要求6所述的用途,其中真核生物腫瘤細胞為癌細胞、白血病癌細胞、乳腺 癌細胞、肝癌細胞、胰腺癌細胞、肺癌細胞、腦癌細胞、卵巢癌細胞、子宮癌細胞、睪丸癌細 胞、皮膚癌細胞、胃癌細胞、鼻咽癌細胞、結腸癌細胞、膀胱癌細胞或直腸癌細胞, 所述白血病癌細胞優(yōu)選人慢性髓原白血病細胞,所述乳腺癌細胞優(yōu)選人乳腺癌細胞; 腫瘤選自白血病、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、腦癌、卵巢癌、子宮癌、睪丸癌、皮膚癌、 胃癌、鼻咽癌、結腸癌、膀胱癌或直腸癌。
【文檔編號】A61P25/16GK106045973SQ201610417063
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月15日
【發(fā)明人】蔣宇揚, 陳昶君, 高春梅, 袁梓高, 陳記偉, 譚春燕, 劉紅霞
【申請人】清華大學深圳研究生院