一種新的檸檬苦素化合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從南五味子中分離得到的一種新的檸檬苦素 化合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 南五味子屬（jfaofei/ra Kaempf. ex Juss.)隸屬于木蘭科（Magnoliaceae)五味子 亞科（Schisandroideae)，近年來也有許多植物分類學(xué)家傾向于把五味子科單獨(dú)作為一科 進(jìn)行分類。南五味子屬有植物29種，主產(chǎn)于亞洲東部和東南部。我國有10種，產(chǎn)于我國東 南部和西南部，包括云南、貴州、四川、廣東、廣西、福建等省。
[0003] 南五味子為南五味子屬植物華中五味子（Schisandra sphenanthera Rehd. Et Wils.)的干燥成熟果實(shí)，其商品名習(xí)稱西五味子，具有收斂固澀、益氣生津、補(bǔ)腎寧心等功 效。早期僅作為正品五味子(北五味子、南五味子）的一種被廣泛收載于各種中藥專著及 各版藥典。由于該品種在生境分布、化學(xué)成分、組成及藥效等方面與北五味子Schisandra chinensis (Turcz. )Baill.存在一定的差異，故2000年版藥典將其單獨(dú)列出收載于藥典 一部。南五味子的根莖作為滇雞血藤被《中國藥典》2010年版收載，以其為原料的制劑復(fù)方 滇雞血藤膏也被《中國藥典》2010年版收載，主治瘀血阻絡(luò)、月經(jīng)不調(diào)。
[0004] 南五味子主要化學(xué)成分較為單一，木脂素和三萜類為其特征性化學(xué)成分。此外該 植物還含有少量倍半萜類成分。木脂素是南五味子的主要活性成分，根據(jù)其骨架類型可分 為5大類：聯(lián)苯環(huán)辛烯類；螺苯駢呋喃型聯(lián)苯環(huán)辛烯類；芳基四氫萘類；二芐基丁烷類；四 氫呋喃類。此外，南五味子屬植物還含有少量新木脂素類化合物和檸檬苦素類化合物。
[0005] 現(xiàn)代藥理研究表明，該屬植物具有抗白血病、抗氧化、抗乙型肝炎、拮抗血小板活 化因子（PAF)等作用。近年來，該屬植物抗腫瘤、抗病毒方面的活性尤其受人關(guān)注。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種從南五味子藥材中分離得到的一種新的檸檬苦素化合 物，含其的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的： 具有下述結(jié)構(gòu)式的檸檬苦素化合物（I )，
所述的化合物（I )的制備方法，包含以下操作步驟：（a)南五味子干燥成熟果實(shí)粉碎， 用75%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的 正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟（a)中乙 酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，依次用10%乙醇和75%乙醇洗脫，收集75%乙醇洗脫液，減 壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏；（c)步驟（b)中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用 體積比為100:1、50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步 驟（c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1、15:1和10:1的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用 體積百分濃度為55%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-12個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮 得到純的化合物（I )。
[0008] 進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為DlOl型大孔吸附樹脂。
[0009] 藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I )和藥學(xué)上可接受的載體。
[0010] 所述的化合物（I)在制備治療腺樣囊性癌的藥物中的應(yīng)用。
[0011] 所述的藥物組合物在制備治療腺樣囊性癌的藥物中的應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0013] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I )，其余為藥物學(xué)上可接受的、 對人和動(dòng)物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0014] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
[0015] 說明書附圖 圖1為化合物（I)結(jié)構(gòu)式； 圖2為化合物（I )二維HSQC譜； 圖3為化合物（I )二維1H-1H COSY譜； 圖4為化合物（I )二維HMBC譜； 圖5為化合物（I )二維ROESY譜； 圖6為不同濃度化合物（I )作用不同時(shí)間對ACC-M的抑制率。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0017] 主要材料、試劑來源及儀器類型： 乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化學(xué)試劑有限公 司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0018] 腺樣囊性癌細(xì)胞系A(chǔ)CC-M購自上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院口腔頌面外科實(shí)驗(yàn)室?；衔?I自制，HPLC純度大于98%。RPMI-1640培養(yǎng)基、胰蛋白酶購于美國SIGMA公司。標(biāo)準(zhǔn)胎牛 血清購自邢臺(tái)市匯豐生物技術(shù)研究所。Annexin-v-FITC/PI試劑盒購于北京寶賽生物技術(shù) 有限公司。PBS購于天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所。MTT粉購于Amresco公司。二乙胺四乙 酸二鈉（EDTA)購于北京益利精細(xì)化學(xué)品有限公司。青霉素、鏈霉素購于華北制藥股份有限 公司。二甲基亞砜（DMSO)購于天津市標(biāo)準(zhǔn)科技有限公司。Giemsa染液購于珠海貝索生物 技術(shù)有限公司。
[0019] XYJ型醫(yī)療凈化工作臺(tái)，蘇州凈化設(shè)備有限公司；BB5060/BB16二氧化碳培養(yǎng)箱， 上海Heraeus公司；CX21光學(xué)顯微鏡，日本OLYMPUS ;XD-10198101倒置顯微鏡，江南公 司；流式細(xì)胞儀，Bection Dickinson FacscaLibur ;WeLLscan MK3全自動(dòng)酶標(biāo)儀，芬蘭 Labsystems Dragon ;BFX5_320型低速離心機(jī)，中國上海於南科學(xué)儀器聯(lián)營廠；GF-300型電 子天平，Japan A&D Company，Limited ;725 型超低溫冰箱，F(xiàn)orma Scientific. Inc ;微量 加樣器，EPPEND0RF公司。
[0020] 實(shí)施例1 :化合物（I )分離制備及結(jié)構(gòu)確證 (a)南五味子干燥成熟果實(shí)（IOkg)粉碎，用75%乙醇熱回流提?。?0LX3次)，合并提 取液，濃縮至無醇味（5L)，依次用石油醚（5L X 3次)、乙酸乙酯（5L X 3次）和水飽和的正丁 醇（5LX 3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（345g)和正丁醇萃取物；（b) 步驟（a)中乙酸乙酯萃取物用DlOl大孔樹脂除雜，依次用10%乙醇（10L)和75%乙醇（15L) 洗脫，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏（135g) ; (c)步驟（b)中75% 乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為100:1 (10個(gè)柱體積)、50:1 (8個(gè)柱體積)、 25:1 (12個(gè)柱體積)、15:1 (8個(gè)柱體積）和5:1 (6個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫 得到5個(gè)組分；（d)步驟（c)中組分4 (28g)用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1 (5個(gè)柱體積)、15:1 (6個(gè)柱體積)和10:1 (5個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3 個(gè)組分；（e)步驟（d)中組分2 (Ilg)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃 度為55%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-12個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化 合物（I ) (32mg)。
[0021] 結(jié)構(gòu)確證：淡黃色針狀結(jié)晶，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮和甲醇；HR-ES頂S顯示 [M+Na] +為m/z 591. 2624,結(jié)合核磁特征可得分子式為C 32H4(]09，不飽和度為13。紅外IR顯 示在3494,1648,1730和1715cm 1有吸收，提示存在羥基和羰基；875cm 1的吸收峰提示呋喃 環(huán)的存在。核磁共振氫譜數(shù)據(jù) S (ppm, CDCl3, 400MHz):