一種開環(huán)西松烷二萜類化合物及其分離制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體地說是一種開環(huán)西松烷二萜類化合物及其分 離制備方法和在抗腫瘤方面的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 西松燒二砲（Cembranoidditerpenes)是由4個(gè)異戊二稀首尾相連形成的大環(huán) 二萜，是一類母體骨架具有十四元環(huán)和3個(gè)對(duì)稱分布的甲基與1個(gè)異丙基的天然產(chǎn)物 [1]。 西松烷二萜類物質(zhì)是煙草中一類重要的二萜類物質(zhì)，是煙葉香氣和香味成分的重要前體 物，對(duì)煙葉香氣風(fēng)格和品質(zhì)具有決定性影響，是開展煙葉品質(zhì)研究的關(guān)鍵化學(xué)物質(zhì)之一。自 1962年以來，已從煙草中發(fā)現(xiàn)了百余種該類化合物 [2]。此外，西松烷二萜類成分具有較強(qiáng) 的抗腫瘤、抑菌、抗炎和調(diào)節(jié)植物生長等生物活性[3 4]，因此引起合成化學(xué)家和藥物化學(xué)家 的極大興趣和高度重視[5 6]。
[0003]肺癌（Lungcancer，又稱支氣管肺癌Bronchopulmonarycarcinoma)是世界發(fā)病 率和死亡率最高的惡性腫瘤之一。在我國，肺癌的發(fā)病率和死亡率分列男性腫瘤首位，女性 腫瘤第二位。肺癌的治療長期以來一直是公眾和醫(yī)學(xué)界關(guān)注的熱點(diǎn)議題。肺癌中約有85% 是非小細(xì)胞肺癌（non-smallcelllungcancer,NSCLC)m，且部分就診時(shí)已屬晚期M。目 前肺癌的治療方法仍以手術(shù)、化療和放療為主，但其療效已達(dá)到一個(gè)平臺(tái)，毒性及不良反應(yīng) 也限制了其臨床應(yīng)用。近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，分子靶向治療成為目前腫 瘤治療的熱點(diǎn)，但在長期治療中易出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，且不能滿足臨床需要。在藥物發(fā)現(xiàn)中，從 植物中尋找并開發(fā)具有抗腫瘤活性成分具有廣闊的研究前景。
[0004] 近年來，西松烷二萜類成分的研究主要集中在海洋生物中，煙草相關(guān)西松烷二萜 類成分的研究卻鮮有報(bào)道。因此針對(duì)煙草西松烷二萜類成分開展系統(tǒng)研究，豐富煙草西 松烷二萜類成分的組成，促進(jìn)煙草西松烷二萜類成分相關(guān)研究進(jìn)程具有重要意義。煙葉 (yVicotiaflateAacwa?L.)富含西松燒二砲類成分，在前期研究中發(fā)現(xiàn)煙葉西松燒二砲類成 分具有顯著的抗腫瘤活性。
[0005]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的正是基于上述現(xiàn)有技術(shù)狀況而提供了一種從煙草中分離純化西松 烷二萜的方法，得到了的一個(gè)新的開環(huán)西松烷二萜類化合物。并通過深入研究，還發(fā)現(xiàn)該化 合物且具有顯著的抗腫瘤活性。
[0007] 本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的： 一種開環(huán)西松烷二萜類化合物，是由煙草中分離純化而得到，該開環(huán)西松烷二萜化合 物具有如下結(jié)構(gòu)：
該開環(huán)西松烷二萜化合物的分離制備方法包括如下步驟： (1) 新鮮煙葉樣品真空冷凍干燥，粉碎； (2) 乙醇回流提取粉碎后的煙葉樣品，濃縮提取液，得到浸膏； 6?)將步驟（2)中所得浸膏浮于水中，依次用石油醚、二氯甲烷萃取，具體是先應(yīng)用低等 極性溶劑石油醚萃取三次，合并萃取液得到煙葉提取物低等極性成分及色素；而后，應(yīng)用中 等極性溶劑二氯甲烷萃取，得到煙葉提取物的中等極性成分。
[0008] (4)將步驟（3)中所得的二氯甲烷萃取物濃縮并上樣至硅膠柱色譜，以石油醚：丙 酮的體積比為10 :〇-〇:1〇的混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，按照所使用的不同梯度的洗脫液收集 流份； (5) 將步驟（4)中由石油醚：丙酮體積比為8:1的混合溶劑洗脫下來的流份上樣硅膠柱 色譜，用二氯甲烷：甲醇為100:1-40:1的混合溶劑梯度洗脫； (6) 將步驟（5)中由二氯甲烷：甲醇體積比為60:1的混合溶劑洗脫下來的流份應(yīng)用制 備型高效液相色譜儀，以甲醇：水為89:11的流動(dòng)相洗脫，得到目標(biāo)化合物。
[0009] 在本發(fā)明中，其中步驟（4)中所使用的混合溶劑中石油醚：丙酮的體積比例依次 為10:0，10:1，8:1，6:1，5:1，3:1，2:1和0:10。步驟（5)中所使用的混合溶劑中二氯 甲燒：甲醇的體積比例依次為：1〇〇:1，80:1，60:1和40:1。步驟（6沖所使用的制備型高 效液相流動(dòng)相流速為2mL/min，檢測(cè)波長為210nm。
[0010] 根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方案，其中步驟（4)中所述的硅膠柱色譜為粒徑100-200 目的硅膠色譜柱，步驟（5)中所述的硅膠柱色譜為粒徑300-400目的硅膠色譜柱。
[0011] 其中步驟（6)中與制備型高效液相色譜儀配套使用的色譜柱為C18高效液相半制 備色譜柱，規(guī)格為250XIOmm，粒徑為5ym。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方案，步驟（6)中還包 括使用薄層色譜和/或分析型高效液相色譜儀檢測(cè)所得的化合物。
[0012] 本發(fā)明分離制備的開環(huán)西松烷二萜類化合物經(jīng)研究可應(yīng)用于抗腫瘤方面，體外 抗腫瘤實(shí)驗(yàn)表明，該化合物對(duì)胃癌細(xì)胞株（AGS)、人肝癌細(xì)胞株（HepG2)、人乳腺癌細(xì)胞株 (MCF-7)、人口腔表皮樣癌細(xì)胞株（KB)和人肺腺癌細(xì)胞株（A549)均具有一定的抑制作用。
[0013] 本發(fā)明的化合物是從煙葉中分離的開環(huán)西松烷二萜類化合物，經(jīng)多種現(xiàn)代色譜光 譜分析，特別是應(yīng)用二維核磁共振譜對(duì)化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行綜合解析，確定了該化合物的化 學(xué)結(jié)構(gòu)及立體構(gòu)型。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，該化合物為一新的西松烷二萜類化合物，且11位和12 位之間斷裂成開環(huán)。體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)表明，該化合物對(duì)胃癌細(xì)胞株（AGS)、人肝癌細(xì)胞株 (HepG2 )、人乳腺癌細(xì)胞株（MCF-7 )、人口腔表皮樣癌細(xì)胞株（KB)和人肺腺癌細(xì)胞株（A549 ) 均具有一定的抑制作用。本發(fā)明為研制新的抗腫瘤藥物提供新的思路，對(duì)合理利用煙葉中 西松烷二萜類成分具有重要價(jià)值。
[0014] 本發(fā)明的有益效果和意義在于：充分利用煙草資源優(yōu)勢(shì)，深入研究開發(fā)，尋找具有 獨(dú)特化學(xué)結(jié)構(gòu)的西松烷二萜類化合物，豐富煙草西松烷二萜類成分的組成，為開展西松烷 二萜類成分相關(guān)研究及應(yīng)用奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。
[0015]
【附圖說明】
[0016]圖1為本發(fā)明所述西松烷二萜類化合物的質(zhì)譜圖； 圖2為本發(fā)明所述西松烷二萜類化合物的核磁共振氫譜； 圖3為本發(fā)明所述西松烷二萜類化合物的核磁共振碳譜。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 本發(fā)明所述的西松燒二砲類化合物，命名為nicotiaditerpene A,化學(xué)名為（15； 2E,AR, &R, 1E)-4, 8-dimethyl-4, 6, 1 l-trihydroxy-2, 7-pentadecadien_14-〇ne ; 分子式為：C2〇H3604;化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：
本發(fā)明化合物nicotiaditerpeneA為白色針狀結(jié)晶，[ff]20D+38.0(c=0.06,MeOH)〇HR-ESI-MS給出準(zhǔn)分子離子峰m/z: 363. 25107[M+Na]+ (計(jì)算值C2QH3604Na，363. 25113)，結(jié) 合核磁共振波譜數(shù)據(jù)，確定其分子式為C2(]H3604，不飽和度為3。4和13C核磁共振數(shù)據(jù)見表 1 表 1NicotiaditerpeneA的1H和13C核磁共振1H譜（CDC13, 600Mz)和13C譜（CDC13, 150Mz)數(shù)據(jù)
NicotiaditerpeneA分離制備： 新鮮煙葉采自許昌煙草種植