多配體蛋白聚糖-2的醫(yī)學(xué)用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及免疫調(diào)節(jié)和治療試劑和組合物及其用途。此外，本發(fā)明涉及現(xiàn)有基于 細(xì)胞的產(chǎn)品的試驗(yàn)和修飾，從而影響其免疫調(diào)節(jié)與/或其它治療特性。
【背景技術(shù)】
[0002] 人們對(duì)許多臨床應(yīng)用的間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC)相關(guān)產(chǎn)品非常熟悉，還有更多的產(chǎn)品 正在研發(fā)之中，并預(yù)期將來(lái)可批準(zhǔn)用于人類。MSC具有某些免疫調(diào)節(jié)特性，使其具有治療價(jià) 值，特別是，MSC可用于治療自身免疫性疾病。人MSC的免疫抑制潛力得到了證明，例如，研 究表明，人MSC對(duì)T-細(xì)胞、B-細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞的增殖具有抑制效果（Han等， 2012)〇
[0003] EP 1795588描述了將源自脂肪組織的MSC用于治療移植物抗宿主病（GVHD)的用 途；據(jù)稱，這種細(xì)胞具有免疫抑制特性。
[0004] EP 2545928涉及含MSC的細(xì)胞制備物，通過(guò)無(wú)血清或低血清培養(yǎng)，其免疫抑制能 力得以保持。
[0005] W0 2012/111997公開(kāi)了一種組合治療方法，其中MSC與免疫調(diào)節(jié)性T細(xì)胞一起使 用，為基于MSC的療法實(shí)現(xiàn)合適的免疫抑制效果。
[0006] W0 2009/1105624公開(kāi)了向細(xì)胞共同傳輸分子和多肽從而改善分子治療效果的組 合物和方法。將生長(zhǎng)因子與其受體和共受體，如多配體蛋白聚糖（)1、2、3和4共傳輸，改善 了這些生長(zhǎng)因子的傳輸。多配體蛋白聚糖和生長(zhǎng)因子的共傳輸可以防止生長(zhǎng)因子發(fā)生蛋白 水解，增強(qiáng)其活性，將生長(zhǎng)因子靶向細(xì)胞表面，從而促進(jìn)生長(zhǎng)因子的信號(hào)傳導(dǎo)。
[0007] KR1020100106744涉及一種預(yù)防或治療轉(zhuǎn)移性皮炎或黑素生成相關(guān)疾病的組合 物。預(yù)防或治療轉(zhuǎn)移性皮炎的組合物包含活性成分多配體蛋白聚糖-2?？紤]的轉(zhuǎn)移性皮炎 疾病有黑色素瘤、色素沉著過(guò)度、色素沉著不足或白癜風(fēng)。
[0008] W0 02/087609涉及一種預(yù)防哺乳動(dòng)物乳頭瘤病毒感染的藥物組合物，包括可溶 肽、蛋白質(zhì)或融合蛋白，它們與乳頭瘤病毒粒子結(jié)合，作為連接硫酸乙酰肝素粘多糖鏈的多 配體蛋白聚糖的配體。
[0009] W0 03/062386涉及調(diào)節(jié)動(dòng)物體內(nèi)多配體蛋白聚糖水平和血管形成的方法和材料。 其公開(kāi)了多配體蛋白聚糖多肽和編碼多配體蛋白聚糖多肽的核酸。這些都用于制備調(diào)節(jié)血 管形成的多核苷酸和多核苷酸類似物。亦探討了鑒定多配體蛋白聚糖調(diào)節(jié)劑和血管形成調(diào) 節(jié)劑的方法。
[0010] Mukhopadhyay, A. et al. , J. Trauma Injury Infect. Crit. Care，2010, vol. 68, pp. 999-1008得出了以下結(jié)論：多配體蛋白聚糖-2和FGF-2可相互作 用，使多配體蛋白聚糖-2從細(xì)胞上脫落，反過(guò)來(lái)激活負(fù)責(zé)瘢痕瘤表型的事件。
[0011] Kaur，C. et al.，Glia，2009, vol. 57, ρρ· 336-349 研究了多配體蛋白聚糖-2 在變 形蟲(chóng)小膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)，并指出這是缺氧上調(diào)的。
[0012] Contreras, H. R. et al. , Biochem. Biophys. Res. Comm.，2001，vol. 286, pp. 742-751研究了多配體蛋白聚糖-2在癌癥中的表達(dá)，并指出多配 體蛋白聚糖-2表達(dá)包含在某些細(xì)胞朝轉(zhuǎn)移性間充質(zhì)樣表型的分化中。
[0013] Sojoong Choi, e t al. , Biochem. Biophys. Res. Comm.，2012, vol. 417, pp. 1260-1264研究了基質(zhì)金屬蛋白酶-7 (MMP-7)在多配體蛋白聚 糖-2從結(jié)腸癌細(xì)胞上脫落中的作用。據(jù)其觀察，MMP-7直接調(diào)節(jié)多配體蛋白聚糖-2從這 些細(xì)胞上的脫落。
[0014] Alexopoulou,A. N. et a 1. , BMC Cell Biol. , vol. 9, 2008, d oi: 10:10. 1186/1471-2121-9-2研究了干細(xì)胞朝中胚層分化期間用于轉(zhuǎn)基因長(zhǎng)期表達(dá)的載 體。使用的其中一個(gè)載體編碼多配體蛋白聚糖-2。
[0015] W0 2011/153458公開(kāi)了一種干擾登革熱感染的方法，包括米用與登革熱病毒革巴向 的細(xì)胞上的多配體蛋白聚糖結(jié)合的登革熱病毒進(jìn)行干擾。還公開(kāi)了涉及這種用途的藥物組 合物。
[0016] Mytilinaiou, M. et al.，IUBMB Life, 2013, vol. 65, ρρ· 134-143 研究了多配體蛋 白聚糖-2作為TGFi3 2/Smad2介導(dǎo)的纖維肉瘤細(xì)胞的細(xì)胞粘附的調(diào)節(jié)劑的作用。
[0017] 據(jù) Kim, Y. et al·，Oncogene (2003)，vol. 22, ρρ· 826-830 觀察，多配體蛋白聚糖-2 表達(dá)減少與曲古柳菌素-A-誘導(dǎo)的形態(tài)變化及結(jié)腸癌細(xì)胞中腫瘤發(fā)生活性降低有關(guān)。此 外，反義cDNA引起的多配體蛋白聚糖-2表達(dá)下調(diào)模擬了形態(tài)變化及減少了結(jié)腸癌細(xì)胞的 非貼壁依賴性生長(zhǎng)。
[0018] Chung, H. et al. , Journal of Biological Chemistry, vol. 287, no. 23, pp. 19326-19335, 2012發(fā)現(xiàn)，黑皮質(zhì)素1受體通過(guò)控制多配體蛋白聚糖-2表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)黑色 素瘤細(xì)胞的迀移。這是因?yàn)楹谄べ|(zhì)素1受體抑制了 P38MAPK的活化，繼而增強(qiáng)了多配體蛋 白聚糖-2的表達(dá)和黑色素瘤細(xì)胞的迀移。
[0019] 據(jù) P6terfia, B. et al·，PLoS ONE, vol. 7, no. 6, e39474 觀察，多配體蛋白聚糖-1 通過(guò)誘導(dǎo)多配體蛋白聚糖-2表達(dá)增強(qiáng)了間充質(zhì)腫瘤細(xì)胞系的惡性程度。因此，多配體蛋白 聚糖-1與多配體蛋白聚糖-2 -起增強(qiáng)了人纖維肉瘤細(xì)胞系的增殖、迀移和轉(zhuǎn)移。
[0020] Ruiz, X. et al·，PLoS ONE, vol. 7, no. 8, e43049 描述 了他們的發(fā)現(xiàn)：多配體蛋白 聚糖-2是一種與蛋白-3(IGFBP-3)結(jié)合的胰島素樣生長(zhǎng)因子新型靶，以及多配體蛋白聚 糖-2在纖維化中過(guò)度表達(dá)。SDC2表達(dá)的增加至少部分是由于兩種促纖維化因子TGF0和 IGFBP-3 的活性引起的。Dieudonn6，F(xiàn)_X et al·，Journal of Bone and Mineral Research ，vol. 27, no. 10, pp. 2118-2129描述了多配體蛋白聚糖-2表達(dá)是如何被骨肉瘤細(xì)胞中的阿 霉素上調(diào)的。T-細(xì)胞因子（TCF)負(fù)責(zé)抑制多配體蛋白聚糖-2。因此，TCF活性的靶向抑制 促進(jìn)了多配體蛋白聚糖-2的表達(dá)和對(duì)小鼠骨肉瘤細(xì)胞和骨腫瘤中阿霉素的敏感性。
[0021] KR 20120013915描述了一種用于診斷結(jié)腸癌的組合物，包含一種測(cè)定多配體蛋白 聚糖-2肽片段表達(dá)水平的試劑。該試劑包含一種對(duì)多配體蛋白聚糖_2肽片段具有特異性 的抗體。
[0022] Huang, X. et al·，Oncology Reports 2009, vol. 21，ρρ· 1123-1129 討論了食管鱗 狀細(xì)胞癌中多配體蛋白聚糖-2 (SDC2)和富半胱氨酸61 (CYR61)表達(dá)改變的預(yù)后意義。
[0023] 現(xiàn)有技術(shù)中存在的一個(gè)共同問(wèn)題是，MSC-類產(chǎn)品單獨(dú)使用時(shí)免疫抑制性不夠或 MSC的免疫抑制特性在細(xì)胞培養(yǎng)傳代中隨時(shí)間而喪失，即得不到保持。理想的是保持、刺激 起或能夠恢復(fù)這些特性。
[0024] 免疫抑制方案可用于防止或減少移植排斥，臨床使用的免疫抑制方案通常包括同 時(shí)使用幾種試劑的組合。最好是鑒定替代免疫抑制劑和治療方法。同樣，最好鑒定促進(jìn)血 管形成的試劑和治療方法。此外，最好能夠?qū)Υ祟I(lǐng)域潛在治療產(chǎn)品的效力進(jìn)行試驗(yàn)。建議 的一種試驗(yàn)是基于可溶TNFR1，但是，需要替代且最好是改進(jìn)的試驗(yàn)。
[0025] 發(fā)明目的
[0026] 本發(fā)明的一個(gè)目的是提供具有此處指出的免疫調(diào)節(jié)性與/或其它治療特性的替 代試劑和治療方法。本發(fā)明具體實(shí)施例的一個(gè)目的是提供賦予包含細(xì)胞或組織的產(chǎn)品或組 合物的較低免疫原性或較高免疫抑制性的試劑和療法。
[0027] 發(fā)明概沐
[0028] 本發(fā)明實(shí)施例在使用時(shí)表明，增強(qiáng)的多配體蛋白聚糖-2 (SDC2)表達(dá)和/或活性增 強(qiáng)了免疫抑制和/或具有其它治療特性。因此，本發(fā)明提供了 SDC2、包含SDC2的組合物、 編碼SDC2的載體和調(diào)節(jié)SDC2表達(dá)的化合物，用于治療細(xì)胞一一然后那些細(xì)胞用于治療用 途。這些組合物、載體和化合物本身可用于治療性處理，特別是人的治療性處理，例如，用于 如本文描述的免疫調(diào)節(jié)或用于其它治療用途。
[0029] 本發(fā)明還提供處理細(xì)胞群的方法，包括將細(xì)胞與SDC2結(jié)合，采用與SDC2結(jié)合的抗 體或抗體片段處理細(xì)胞與/或通過(guò)細(xì)胞調(diào)節(jié)SDC2的表達(dá)或活性。這種方法制備的細(xì)胞以 及來(lái)源于經(jīng)處理細(xì)胞的細(xì)胞和組織構(gòu)成本發(fā)明的其它部分。
【具體實(shí)施方式】
[0030] 本發(fā)明的實(shí)施例包括含SDC2的組合物、使用SDC2的方法及SDC2的特定用途。適 宜的是，這是可溶形式的，以及在特定實(shí)施例中，是人或馬SDC2,雖然本發(fā)明包括通常源自 哺乳動(dòng)物的SDC2，特別是源自人、小鼠、大鼠、狗、馬、兔、羊、牛和豬的SDC2。
[0031] 所述組合物可包含藥學(xué)上可接受、適合醫(yī)藥用途的賦形劑與/或載體。組合物可 以包含細(xì)胞培養(yǎng)基或配制為細(xì)胞培養(yǎng)基--例如，在細(xì)胞培養(yǎng)基中的SDC2--適合用于細(xì) 胞培養(yǎng)，例如，用于加入到培養(yǎng)的細(xì)胞中，用于制備基于治療性細(xì)胞的產(chǎn)品。該組合物可配 制用于緩釋和任選經(jīng)修飾而改善半衰期，例如，SDC2 (或片段、變體、衍生物或類似物）可聚 乙二醇化（PEGylated)或多聚唾液酸化（PSAylated)。組合物可配制用于注射，例如，配制 在水中或鹽水溶液中用于注射。組合物可配制用于吸入，例如，通過(guò)霧化。SDC2可以重組 體形式制備或從表達(dá)或過(guò)度表達(dá)SDC2的細(xì)胞分離。在試驗(yàn)的實(shí)例中，從表達(dá)SDC2的細(xì)胞 上清液中分離出，并且重組制備；正如其它地方所指出的那樣，SDC2可脫落到培養(yǎng)基內(nèi)，因 此，可從表達(dá)SDC2的細(xì)胞培養(yǎng)物中收獲SDC2。
[0032] 本發(fā)明還提供編碼SDC2的表達(dá)載體；再一次，優(yōu)選人或馬SDC2,但是，通常來(lái)源于 上文所述哺乳動(dòng)物的編碼SDC2的載體亦構(gòu)成本發(fā)明的實(shí)施例。詞語(yǔ)"表達(dá)載體"指的是核 酸，例如，線性或環(huán)狀DNA或RNA，包括編碼SDC2的片段，該片段可與用于其轉(zhuǎn)錄的其它片段 可操作地連接。這種其它片段可包括啟動(dòng)子（許多是人們已知的，合適的實(shí)例包括CMV和 UbC啟動(dòng)子）、終止子和UTR序列，并可任選包括一個(gè)或多個(gè)復(fù)制起點(diǎn)、一個(gè)或多個(gè)可選擇標(biāo) 記物、增強(qiáng)子、多腺苷酸化信號(hào)等。表達(dá)載體通常源于質(zhì)?；虿《綝NA，或包含兩者的元件。 本發(fā)明下文一個(gè)實(shí)例中采用的合適載體是腺病毒載體。其它合適的病毒載體包括逆轉(zhuǎn)錄病 毒、慢病毒和腺相關(guān)病毒。表達(dá)人SDC2的優(yōu)選載體包括源于SEQ ID NO: 1或2 (例如，沒(méi)有 polyA尾）的編碼序列，或其等位變體，或編碼SEQ ID N0:3或4的替代核苷酸序列。
[0033] SDC2可被細(xì)胞脫落進(jìn)入到培養(yǎng)基中，這種胞外域脫落是由通常稱為脫落酶的高 度調(diào)節(jié)直接作用引起的。已知基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP)是多配體蛋白聚糖的脫落酶。特別 是，已經(jīng)證明，MMP-7是SDC2脫落必須的（Ryu et al.，2007)。然而，亦已經(jīng)證明，各種細(xì) 胞外刺激，包括生長(zhǎng)因子（Subramanion et al.，1997)、趨化因子（Li et al.，2002;Brule et al·，2006 ;Charnaux et al·，2005)、乙酰肝素酶（Yang et al·，2007)和細(xì)胞應(yīng)激 (Fitzgerald et al.，2000)都可以誘導(dǎo) SDC2 的脫落。
[0034] 在本發(fā)明下文更詳細(xì)地描述的具體實(shí)施例中，當(dāng)含SDC2的培養(yǎng)基用于處理分開(kāi) 的細(xì)胞群時(shí)，從人MSC表面脫落進(jìn)入到培養(yǎng)基內(nèi)的SDC2具有免疫抑制特性。因此，本發(fā)明 提供SDC2用于提供這種治療效果一一免疫抑制的用途。用于療法例如移植的細(xì)胞可以采用 這種方式進(jìn)行處理，例如，暴露于SDC2,以降低其免疫原特性。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)的免疫抑制效果 還可以與其它基于細(xì)胞的療法一起平行使用，例如，從而降低或延遲患者出現(xiàn)不良免疫反 應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)或發(fā)生。因此，本發(fā)明的SDC2和含SDC2的組合物，以及本發(fā)明的載體和化合物， 可與另一治療組合物，例如，細(xì)胞治療產(chǎn)品一起對(duì)患者給藥，這種細(xì)胞治療產(chǎn)品可以是MSC 與/或基質(zhì)干細(xì)胞或包含MSC與/或基質(zhì)干細(xì)胞。
[0035] 本發(fā)明另外還提供用于處理細(xì)胞的調(diào)節(jié)細(xì)胞SDC2表達(dá)的化合物。在本發(fā)明的實(shí) 施例中，所述化合物增加 SDC2的表達(dá)。這類化合物的實(shí)例包括激活p53的化合物、激活ERK、 p38或JNK SAPK激酶通路的化合物、激活缺氧誘導(dǎo)因子（HIF)-介導(dǎo)的通路的化合物、激動(dòng) (agonize) TGF、BMP、Lefty、Nodal和激活素（）通路的化合物、激動(dòng)NOTCH通路（如Jagged 1、Jagged2、DLL1、DLL2、DLL3和DII4)的化合物、激動(dòng)Hedgehog信號(hào)傳導(dǎo)通路的化合物， 激動(dòng)WNT通路的化合物、激活雄激素受體或雌激素受體通路的化合物及激活NFkB通路的化 合物。用于增強(qiáng)SDC2表達(dá)的化合物實(shí)例包括，p53調(diào)節(jié)化療劑（如nutlins、5-FU、阿霉素、 順鉑、